CN113667601A - 用于细胞连续培养及取样的装置和方法 - Google Patents
用于细胞连续培养及取样的装置和方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113667601A CN113667601A CN202110867490.5A CN202110867490A CN113667601A CN 113667601 A CN113667601 A CN 113667601A CN 202110867490 A CN202110867490 A CN 202110867490A CN 113667601 A CN113667601 A CN 113667601A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- shake flask
- thread
- pipe
- liquid
- bottle
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000005070 sampling Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 121
- 208000012788 shakes Diseases 0.000 claims abstract description 115
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims abstract description 14
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 27
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 16
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- 241001411320 Eriogonum inflatum Species 0.000 description 9
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 4
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 2
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 238000004026 adhesive bonding Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000000806 elastomer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229920001903 high density polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004700 high-density polyethylene Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005213 imbibition Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229920000092 linear low density polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004707 linear low-density polyethylene Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 238000011165 process development Methods 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/08—Flask, bottle or test tube
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/24—Gas permeable parts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/38—Caps; Covers; Plugs; Pouring means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/58—Reaction vessels connected in series or in parallel
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M33/00—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M33/00—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus
- C12M33/04—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus by injection or suction, e.g. using pipettes, syringes, needles
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
本发明公开一种用于细胞连续培养及取样的装置和方法,其中,用于细胞连续培养及取样的装置,包括多个摇瓶,摇瓶包括:瓶体;瓶盖;转接件,转接件包括两端贯通的管体部,转接件固定于瓶体,瓶盖固定于转接件上,管体部的外侧相对设置有至少两个接口管,至少两个接口管呈中空设置且连通管体部内的空间;吸液管,置于瓶体内,吸液管的一端与接口管相连接,吸液管上设有通气孔;连接管,包括出液管和进液管,出液管的一端从外部与连接有吸液管的接口管相连接,进液管的一端与另一接口管相连接;其中,前级摇瓶的出液管的另一端与后级摇瓶的进液管的另一端固定连通,前级摇瓶的出液管可对接动力装置以将前级摇瓶内的液体转移到次级摇瓶内。
Description
技术领域
本发明涉及细胞培养技术领域,特别涉及一种用于细胞连续培养及取样的装置和方法。
背景技术
摇瓶培养法是指把微生物或动、植物的细胞接种于含有液体培养基的摇瓶中,将摇瓶放置在振荡培养箱中不停摇动而进行的培养。摇瓶在细胞的培养过程中需要保持密封的状态,在达到一定的细胞密度后再转移至更大规模的摇瓶或反应器中进行放大培养。在传统的液体转移方式中,往往通过在安全柜中从小容量摇瓶中直接倒入下级摇瓶或反应器中,这种转移方式对实验者的技巧要求较高,操作不当就会导致污染。为了降低摇瓶液体转移的难度,现有的一些厂家采用将瓶盖上直接增加接口的的方式进行液体转移,虽然简单便捷,但是日常培养过程中的液体添加用户体验仍不够好。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种用于细胞连续培养及取样的装置,旨在提供更方便的用于细胞连续培养及取样的装置。
为实现上述目的,本发明提出的一种用于细胞连续培养及取样的装置,包括多个摇瓶,所述摇瓶包括:瓶体,所述瓶体具有瓶颈,所述瓶颈的上端开设有瓶口,所述瓶颈靠近所述瓶口的一端的外周壁设有第一螺纹,所述第一螺纹上形成有第一排气通道;转接件,所述转接件包括两端贯通的管体部,所述管体部的下端开口的内壁处设有与所述第一螺纹相适配的第二螺纹,所述第一螺纹与所述第二螺纹螺纹连接使所述转接件固定于所述瓶体,所述管体部的外侧相对设置有至少两个接口管,所述两个接口管呈中空设置且连通所述管体部内的空间;所述管体部靠近其上端开口的外周壁上设有第三螺纹;瓶盖,所述瓶盖的内周壁设有与所述第三螺纹相适配的第四螺纹,所述瓶盖通过螺纹固定于所述转接件;吸液管,置于所述瓶体内,所述吸液管的一端与所述接口管相连接,所述吸液管上设有通气孔;以及连接管,所述连接管包括出液管和进液管,所述出液管的一端从外部与连接有吸液管的接口管相连接,所述进液管的一端与另一接口管相连接;其中,所述前级摇瓶的出液管的另一端与后级摇瓶的进液管的另一端固定连通,所述前级摇瓶的出液管可对接动力装置以将前级摇瓶内的液体转移到次级摇瓶内。
可选地,前级摇瓶的出液管与次级摇瓶的进液管直接通过三通阀相连通。
可选地,所述接口管包括第一接口段和第二接口段,所述第一接口段外露于所述管体部,所述第二接口段穿设所述管体部,所述第一接口段的外径大于所述第二接口段的外径使得二者间形成有阶梯。
可选地,所述接口管朝上倾斜设置。
可选地,所述第一螺纹包括多个螺纹圈,所述多个螺纹圈上均设有缺口,多个所述缺口相互连通形成所述第一排气通道。
可选地,所述缺口在所述瓶颈的径向上呈扩口设置。
可选地,所述第三螺纹与所述第一螺纹相同,所述第三螺纹上形成有第二排气通道。
可选地,所述管体部的外壁上还设有止挡部,所述止挡部位于所述第三螺纹下方。
可选地,所述摇瓶还包括瓶盖,所述瓶盖的顶端设有开口,所述开口处设有滤膜,所述滤膜用以封闭所述开口。
本发明还提出一种细胞连续培养的方法,所述细胞连续培养方法包括以下步骤:
选取初级摇瓶,在初级摇瓶中进行细胞培养;
当初级摇瓶中的细胞增殖至预设规模时,提供容量大于该初级摇瓶的次级摇瓶;
在次级摇瓶中加入新鲜培养基;
连接进液管和出液管,将出液管与初级摇瓶中连接有吸液管的接口管相连,将进液管与次级摇瓶中未连接吸液管的接口管相连接,再将初级摇瓶的出液管与次级摇瓶的进液管相连通;
通过初级摇瓶中出液管连接动力装置将初级摇瓶内的液体转移到次级摇瓶内;
断开出液管和进液管,用堵头将次级摇瓶的两个接口管进行密封,将次级摇瓶放入摇床继续培养。
本发明技术方案通过在初级摇瓶将细胞培养至一定规模后,通过出液管与进液管与初级摇瓶的接口管相连,在将初级摇瓶的出液管与次级摇瓶的进液管相连通,对摇瓶的培养液体进行转移时,只需通过转接件进行培养液体的转移,大大降低污染的风险,并且因为接口管设于侧面,大大降低了摇瓶的整体高度,如此,当需要继续扩大细胞培养规模,只需重复连接操作,方便灵活。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
图1为本发明一种用于细胞连续培养及取样的装置的摇瓶的一实施例的立体结构示意图;
图2为图1中用于细胞连续培养及取样的装置的摇瓶又一角度的立体结构示意图;
图3为图1中用于细胞连续培养及取样的装置的摇瓶在一角度的立体结构示意图;
图4为图3中用于细胞连续培养及取样的装置的摇瓶的分解结构示意图;
图5为图4中用于细胞连续培养及取样的装置的摇瓶的瓶体的立体结构示意图;
图6为图5中瓶体的剖面图;
图7为图4中瓶盖的透视图;
图8为图4中转接件的透视图;
图9为图8中转接件的立体结构示意图;
图10为本发明一种细胞连续培养的方法的步骤流程图。
附图标号说明:
标号 | 名称 | 标号 | 名称 |
100 | 用于细胞连续培养及取样的装置 | 10 | 瓶体 |
11 | 瓶颈 | 111 | 第一螺纹 |
112 | 第一排气通道 | 12 | 瓶口 |
13 | 密封件 | 14 | 瓶体止挡件 |
20 | 转接件 | 21 | 管体部 |
211 | 第三螺纹 | 212 | 第二排气通道 |
213 | 第二螺纹 | 22 | 接口管 |
221 | 第一接口段 | 222 | 第二接口段 |
23 | 转接件止挡件 | 24 | 底盖 |
40 | 瓶盖 | 41 | 开口 |
42 | 第四螺纹 | 50 | 防滑件 |
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例,参照附图做进一步说明。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
在本发明中,除非另有明确的规定和限定,术语“连接”、“固定”等应做广义理解,例如,“固定”可以是固定连接,也可以是可拆卸连接,或成一体;可以是机械连接,也可以是电连接;可以是直接相连,也可以通过中间媒介间接相连,可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系,除非另有明确的限定。对于本领域的普通技术人员而言,可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
另外,在本发明中如涉及“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此,限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外,各个实施例之间的技术方案可以相互结合,但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础,当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在,也不在本发明要求的保护范围之内。
本发明提出一种用于细胞连续培养及取样的装置100,包括:
多个摇瓶,所述摇瓶包括:
瓶体10,所述瓶体10具有瓶颈11,所述瓶颈11的上端开设有瓶口12,所述瓶颈11靠近所述瓶口12的一端的外周壁设有第一螺纹111,所述第一螺纹111上形成有第一排气通道112;
转接件20,所述转接件20包括两端贯通的管体部21,所述管体部21的下端开口41的内壁处设有与所述第一螺纹111相适配的第二螺纹213,所述第一螺纹111与所述第二螺纹213螺纹连接使所述转接件20固定于所述瓶体10,所述管体部21的外侧相对设置有至少两个接口管22,所述至少两个接口管22呈中空设置且连通所述管体部21内的空间;所述管体部21靠近其上端开口41的外周壁上设有第三螺纹211;
瓶盖40,所述瓶盖40的内周壁设有与所述第三螺纹211相适配的第四螺纹42;
吸液管,置于所述瓶体10内,所述吸液管的一端与所述接口管22相连接,所述吸液管上设有通气孔;以及
连接管,所述连接管包括出液管和进液管,所述出液管的一端从外部与连接有吸液管的接口管22相连接,所述进液管的一端与另一接口管22相连接;
其中,所述前级摇瓶的出液管的另一端与后级摇瓶的进液管的另一端固定连通,所述前级摇瓶的出液管可对接动力装置以将前级摇瓶内的液体转移到次级摇瓶内。
在本发明实施例中,瓶盖40通过螺纹固定于转接件20上,所述瓶体10可以为锥形瓶。所述瓶体10可以采用医用聚碳酸酯(PC)材质,具有透明度高、抗冲击力强、抗氧化、可耐高温(121℃)等优点。所述瓶体10上可以印设有多个刻度线,便于实验者观察所述瓶体10内培养基的容量。所述瓶体10也可以采用PECT材料。所述瓶体10可以采用无菌独立包装,这样实验者使用前不需要灭菌,使用比较方便。所述瓶体10的瓶口12处可以设有防挂液部(例如凸设的环状结构),这样便于溶液的倾倒。所述瓶体10的瓶颈11可以设置的比较长,便于实验者把持和降低实验者手部污染所述瓶口12的概率。
瓶体10的规格为125ml、250ml、500ml、1500ml、2000ml、3000ml或5000ml。3000ml或者5000ml规格的瓶体10的体积比较大,拿取不便,为了方便拿取,瓶体10上可以设有把手。把手可以套设在瓶颈11外,且位于瓶体止挡件14的下方。把手也可以设于瓶体10的一侧,且位于瓶体止挡件14的下方。根据不同的规格,瓶颈11的直径可以大于或等于35mm,且小于或等于100mm;瓶底的直径可以为大于或等于65mm,且小于或等于230mm;瓶体10的高度可以为大于或等于110mm,且小于或等于300mm。
所述排气通道的结构具有多种,所述排气通道可以为排气缺口,也可以为排气开孔,下文会对此进行详细介绍,不再赘述。所述排气通道的数量可以为一个或者多个。当所述摇瓶的瓶盖40靠近所述瓶口12时,所述瓶盖40给予所述瓶口12附近的气体一个向下的压力,气体受到压力经由所述第一螺纹111上的所述排气通道向下排出,不会受到所述第一螺纹111的阻挡而聚集在相邻的两个螺纹圈之间,相邻的两个螺纹圈之间的气体变少,导致所述瓶盖40内外的气体压力不同,所述瓶盖40外的大气压力给予所述瓶盖40靠近所述瓶口12的力,从而提高了所述瓶盖40与所述瓶口12的连接紧密性。
转换件(可结合图8和图9),可以采用聚丙烯(PP)或聚乙烯(PE)等材料,转接件20具有一个底盖24,底盖24和瓶盖40(见图7)大小相仿,为了盖合瓶体10时方便,底盖24上还可在外周侧面上可以设有防滑件50。具体地,防滑件50可以为凸设于底盖24上的防滑条。防滑条的数量为多个。多个防滑条可以沿上下方向延伸,并沿底盖24的周向呈间隔设置。多个防滑条也可以沿底盖24的周向延伸呈环,并在上下方向上呈间隔设置。防滑件50还可以为凸设于底盖24上的多个防滑颗粒,多个所述防滑颗粒呈间隔设置。转接件20的管体部21位于底盖24的上方,二者为连通设置,底盖24的厚度大于管体部21使得连接处具有较好的强度,接口管22设于管体部21靠近底盖24处,接口管22可设置一个,该接口管22可视情况装配有弹性体管件。因为接口管22贯通转接件20的内壁使得从接口管22处能连通摇瓶内外的空间。
底盖24的内壁设有与第一螺纹111相适配的第二螺纹213,第一螺纹111上设有排气通道;如此,底盖24靠近所述瓶口12时,底盖24给予瓶口12附近的气体一个向下的压力,气体受到压力经由所述第一螺纹111上的所述排气通道向下排出,不会受到所述第一螺纹111的阻挡而聚集在相邻的两个螺纹圈之间,相邻的两个螺纹圈之间的气体变少,导致底盖24内外的气体压力不同,底盖24外的大气压力给予底盖24靠近瓶口12的力,从而提高了底盖24与瓶口12的连接紧密性。
吸液管(图中未标识)可采用医用塑胶制成,如医用PP,PTFE,PVC材料等,吸液管与接口管22的连接方式可通过插入、胶合或旋拧实现,另一端置于瓶体10的底部或接近底部,方便转液或其他操作。吸液管的上部开有0.5-2mm直径的小孔,在取样结束后,空气进入小孔平衡内外压力,吸液管内部残留的液体会在重力作用下自然下降。
请参阅图1至图4以及图7,摇瓶还包括瓶盖40,瓶盖40的内周壁设有与第三螺纹211相适配的第四螺纹42,瓶盖40的顶端设有开口41,开口41处设有滤膜,滤膜用以封闭开口41。开口41的数量可以为多个,多个开口41呈间隔设置。开口41可以呈圆形、方形、三角形、多边形、腰形或者异形。多个开口41可以为大小一致,也可以为大小不一致。滤膜可以为PTFE滤膜,滤膜上设有多个直径为0.2μm的滤孔,滤孔可以阻止微生物进出,避免培养过程中污染的发生。同时,细胞在培养过程中新陈代谢产生的气体可以透过滤孔,与外界大气发生气体交换。瓶盖40可以设置为黄色、蓝色、红色或者绿色等颜色,以供实验者对样品进行区分。瓶盖40也可以为密封盖,也即瓶盖40上不开设有开口41。瓶盖40可以由聚乙烯(PE)材料制备而成,例如HDPE或LLDPE。为了增大摩擦力,所述瓶盖40的外周侧面上也可以设有防滑件50。防滑件50的具体方式及结构已在上文进行说明,在此不再一一赘述。
本发明技术方案通过在初级摇瓶将细胞培养至一定规模后,通过出液管与进液管与初级摇瓶的接口管22相连,在将初级摇瓶的出液管与次级摇瓶的进液管相连通,对摇瓶的培养液体进行转移时,只需通过转接件20进行培养液体的转移,大大降低污染的风险,并且因为接口管22设于侧面,大大降低了摇瓶的整体高度,如此,当需要继续扩大细胞培养规模,只需重复连接操作,方便灵活。
可选地,为了移液过程的接管的牢固性,见图2、图8或图9,所述接口管22包括第一接口段221和第二接口段222,所述第一接口段221外露于所述管体部21,所述第二接口段222穿设所述管体部21,所述第一接口段221的外径大于所述第二接口段222的外径使得二者间形成有阶梯。吸液管可插入到第二接口段222与第一接口段221分界处,使得吸液管与第二接口段222的连接牢固,使得液体流经时不会流出,另外,可在将软连管一端套入接口管22并包裹第一接口段221,由于第一接口段221外径较大形成有阶梯,软连管能与接口管22连接稳固,避免松脱造成污染。
进一步地,为了方便液体的流入和流出,见图1至图4,所述接口管22朝上倾斜设置。接口管22设置在管口部如树干分叉的树枝一般,接口管22与管口部的倾斜角度可在30°~75°设置,允许摇瓶内的细胞液通过接口管22流入\流出。可以理解地,接口管22设置两个即能满足转移培养液的操作需求。在一些情况中,还可根据使用需求设置两个以上的接口管22,如方便测量等等。
进一步地,请参阅图1至图5,第一螺纹111包括多个螺纹圈,多个螺纹圈上均设有缺口,多个缺口相互连通形成第一排气通道112。在一实施例中。缺口的形状具有多种,缺口可以大致呈半圆形、三角形、方形或者梯形等。同一螺纹圈上可以设有一个或者更多个缺口,对此不做限定。
进一步地,请参阅图1至图5,缺口在瓶颈11的径向上呈扩口设置。这样设置,缺口具有比较大的面积,气体经由缺口排出的速度比较快,使得相邻的两个螺纹圈之间残存气体的含量更少,进一步提高了底盖24与瓶口12的连接紧密性。在一实施例中,多个缺口在上下方向上排列呈直线形。这样设置,相邻两个缺口之间的直线距离比较短,气体向下排出的速度更快,也进一步提高了底盖24与瓶口12的连接紧密性。当然,多个缺口也可以在上下方向上排列呈曲线形。
在另一实施例中,第一螺纹111的多个螺纹圈上可均贯设有开孔,多个开孔相互连通形成排气通道。开孔的形状可以呈圆形、方形、三角形、多边形、腰形或者异形。同一螺纹圈上的开孔的数量可以为一个或者多个。多个开孔在上下方向上的排列也可以呈直线形或者曲线形。第一螺纹111的多个螺纹圈上可以既设有多个缺口,也可以设有多个开孔,多个缺口与多个开孔相互连通形成排气通道,这样同样能够实现向下排出气体的效果。可以理解地,上述的设置方式也可以在第三螺纹211中设置,即管体部21靠近其上端开口41的外周壁上设有第三螺纹211,所述第三螺纹211上形成有第二排气通道212。
进一步地,见图4、图5,摇瓶还包括密封件13,密封件13凸设在瓶颈11的外周,且设于第一螺纹111的下方。摇瓶包括密封件13,密封件13凸设在瓶颈11的外周,且设于第一螺纹111的下方,瓶体10具有瓶底,密封件13的外侧面在瓶口12朝向瓶底的方向上,朝向远离瓶体10中心线的方向倾斜。具体地,密封件13呈环状。当瓶盖40与第一螺纹111螺纹连接的过程中,密封件13的向外倾斜设置导向瓶盖40的移动,避免瓶体10在连接过程中发生倾倒。另一方面,瓶盖40抵接密封件13的边缘,加强了瓶盖40密封瓶口12的效果。
请继续参阅图4和图5,摇瓶包括瓶体止挡件14,瓶体止挡件14凸设在瓶颈11外,且位于密封件13的下方。瓶体止挡件14的结构具有多种。瓶体止挡件14可以为沿瓶颈11周向延伸的止挡板,瓶体止挡件14可以呈圆环状,这样瓶体止挡件14与瓶盖40的形状比较适配。止挡件也可以为止挡块,止挡块可以呈三角形、方形或者圆弧形。止挡块的数量可以为一个;也可以为多个,多个止挡块沿瓶颈11的周向呈间隔设置。止挡件可以阻止瓶盖40继续下移,避免瓶盖40磕坏瓶口12。止挡件的底面在瓶口12朝向瓶底的方向上,朝向靠近瓶体10中心线的方向倾斜。这样设置,止挡件的顶面与止挡件的底面之间形成三角结构,稳定性比较高。止挡件从而具有比较高的承载力,可以避免止挡件在瓶盖40的压力下发生折断。另外,管体部21的外壁上也设有止挡部,转接件止挡件2323位于所述第三螺纹211下方。转换件止挡件设置于瓶体止挡件14设置相同,在此不再说明。
细胞如在此所指,细胞被定义为能够独立发挥功能的生物体的最小结构单位,或单细胞的生物体,其由全部都被半透性的细胞膜或细胞壁包围的一个或多个细胞核、细胞质和多种细胞器组成。该细胞可以是原核的、真核的或古细菌的。例如,细胞可以是真核细胞。如哺乳动物细胞,特别是人细胞。细胞可以是天然的或例如通过遗传操作或在培养物中传代而改进以获得所需要的特性。对干细胞如下进行更详细地定义,其是能够产生一个以上分化的细胞类型的全能性、多潜能或多能细胞。干细胞可以在体外分化以产生分化的细胞,其本身可以是多能的,或可以是末端分化的。体外分化的细胞是已经通过将干细胞暴露于一种或多种促进细胞分化的试剂而人工产生的细胞。
初级摇瓶,表示选定初步进行细胞培养的摇瓶,且需要进行瓶内细胞液转移的摇瓶。
次级摇瓶,表示接收初级摇瓶的细胞液的摇瓶,且次级摇瓶的容积大于初级摇瓶。
堵头,表示用以封堵接管的密封件,其可与进液管、出液管相连,亦可与接口管相连。
本发明还提出一种细胞连续培养方法,该细胞连续培养方法包括以下步骤,选取初级摇瓶,在初级摇瓶中进行细胞培养;
当初级摇瓶中的细胞增殖至预设规模时,提供容量大于该初级摇瓶的次级摇瓶;
加入适量培养基于在次级摇瓶中;
连接进液管和出液管,将出液管与初级摇瓶中连接有吸液管的接口管相连,将进液管与次级摇瓶中未连接吸液管的接口管相连接,再将初级摇瓶的出液管与次级摇瓶的进液管相连通;
通过初级摇瓶中出液管连接动力装置将初级摇瓶内的液体转移到次级摇瓶内;
断开出液管和进液管,用堵头将次级摇瓶的两个接口管进行密封,将次级摇瓶放入摇床继续培养。
在一情况中,当初级摇瓶中的细胞培养液中的细胞浓度增高到一定的程度时,可选取一次级摇瓶进行移液操作,具体地,将初级摇瓶的转接件两端的堵头取下,在初级摇瓶的进液口连接进液管和出液口连接出液管,在次级摇瓶中的进液口连接进液管,将初级摇瓶的出液管和次级摇瓶的进液管相连接,通过蠕动泵或压缩空气等动力装置将初级摇瓶内的液体转移至次级摇瓶内。如此,对初级摇瓶移液时只需进行管路连接的无菌操作,大大降低污染的风险,并且需要对培养中的摇瓶进行开盖时无需将吸液管整体拿出,只需将瓶盖打开即可,避免吸液管接触台面造成污染,用户日常操作不受影响。
在需要对摇瓶进行取样时,选定需要取样的摇瓶,准备洁净的一次性注射器,取下出液口上的堵头,将注射器接至出液口的接头上,抽取适当液体后,取下注射器,将堵头连回出液口。为了避免液体在取样后在管路内的残留,吸液管,置于所述瓶体内,所述吸液管的一端与所述接口管22相连接,所述吸液管上设有通气孔(图中未标识)。通气孔为吸液管的上部设有0.5-2mm的小孔,瓶内的空气可以通过小孔进入吸液管,吸液管内的液体在重力作用下自然下降。
在另一情况中,需要进行高密度细胞培养时,可通过出液口进行补液和通气,实现连续长时间培养。具体地,取下出液口的堵头,前级摇瓶的出液管与次级摇瓶的进液管直接通过三通阀相连通,即通过三通接头连通,在三通接头其中一端连接进气过滤器,另一端连接进液瓶。调整装置的进气压力及流量,使过滤后的空气从摇瓶底部冒出,然后将软管夹入蠕动泵,设置合适转速,开始补料。此外,在一个培养箱中安装在一个摇动平台上的具有本文描述的摇瓶的并行培养显著降低了培养成本和复杂度,因此仍然允许在可再现且可比较的条件下更快、更高效且成本降低的过程开发。
以上所述仅为本发明的可选实施例,并非因此限制本发明的专利范围,凡是在本发明的发明构思下,利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换,或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种用于细胞连续培养及取样的装置,其特征在于,包括:
多个摇瓶,所述摇瓶包括:
瓶体,所述瓶体具有瓶颈,所述瓶颈的上端开设有瓶口,所述瓶颈靠近所述瓶口的一端的外周壁设有第一螺纹,所述第一螺纹上形成有第一排气通道;
转接件,所述转接件包括两端贯通的管体部,所述管体部的下端开口的内壁处设有与所述第一螺纹相适配的第二螺纹,所述第一螺纹与所述第二螺纹螺纹连接使所述转接件固定于所述瓶体,所述管体部的外侧相对设置有至少两个接口管,所述至少两个接口管呈中空设置且连通所述管体部内的空间;所述管体部靠近其上端开口的外周壁上设有第三螺纹;
瓶盖,所述瓶盖的内周壁设有与所述第三螺纹相适配的第四螺纹,所述瓶盖通过螺纹固定于所述转接件;
吸液管,置于所述瓶体内,所述吸液管的一端与所述接口管相连接,所述吸液管上设有通气孔;以及
连接管,所述连接管包括出液管和进液管,所述出液管的一端从外部与连接有吸液管的接口管相连接,所述进液管的一端与另一接口管相连接;
其中,所述前级摇瓶的出液管的另一端与后级摇瓶的进液管的另一端固定连通,所述前级摇瓶的出液管可对接动力装置以将前级摇瓶内的液体转移到次级摇瓶内。
2.如权利要求1所述的用于细胞连续培养及取样的装置,其特征在于,前级摇瓶的出液管与次级摇瓶的进液管直接通过三通阀相连通。
3.如权利要求1所述的用于细胞连续培养及取样的装置,其特征在于,所述接口管包括第一接口段和第二接口段,所述第一接口段外露于所述管体部,所述第二接口段穿过所述管体部,所述第一接口段的外径大于所述第二接口段的外径使得二者间形成有阶梯。
4.如权利要求3所述的用于细胞连续培养及取样的装置,其特征在于,所述接口管朝上倾斜设置。
5.如权利要求1所述的用于细胞连续培养及取样的装置,其特征在于,所述第一螺纹包括多个螺纹圈,所述多个螺纹圈上均设有缺口,多个所述缺口相互连通形成所述第一排气通道。
6.如权利要求5所述的用于细胞连续培养及取样的装置,其特征在于,所述缺口在所述瓶颈的径向上呈扩口设置。
7.如权利要求1所述的用于细胞连续培养及取样的装置,其特征在于,所述第三螺纹与所述第一螺纹相同,所述第三螺纹上形成有第二排气通道。
8.如权利要求7所述的用于细胞连续培养及取样的装置,其特征在于,所述管体部的外壁上还设有止挡部,所述止挡部位于所述第三螺纹下方。
9.如权利要求7所述的用于细胞连续培养及取样的装置,其特征在于,所述瓶盖的顶端设有开口,所述开口处设有滤膜,所述滤膜用以封闭所述开口。
10.一种细胞连续培养的方法,所述细胞连续培养方法包括以下步骤:
选取初级摇瓶,在初级摇瓶中进行细胞培养;
当初级摇瓶中的细胞增殖至预设规模时,提供容量大于该初级摇瓶的次级摇瓶;
加入适量培养基于在次级摇瓶中;
连接进液管和出液管,将出液管与初级摇瓶中连接有吸液管的接口管相连,将进液管与次级摇瓶中未连接吸液管的接口管相连接,再将初级摇瓶的出液管与次级摇瓶的进液管相连通;
通过初级摇瓶中出液管连接动力装置将初级摇瓶内的液体转移到次级摇瓶内;
断开出液管和进液管,用堵头将次级摇瓶的两个接口管进行密封,将次级摇瓶放入摇床继续培养。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110867490.5A CN113667601A (zh) | 2021-07-28 | 2021-07-28 | 用于细胞连续培养及取样的装置和方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110867490.5A CN113667601A (zh) | 2021-07-28 | 2021-07-28 | 用于细胞连续培养及取样的装置和方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113667601A true CN113667601A (zh) | 2021-11-19 |
Family
ID=78540815
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110867490.5A Pending CN113667601A (zh) | 2021-07-28 | 2021-07-28 | 用于细胞连续培养及取样的装置和方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113667601A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115232713A (zh) * | 2022-09-02 | 2022-10-25 | 安徽大学 | 一种便携式去除培养基中氧气的实验室简易装置 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1221031A (zh) * | 1998-08-26 | 1999-06-30 | 刘放 | 微生物工业发酵连续转接新工艺 |
CN202430229U (zh) * | 2011-12-22 | 2012-09-12 | 上海康岱生物医药技术股份有限公司 | 一种大容量细胞培养转瓶 |
CN105018337A (zh) * | 2014-04-25 | 2015-11-04 | 朱海东 | 一种取样、补料相结合的多功能摇瓶发酵装置 |
CN205473761U (zh) * | 2016-03-14 | 2016-08-17 | 上海康岱生物医药技术股份有限公司 | 一种细胞液转移瓶 |
CN206956035U (zh) * | 2017-05-05 | 2018-02-02 | 上海康岱生物医药技术股份有限公司 | 一种细胞液转移装置 |
CN109576183A (zh) * | 2018-12-24 | 2019-04-05 | 上海智城分析仪器制造有限公司 | 一种用于细菌的虹吸导管补料摇床培养方法 |
CN210163444U (zh) * | 2018-12-24 | 2020-03-20 | 上海智城分析仪器制造有限公司 | 一种虹吸导管补料摇床 |
CN210506341U (zh) * | 2019-06-20 | 2020-05-12 | 福建农林大学 | 一种食用菌液体培养中换培养液的装置 |
CN212476783U (zh) * | 2020-06-08 | 2021-02-05 | 深圳市中凯业科技有限公司 | 一种间充质干细胞培养分离装置 |
-
2021
- 2021-07-28 CN CN202110867490.5A patent/CN113667601A/zh active Pending
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1221031A (zh) * | 1998-08-26 | 1999-06-30 | 刘放 | 微生物工业发酵连续转接新工艺 |
CN202430229U (zh) * | 2011-12-22 | 2012-09-12 | 上海康岱生物医药技术股份有限公司 | 一种大容量细胞培养转瓶 |
CN105018337A (zh) * | 2014-04-25 | 2015-11-04 | 朱海东 | 一种取样、补料相结合的多功能摇瓶发酵装置 |
CN205473761U (zh) * | 2016-03-14 | 2016-08-17 | 上海康岱生物医药技术股份有限公司 | 一种细胞液转移瓶 |
CN206956035U (zh) * | 2017-05-05 | 2018-02-02 | 上海康岱生物医药技术股份有限公司 | 一种细胞液转移装置 |
CN109576183A (zh) * | 2018-12-24 | 2019-04-05 | 上海智城分析仪器制造有限公司 | 一种用于细菌的虹吸导管补料摇床培养方法 |
CN210163444U (zh) * | 2018-12-24 | 2020-03-20 | 上海智城分析仪器制造有限公司 | 一种虹吸导管补料摇床 |
CN210506341U (zh) * | 2019-06-20 | 2020-05-12 | 福建农林大学 | 一种食用菌液体培养中换培养液的装置 |
CN212476783U (zh) * | 2020-06-08 | 2021-02-05 | 深圳市中凯业科技有限公司 | 一种间充质干细胞培养分离装置 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115232713A (zh) * | 2022-09-02 | 2022-10-25 | 安徽大学 | 一种便携式去除培养基中氧气的实验室简易装置 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2749857T3 (es) | Colector para sistema de cultivo celular de múltiples capas de acceso limitado | |
US10774362B2 (en) | Sample preparation unit and sample preparation device | |
CN113667601A (zh) | 用于细胞连续培养及取样的装置和方法 | |
AU2011316628A1 (en) | Ventable closure with port | |
CN216337703U (zh) | 用于细胞连续培养及取样的摇瓶和装置 | |
CN212284085U (zh) | 一种离心管 | |
CN210367724U (zh) | 一种细胞基因工程用干细胞培养瓶 | |
CN208500961U (zh) | 一种新型的巴氏吸管 | |
CN220450184U (zh) | 细胞上清负压收集瓶 | |
CN209338545U (zh) | 内镜微生物取样器 | |
CN208167010U (zh) | 一种生物反应器取样装置 | |
CN205576165U (zh) | 一种改进的细胞培养瓶 | |
CN214004656U (zh) | 一种新型细胞培养装置 | |
CN104819870A (zh) | 一种微生物分析取样装置 | |
CN109136076A (zh) | 一种细胞培养液实时提供装置 | |
CN208318102U (zh) | 细胞存储装置 | |
CN215628022U (zh) | 摇瓶 | |
CN218989234U (zh) | 一种用于培养基转移的装置 | |
CN220432833U (zh) | 一种快速提取单个核细胞的分离管 | |
CN215767835U (zh) | 无菌取样装置 | |
CN211645228U (zh) | 便捷取样的充气式浮游生物无菌培养装置 | |
CN212128203U (zh) | 一种适用于研究培养物间通过气体交流互作的培养装置 | |
CN208266191U (zh) | 一种细胞培养瓶 | |
CN217535994U (zh) | 一种厌氧湿发酵取液装置 | |
CN213266493U (zh) | 一种取样装置 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |