CN113661178A

CN113661178A - 抗癌组合疗法

Info

Publication number: CN113661178A
Application number: CN202080025345.6A
Authority: CN
Inventors: V·津萨拉; B·德罗比特·汉德尔; M·J·鲍尔
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2019-03-29
Filing date: 2020-03-26
Publication date: 2021-11-16
Also published as: BR112021016520A2; EP3947455A1; IL286700A; AU2020250810A1; CA3130663A1; MX2021011854A; KR20210144736A; WO2020200997A1; JP2022527097A; US20200308276A1; CL2021002190A1; TW202108615A; EA202192596A1

Abstract

本发明描述包含使用能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽与抗PD1抗体的组合的抗癌疗法，该多肽及该抗PD1抗体各自如本申请所述。

Description

抗癌组合疗法

本发明关于用于治疗癌症的组合疗法及用于该组合疗法中的化合物。用于组合的化合物是LRP5/6拮抗剂及PD-1拮抗剂。

背景技术

Wnt信号传导通路的活化需要细胞外Wnt配体与卷曲受体及辅受体LRP5(登录号：UniProtKB-O75197/LRP5_HUMAN)或其密切相关的同源物LRP6(登录号：UniProtKB-O75581/LRP6_HUMAN)结合。哺乳动物细胞中有19种Wnt蛋白及10种卷曲受体。在Wnt配体不存在的情况下，细胞质β-连环蛋白被由支架蛋白Axin及APC以及激酶GSK3β及CK1a组成的蛋白复合物磷酸化。随后由泛素连接酶β-TrcP识别导致泛素介导的β-连环蛋白降解。在Wnt配体存在下，Wnt与Frizzled及LRP5或LRP6的结合导致细胞质效应蛋白Dvl的招募及LRP5或LRP6胞质尾区的磷酸化，其为Axin提供停靠位点。通过LRP5或LRP6的Axin螯合导致Axin-APC-GSK3β复合物的不活化，且因此导致细胞内β-连环蛋白的稳定及累积。因此，β-连环蛋白的细胞质含量升高，且β-连环蛋白迁移至细胞核中，且与转录因子的T细胞因子(TCF)/淋巴增强子结合因子(LEF)家族成员复合。然后招募基础转录机制及转录共活化剂，包括cAMP反应组件结合蛋白(CREB)-结合蛋白(CBP)或其同源物p300，导致各种靶基因的表达，这些靶基因包括Axin2、细胞周期蛋白D1、Naked1、Notum及c-Myc。

配体依赖性Wnt通路调节的额外水平由E3连接酶RNF43及其密切相关的同源物ZNRF3及分泌的R-Spondin蛋白介导(de Lau等“The R-spondin/Lgr5/Rnf43 module:regulator of Wnt signal strength”.Genes Dev.2014；28(4):305-16)。RNF43介导Frizzled/LRP5或LRP6受体复合物在细胞表面的泛素化，从而导致其降解，且由此抑制配体依赖性Wnt通路活性。RNF43的活性由R spondin家族成员(R-spondin 1至4配体)抵消。当R-Spondin配体存在时，其自细胞表面去除RNF43，从而允许在Wnt配体存在下Frizzled/LRP5或LRP6复合物累积及Wnt信号传导增强。

Wnt信号传导的过度活化以至少两种不同方式参与多种(虽然并非全部)类型的癌症的发病机制：在一些癌症类型中，下游信号传导分子中的频繁突变有助于组成型活化的Wnt通路(例如结肠直肠癌中的APC突变；肝细胞癌中的β-连环蛋白活化突变)，而在其他类型的癌症中，例如三阴性乳腺癌(TNBC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、胰脏腺癌以及结肠直肠癌(CRC)及子宫内膜癌的亚组中，Wnt信号活化由配体依赖性机制(即自分泌/旁分泌Wnt活化)驱动，如通过β-连环蛋白细胞内累积所检测。在NSCLC、TNBC及胰脏腺癌中，配体依赖性Wnt活化由多种机制介导，包括Wnt配体及/或LRP5及LRP6受体的表达增加、或LRP5及LRP6负调节剂DKK1的沉默(TNBC:Liu等“LRP6overexpression defines a class of breast cancersubtype and is a target for therapy”.Proc Natl Acad Sci U S A 2010；107(11):5136-41；Khramtsov等“Wnt/beta-catenin pathway activation is enriched in basal-like breast cancers and predicts poor outcome”.Am J Pathol.2010；176(6):2911-20；NSCLC:Nakashima等“Wnt1 overexpression associated with tumor proliferationand a poor prognosis in non-small cell lung cancer patients”.Oncol Rep.2008；19(1):203-9；Pancreatic cancer:Zhang等“Canonical wnt signaling is required forpancreatic carcinogenesis”.Cancer Res.2013；73(15):4909-22)。具体而言，公开的数据已显示在健康组织(例如乳腺及肺上皮)中，β-连环蛋白仅定位在质膜。相反，由于异常Wnt信号传导，大多数TNBC、NSCLC及胰脏腺癌原发性临床样品显示β-连环蛋白细胞内累积(即在细胞质/细胞核中；Wnt信号传导活化的生物标记)。最近的出版物已显示配体依赖性Wnt信号活化由突变/不活化的RNF43(Giannakis等“RNF43 is frequently mutated incolorectal and endometrial cancers”.Nat Genet.2014；46(12):1264-6)或通过活化CRC及子宫内膜癌亚组中的R-Spondin融合转录本(编码由组成型活性强启动子取代的R-spondin2或R-spondin3蛋白；Seshagiri等“Recurrent R-spondin fusions in coloncancer”.Nature 2012；488(7413):660-4)介导。不活化的RNF43突变及R-spondin融合转录本二者皆已显示通过增加细胞表面上Frizzled的丰度而增强活体外配体依赖性Wnt信号传导。显示肿瘤中配体依赖性Wnt活化可驱动肿瘤生长及对化学疗法或免疫疗法的抗性，且与临床前模型中的复发有关。

由于LRP5及LRP6作为配体依赖性Wnt信号传导活化的看门人起作用，故其可被认为实现完全阻断由所有19个Wnt配体及10个Frizzled受体介导的通路的靶标。

直接靶向癌症/癌细胞的上述方法的替代方法是癌症免疫疗法。癌症免疫疗法是肿瘤学的分枝，其中免疫系统用于治疗癌症，此与现存常见治疗方法形成鲜明对比，在常见治疗方法中，直接切除或治疗肿瘤。此治疗概念基于鉴别T细胞表面上用于抑制这些细胞的免疫功能的许多蛋白质。这些蛋白质中列出了PD-1(程序性细胞死亡1)。

PD-1在T细胞上表达的细胞表面受体蛋白。PD-1具有两种配体PD-L1及PD-L2，其与细胞表面受体相互作用。在配体结合时，PD-1诱导负调节T细胞反应的细胞内信号。因此，通常，该蛋白质起“免疫检查点”抑制剂的作用，即其用于调节免疫系统中细胞的活性，以调节及限制自体免疫疾病。最近已了解，许多癌症可通过修饰“免疫检查点”抑制剂来保护自身免受免疫系统的影响，并因此避免检测。

因此，在一系列不同癌症背景中也显示拮抗性PD-1抗体分子(例如尼沃鲁单抗(nivolumab)及派姆单抗(pembrolizumab))可用于刺激免疫系统且由此治疗癌症。

尽管癌症治疗中有上述进展，但仍需要显示优于标准疗法的优点的治疗癌症的新治疗概念。这些优点可包括活体内效能(例如改善的临床反应、反应的延长、反应速率的增加、反应的持续时间、疾病稳定速率、稳定的持续时间、疾病进展时间、无进展存活(PFS)及/或总体存活(OS)、抗性的稍后发生及诸如此类)、安全且良好耐受的投与以及不良事件的降低的频率及严重程度。具体地，对于患有癌症(例如肺癌(例如NSCLC)、黑色素瘤、膀胱癌及胃肠癌)的患者，需要额外治疗选择。

因此，本发明的目的是提供相对于目前使用的及/或现有技术中已知的治疗方法有利的新颖癌症治疗。

发明内容

本发明提供用LRP5/LRP6拮抗剂(该术语在本申请与术语“特异性结合至LRP5及LRP6的多肽”或“能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽”可互换使用)及对程序性细胞死亡1(PD-1)特异性的抗体(该术语在本申请与术语“抗PD-1抗体”、“PD-1抗体”或“PD-1拮抗剂”可互换使用)治疗患有过度增殖疾病的患者、由此拮抗PD-1信号传导通路的方法。因此，本发明提供包含LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD-1抗体的组合疗法。

在一个方面中，本发明提供能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽，其用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法，其中该方法包含将能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽与PD-1抗体组合投与给有此需要的患者，

其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽选自由以下组成的组：

(i)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

(i)抗PD1抗体，其包含含有SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)及SEQ IDNO:3(HCDR3)的氨基酸序列的重链CDR及含有SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)及SEQ ID NO:6(LCDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；

(ii)抗PD1抗体，其包含含有SEQ ID NO:7(HCDR1)、SEQ ID NO:8(HCDR2)及SEQ IDNO:9(HCDR3)的氨基酸序列的重链CDR及含有SEQ ID NO:10(LCDR1)、SEQ ID NO:11(LCDR2)及SEQ ID NO:12(LCDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；

及

(iii)抗PD1抗体，其包含含有SEQ ID NO:13(HCDR1)、SEQ ID NO:14(HCDR2)及SEQID NO:15(HCDR3)的氨基酸序列的重链CDR及含有SEQ ID NO:16(LCDR1)、SEQ ID NO:17(LCDR2)及SEQ ID NO:18(LCDR3)的氨基酸序列的轻链CDR。

在另一个方面中，本发明提供治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法，其包含向有此需要的患者投与治疗有效量的能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽及治疗有效量的PD-1抗体，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽选自由以下组成的组：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

在另一个方面中，本发明提供PD-1抗体，其用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中，该方法包含将PD-1抗体与能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽组合投与给有此需要的患者，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽选自由以下组成的组：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

在另一个方面中，本发明提供能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽的用途，其用于制备用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中的医药组合物，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽将与PD-1抗体组合使用，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽选自由以下组成的组：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

在另一个方面中，本发明提供PD-1抗体的用途，其用于制备用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中的医药组合物，其中该PD-1-抗体将与选自由以下组成的组的能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽组合使用：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

在另一个方面中，本发明提供医药组合物，其包含：

·能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽；

·PD-1抗体；及

·任选地，一或多种医药上可接受的载剂、赋形剂及/或媒剂；

其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽选自由以下组成的组：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

在一些实施例中，医药组合物用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中。

在另一个方面中，本发明提供试剂盒，其在一或多个容器中包含

·第一医药组合物或剂型，其包含能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽及任选地一或多种医药上可接受的载剂、赋形剂及/或媒剂；

·第二医药组合物或剂型，其包含PD-1抗体及任选地一或多种医药上可接受的载剂、赋形剂及/或媒剂；及

·任选地包含印刷说明书的包装插页；

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

在一些实施例中，本发明的试剂盒用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中。

在本发明的优选实施例中，能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽选自由以下组成的组：

(i)多肽，其包含含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的第一ISVD及含有SEQ ID NO:61的序列的第二ISVD；

(ii)多肽，其包含含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的第一ISVD及含有SEQ ID NO:61的序列的第二ISVD；

(iii)多肽，其包含含有SEQ ID NO:60的序列的第一ISVD及含有SEQ ID NO:61的序列的第二ISVD；

(iv)多肽，其包含含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的第一ISVD及含有SEQ ID NO:62的序列的第二ISVD；

(v)多肽，其包含含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的第一ISVD及含有SEQ ID NO:62的序列的第二ISVD；及

(vi)多肽，其包含含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的第一ISVD及含有SEQ ID NO:62的序列的第二ISVD；

优选地，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽进一步包含含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的Alb11结构域。

在特别优选的实施例中，能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽包含含有选自由SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65及SEQ ID NO:66组成的组的氨基酸序列的多肽。

在本发明的优选实施例中，抗PD1抗体选自由以下组成的组：

(i)具有包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链可变结构域及含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链可变结构域的抗体；

(ii)具有包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链可变结构域及含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链可变结构域的抗体；

(iii)具有包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变结构域及含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变结构域的抗体；

(iv)具有包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链可变结构域及含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链可变结构域的抗体；及

(v)具有包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的重链可变结构域及含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链可变结构域的抗体。

在本发明的特别优选的实施例中，PD-1抗体选自由以下组成的组：

(i)包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链的抗体；

(ii)包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链的抗体；

(iii)包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链的抗体；

(iv)包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链的抗体；及

(v)包含含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链的抗体。

在本发明的一些实施例中，PD-1抗体将与能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽同时、并行、依序、连续、交替或分开投与。

在优选实施例中，能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽及PD-1抗体将根据以下治疗方案投与：

(i)第一治疗期，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽及PD-1抗体将同时或并行投与，优选每三周或四周一次；及

(ii)第二治疗期，其中仅投与PD-1抗体且不投与能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽，优选地其中PD-1抗体将每三周或四周投与一次。

在本发明的优选实施例中，欲治疗的过度增殖疾病选自由以下组成的组的癌症：胃肠癌、黑色素瘤肿瘤、膀胱癌及肺癌(例如NSCLC)，甚至更优选地癌症是免疫疗法抗性胃肠癌(包括(但不限于)食道癌(例如胃食道接合部癌)、胃(stomach或gastric)癌、肝细胞癌、胆道癌(例如胆管癌)、胆囊癌、胰脏癌或结肠直肠癌(CRC))、免疫疗法抗性黑色素瘤、免疫疗法抗性膀胱癌或免疫疗法抗性肺癌。

在本发明的替代优选实施例中，欲治疗的过度增殖疾病是实体免疫疗法抗性肿瘤。

附图简单说明.

图1A-1H：显示实例性LRP5/LRP6拮抗剂作为单一药剂及与PD-1的实例性抗体组合在源自Balb/c小鼠中的乳癌细胞系EMT6的皮下同基因小鼠模型中的抗肿瘤活性。图1A：在用同型匹配的抗体处理后指定天数时测量的肿瘤体积；1B：用LRP5/6拮抗剂；1C：用PD-1抗体；1D：用LRP5/6拮抗剂+PD-1抗体。图1E：在用同型匹配的抗体处理后指定天数时测量肿瘤收缩反应；1F：用LRP5/6拮抗剂；1G：用PD-1抗体；1H：用LRP5/6拮抗剂+PD-1抗体。用*指示的编号显示全部研究小鼠中观察到反应的小鼠的数量，即，治疗结束时及开始时的肿瘤体积的比小于1(即指示肿瘤收缩)。

图2显示在源自Balb/c小鼠中乳癌细胞系EMT6的皮下同基因小鼠模型中，通过在第16天时肿瘤样品的免疫组织化学染色评价的作为单一药剂及与PD-1的实例性抗体组合的实例性LRP5/LRP6拮抗剂的肿瘤浸润CD8+淋巴细胞(肿瘤总面积中阳性细胞的％)。

图3A及3B：图3A：显示Wnt信号传导活化阻断PBMC介导的癌细胞存活率的抑制，其通过用LRP5/LRP6拮抗剂治疗而恢复。图3B：展现在与肿瘤细胞(NCI-H1437非小细胞肺癌细胞系)及人类PBMC的活体外共培养分析中，与用LRP5/LRP6拮抗剂的单一疗法相比，LRP5/LRP6拮抗剂及抗人类PD-1抗体的组合导致PBMC介导的肿瘤细胞杀死的增强。稳定转染NCI-H1437细胞以表达红色荧光蛋白(mKate2)并在3D中培养为球状体。在0小时添加Wnt3a(1μg/ml)、LRP5/LRP6拮抗剂(LRP5/6；1000nM)、抗人类PD-1抗体(PD1；200nM)及抗PD-1抗体的同型对照(iso；200nM)。在0小时将活化的人类PBMC(用抗CD3/CD28激动剂预处理72小时)添加至肿瘤细胞中。在指示时间点(天)以荧光信号(mKate2 RFU)测量肿瘤细胞存活率。

发明详述

定义

本发明的上述及其他方面及实施例将自本申请的进一步说明中明了，其中：

除非另外指示或定义，否则所用的所有术语具有其在本领域中的通常含义，此对于本发明所属领域的技术人员来说是清楚的。在冲突的情形下，以包括定义的专利说明书为准。参照(例如)标准手册，例如Sambrook等，“Molecular Cloning:ALaboratory Manual”(第2版)，第1-3卷,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)；Lewin,“Genes IV”,Oxford University Press,New York,(1990)，及Roitt等，“Immunology”(第2版),GowerMedical Publishing,London,New York(1989)，以及本申请引用的一般背景技术。此外，除非另外指明，否则可实施且以本身已知的方式实施未明确详细阐述的所有方法、步骤、技术及操作，如本领域技术人员所明了。再次参照(例如)标准手册、上文提及的一般背景技术及其中引用的其他参考文献。

术语“抗体”涵盖抗体、抗体片段、抗体样分子及与上述中任一者的偶联物。抗体包括(但不限于)多克隆或单克隆、嵌合、人源化、人类、单特异性、双特异性或多特异性抗体。术语“抗体”应涵盖由淋巴细胞产生且(例如)存在于血清中的完整免疫球蛋白、由杂交瘤细胞系分泌的单克隆抗体、通过在宿主细胞中重组表达产生的多肽(其具有免疫球蛋白或单克隆抗体的结合特异性)、及通过进一步处理同时保留其结合特异性而源自这些免疫球蛋白、单克隆抗体或多肽的分子。具体而言，术语“抗体”包括包含两条重链及两条轻链的完整免疫球蛋白。在另一实施例中，该术语涵盖免疫球蛋白的片段，如Fab片段。在另一实施例中，术语“抗体”涵盖具有一或多个源自免疫球蛋白的可变结构域的多肽，如单链抗体(scFv)、单一结构域抗体及诸如此类。

“人类抗体”具有对应于如下抗体的氨基酸序列的氨基酸序列者：其由人类细胞产生或源自利用人类抗体谱或其他编码人类抗体的序列的非人类来源。此人类抗体的定义明确排除包括非人类抗原结合残基的人源化抗体。

如本申请所用术语“重组人类抗体”意欲包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人类抗体，例如自诸如NS0或CHO细胞等宿主细胞或自人类免疫球蛋白基因的转基因动物(例如小鼠)分离的抗体，或使用转染至宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体。这些重组人类抗体具有呈重排形式的可变区及恒定区。本发明的重组人类抗体已经受活体内体细胞超突变。因此，尽管重组抗体中VH及VL区的氨基酸序列源自人类种系VH及VL序列且与其相关，但其可能并非天然存在于活体内人类种系抗体谱中。

“人源化”抗体指包含来自非人类超变区(HVR)的氨基酸残基及来自人类框架区(FR)的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施例中，人源化抗体将包含实质上全部的至少一个、且通常两个可变结构域，其中全部或实质上全部的HVR(例如，互补决定区(CDR))对应于非人类的那些HVR，且全部或实质上整个框架区(FR)对应于人类抗体的那些FR。人源化抗体任选地可包含源自人类抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体的“人源化形式”(例如非人类抗体)指已经受人源化的抗体。

如本申请所用的表述“可变结构域”或“可变区”或Fv表示直接参与抗体与抗原结合的轻链及重链对中的每一者。轻链的可变结构域缩写为“VL”，且重链的可变结构域缩写为“VH”。轻链及重链可变结构域具有相同的一般结构，且每一结构域包含四个序列广泛保守且由三个HVR(或CDR)连接的框架(FR)区。框架区采用β-折叠构象，且CDR可形成连接β-折叠结构的环。每一链中的CDR通过框架区保持其三维结构并与另一链的CDR一起形成抗原结合位点。抗体的重链及轻链CDR区在本发明抗体的结合特异性/亲和力方面起尤其重要的作用，且因此提供本发明的又一目标。

在本发明的上下文中，与抗体(例如PD1抗体)相关的CDR的参考基于Chothia(Chothia及Lesk，J.Mol.Biol.1987,196:901-917)以及Kabat(E.A.Kabat,T.T.Wu,H.Bilofsky,M.Reid-Miller and H.Perry,Sequence of Proteins of ImmunologicalInterest,National Institutes of Health,Bethesda(1983))的定义。

除非另外指示，否则术语“免疫球蛋白”及“免疫球蛋白序列”-无论在本申请中用于指重链抗体或指常规4链抗体-皆用作一般术语，以包括全长抗体、其个别链以及其所有部分、结构域或片段(包括但不限于抗原结合结构域或片段，分别例如VHH结构域或VH/VL结构域)。此外，除非上下文需要更有限的解释，否则如本申请所用的术语“序列”(例如术语“免疫球蛋白序列”、“抗体序列”、“(单一)可变结构域序列”、“VHH序列”或“蛋白序列”)通常应理解为包括相关的氨基酸序列以及编码其的核酸序列或核苷酸序列。

如本申请所用的术语(多肽或蛋白质)的“结构域”指折叠的蛋白质结构，其具有独立于蛋白质其余部分而保留其三级结构的能力。通常，结构域负责蛋白质的离散功能性质，且在许多情形下可添加、去除或转移至其他蛋白质而不损失蛋白质的其余部分及/或结构域的功能。

如本申请所用的术语“免疫球蛋白结构域”指抗体链(例如常规4链抗体或重链抗体的链)的球状区，或指基本上由该球状区组成的多肽。免疫球蛋白结构域的特征在于其保留抗体分子的免疫球蛋白折叠特征，其由以两个β-折叠布置的约7条反平行β-链的2层夹心组成，其任选地通过保守的二硫键稳定。

如本申请所用的术语“免疫球蛋白可变结构域”意指基本上由四个“框架区”组成的免疫球蛋白结构域，这些框架区在本领域及本申请中分别称为“框架区1”或“FR1”、“框架区2”或“FR2”、“框架区3”或“FR3”及“框架区4”或“FR4”；这些构架区由三个“互补决定区”或“CDR”中断，这些互补决定区或CDR在业本领域内及本申请中分别称为“互补决定区1”或“CDR1”、“互补决定区2”或“CDR2”及“互补决定区3”或“CDR3”。因此，免疫球蛋白可变结构域的一般结构或序列可如下指示：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。免疫球蛋白可变结构域通过携带抗原结合位点赋予抗体对抗原的特异性。

如本申请所用的术语“免疫球蛋白单一可变结构域”(或ISVD)意指能够特异性结合至抗原的表位而不与额外可变免疫球蛋白结构域配对的免疫球蛋白可变结构域。本发明意义上的ISVD的一个实例是“结构域抗体”，例如ISVD VH及VL(VH结构域及VL结构域)。ISVD的另一重要实例来自骆驼科动物的“VHH结构域”(或简称为“VHH”)，如下文所定义。

鉴于上述定义，常规4链抗体(例如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE分子；本领域内已知)或Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段(例如二硫键连接的Fv或scFv片段)、或源自该常规4链抗体的双价抗体(所有皆为本领域内已知)的抗原结合结构域通常不被认为ISVD，此乃因在这些情形下，与抗原的各别表位的结合通常并非由一个(单一)免疫球蛋白结构域而是由一对(缔合)免疫球蛋白结构域(例如轻链及重链可变结构域)、即由免疫球蛋白结构域的VH-VL对(其共同结合至各别抗原的表位)发生。

“VHH结构域”，也称为VHH、V_HH结构域、VHH抗体片段及VHH抗体，最初阐述为“重链抗体”的抗原结合免疫球蛋白(可变)结构域(即“缺乏轻链的抗体”的抗原结合免疫球蛋白(可变)结构域；Hamers-Casterman C、Atarhouch T、Muyldermans S、Robinson G、HamersC、Songa EB、Bendahman N、Hamers R.:“Naturally occurring antibodies devoid oflight chains”；Nature363,446-448(1993))。选择术语“VHH结构域”以区分这些可变结构域与常规4链抗体中存在的重链可变结构域(其在本申请中称为“V_H结构域”或“VH结构域”)及常规4链抗体中存在的轻链可变结构域(其在本申请中称为“V_L结构域”或“VL结构域”)。VHH结构域可在无额外抗原结合结构域的情况下特异性结合至表位(与常规4链抗体中的VH或VL结构域相反，在该情形下，表位由VL结构域及VH结构域一起识别)。VHH结构域由单一免疫球蛋白结构域形成的小、稳健且有效的抗原识别单元。

在本发明的上下文中，术语VHH结构域、V_HH结构域、VHH抗体片段、VHH抗体以及

及

结构域”(“Nanobody”是Ablynx N.V.公司的商标；Ghent；Belgium)可互换使用，且是ISVD的代表(具有结构：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，且特异性结合至表位而无需存在第二免疫球蛋白可变结构域)，且其也可通过所谓“标志残基”与VH结构域区分，如在例如WO2009/109635，图1中所定义。

VHH结构域的氨基酸残基根据Kabat等(“Sequence of proteins ofimmunological interest”,US Public Health Services,NIH Bethesda,MD,公开号91)给出的V_H结构域的通用编号来编号，如应用于骆驼科动物的VHH结构域，如例如Riechmann及Muyldermans,J.Immunol.Methods 231,25-38(1999)的图2中所示。根据此编号，

-FR1包含1-30位的氨基酸残基，

-CDR1包含31-35位的氨基酸残基，

-FR2包含36-49位的氨基酸，

-CDR2包含50-65位的氨基酸残基，

-FR3包含66-94位的氨基酸残基，

-CDR3包含95-102位的氨基酸残基，且

-FR4包含103-113位的氨基酸残基。

然而，应注意，如本领域内针对V_H结构域及VHH结构域所熟知，每一CDR中氨基酸残基的总数可变化，且因此可能不对应于Kabat编号指示的氨基酸残基的总数(即，实际序列中可不占据根据Kabat编号的一或多个位置，或实际序列可含有比Kabat编号允许的数目更多的氨基酸残基)。此意味着尽管VHH结构域的氨基酸残基的编号基于根据Kabat的编号，但实际序列中氨基酸残基的实际编号可不同。由于此类变化为本领域内所熟知，故本领域技术人员无需赘言即可确定该序列中的框架区及CDR的各别编号及分配。

本领域内已知对V_H结构域的氨基酸残基进行编号的替代方法，这些方法亦也可以类似方式应用于VHH结构域。然而，除非另外指示，否则在与本申请所述ISVD相关的本发明说明书、权利要求及附图中，遵循如上文所述根据Kabat且应用于VHH结构域的编号。

VHH结构域中的氨基酸残基的总数通常在110至120的范围内，通常介于112与115之间。然而，应注意，更小及更长的序列也可适于本申请所述的目的。

获得结合至特定抗原或表位的VHH结构域的方法先前已在(例如)WO2006/040153及WO2006/122786中阐述。通过用存在于来自人类的常规4链抗体的VH结构域中相应位置的一或多个氨基酸残基置换原始VHH序列的氨基酸序列中的一或多个氨基酸残基，可将源自骆驼科动物的VHH结构域“人源化”。人源化VHH结构域可含有一或多个完全人类框架区序列，且在甚至更具体的实施例中，可含有源自DP-29、DP-47、DP-51或其部分的人类框架区序列，任选地与JH序列(例如JH5)组合。

术语“表位”及“抗原性决定子”可互换使用，指高分子(例如多肽)的一部分，其由抗原结合分子(例如常规抗体或本发明的多肽)识别，且更特别地由这些分子的抗原结合位点识别。表位定义免疫球蛋白的最小结合位点，且因此代表免疫球蛋白的特异性的靶点。

识别表位的抗原结合分子(例如常规抗体或本申请所述的多肽)的部分称为互补位。

如本申请所用的术语“双互补位”(抗原)结合分子或"双互补位"多肽应已知包含如本申请定义的第一ISVD及第二ISVD的多肽，其中该两个可变结构域能够结合至一个抗原的两个不同表位，这些表位通常不同时由一个单特异性免疫球蛋白(例如常规抗体或一个ISVD)结合。本发明的双互补位多肽由具有不同表位特异性的可变结构域构成，且不含结合至相同表位的相互互补的可变结构域对。因此，其不彼此竞争结合至LRP5或LRP6。

可“结合”、“结合至”、“特异性结合”、“能够特异性结合至”或“特异性结合至”某一表位、抗原或蛋白质(或其至少一部分、片段或表位)、“对其具有亲和力”及/或“对其具有特异性”的多肽(例如免疫球蛋白、抗体、ISVD或通常抗原结合分子或其片段)称为“针对”或“抵抗”该表位、抗原或蛋白质，或关于该表位、抗原或蛋白质的“结合”分子。

通常，术语“特异性”指特定抗原结合分子或抗原结合蛋白(例如免疫球蛋白、抗体、ISVD)可结合的不同类型的抗原或表位的数目。抗原结合蛋白的特异性可基于其亲和力及/或亲合力来测定。由抗原与抗原结合蛋白解离平衡常数(K_D)表示的亲和力是抗原结合蛋白上表位与抗原结合位点之间的结合强度的度量：K_D值愈小，表位与抗原结合分子之间的结合强度愈强(或者，亲和力也可表示为亲和力常数(K_A)，其为1/K_D)。如本领域技术人员所明了(例如基于本申请的进一步揭示内容)，亲和力可以本身已知的方式根据所关注的特定抗原测定。亲合力是抗原结合分子(例如免疫球蛋白、抗体、ISVD)与有关抗原之间结合强度的度量。亲合力与抗原结合分子上的表位与其抗原结合位点之间的亲和力及抗原结合分子上存在的有关结合位点的数目两者相关。

通常，抗原结合蛋白(例如能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽)将以10E-5至10E-14摩尔/升(M)或更低、且优选10E-7至10E-14摩尔/升(M)或更低、更优选10E-8至10E-14摩尔/升且甚至更优选10E-11至10E-13的解离常数(K_D)(例如，如在Kinexa分析中所量测；本领域内已知)及/或以至少10E7 ME-1、优选至少10E8 ME-1、更优选至少10E9 ME-1、例如至少10E11 ME-1的缔合常数(K_A)结合。通常认为大于10E-4M的任何K_D值指示非特异性结合。优选地，抗原结合蛋白(例如能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽)将以低于500nM、优选低于200nM、更优选低于10nM、例如低于500pM的K_D结合期望抗原。抗原结合蛋白与抗原或表位的特异性结合可以本身已知的任何适宜方式测定，这些方式包括例如本申请所述的分析、Scatchard分析及/或竞争性结合分析，例如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)及夹心竞争分析，以及本领域内本身已知的其不同变体。

与能够结合至LRP5以及LRP6的结合分子相关的术语“交叉反应性”(“LRP5/LRP6交叉反应性”)意指这些结合分子可特异性结合至LRP5分子中包含的表位，或者也可特异性结合至LRP6分子中包含的表位。通常，在由该结合分子结合的不同蛋白质的表位具有相似的结构及/或序列，例如代表保守表位，例如由属于相同蛋白家族的蛋白质共享(例如属于LRP蛋白家族的LRP5及LRP6)的情形下，可产生该交叉反应性。

本申请所述的能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽(在本申请中也称为LRP5/LRP6拮抗剂)对LRP5以及LRP6具有特异性，其中其包含特异性结合至两种这些分子(LRP5/LRP6交叉反应性结合分子)中所包括的表位的免疫球蛋白单一可变结构域。其不会或基本上不会与具有类似于LRP5及LRP6的表位的结构的表位或具有不相关结构的表位交叉反应。

当在本申请中使用时，术语“包含(comprising)”及其变化形式(例如“包含(comprises及comprise)”可用术语“含有”或“包括”或“具有”来代替。此外，术语“包含(comprising)”也明确地涵盖“由所列举的要素组成”的实施例。

组合疗法

本发明的目的是提供用于治疗或控制各种过度增殖疾病、具体而言各种恶性病的新颖疗法。

本申请的发明惊人地发现，与单独使用LRP5/LRP6拮抗剂或抗PD-1抗体相比，使用LRP5/LRP6拮抗剂与抗PD-1(程序性细胞死亡1)抗体的组合具有改善临床结果的潜力。

具体地，在临床前研究中，发明人测试LRP5/LRP6拮抗剂单独或与抗PD-1抗体的组合的免疫调节功能及抗肿瘤活性(参见下文实例1)。完全反应(如通过组织病理学分析所测定)及大量T细胞肿瘤浸润仅在LRP5/LRP6拮抗剂与抗PD-1抗体的组合中观察到。肿瘤引流淋巴结的FACS分析进一步显示，此组合治疗导致引流淋巴结中活化树突细胞(DC)的数目增加。如下文实例3中进一步显示，用Wnt3a配体处理肿瘤球状体及活化的人类PBMC共培养导致PBMC介导的肿瘤细胞存活率的抑制的显著阻断。在Wnt3a的存在下，用LRP5/LRP6拮抗剂处理肿瘤球状体及活化的人类PBMC的共培养，恢复了PBMC介导的肿瘤细胞存活率的抑制。当与LRP5/LRP6拮抗剂单一疗法相比时，根据本发明的LRP5/LRP6拮抗剂及抗人类PD1抗体的组合治疗导致PBMC介导的肿瘤细胞杀伤增强。

不期望受限于理论，这些发现显示，LRP5/LRP6拮抗剂与抗PD-1抗体的组合治疗导致抑制DC中的Wnt信号传导通路，随后其导致促炎细胞介素的上调、交叉引发的恢复及肿瘤T细胞浸润的促进及抗肿瘤活性。

尽管各种组合疗法为本领域内已知且目前正在研究(例如在临床前或临床试验中)，但仍然缺乏用于治疗癌症疾病、具体而言实体肿瘤(例如肺癌(例如NSCLC)、黑色素瘤、膀胱癌及胃肠癌)的令人满意的治疗概念。因此，任何显示优于标准疗法的优点(例如更好的治疗结果、有益效应、优异效能及/或改良的耐受性，例如降低的副作用)的疗法将代表重要的发展。

以下实例中显示的令人惊讶的结果指示，在肿瘤模型中本身物治疗效应的LRP5/LRP6拮抗剂与仅具有有限治疗效应的抗PD-1抗体的组合导致该两种化合物的协同(即超过加合)相互作用，此提供优异结果，其中可获得完全反应。

因此，本发明关于治疗及/或预防过度增殖疾病、具体而言癌症的方法，其包含组合投与各自如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD-1抗体；以及关于医学用途、用途、包含这些治疗剂的医药组合物或组合及试剂盒。

此外，本发明关于抗癌疗法，其包含组合使用各自如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD-1抗体。

该组合治疗可作为物质的非固定(例如游离)组合或以固定组合(包括试剂盒)的形式给予。

对于肿瘤性质的疾病的治疗，已经建议大量抗癌剂(包括靶特异性及非靶特异性抗癌剂)，其可用作单一疗法或用作涉及超过一种药剂的组合疗法(例如双重或三重组合疗法)及/或可与放射疗法(例如照射治疗)、放射-免疫疗法及/或手术组合。因此，除了其他治疗剂及/或治疗(例如放射疗法、放射免疫疗法及手术)之外，也可给予本申请所述的组合治疗。

LRP5/LRP6拮抗剂

在本发明及其所有实施例的含义内中，能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽(在本申请也称为LRP5/LRP6拮抗剂)是LRP5/LRP6交叉反应性双互补位多肽，其包含两个或更多个在不同表位结合至LRP5及/或LRP6的免疫球蛋白单一可变结构域。术语“交叉反应性”及“双互补位”如上文所解释，使得LRP5/LRP6交叉反应性双互补位分子可定义为能够在LRP5蛋白中包含的两个不同表位结合至LRP5且也能够在LRP6蛋白中包含的相应两个表位结合至LRP6的分子。

更特定而言，能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽包括：

-第一免疫球蛋白单一可变结构域，其能够经由表位/以导致Wnt1信号传导通路抑制的方式特异性结合至LRP5以及LRP6(LRP5/LRP6交叉反应性)，使得抑制Wnt1驱动的靶基因转录，及

-第二免疫球蛋白单一可变结构域，其能够经由表位/以导致Wnt3a信号传导通路抑制的方式特异性结合至LRP5以及LRP6(LRP5/LRP6交叉反应性)，使得抑制Wnt3a驱动的靶基因转录。

由于该多肽中存在两个免疫球蛋白单一可变结构域，其中两个结构域结合不同表位(Wnt1/Wnt3a信号传导相关)，故这些分子是双互补位结合分子。在此背景下，应注意假定本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂可经由其LRP5/LRP6结合结构域二者结合至一个单一LRP5或LRP6分子。然而，也可出现其他结合模式。

在本发明的一些实施例中，能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽包含

-包含以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

-包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)。

CDR序列的此具体组合(例如)包含于下文称作LRP5/LRP6#1的LRP5/LRP6拮抗剂中。

-包含以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

-包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)。

CDR序列的此具体组合(例如)包含于下文称作LRP5/LRP6#2的LRP5/LRP6拮抗剂中。

-包含以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

-包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)。

CDR序列的此具体组合(例如)包含于下文称作LRP5/LRP6#3的LRP5/LRP6拮抗剂中。

-包含以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

-包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)。

CDR序列的此具体组合(例如)包含于下文称作LRP5/LRP6#4的LRP5/LRP6拮抗剂中。

-包含以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

-包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)。

CDR序列的此具体组合(例如)包含于下文称作LRP5/LRP6#5的LRP5/LRP6拮抗剂中。

-包含以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

-包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)。

CDR序列的此具体组合(例如)包含于下文称作LRP5/LRP6#6的LRP5/LRP6拮抗剂中。

关于这些ISVD或结构域的如本申请所用术语“第一”及“第二”仅仅意欲指示，这些结构域是两个不同结构域(由于其至少包括不同CDR序列)。因此，这些术语不应理解为指该多肽链内的结构域的确切顺序或序列。换言之，上述ISVD(a)及(b)可在本申请所述的多肽中以(a)-(b)的顺序或以(b)-(a)的顺序布置。

术语“能够特异性结合至LRP5及LRP6”及“特异性结合至LRP5或LRP6”意指免疫球蛋白单一可变结构域(a)及(b)相对于LRP5及LRP6具有交叉反应性。当然，这些分子的结合性质由其(CDR)序列决定，使得上文及权利要求中所述的特征“能够特异性结合至LRP5及LRP6”及“特异性结合至LRP5或LRP6”仅意欲阐释本发明的用途，而非限制本发明的范围。

具体地，本申请所述的多肽的ISVD(例如包含如上文定义的CDR序列的ISVD)是VHH结构域，优选人源化VHH结构域。

在本发明的一些实施例中，能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽包含具有第一ISVD(a)及第二ISVD(b)的多肽，该第一ISVD包含具有选自由SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59及SEQ ID NO:60组成的组的序列的VHH结构域，且该第二ISVD包含具有选自由SEQ ID NO:61及SEQ ID NO:62组成的组的序列的VHH结构域；其中这些序列如下：

SEQ ID NO:58：

AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSTYTVGWFRQAPGKEREFVA

AIRRRGSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAA

DTRTVALLQYRYDYWGQGTLVTVSS[＝Wnt1-333E06mod结构域]

SEQ ID NO:59：

AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGGTFSSYAMGWFRQAPGKEREFVA

AIRRSGRRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAA

ARRVRSSTRYNTGTWWWEYWGQGTLVTVSS[＝Wnt1-333G06结构域]

SEQ ID NO:60：

AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLTFSRYTMGWFRQAPGKEREFVA

AIVRSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAA

DRRGRGENYILLYSSGRYEYWGQGTLVTVSS[＝Wnt1-332D03mod结构域]

SEQ ID NO:61：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSSYAMGWFRQAPGKERE

FVA

AISWSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAA

SPIPYGSLLRRRNNYDYWGQGTLVTVSS[＝Wnt3a-093A01结构域]，及

SEQ ID NO:62：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGGTFSSYAMGWFRQAPGKERE

FVA

AISWRSGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAA

DPRGYGVAYVSAYYEYWGQGTLVTVSS[＝Wnt3a-367B10结构域]

在一些实施例中，第一ISVD包含SEQ ID NO:58的序列且第二ISVD包含SEQ ID NO:61的序列(LRP5/LRP6#1)。

在本发明的一些实施例中，第一ISVD包含SEQ ID NO:59的序列且第二ISVD包含SEQ ID NO:61的序列(LRP5/LRP6#2)。

在一些实施例中，第一ISVD包含SEQ ID NO:60的序列且第二ISVD包含SEQ ID NO:61的序列(LRP5/LRP6#3)。

在一些实施例中，第一ISVD包含SEQ ID NO:58的序列且第二ISVD包含SEQ ID NO:62的序列(LRP5/LRP6#4)。

在一些实施例中，第一ISVD包含SEQ ID NO:59的序列且第二ISVD包含SEQ ID NO:62的序列(LRP5/LRP6#5)。

在一些实施例中，第一ISVD包含SEQ ID NO:60的序列且第二ISVD包含SEQ ID NO:62的序列(LRP5/LRP6#6)。

在本发明的优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂是如由上述CDR及/或VHH序列定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#5或LRP5/LRP6#6中的任一者。

根据本发明的优选方面，LRP5/LRP6拮抗剂包含具有第一(a)LRP5/LRP6结合ISVD及第二(b)LRP5/LRP6结合ISVD及第三ISVD(c)的多肽。优选地，LRP5/LRP6拮抗剂包含如由上述CDR序列定义的第一及第二ISVD及直接或间接连接第一及第二ISVD的第三ISVD。在一些实施例中，第一ISVD经由肽接头共价连接至第三ISVD，该第三ISVD经由肽接头共价连接至第二ISVD。两个接头可为相同或不同接头。也涵盖仅存在一个接头。如上文所述的术语“第一”及“第二”不指示多肽内的其位置，因此自N至C末端，多肽内的ISVD序列可以顺序ISVD(a)-(c)-(b)、(a)-[接头]-(c)-[接头]-(b)、(b)-(c)-(a)布置。(b)-[接头]-(c)-[接头]-(a)、(a)-[接头]-(c)-(b)、(a)-(c)-[接头]-(b)、(b)-[接头]-(c)-(a)、(b)-(c)-[接头]-(a)。

优选地，第三ISVD(c)是白蛋白结合ISVD。该白蛋白结合ISVD的非限制性实例包含以下CDR的Alb11结构域：

CDR(Alb11)1：SFGMS(＝SEQ ID NO:55)

CDR(Alb11)2：SISGSGSDTLYADSVKG(＝SEQ ID NO:56)

CDR(Alb11)3：GGSLSR(＝SEQ ID NO:57)。

此产生具有以下结构的优选LRP5/LRP6拮抗剂的组：

FR(a)1-CDR(a)1-FR(a)2-CDR(a)2-FR(a)3-CDR(a)3-FR(a)4-[可选接头肽]-FR(Alb11)1-CDR(Alb11)1-FR(Alb11)2-CDR(Alb11)2-FR(Alb11)3-CDR(Alb11)3-FR(Alb11)4-[可选接头肽]-FR(b)1-CDR(b)1-FR(b)2-CDR(b)2-FR(b)3-CDR(b)3-FR(b)4，优选地，其中CDR包含如上文所述的序列。

此外，三个ISVD(a)、(b)及Alb11的顺序不固定，但也应涵盖其中上述结构域以如下顺序布置的多肽：

(b)-Alb11-(a)。

此外，本发明也应涵盖在多肽的N-或C-末端具有Alb11结构域的多肽(例如Alb11-(a)-(b)、Alb11-(b)-(a)、(a)-(b)-Alb11或(b)-(a)-Alb11)。

-包含以下CDR序列的第一ISVD：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，

-包含以下CDR序列的第二ISVD：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)，及

-包含以下CDR序列的白蛋白结合ISVD(第三ISVD)：

CDR1：SFGMS(＝SEQ ID NO:55)

CDR2：SISGSGSDTLYADSVKG(＝SEQ ID NO:56)

CDR3：GGSLSR(＝SEQ ID NO:57)。

-包含以下CDR序列的第一ISVD：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，

-包含以下CDR序列的第二ISVD：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)，及

-包含以下CDR序列的白蛋白结合ISVD：

CDR1：SFGMS(＝SEQ ID NO:55)

CDR2：SISGSGSDTLYADSVKG(＝SEQ ID NO:56)

CDR3：GGSLSR(＝SEQ ID NO:57)。

-包含以下CDR序列的第一ISVD：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，

-具有以下CDR序列的第二ISVD：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)，及

-包含以下CDR序列的白蛋白结合ISVD：

CDR1：SFGMS(＝SEQ ID NO:55)

CDR2：SISGSGSDTLYADSVKG(＝SEQ ID NO:56)

CDR3：GGSLSR(＝SEQ ID NO:57)。

-包含以下CDR序列的第一ISVD：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，

-包含以下CDR序列的第二ISVD：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)，及

-包含以下CDR序列的白蛋白结合ISVD：

CDR1：SFGMS(＝SEQ ID NO:55)

CDR2：SISGSGSDTLYADSVKG(＝SEQ ID NO:56)

CDR3：GGSLSR(＝SEQ ID NO:57)。

-包含以下CDR序列的第一ISVD：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，

-包含以下CDR序列的第二ISVD：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)，及

-包含以下CDR序列的白蛋白结合ISVD：

CDR1：SFGMS(＝SEQ ID NO:55)

CDR2：SISGSGSDTLYADSVKG(＝SEQ ID NO:56)

CDR3：GGSLSR(＝SEQ ID NO:57)。

-包含以下CDR序列的第一ISVD：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，

-包含以下CDR序列的第二ISVD：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)，及

-包含以下CDR序列的白蛋白结合ISVD：

CDR1：SFGMS(＝SEQ ID NO:55)

CDR2：SISGSGSDTLYADSVKG(＝SEQ ID NO:56)

CDR3：GGSLSR(＝SEQ ID NO:57)。

在一些实施例中，能够特异性结合至LRP5及LRP6的上述多肽中由其CDR序列定义的ISVD经布置使得白蛋白结合ISVD直接或间接(例如经由一或多个接头肽)连接第一及第二ISVD。

上文提及的Alb11免疫球蛋白单一可变结构域的序列如下：

EVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS(＝Alb11结构域；＝SEQ ID NO:63)

上文提及的CDR序列概述于表1A、1B及1C中：

表1A：干扰Wnt1信号传导的免疫球蛋白单一可变结构域的CDR序列：

表1B：干扰Wnt3a信号传导的免疫球蛋白单一可变结构域的CDR序列：

表1C：结合至血清白蛋白的免疫球蛋白单一可变结构域(Alb11结构域)的CDR序列：

本申请阐述的三个优选LRP5/LRP6拮抗剂如下：

第一优选LRP5/LRP6拮抗剂：多肽以此顺序或改变的上述三个结构域的顺序包含：

-包含如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列的第一(LRP5/LRP6结合)ISVD；

-包含如SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列的白蛋白结合ISVD；

-包含如SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列的第二(LRP5/LRP6结合)ISVD。

第二优选LRP5/LRP6拮抗剂：多肽以此顺序或改变的下述三个结构域的顺序包含：

-包含如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列的第一(LRP5/LRP6结合)ISVD；

-包含如SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列的白蛋白结合ISVD；

-包含如SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列的第二(LRP5/LRP6结合)ISVD。

第三优选LRP5/LRP6拮抗剂：多肽以此顺序或改变的下述三个结构域的顺序，包含：

-包含如SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列的第一(LRP5/LRP6结合)ISVD；

-包含如SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列的白蛋白结合ISVD；

在甚至更特别优选的实施例中，白蛋白结合ISVD位于两个LRP5/LRP6结合ISVD之间。

上文提及的VHH的序列概述于表2A、2B及2C中：

表2A：干扰Wnt1信号传导的免疫球蛋白单一可变结构域的序列：

表2B：干扰Wnt3a信号传导的免疫球蛋白单一可变结构域的序列：

表2C：结合至血清白蛋白的免疫球蛋白单一可变结构域(Alb11结构域)的序列：

在本发明的优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含选自SEQ ID NO:64、65及66的序列(能够特异性结合至LRP5及LRP6的这些优选多肽在本申请中也分别称为LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#5及LRP5/LRP6#6)，其中精确氨基酸序列可取自下表2D：

表2D：能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽的三个具体实施例的序列

能够特异性结合至LRP5及LRP6的上文所提及的多肽的制造及治疗用途揭示于WO2017/093478A1中。具体而言，本申请件提供制备本发明中所用的能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽的方法的足够公开内容。

抗PD-1抗体

本发明及其所有实施例的含义内的抗PD-1抗体(本申请中也称为“PD-1抗体”)是抑制PD-1与其配体的相互作用的化合物，优选地，抗PD-1抗体是人源化或完全人类抗PD-1抗体。这些抗体中的任一者可为重组人类抗体。

PD-1基因编码55kDa I型跨膜蛋白，其Ig基因超家族的一部分(Agata等(1996)IntImmunol.8:765-72)。完整的PD-1序列可在GenBank登录号U64863下找到。尽管在结构上与CTLA-4相似，但PD1缺乏对B7-1及B7-2结合重要的MYPPY基序(SEQ ID NO:39)。

PD-1是T细胞调节剂的延伸的CD28/CTLA-4家族的抑制成员。CD28家族的其他成员包括CD28、CTLA-4、ICOS及BTLA。建议PD-1作为单体存在，缺乏其他CD28家族成员特征性的未配对半胱胺酸残基。PD-1在活化的B细胞、T细胞及单核细胞上表达(Okazaki等(2002)Curr Opin Immunol 14:391779-82；Bennett等(2003)J.Immunol.170:711-8)。已鉴别PD-1的两种配体，PD-L1(B7-H1)及PD-L2(B7-DC)，其在结合至PD-1时下调T细胞活化(Freeman等(2000)J.Exp.Med.192:1027-34；Carter等(2002)Eur.J.Immunol.32:634-43)。PD-L1及PD-L2二者皆结合至PD-1的B7同源物。PD-L1在多种人类癌症中丰富(Dong等(2002)Nat.Med.8:787-9)。

PD-1已知为负调节TCR信号的免疫抑制蛋白(Ishida,Y.等(1992)EMBO J.11:3887-3895；Blank,C.等(2006)Immunol.Immunother.56(6):739-745)。PD-1与PD-L1之间的相互作用可用作免疫检查点，其可导致(例如)肿瘤浸润淋巴球减少、T细胞受体介导的增殖减少及/或癌细胞的免疫逃避(Dong等(2003)J.Mol.Med.81:281-7；Blank等(2005)CancerImmunol.Immunother.54:307-314；Konishi等(2004)Clin.Cancer Res.10:5094-100)。免疫抑制可通过抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的局部相互作用而逆转；当PD-1与PD-L1及PD-L2的相互作用被阻断时，该效应是加合的(Iwai等(2002)Proc.Nat’l.Acad.Sci USA99:12293-7；Brown等(2003)J.Immunol.170:1257-66)。

在本发明的一个方面中，抗PD-1抗体由表3中借助SEQ ID号显示的序列定义的抗体PD1-1、PD1-2、PD-1-3、PD1-4及PD1-5中的任一者，其中VH表示重链可变结构域，VL表示轻链可变结构域，HC表示(全长)重链，且LC表示(全长)轻链：

表3：CDR、VH、VL、HC及LC序列的SEQ ID NO

且其中SEQ ID号的氨基酸序列(及序列名称)如表4中所示：

表4：

具体地，本申请所述的抗PD-1抗体分子包含：(a)包含SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQID NO:2(HCDR2)及SEQ ID NO:3(HCDR3)的氨基酸序列的重链CDR及含有SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)及SEQ ID NO:6(LCDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或，b)包含SEQ ID NO:7(HCDR1)、SEQ ID NO:8(HCDR2)及SEQ ID NO:9(HCDR3)的氨基酸序列的重链CDR及含有SEQ ID NO:10(LCDR1)、SEQ ID NO:11(LCDR2)及SEQ ID NO:12(LCDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或(c)包含SEQ ID NO:13(HCDR1)、SEQ ID NO:14(HCDR2)及SEQ ID NO:15(HCDR3)的氨基酸序列的重链CDR及含有SEQ ID NO:16(LCDR1)、SEQ ID NO:17(LCDR2)及SEQ ID NO:18(LCDR3)的氨基酸序列的轻链CDR。

在一些实施例中，抗PD-1抗体分子包含含有选自SEQ ID NO:19、21、23、25及27的氨基酸序列的重链可变结构域。

在一些实施例中，抗PD-1抗体分子包含含有选自SEQ ID NO:20、22、24、26及28的氨基酸序列的轻链可变结构域。

在一些实施例中，抗PD-1抗体分子包含(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链可变结构域及包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链可变结构域，(b)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链可变结构域及包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链可变结构域，(c)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变结构域及包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变结构域，(d)包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链可变结构域及包含SEQ IDNO:26的氨基酸序列的轻链可变结构域，或(e)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的重链可变结构域及包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链可变结构域。

在一些实施例中，抗PD-1抗体包含(a)包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链，(b)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链，(c)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链，(d)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链及包含SEQID NO:36的氨基酸序列的轻链，或(e)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链及包含SEQID NO:38的氨基酸序列的轻链。

在优选实施例中，抗PD-1抗体PD1-1。

在优选实施例中，抗PD-1抗体PD1-2。

在优选实施例中，抗PD-1抗体PD1-3。

在优选实施例中，抗PD-1抗体PD1-4。

在优选实施例中，抗PD-1抗体PD1-5。

在一个方面中，本发明提供治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法，其包含向有此需要的患者投与治疗有效量的LRP5/LRP6拮抗剂(例如，如由表1a、1b、1c、2a、2b、2c的CDR及/或VHH序列所定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)及治疗有效量的抗PD-1抗体(例如，如由表3及4的CDR及/或VH/VL序列所定义的PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5中的任一者)。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ IDNO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ IDNO:32的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链。

在另一个方面中，本发明提供LRP5/LRP6拮抗剂(例如，如由表1a、1b、1c、2a、2b、2c的CDR及/或VHH序列所定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)与如本申请所述的抗PD-1抗体(例如，如由表3及4的CDR及/或VH/VL序列所定义的PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5中的任一者)的组合，其尤其用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中，其中该方法包含向有此需要的患者投与治疗有效量的该组合。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链。

在另一个方面中，本发明指LRP5/LRP6拮抗剂(例如，如由表1a、1b、1c、2a、2b、2c的CDR及/或VHH序列所定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)，其用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中，其中该方法包含向有此需要的患者投与治疗有效量的LRP5/LRP6拮抗剂与如本申请所述的抗PD-1抗体(例如，如由表3及4的CDR及/或VH/VL序列所定义的PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5中的任一者)的组合。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链。

在另一个方面中，本发明指如本申请所述的抗PD-1抗体(例如，如由表3及4的CDR及/或VH/VL序列所定义的PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5中的任一者)，其用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中，其中该方法包含向有此需要的患者投与治疗有效量的抗PD-1抗体与LRP5/LRP6拮抗剂(例如，如由表1a、1b、1c、2a、2b、2c的CDR及/或VHH序列所定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)的组合。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链。

在另一个方面中，本发明指试剂盒，其在一或多个容器中包含

·第一医药组合物或剂型，其包含LRP5/LRP6拮抗剂(例如，如由表1a、1b、1c、2a、2b、2c的CDR及/或VHH序列所定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)，及任选地一或多种医药上可接受的载剂、赋形剂及/或媒剂，及

·第二医药组合物或剂型，其包含如本申请所述的抗PD-1抗体(例如，如由表3及4的CDR及/或VH/VL序列所定义的PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5中的任一者)，及任选地一或多种医药上可接受的载剂、赋形剂及/或媒剂，

·及任选地包含印刷说明书的包装插页。

在本发明的试剂盒的优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链。在本发明的试剂盒的优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链。在本发明的试剂盒的优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQID NO:34的氨基酸序列的轻链。

优选地，包装插页包含同时、并行、依序、连续、交替或单独用于治疗及/或预防有此需要的患者的如本申请所述的过度增殖疾病、具体而言癌症的印刷说明书。

在另一个方面中，本发明指上文所提及的试剂盒，其如本申请所述用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中。

在另一个方面中，本发明指包含以下的医药组合物：

·LRP5/LRP6拮抗剂(例如，如由表1a、1b、1c、2a、2b、2c的CDR及/或VHH序列所定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)，

·如本申请所述的抗PD-1抗体(例如，如由表3及4的CDR及/或VH/VL序列所定义的PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5中的任一者)，及，

·任选地一或多种医药上可接受的载剂、赋形剂及/或媒剂。

在本发明的医药组合物的优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链。在本发明的医药组合物的优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链。在本发明的医药组合物的优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链。

在另一个方面中，本发明指LRP5/LRP6拮抗剂(例如，如由表1a、1b、1c、2a、2b、2c的CDR及/或VHH序列所定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)用于制备医药组合物的用途，该医药组合物如本申请所述用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中，其中LRP5/LRP6拮抗剂将与如本申请所述的PD-1抗体(例如，如由表3及4的CDR及/或VH/VL序列所定义的PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5中的任一者)组合使用。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链。

在另一个方面中，本发明指如本申请所述的PD-1抗体(例如，如由表3及4的CDR及/或VH/VL序列所定义的PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5中的任一者)用于制备医药组合物的用途，该医药组合物如本申请所述用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中，其中PD-1拮抗剂将与LRP5/LRP6拮抗剂(例如，如由表1a、1b、1c、2a、2b、2c的CDR及/或VHH序列所定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)组合使用。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链。

在另一个方面中，本发明指LRP5/LRP6拮抗剂(例如，如由表1a、1b、1c、2a、2b、2c的CDR及/或VHH序列所定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)及PD-1抗体(例如，如由表3及4的CDR及/或VH/VL序列所定义的PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5中的任一者)用于制备医药组合物的用途，该医药组合物如本申请所述用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ IDNO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ IDNO:32的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链。

在另一个方面中，本发明指各自如本申请所述的本发明的组合、医药组合物或试剂盒，其包含LRP5/LRP6拮抗剂(例如，如由表1a、1b、1c、2a、2b、2c的CDR及/或VHH序列所定义的LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)及抗PD-1抗体(例如，如由表3及4的CDR及/或VH/VL序列所定义的PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5中的任一者)、由其组成或基本上由其组成，其如本申请所述用于治疗及/或预防过度增殖疾病(优选癌症)的方法中。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链。在优选实施例中，LRP5/LRP6拮抗剂包含SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列且PD-1抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链。

关于LRP5/LRP6拮抗剂的实施例(例如LRP5/LRP6#1、LRP5/LRP6#2、LRP5/LRP6#3、LRP5/LRP6#4、LRP5/LRP6#5、LRP5/LRP6#6中的任一者)与关于PD-1拮抗剂PD1-1、PD1-2、PD1-3、PD1-4、PD1-5的实施例的排列产生具体组合，这些组合皆应被认为具体揭示的且本发明以及所有其组合、组合物、试剂盒、方法、用途及使用的化合物的实施例，包括应用如下文详述的特定投与/给药方案的方法及/或用于治疗如下文详述的特定癌症的方法。

如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂及/或抗PD1抗体的投与途径包括(但不限于)非经肠(例如肌内、腹膜内、静脉内、经皮或皮下注射或植入)、经口、肠内、经鼻、阴道、直肠或局部投与。在优选实施例中，投与途径是静脉内投与、尤其静脉内输注或注射。本发明的化合物可单独或一起调配成适宜剂量单位调配物，其含有适合于每一投与途径的常规无毒的医药上可接受的载剂、赋形剂及/或媒剂。更优选地，调配物包括固体、半固体或液体剂型，例如冻干物、液体溶液(例如可注射及可输注溶液)、分散液或悬浮液、脂质体及栓剂。优选方式取决于预期投与模式及治疗应用。特别优选实施例包括液体调配物及冻干物。在冻干的情形下，冻干物可在液体、优选水中重构。

如本申请所述的抗PD-1抗体的投与可(例如)通过注射(例如皮下或静脉内)以约0.1至30mg/kg患者体重、例如约0.5至25mg/kg患者体重、约1至20mg/kg患者体重、约2至5mg/kg患者体重或约3mg/kg患者体重的剂量进行。

在一些实施例中，抗PD-1抗体以每两周约10-20mg/kg患者体重的剂量投与。抗体分子可通过静脉内输注以超过20mg/min、例如20-40mg/min且通常大于或等于40mg/min的速率投与，以达到约35至440mg/m²、通常约70至310mg/m²且更通常约110至130mg/m²的剂量。在一些实施例中，约110至130mg/m²的输注速率达到约3mg/kg患者体重的水平。在其他实施例中，抗体分子可通过静脉内输注以小于10mg/min、例如小于或等于5mg/min的速率投与，以达到约1至100mg/m²、例如约5至50mg/m²、约7至25mg/m²或约10mg/m²的剂量。在一些实施例中，在约30min的时间段内输注抗体。

本申请所述的抗PD-1抗体的优选剂量方案包括经由静脉内投与1mg/kg患者体重或另一选择为3mg/kg患者体重，其中每三周或每四周给予抗体。

本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂或包含其的组合物可(例如)静脉内(i.v.)、皮下(s.c.)、肌内(i.m.)、腹膜内(i.p.)、经皮、经口、舌下(例如以舌下片剂、喷雾剂或滴剂的形式置于舌下并经由黏膜吸收至舌下的毛细管网络中)、鼻(内)(例如以鼻喷雾剂及/或作为气溶胶的形式)、局部、借助栓剂、通过吸入或任何其他适宜方式以有效量或剂量投与。

本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂通常以介于0.005与20.0mg/公斤患者体重之间的量及优选介于0.05至10.0mg/kg/剂量、更优选介于0.5至10mg/kg/剂量的剂量投与，但尤其可根据欲治疗的具体疾病、病症或病况、欲使用的具体LRP5/LRP6拮抗剂的功效、具体投与途径及所使用的具体医药调配物或组合物变化。因此，在一些情形下，使用低于上文给出的最低剂量可能已足矣，而在其他情形下可能不得不超出上限。当大量投与时，可适当地将其分成许多较小剂量在一天中不同时间投与。

应注意，剂量值可随欲缓解病况的类型及严重程度而变化。应进一步了解，对于任一特定个体而言，具体剂量方案应根据个体需要及组合物投与者或组合物投与监督者的专业判断来随时间进行调整。

如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD1抗体可以治疗有效量以适当时间间隔投与的单剂量或分开剂量来投与。治疗有效量指在达到期望治疗结果所需的剂量及时间段内有效的量，且是预防、改善或治疗疾病或病症所需的最小量。本申请所述化合物的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别及体重以及化合物在个体中引起期望反应的能力等因素而变化。治疗有效量也是亦其中化合物的治疗有益效应超过其任何毒性或有害效应的量。相对于未治疗的个体或相对于欲治疗的同一个体的先前未治疗的时段，治疗有效剂量优选抑制可测量的参数(例如肿瘤生长速率)达至少约20％、更优选佳至少约40％、甚至更优选至少约60％且仍更优选至少约80％。

活性化合物可以在单一疗法中治疗有效的剂量投与，或以低于或高于单一疗法中所用剂量的剂量投与，但当组合时产生期望(共同)治疗有效量。此可(例如)用于避免、限制或减少任何不希望的副作用，同时仍获得期望药理学或治疗效应，这些不希望的副作用与当以其常规量使用时一或多种物质或原理的使用相关。

用于治疗中所需的本申请所述化合物的量可根据所选的特定化合物、投与途径、所治疗病况的性质及患者的年龄及状况进行调整，并最终由主治医师或临床医师判断。此外，本申请所述的化合物的剂量可根据靶细胞、肿瘤、组织、移植物或器官进行调整。

如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂或抗PD-1抗体二者的期望剂量可每次投与以固定量或以快速输注的形式投与，以在患者中达到设定的血液浓度。

在本发明中，应理解，LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD1抗体可依赖地(即一起混合成一种组合物)或独立地(即作为分开的组合物)投与或调配，其中该投与在患者体内提供两种化合物的治疗有效水平。后者也适用于鸡尾酒疗法，例如投与三种或更多种活性剂。换言之，LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD1抗体可作为同一医药组合物/剂型的一部分或优选地以分开的医药组合物/剂型投与。就以分开的医药组合物/剂型投与而言，应理解，根据本发明，该投与设想同时、并行、依序或交替投与活性剂或组分。

术语“同时”(本申请中亦称为“伴随”)指实质上同时投与两种化合物/组合物。

并行投与包括在相同的一般时间段内、例如在同一天但不必同时投与活性剂。

依序投与包括在第一时间段期间(例如在几小时、几天或一周的过程中)使用一或多个剂量投与一种药剂，随后在第二时间段期间(例如在几小时、几天或一周的过程中)使用一或多个剂量投与另一药剂。还可采用重叠时间表，其包括在治疗期间的不同天、而不必按照规则的顺序投与活性剂。或者，也设想连续投与，第二次投与步骤是在第一化合物投与结束后立即实施。本领域技术人员知道如何确定第一次投与步骤的结束，由此使其能够鉴别用于起始第二次投与步骤的适宜时间点。

交替投与包括在一段时间内、例如在几小时、几天或一周的过程中投与一种药剂，随后在随后的时间段内、例如在几小时、几天或一周的过程中投与另一药剂，且然后重复该模式一或多个周期，其中重复的总数取决于所选的剂量方案。

还可例如根据所用的药剂及个体的状况采用这些一般指导的变化。

在本发明的优选实施例中，在本发明的方法中，在第一时段期间同时或并行(例如通过静脉内输注或皮下)投与如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD1抗体，随后在第二时段期间投与(例如通过静脉内输注或皮下)抗PD1抗体，而不投与LRP5/LRP6拮抗剂。在一些实施例中，在能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽及PD1抗体是每三周投与时，第一时段是3或6周。在一些实施例中，在能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽及PD1抗体是每四周投与时，第一时段是4或8周。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#1且该抗PD-1抗体是PD1-1，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#5且该抗PD-1抗体是PD1-1，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#6且该抗PD-1抗体是PD1-1，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#1且该抗PD-1抗体是PD1-2，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#5且该抗PD-1抗体是PD1-2，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#6且该抗PD-1抗体是PD1-2，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#1且该抗PD-1抗体是PD1-3，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#5且该抗PD-1抗体是PD1-3，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#6且该抗PD-1抗体是PD1-3，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。

在本发明的另一优选实施例中，如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD1抗体二者在第一时段(例如3或6周)期间每三周(通过静脉内输注或皮下同时或并行)投与，且然后抗PD1抗体在第二时段期间(例如)每三周(例如通过静脉内输注或皮下)投与。举例而言，在(i)第1周或(ii)第1周及第4周中同时或并行(例如通过静脉内输注或皮下)投与LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD1抗体，且然后例如在第7周、第10周及任何随后的第三周(第13周、第16周等)投与PD1抗体直至治疗终止。在选择(i)的情形下，PD1抗体在第4周已经单独投与(即代替选择(ii)中与LRP5拮抗剂组合投与)。

特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#1且该抗PD-1抗体是PD1-1，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#5且该抗PD-1抗体是PD1-1，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#6且该抗PD-1抗体是PD1-1，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#1且该抗PD-1抗体是PD1-2，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#5且该抗PD-1抗体是PD1-2，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#6且该抗PD-1抗体是PD1-2，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#1且该抗PD-1抗体是PD1-3，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#5且该抗PD-1抗体是PD1-3，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#6且该抗PD-1抗体是PD1-3，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。

在本发明的另一优选实施例中，如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD1抗体二者在第一时段(例如4或8周)期间每四周(通过静脉内输注或皮下同时或并行)投与，且然后抗PD1抗体在第二时段期间(例如)每四周(例如通过静脉内输注或皮下)投与。举例而言，在(i)第1周或(ii)第1周及第5周中同时或并行(例如通过静脉内输注或皮下)投与LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD1抗体，且然后例如在第9周、第13周及任何随后的第四周(第17周、第21周等)投与PD1抗体直至治疗终止。在选择(i)的情形下，PD1抗体在第5周已经单独投与(即代替选择(ii)中与LRP5拮抗剂组合投与)。

优选地，如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂(例如剂量为约0.5至10mg/kg患者体重)及如本申请所述的抗PD1抗体(例如剂量为2、3、4或5mg/kg患者体重中的任一者)二者在第一时段期间(例如对应于1或2个剂量)每三周或四周(通过静脉内输注或皮下同时或并行)投与一次，且然后抗PD1抗体在第二时段期间(例如)每三周或四周(例如通过静脉内输注或皮下)投与一次。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#1且该抗PD-1抗体是PD1-1，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#5且该抗PD-1抗体是PD1-1，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂LRP5/LRP6#6且该抗PD-1抗体是PD1-1，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#1且该抗PD-1抗体是PD1-2，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#5且该抗PD-1抗体是PD1-2，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#6且该抗PD-1抗体是PD1-2，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#1且该抗PD-1抗体是PD1-3，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#5且该抗PD-1抗体是PD1-3，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。特别优选地，采用此投与时间表：其中该LRP5/LRP6拮抗剂是LRP5/LRP6#6且该抗PD-1抗体是PD1-3，甚至更优选地，其用于治疗胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌或肺癌(包括对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的胃肠癌、黑色素瘤、膀胱癌及肺癌)或对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的任何实体肿瘤。

在本发明的一些实施例中，如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD1抗体二者在第一时段期间(例如对应于1或2个剂量)每三周或四周(通过静脉内输注或皮下同时或并行)投与一次，且然后抗PD1抗体在第二时段期间每周、每隔一周、每三周或每月(例如通过静脉内输注或皮下)投与一次。

根据欲治疗的疾病，如本申请定义的组合疗法可自身使用或与一或多种额外治疗剂进一步组合使用，这些额外治疗剂具体而言选自抑制癌细胞中的血管生成、信号转导通路或有丝分裂检查点的化学治疗剂或治疗活性化合物。

额外治疗剂可任选地作为相应医药制剂的组分与投与LRP5/LRP6拮抗剂及/或PD1抗体同时或之前或之后投与。

该/这些额外治疗剂可(各自)选自以下(但不限于此)：

·免疫治疗剂，例如以下检查点抑制剂的调节剂：TIM3、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、VISTA、BTLA、TIGIT、CD160、LAIR1、2B4、CEACAM；

·癌症疫苗；

·DNA损害剂；

·血管生成的抑制剂；

·信号转导通路的抑制剂；

·有丝分裂检查点的抑制剂；及

激素、激素类似物及抗激素(例如他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、雷洛昔芬(raloxifene)、氟维司群(fulvestrant)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、乙酸环丙孕酮(cyproterone acetate)、非那雄胺(finasteride)、乙酸布舍瑞林(buserelin acetate)、氟氢可体松(fludrocortisone)、氟羟甲基睾酮(fluoxymesterone)、甲羟助孕酮(medroxyprogesterone)、奥曲肽(octreotide))、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(letrozole)、利阿唑(liarozole)、伏氯唑(vorozole)、依西美坦(exemestane)、阿他美坦(atamestane))、LHRH激动剂及拮抗剂(例如乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、亮丙瑞林(leuprolide))、生长因子(诸如“血小板源生长因子(PDGF)”、“纤维母细胞生长因子(FGF)”、“血管内皮生长因子(VEGF)”、“表皮生长因子(EGF)”、“胰岛素样生长因子(IGF)”、“人类表皮生长因子(HER，例如HER2、HER3、HER4)”及“肝细胞生长因子(HGF)”等生长因子)的抑制剂，抑制剂是例如“生长因子”抗体、“生长因子受体”抗体及酪胺酸激酶抑制剂，例如西妥昔单抗、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、伯舒替尼及曲妥珠单抗)；抗代谢物(例如抗叶酸剂，例如甲氨喋呤(methotrexate)、雷替曲塞(raltitrexed)、嘧啶类似物(例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨(capecitabine)及吉西他滨(gemcitabine))、嘌呤及腺苷类似物(例如巯嘌呤、硫鸟嘌呤、克拉屈滨(cladribine)及喷司他汀(pentostatin))、阿糖胞苷(ara C)、氟达拉滨(fludarabine))；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类，例如多柔比星(doxorubicin)、多克希尔(doxil)(聚乙二醇化脂质体盐酸多柔比星、美斯特(myocet)(非聚乙二醇化脂质体多柔比星)、道诺霉素(daunorubicin)、泛艾霉素(epirubicin)及伊达比星(idarubicin)、丝裂霉素-C(mitomycin-C)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、普卡霉素(plicamycin)、链脲霉素(streptozocin))；铂衍生物(例如顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、卡铂(carboplatin))；烷基化剂(例如雌氮芥(estramustin)、氮芥(mechlorethamine)、美法仑(melphalan)、氮芥苯丁酸(chlorambucil)、白消安(busulphan)、达喀尔巴嗪(dacarbazin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、替莫唑胺(temozolomide)，亚硝基脲，例如卡莫司汀(carmustin)及洛莫司汀(lomustin)、噻替派(thiotepa))；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱(Vinca alkaloid)，例如长春碱(vinblastine)、长春地辛(vindesin)、长春瑞滨(vinorelbin)及长春新碱(vincristine)；及紫杉烷(taxane)，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel))；血管生成抑制剂(例如他喹莫德(tasquinimod))、微管蛋白抑制剂；DNA合成抑制剂(例如沙帕他滨(sapacitabine))、PARP抑制剂、拓朴异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，例如依托泊苷(etoposide)及凡毕复(etopophos)、替尼泊苷(teniposide)、安吖啶(amsacrin)、托泊替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、米托蒽醌(mitoxantrone))、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如PDK 1抑制剂、Raf抑制剂、A-Raf抑制剂、B-Raf抑制剂、C-Raf抑制剂、mTOR抑制剂、mTORC1/2抑制剂、PI3K抑制剂、PI3Kα抑制剂、双重mTOR/PI3K抑制剂、STK 33抑制剂、AKT抑制剂、PLK 1抑制剂、CDK抑制剂、极光激酶抑制剂)、酪氨酸激酶抑制剂(例如PTK2/FAK抑制剂)、蛋白-蛋白相互作用抑制剂(例如IAP活化剂、Mcl-1、MDM2/MDMX)、MEK抑制剂(例如匹马色替(pimasertib))、ERK抑制剂、FLT3抑制剂(例如奎扎替尼(quizartinib))、BRD4抑制剂、IGF-1R抑制剂、TRAILR2激动剂、Bcl-xL抑制剂、Bcl-2抑制剂(例如维尼托克莱克斯(venetoclax))、Bcl-2/Bcl-xL抑制剂、ErbB受体抑制剂、BCR-ABL抑制剂、ABL抑制剂、Src抑制剂、雷帕霉素(rapamycin)类似物(例如依维莫司(everolimus)、替西罗莫司(temsirolimus)、地磷莫司(ridaforolimus)、西罗莫司(sirolimus))、雄激素合成抑制剂(例如阿比特龙(abiraterone)、TAK-700)、雄激素受体抑制剂(例如恩杂鲁胺(enzalutamide)、ARN-509)、免疫疗法(例如西普鲁塞-T(sipuleucel-T))、DNMT抑制剂(例如SGI110、替莫唑胺(temozolomide)、沃沙毒素(vosaroxin))、HDAC抑制剂(例如伏立诺他(vorinostat)、恩替诺特(entinostat)、普西司他(pracinostat)、帕比司他(panobinostat))、ANG1/2抑制剂(例如曲班那尼(trebananib))、CYP17抑制剂(例如盖乐特龙(galeterone))、放射医药剂(例如镭-223、阿发镭(alpharadin))、免疫治疗剂(例如基于痘病毒的疫苗、伊匹单抗(ipilimumab)、免疫检查点抑制剂)及各种化学治疗剂，例如氨磷汀(amifostin)、阿那格雷(anagrelid)、氯膦酸(clodronat)、非尔司亭(filgrastin)、干扰素、干扰素α、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、利妥昔单抗(rituximab)、丙卡巴肼(procarbazine)、左旋咪唑(levamisole)、美司钠(mesna)、米托坦(mitotane)、帕米膦酸(pamidronate)及卟菲尔钠(porfimer)；

2-氯脱氧腺苷、2-氟脱氧胞苷、2-甲氧基雌二醇、2C4、3-阿莱西恩(alethine)、131-I-TM-601、3CPA、7-乙基-10-羟基喜树碱、16-氮杂-埃博霉素B(epothilone B)、ABT-199、ABT-263/纳韦托克莱克斯(navitoclax)、ABT-737、A105972、A204197、阿地介白素(aldesleukin)、阿立色替(alisertib)/MLN8237、阿曲诺英(alitretinoin)、阿乐维汀-7(allovectin-7)、六甲蜜胺(altretamine)、阿伏昔地(alvocidib)、氨萘非特(amonafide)、蒽吡唑(anthrapyrazole)、AG-2037、AP-5280、阿帕兹醌(apaziquone)、阿朴吗啡(apomine)、阿拉诺斯(aranose)、阿格拉宾(arglabin)、阿佐昔芬(arzoxifene)、阿他美坦(atamestane)、阿曲生坦(atrasentan)、奥里斯他汀PE(auristatin PE)、AVLB、AZ10992、ABX-EGF、AMG-479(盖尼塔单抗(ganitumab))、AMG-232、AMG-511、AMG 2520765、AMG2112819、ARRY 162、ARRY 438162、ARRY-300、ARRY-142886/AZD-6244(司美替尼(selumetinib))、ARRY-704/AZD-8330、ATSP-7041、AR-12、AR-42、AS-703988、AXL-1717、AZD-1480、AZD-4547、AZD-8055、AZD-5363、AZD-6244、AZD-7762、ARQ-736、ARQ 680、AS-703026(帕赛替布(primasertib))、癌思停(avastin)、AZD-2014、阿扎胞苷(azacitidine)(5-aza)、氮杂埃博霉素B(azaepothilone B)、阿奏纳菲德(azonafide)、巴拉塞替(barasertib)/AZD1152、BAY-43-9006、BAY 80-6946、BBR-3464、BBR-3576、贝伐珠单抗(bevacizumab)、BEZ-235/达克利司(dactolisib)、二柠檬酸比立考达(biricodardicitrate)、比瑞那帕(birinapant)、BCX-1777、BKM-120/布帕里斯(buparlisib)、博莱霉素(bleocin)、BLP-25、BMS-184476、BMS-247550、BMS-188797、BMS-275291、BMS-663513、BMS-754807、BNP-1350、BNP-7787、BIBW 2992/阿法替尼(afatinib)、BIBF 1120/尼达尼布(nintedanib)、BI 836845、BI 2536、BI 6727/伏拉塞替(volasertib)、BI 836845、BI847325、BI 853520、BIIB-022、博来霉素酸、博来霉素A、博来霉素B、布立尼布(brivanib)、苔藓虫素-1(bryostatin-1)、硼替佐米(bortezomib)、伯斯坦尼辛(brostallicin)、白消安(busulphan)、BYL-719/阿培利斯(alpelisib)、CA-4前药、CA-4、卡巴他赛(cabazitaxel)、卡博替尼(cabozantinib)、CapCell、骨化三醇(calcitriol)、卡奈替尼(canertinib)、坎磷酰胺(canfosfamide)、卡培他滨、羧基邻苯二甲酸合铂、CCI-779、CC-115、CC-223、CEP-701、CEP-751、CBT-1希复欣敏(cefixime)、头孢克宁(ceflatonin)、头孢曲松(ceftriaxone)、塞来昔布(celecoxib)、西莫介白素(celmoleukin)、西马多丁(cemadotin)、CGM-097、CH4987655/RO-4987655、氯烯雌醚(chlorotrianisene)、西仑吉肽(cilengitide)、环孢素(ciclosporin)、CD20抗体、CDA-II、CDC-394、CKD-602、CKI-27、氯法拉滨(clofarabine)、秋水仙碱(colchicin)、考布他汀A4(combretastatin A4)、COT抑制剂、CHS-828、CH-5132799、CLL-Thera、CMT-3念珠藻素52、CPI-613、CTP-37、CTLA-4单克隆抗体(例如伊匹单抗)、CP-461、克唑替尼(crizotinib)、CV-247、氰基吗啉基多柔比星、阿糖胞苷、D 24851、达沙替尼(dasatinib)、地西他滨(decitabine)、脱氧代比星(deoxorubicin)、脱氧柔比星(deoxyrubicin)、脱氧助间型霉素(deoxycoformycin)、酯肽(depsipeptide)、脱氧埃博霉素B、地塞米松(dexamethasone)、右雷佐生(dexrazoxanet)、乙底酚(diethylstilbestrol)、二氟替康(diflomotecan)、地多西(didox)、DMDC、尾海兔素10(dolastatin 10)、多拉达唑(doranidazole)、DS-7423、DS-3032、E7010、E-6201、依达曲沙(edatrexat)、依度曲肽(edotreotide)、乙法昔罗(efaproxiral)、依氟鸟氨酸(eflornithine)、EGFR抑制剂、EKB-569、EKB-509、恩扎妥林(enzastaurin)、伊利司莫(elesclomol)、依沙芦星(elsamitrucin)、埃博霉素B、依帕珠单抗(epratuzumab)、EPZ-004777、ER-86526、厄洛替尼(erlotinib)、ET-18-OCH3、乙炔基胞苷(ethynylcytidine)、乙炔基雌二醇、依沙替康(exatecan)、依沙替康甲磺酸盐、依西美坦(exemestane)、依昔舒林(exisulind)、芬维A铵(fenretinide)、芬妥木单抗(figitumumab)、氟尿苷(floxuridine)、叶酸、FOLFOX、FOLFOX4、FOLFIRI、福美坦(formestane)、福他替尼(fostamatinib)、福莫司汀(fotemustine)、加柔比星(galarubicin)、麦芽酚镓、加奈特匹(ganetespib)、吉非替尼(gefinitib)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin)、吉马替康(gimatecan)、葡磷酰胺(glufosfamide)、GCS-IOO、GDC-0623、GDC-0941(皮特里斯(pictrelisib))、GDC-0980、GDC-0032、GDC-0068、GDC-0349、GDC-0879、G17DT免疫原、GMK、GMX-1778、GPX-100、gp100-肽疫苗、GSK-5126766、GSK-690693、GSK-1120212(曲美替尼(trametinib))、GSK-1995010、GSK-2118436(达拉菲尼(dabrafenib))、GSK-2126458、GSK-2132231A、GSK-2334470、GSK-2110183、GSK-2141795、GSK-2636771、GSK-525762A/I-BET-762、GW2016、格拉司琼(granisetron)、贺癌平(herceptine)、六甲基三聚氰胺(hexamethylmelamine)、组织胺、高三尖杉酯碱(homoharringtonine)、玻尿酸、羟基脲、羟助孕酮己酯、HDM-201、伊班膦酸盐(ibandronate)、替伊莫单抗(ibritumomab)、依鲁替尼(ibrutinib)/PCI-32765、伊达萨林(idasanutlin)、依达曲沙(idatrexate)、艾代拉里斯(idelalisib)/CAL-101、依德斯淳(idenestrol)、IDN-5109、IGF-1R抑制剂、IMC-1C11、IMC-A12(西妥木单抗(cixutumumab))、伊木诺(immunol)、茵德苏兰(indisulam)、干扰素α-2a、干扰素α-2b、聚乙二醇化干扰素α-2b、白介素-2、INK-1117、INK-128、INSM-18、洛那法尼(ionafarnib)、异丙铂(iproplatin)、伊罗夫文(irofulven)、异高软海绵素-B(isohomohalichondrin-B)、异黄酮(isoflavone)、异维A酸(isotretinoin)、伊沙匹隆(ixabepilone)、JRX-2、JSF-154、JQ-1、J-107088、偶联的雌激素、卡利德F(kahalid F)、酮康唑(ketoconazole)、KW-2170、KW-2450、KU-55933、LCL-161、洛铂(lobaplatin)、来氟米特(leflunomide)、雷利窦迈(lenalidomide)、来格司亭(lenograstim)、柳培林(leuprolide)、亮丙瑞林(leuporelin)、来昔决南钐(lexidronam)、LGD-1550、利奈唑胺(linezolid)、洛伐他汀(lovastatin)、德卟啉镏(lutetium texaphyrin)、洛美曲索(lometrexol)、氯尼达明(lonidamine)、洛索蒽醌(losoxantrone)、LU 223651、陆宾奈丁(lurbinectedin)、勒托替康(lurtotecan)、LY-S6AKT1、LY-2780301、LY-2109761/加鲁塞替(galunisertib)、马磷酰胺(mafosfamide)、马立马司他(marimastat)、马索罗酚(masoprocol)、甲氯乙胺(mechloroethamine)、MEK抑制剂、MEK-162、甲基睾固酮(methyltestosteron)、甲基普赖苏浓(methylprednisolone)、MEDI-573、MEN-10755、MDX-H210、MDX-447、MDX-1379、MGV、米哚妥林(midostaurin)、米诺膦酸(minodronic acid)、丝裂霉素(mitomycin)、米伏布尔(mivobulin)、MK-2206、MK-0646(达洛珠单抗(dalotuzumab))、MLN518、MLN-0128、MLN-2480、莫特沙芬钆(motexafin gadolinium)、MS-209、MS-275、MX6、奈立膦酸盐(neridronate)、来那替尼(neratinib)、蕾莎瓦(Nexavar)、新伐司他(neovastat)、尼罗替尼(nilotinib)、尼美舒利(nimesulide)、硝化甘油(nitroglycerin)、诺拉曲塞(nolatrexed)、诺瑞宁(norelin)、N-乙酰基半胱胺酸、NU-744106-苄基鸟嘌呤、奥利默森(oblimersen)、奥美拉唑(omeprazole)、奥拉帕尼(olaparib)、奥克非格(oncophage)、oncoVEX^GM-CSF、奥米拉汀(ormiplatin)、奥他赛(ortataxel)、OX44抗体、OSI-027、OSI-906(林西替尼(linsitinib))、4-1BB抗体、吡罗蒽醌(oxantrazole)、雌激素、奥那司酮(onapristone)、帕博西尼(palbociclib)/PD-0332991、帕尼单抗(panitumumab)、帕比司他(panobinostat)、帕土匹隆(patupilone)、帕唑帕尼(pazopanib)、聚乙二醇非格司亭(pegfilgrastim)、PCK-3145、聚乙二醇非格司亭、PBI-1402、PBI-05204、PD0325901、PD-1及PD-L1抗体(例如派姆单抗、尼沃鲁单抗、匹利珠单抗(pidilizumab)、MEDI-4736/德瓦鲁单抗(durvalumab)、RG-7446/阿替珠单抗(atezolizumab))、PD-616、PEG-太平洋紫杉醇、白蛋白稳定的太平洋紫杉醇、PEP-005、PF-05197281、PF-05212384、PF-04691502、PF-3758309、PHA-665752、PHT-427、P-04、PKC412、P54、PI-88、培利替尼(pelitinib)、培美曲塞(pemetrexed)、芬瑞克斯(pentrix)、哌立福辛(perifosine)、紫苏子醇(perillylalcohol)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、喷文地司他(pevonedistat)、PI3K抑制剂、PI3K/mTOR抑制剂、PG-TXL、PG2、PLX-4032/RO-5185426(威罗菲尼(vemurafenib))、PLX-3603/RO-5212054、PT-100、PWT-33597、PX-866、吡铂(picoplatin)、特戊酰基氧基甲基丁酸酯、匹杉琼(pixantrone)、苯妥地尔O(phenoxodiolO)、PKI166、普来曲塞(plevitrexed)、普卡霉素(plicamycin)、聚烯瑞尼酸(polyprenicacid)、普纳替尼(ponatinib)、泊非霉素(porfiromycin)、泊沙康唑(posaconazole)、普赖松(prednisone)、普赖苏浓(prednisolone)、PRT-062607、曲马德(quinamed)、奎奴普汀(quinupristin)、奎扎替尼(quizartinib)/AC220、R115777、RAF-265、雷莫司琼(ramosetron)、豹蛙酶(ranpirnase)、RDEA-119/BAY 869766、RDEA-436、蝴蝶霉素(rebeccamycin)类似物、受体酪胺酸激酶(RTK)抑制剂、雷维米德(revimid)、RG-7167、RG-7112、RG-7304、RG-7421、RG-7321、RG-7356、RG 7440、RG-7775、利索新(rhizoxin)、rhu-MAb、里格瑟尼林菲培(rigosertib rinfabate)、利塞膦酸盐(risedronate)、利妥昔单抗、罗妥木单抗(robatumumab)、罗非昔布(rofecoxib)、罗米地辛(romidepsin)、RO-4929097、RO-31-7453、RO-5126766、RO-5068760、RPR 109881A、红比腙(rubidazone)、卢比替康(rubitecan)、R-氟比洛芬(R-flurbiprofen)、RX-0201、鲁索替尼(ruxolitinib)、S-9788、萨巴比星(sabarubicin)、SAHA、沙帕他滨(sapacitabine)、SAR-405838、沙格司亭(sargramostim)、沙铂(satraplatin)、SB-408075、SB-431542、Se-015/Ve-015、SU5416、SU6668、SDX-101、塞林西斯(selinexor)、司莫司汀(semustin)、西奥骨化醇(seocalcitol)、SM-11355、SN-38、SN-4071、SR-27897、SR-31747、SR-13668、SRL-172、索拉菲尼(sorafenib)、螺铂(spiroplatin)、角鲨胺(squalamine)、STF-31、辛二酰苯胺异羟肟酸(suberanilohydroxamic acid)、舒癌特(sutent)、T 900607、T 138067、TAE-684、TAK-733、TAS-103、泰克地那林(tacedinaline)、他拉泊芬(talaporfin)、坦螺旋霉素(tanespimycin)、得舒缓(Tarceva)、塔瑞曲他(tariquitar)、塔斯素拉(tasisulam)、克癌易(taxotere)、他克普辛(taxoprexin)、他扎罗汀(tazarotene)、替加氟(tegafur)、替莫唑胺(temozolamide)、替米利芬(tesmilifene)、睾固酮、丙酸睾固酮、替米利芬、四铂剂、河豚毒素(tetrodotoxin)、替扎他滨(tezacitabine)、沙利窦迈(thalidomide)、塞拉克斯(theralux)、吡柔比星(therarubicin)、胸腺法新(thymalfasin)、赛美他新(thymectacin)、噻唑呋林(tiazofurin)、替吡法尼(tipifarnib)、替拉扎明(tirapazamine)、托拉地新(tocladesine)、妥妙得适(tomudex)、托瑞莫芬(toremofin)、托舍多特(tosedostat)、曲贝替定(trabectedin)、反式MID-107、反式维A酸(transretinicacid)、曲妥单抗(traszutumab)、曲美目单抗(tremelimumab)、维A酸(tretinoin)、三乙酰基尿苷、曲阿平(triapine)、曲西立滨(triciribine)、三甲曲沙(trimetrexate)、TLK-286TXD 258、泰克泊(tykerb)/泰维泊(tyverb)、优诺西丁(urocidin)、丙戊酸、戊柔比星(valrubicin)、凡德他尼(vandetanib)、瓦他拉尼(vatalanib)、长春新碱、长春氟宁(vinflunine)、维力金(virulizin)、维莫德吉(vismodegib)、沃萨洛辛(vosaroxin)、WX-UK1、WX-554、维必施(vectibix)、XAV-939、截瘤达(xeloda)、XELOX、XL-147、XL-228、XL-281、XL-518/R-7420/GDC-0973、XL-765、YM-511、YM-598、ZD-4190、ZD-6474、ZD-4054、ZD-0473、ZD-6126、ZD-9331、ZDI839、ZSTK-474、唑来膦酸盐(zoledronat)及唑喹达(zosuquidar)。

在一些实施例中，如所述的组合疗法涉及如本申请所述的LRP5/LRP6拮抗剂及抗PD-1抗体而无任何额外化学治疗剂。

过度增殖疾病/癌症

根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物可用于治疗及/或预防过度增殖病症、具体而言癌症。

在某些实施例中，根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物可用于治疗过度增殖病症、具体而言癌症。

如本申请中所使用，“过度增殖疾病”指细胞生长增加至超过正常值的病况。举例而言，过度增殖疾病或病症包括恶性疾病(例如食道癌、结肠癌、胆管癌)及非恶性疾病(例如动脉粥样硬化、良性增生、良性前列腺肥大)。

在优选实施例中，过度增殖病症是癌症。在优选实施例中，该癌症的特征在于其具有突变/不活化的RNF43或一或多种活化的R-Spondin融合转录本。

癌症以两种方式分类：根据癌症起源的组织类型(组织学类型)及根据癌症首先发展的身体中的原发部位或位置。癌症发育的最常见部位包括皮肤、肺、乳房、前列腺、结肠及直肠、子宫颈及子宫以及血液学隔室。

根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物可用于治疗多种过度增殖病症、具体而言癌症，包括例如但不限于以下：

·胃肠癌，例如食道癌(例如胃食道接合部癌)、胃(stomach或gastric)癌、肝细胞癌、胆道癌(例如胆管癌)、胆囊癌、胰脏癌或结肠直肠癌(CRC)；

·黑色素瘤；

·膀胱癌；及

·肺癌(例如NSCLC)。

在本发明的一些实施例中，根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物用于治疗胃肠癌、优选食道癌(例如胃食道接合部癌)、胃(stomach或gastric)癌、肝细胞癌、胆道癌(例如胆管癌)、胆囊癌、胰脏癌或结肠直肠癌(CRC)。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。

在本发明的一些实施例中，根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物用于治疗黑色素瘤。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。

在本发明的一些实施例中，根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物用于治疗膀胱癌。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。

在本发明的一些实施例中，根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物用于治疗肺癌(例如非小细胞肺癌NSCLC)。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。

在本发明的另一实施例中，根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物用于治疗癌症患者(例如患有以下疾病的患者：(i)胃肠癌，例如食道癌、胃癌、肝细胞癌、胆道癌、胆囊癌、胰脏癌或结肠直肠癌，(ii)黑色素瘤，(iii)膀胱癌或(iv)肺癌)，这些患者从未接受过关于检查点抑制剂或免疫调节剂方面的治疗，即例如未接受过关于抗PD-1抗体的治疗的患者。在一个实施例中，该癌症的特征在于其具有突变/不活化的RNF43或一或多种活化的R-Spondin融合转录本。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。

在本发明的另一实施例中，根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物用于治疗癌症患者(例如患有以下癌症的患者：(i)胃肠癌，例如食道癌、胃癌、肝细胞癌、胆道癌、胆囊癌、胰脏癌或结肠直肠癌，(ii)黑色素瘤，(iii)膀胱癌或(iv)肺癌)，这些患者在用检查点抑制剂或免疫调节剂治疗期间、随后或之后复发，即例如在用PD-1拮抗剂(例如抗PD-1抗体)治疗期间、随后或之后复发的患者。在一个实施例中，该癌症的特征在于其具有突变/不活化的RNF43或一或多种活化的R-Spondin融合转录本。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。

根据本发明的组合疗法的治疗适用性可包括患者(例如患有以下疾病的患者：(i)胃肠癌，例如食道癌、胃癌、肝细胞癌、胆道癌、胆囊癌、胰脏癌或结肠直肠癌，(ii)黑色素瘤，(iii)膀胱癌或(iv)肺癌)的第一线、第二线、第三线或其他线治疗。癌症可为转移性的、复现的、复发的、对一或多种抗癌治疗有抗性或难治性。因此，患者可未经治疗，或可接受一或多种先前的尚未完全治愈疾病的抗癌疗法。

复发及/或对一或多种抗癌剂(例如，组合的单一组分、或标准化疗剂)具有抗性的患者也适合于根据本发明的组合治疗，例如，持续第二或第三线治疗周期(任选地，进一步与一或多种其他抗癌剂组合)，例如，作为附加组合或作为替代治疗。

因此，本发明所揭示的组合疗法中的一些在治疗受试者(例如，患有以下疾病的患者：(i)胃肠癌，例如食道癌、胃癌、肝细胞癌、胆道癌、胆囊癌、胰脏癌或结肠直肠癌，(ii)黑色素瘤，(iii)膀胱癌或(iv)肺癌)是有效的，这些受试者的癌症已复发，或这些受试者的癌症已变得具有抗药性或多重抗药性，或这些受试者的癌症已在用一或多种抗癌剂(例如，组合的单一组分或标准化学疗法)进行的一种、两种或更多种单一疗法或组合疗法中失败。

最初对抗癌药物有反应的癌症可复发，且其可变得对抗癌药物有抗性，此时例如尽管投与增加剂量的抗癌药物，但抗癌药物在治疗患有癌症的受试者中不再有效。据称对两种或更多种抗癌药物产生抗性的癌症为多重抗药性的。

在优选实施例中，根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物用于治疗癌症患者(例如患有以下疾病的患者：(i)胃肠癌，例如食道癌、胃癌、肝细胞癌、胆道癌、胆囊癌、胰脏癌或结肠直肠癌，(ii)黑色素瘤，(iii)膀胱癌或(iv)肺癌)，这些患者先前已经一或多种免疫检查点抑制剂及/或免疫调节剂(例如一或多种PD-1拮抗剂，例如抗PD1抗体)治疗。在一个实施例中，该癌症的特征在于其具有突变/不活化的RNF43或一或多种活化的R-Spondin融合转录本。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。

在又一优选实施例中，根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物用于治疗癌症患者(例如患有以下疾病的患者：(i)胃肠癌，例如食道癌、胃癌、肝细胞癌、胆道癌、胆囊癌、胰脏癌或结肠直肠癌，(ii)黑色素瘤，(iii)膀胱癌或(iv)肺癌)，这些患者对检查点抑制剂疗法(例如对用一或多种免疫检查点抑制剂及/或免疫调节剂(例如一或多种PD-1拮抗剂，例如抗PD1抗体)的治疗)具有难治性或抗性。在一个实施例中，该癌症的特征在于其具有突变/不活化的RNF43或一或多种活化的R-Spondin融合转录本。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。

在替代优选实施例中，根据本发明(包括所有实施例)使用的组合、组合物、试剂盒、用途、方法及化合物用于治疗患有任何实体肿瘤的癌症患者，该实体肿瘤对检查点抑制剂疗法(例如对用一或多种免疫检查点抑制剂及/或免疫调节剂(例如一或多种PD-1拮抗剂，例如抗PD1抗体)的治疗)具有难治性或抗性。在一个实施例中，该癌症的特征在于其具有突变/不活化的RNF43或一或多种活化的R-Spondin融合转录本。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。实体肿瘤的实例是本领域内充分已知的。类似地，术语难治性或抗性也为本领域技术人员已知，且根据本领域内所用的定义在本申请中使用。

对检查点抑制剂疗法具有难治性或抗性的肿瘤在本申请中也称为“免疫疗法抗性肿瘤”或“免疫疗法抗性非T细胞发炎肿瘤”。最近已发现，在许多肿瘤的微环境中，可发现特异性免疫细胞的高表达。此在业内称为“T细胞发炎的表型”，且已经观察到此表型与这些肿瘤相关，这些肿瘤适合用包括治疗性疫苗及检查点阻断抗体(例如抗PD-1抗体)的多重免疫疗法治疗。另一方面，某些肿瘤在其微环境中缺乏免疫细胞的此表达。这些肿瘤在本领域内称为“非T细胞发炎的肿瘤”，且发现其缺乏对免疫疗法的临床益处，特别用抗PD-1抗体的免疫疗法。根据本发明，具有活性Wnt信号传导的后一种类型的肿瘤是所主张的组合疗法的优选靶点。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-1作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-2作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#1作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#5作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。特别优选地，这些癌症经LRP5/LRP6#6作为LRP5/LRP6拮抗剂及PD1-3作为抗PD-1抗体治疗。

本发明的范畴并不限于本申请所述具体实施例。除本申请所述的那些以外，那些本领域技术人员根据本发明揭示内容应可明了本发明各种修改。这些修改意欲落入随附权利要求的范畴。

本申请引用的所有专利申请以引用方式整体并入本申请中。

实例1

源自Balb/c小鼠中乳癌细胞系EMT6的皮下同基因小鼠模型中实例性LRP5/LRP6与PD-1的小鼠抗体的组合的抗肿瘤活性

在小鼠乳癌(EMT6)的s.c.细胞系源自同基因模型中，测试实例性LRP5/6拮抗剂作为单一药剂及与PD-1的小鼠抗体的组合的效能。

BALB/cJBomTac小鼠用于本研究。每只小鼠注射1×10⁶个EMT6乳癌细胞以建立肿瘤。使用卡尺每周至少测量三次肿瘤体积。当肿瘤达到约200mm³的中值肿瘤体积时开始治疗，且30天后终止治疗。

用实例性LRP5/LRP6静脉内(i.v.)每周两次及用实例性小鼠PD-1抗体或两种化合物的组合i.p.每周两次治疗十只具有肿瘤的动物。十只动物用于媒剂/同型对照处理组。在研究结束时，基于肿瘤质量(肿瘤≥1.5cm³)出于伦理原因对动物实施安乐死。

细胞

EMT6细胞获自ATCC(目录号

CRL2755^TM)。建立种源细胞库(MCB)及工作细胞库(WCB)。于37℃及5％CO₂下在T175组织培养瓶中培养细胞。所用培养基是Waymouth的MB752/1，其补充有15％胎牛血清(

表征的胎牛血清；目录号SH30071.03；ThermoScientific)及2mM L-谷氨酰胺(L-谷氨酰胺200mM(100x)；Ref 25030-024；Gibco by LifeTechnologies)。培养物以1:10/1:15的比率每二至三天分裂一次。

小鼠

小鼠是7-8周龄BALB/cJBomTac，购自Taconic,Denmark。在到达动物设施后，在将小鼠用于实验之前，允许将其适应周围环境条件至少5天。在21.5±1.5℃及55±10％湿度的标准条件下，将其以十只每组圈养于

III型笼中。随意提供标准化的经辐照的饮食(PROVIMI KLIBA)及高压灭菌的自来水。在异氟烷麻醉下皮下植入的微芯片用于鉴别每一小鼠。显示研究编号、动物编号、化合物及剂量值、投与途径以及时间表的笼卡在整个研究期间皆保持与动物同在。

测试化合物的投与

将LRP5LRP/6拮抗剂悬浮于组氨酸缓冲液pH6.5中，并以10mg/kg剂量每周两次i.v.投与10mL/kg/小鼠的施加体积，持续前两周。

将PD-1抗体在PBS中稀释，且以10mL/kg/小鼠的体积以10mg/kg剂量每周两次腹膜内注射，直至研究结束。

监测肿瘤生长及疾病进展

用卡尺每周测量肿瘤直径三次(星期一、星期三及星期五)。根据式“肿瘤体积＝长度*直径2*π/6”计算每一肿瘤的体积[以mm³计]。为了监测治疗的副作用，每日检查小鼠的异常，并每日测定体重。在研究结束时处死动物。在研究期间出于伦理原因，早期处死具有坏死肿瘤或肿瘤大小超过1500mm³的动物。

结果

用抗PD-1的小鼠抗体处理ETM6肿瘤导致中度肿瘤生长抑制。在与单一药剂投与相比时，LRP5/LRP6拮抗剂与PD-1抗体的组合导致显著增加的效能，包括在与单一治疗相比时在9只小鼠中的4只中诱导肿瘤消退，在单一治疗时在10只小鼠中的仅一只中观察到肿瘤消退。展现与单一治疗相比组合投与具有协同效应的结果显示于图1。在与单一治疗相比时，LRP5/LRP6拮抗剂与PD-1抗体的组合增加存活，在表5中报导为自治疗开始至肿瘤体积达到至少500mm³时的时间的间隔，以天数计。

表5显示实例性LRP5/LRP6拮抗剂作为单一药剂及与PD-1的小鼠抗体的组合的抗肿瘤活性，中值指自治疗开始至肿瘤体积达到至少500mm³时的时间的间隔(天)。

表5：

此外，对来自显示肿瘤收缩(即，当与治疗开始时相比时，研究结束时的肿瘤体积较小)的小鼠的样品实施组织学分析。具体而言，自所有组收集肿瘤，并在10％NBF(福尔马林(Formalin)溶液，中性缓冲液，10％)中固定用于FFPE(福尔马林固定石蜡包埋)。经由苏木素-伊红(HE)染色对FFPE肿瘤组织实施形态学分析以进行形态学评价。仅在组合组(9只小鼠中的3只)中未报导先前具有肿瘤的部位的组织上在研究结束时肿瘤的证据，指示在与单一治疗相比时，仅通过LRP5/6拮抗剂与PD-1抗体治疗的组合可获得病理完全反应(表6)。

表6显示实例性LRP5/6拮抗剂作为单一药剂及与PD-1的小鼠抗体的组合的抗肿瘤活性。研究结束时的完全反应指当与其中检测到肿瘤细胞的部分反应相比时，通过对先前具有肿瘤的部位的组织进行组织学检查无癌症剩余的证据。

表6：

实例2

在源自Balb/c小鼠中乳癌细胞系EMT6的皮下同基因小鼠模型中，实例性LRP5/LRP6拮抗剂与PD-1的小鼠抗体的组合增加肿瘤T细胞浸润

在小鼠乳癌的s.c.细胞系衍生的同基因模型(EMT6)中测试作为单一药剂及与PD-1的小鼠抗体的组合的实例性LRP5/LRP6拮抗剂在肿瘤中诱导T细胞浸润的能力。

在第16天分析来自用单一药剂及与PD-1的小鼠抗体的组合处理的小鼠的肿瘤中的CD8阳性T细胞，如实例1所报告。自所有组收集肿瘤并固定在用于FFPE组织的10％NBF中，并使用CD8a的大鼠单克隆抗体(53-6.7，eBioscience^TM，工作稀释度1:200)以标准方案实施免疫组织化学(IHC)以检测CD8阳性T细胞。使用HALO^TM影像分析软件实施定量评价，且使用Graph Pad Prism软件测定显著性水平。小于0.05的调整的p值被认为显示组之间的统计学显著差异。结果显示于图2中。

实例3

LRP5/LRP6拮抗剂与抗人PD-1抗体的组合在3D球状体中的效应

为了进一步评价抗LRP5/LRP6拮抗剂(如上定义的LRP5/LRP6#5，还显示为SEQ IDNO:65)与本发明的抗人类PD-1抗体(如上表3中定义的PD1-3)的组合对Wnt驱动的免疫抑制的效应，使用肿瘤细胞、活化的人类PBMC及Wnt配体(Wnt3a)的活体外共培养物，并测量肿瘤细胞存活率作为读出值。

为此，将稳定转染以表达红色荧光蛋白(mKate2)并在3D中作为具有活化的人类PBMC及Wnt3a配体(0.5μg/ml)配体的球状体培养的肿瘤细胞(NCI-H1437)用1000nM的LRP5/LRP6拮抗剂及200nM的抗PD-1抗体处理，并在化合物添加后的指定时间点测量细胞存活率。

3.1研究设计

为了建立与肿瘤细胞(NCI-H1437非小细胞肺癌细胞系)及人类PBMC的活体外共培养分析，将NCI-H1437细胞稳定转染以表达红色荧光蛋白(mKate2)，并在3D中培养为球状体。为了实施共培养分析，将NCI-H1437mKate2细胞接种在96孔球状体微板中(每孔5000个细胞)。将NCI-H1437mKate2细胞接种在每孔200μl体积的RPMI-1640+Glutamax培养基(具有10％FCShi)中。4天后，球状体形成，且自每一孔去除100μl培养基，且将100μl含有或不含有3×10⁵个PBMC(用抗CD3及抗CD28抗体(1μg/ml)活化72小时)的RPMI1640培养基+Glutamax(+10％FCShi)添加至适当孔中。

将含有及不含有PBMC的球状体暴露于抗LRP5/LRP6拮抗剂Wnt3a、抗人类PD-1抗体或抗人类PD-1抗体的同型(作为对照)，作为单一疗法或组合疗法。在第0天(肿瘤细胞接种于微量培养板后4天)仅添加一次化合物。

添加化合物后12小时，进行mKate2荧光的第一次测量，并用于测定肿瘤球状体的细胞存活率。此时间点用作基线(100％)，将以下测量(以12至48小时的时间间隔进行)与之进行比较。使用EnVision 2100多标记读数器(PerkinElmer)测量mKate2的荧光(激发：590nm；发射635nm)。在实验中，具有PBMC及用或不用处理的球状体运行六次生物重复直至第二天，在第3及4天运行五次生物重复，且在第7及8天运行四次生物重复。

试剂及组织培养物质

·PBS(Gibco；14190-094)

·胰蛋白酶EDTA(Gibco；043-90317FU)

·Ultra-LEAF^TM纯化抗人类CD3抗体(Biolegend；300332)

·Ultra-LEAF^TM纯化抗人类CD28抗体(Biolegend；302934)

·RPMI 1640+Glutamax(Gibco；61870-010)

·RPMI 1640(Gibco；A10491-01)

·FCS(HyClone；SH30084.03)

·WNT3a(R&D 5036-WN/CF；Lot SVH181610A)

·StemCell供体：B001000527；批号：1812180182

3.2NCI-H1437MKATE2培养

使用RPMI 1640(Gibco；A10491-01)+10％FCShi培养NCI-H1437mKate2细胞。细胞每周分裂一次(1:10)，并再更换培养基一次。为了传代，使用PBS中的胰蛋白酶EDTA(Gibco；043-90317FU)自细胞培养烧瓶剥离细胞：去除培养基且在37℃下添加5ml胰蛋白酶大约5分钟。每分钟进行目视检查以验证细胞是否已经剥离。剥离后，将细胞/胰蛋白酶溶液与45ml含有10％FCShi的培养基混合，并在室温下以400xg离心5min。将细胞团粒重新悬浮于适量培养基中，且计数用于共培养分析或1:10分裂用于培养。在37℃及5％CO₂下培养细胞。

3.3PBMC的解冻及PBMC活化

将一个具有PBMC的小瓶(StemCell供体：B001000527；批号：1812180182)于RT下解冻，直至仅剩下一小片冰，然后倒入50ml具有20ml冷(2-8℃)RPMI-1640+Glutamax的Falcon中。涡旋后，将Falcon管以400xg离心5min。然后弃去上清液，且将PBMC团粒重新悬浮于1-2ml分析培养基(RPMI1640+Glutamax+10％FCShi)中。

对细胞进行计数并用抗CD3及抗CD28抗体(1μg/ml)活化72小时(5×10^6个细胞/ml)。72小时后，将活化的PBMC以400xg离心5分钟。将细胞团粒重新悬浮于1-2ml RPMI-1640+Glutamax培养基(具有10％FCShi)中。最后，对细胞进行计数并稀释至3×10^6个细胞/ml用于共培养分析。

3.4球状体存活率变化：测量及分析

Envision 2100多标记读数器(PerkinElmer)用于测定NCI-H1437mKate2球状体的细胞存活率变化。在激发590nm及发射635nm以及4.1mm的测量高度下测量mKate2的荧光。为了分析，自测量值减去背景(仅培养基)的平均值，并计算每一孔的百分比变化，将孔的新测量值(减去背景)与基线测量值(添加化合物及PBMC后12小时)进行比较。所示的标准偏差在相应治疗及时间点的百分比变化的百分比标准偏差。将所得的存活率值百分比变化转移至Graph Pad软件，并通过应用双因子ANOVA与Bonferroni多重比较测试的组合进行分析，以测定统计学显著性。

3.5统计分析

使用Graph Pad Prism软件测定显著性水平。对于*为小于0.05、对于**为小于0.01、对于***为小于0.001且对于****为<0.0001的(调整的)p值被认为显示组之间的统计学显著差异。

3.6结果

用Wnt3A配体、LRP5/LRP6拮抗剂或抗人类PD-1抗体治疗对与活化的PMBC共培养的肿瘤球状体的存活率的效应示于图3A中。Wnt3a治疗导致在4至8天的任何时间点检测到的肿瘤球状体存活率显著增加(PBMC介导的肿瘤细胞杀死的抑制)。当与同型治疗(对照)相比时，用LRP5/LRP6拮抗剂或抗人类PD-1抗体治疗对肿瘤球状体存活率无显著效应。

在Wnt3a配体存在下用LRP5/LRP6拮抗剂作为单一疗法或与抗人类PD-1抗体的组合治疗的效应显示于图3B中。用LRP5/LRP6拮抗剂作为单一疗法治疗抑制Wnt3a介导的肿瘤球状体存活率的增加(包括在治疗开始后4至8天之间有显著效应，Tum/PBMC 1:3+LRP5/6+WNT3a+iso对Tum/PBMC 1:3+iso)。因此，在Wnt3a配体存在下用LRP5/LRP6拮抗剂治疗恢复PBMC介导的肿瘤球状体存活率的抑制。

与LRP5/LRP6拮抗剂单一疗法相比，LRP5/LRP6拮抗剂及抗人类PD-1抗体的组合治疗导致肿瘤球状体存活率显著降低(包括治疗开始后7至8天之间有显著效应，Tum/PBMC 1:3+LRP5/6+WNT3a+PD1 vs.Tum/PBMC1:3+LRP5/6+WNT3a+iso)。因此，当与LRP5/LRP6拮抗剂单一疗法相比时，LRP5/LRP6拮抗剂及抗人类PD-1抗体的组合治疗导致PBMC介导的肿瘤细胞杀伤的增强。

3.7讨论

这些结果显示，LRP5及LRP6与PD-1拮抗剂的组合的阻断导致PBMC介导的肿瘤球状体的杀死。这些数据与实例1及2中所示的数据一起指示，本发明的组合治疗具有强效抗肿瘤活性。

序列表

<110> 勃林格殷格翰国际有限公司

<120> 抗癌组合疗法

<130> 12-0437-CN-1

<160> 66

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-1HCDR1

<400> 1

Gly Phe Thr Phe Ser Ala Ser Ala Met Ser

1 5 10

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-1HCDR2

<400> 2

Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-1HCDR3

<400> 3

His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-1LCDR1

<400> 4

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Thr Ser Gly Ile Ser Phe Met Asn

1 5 10 15

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-1LCDR2

<400> 5

Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-1LCDR3

<400> 6

Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 7

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-2HCDR1

<400> 7

Gly Phe Thr Phe Ser Ala Ser Ala Met Ser

1 5 10

<210> 8

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-2HCDR2

<400> 8

Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 9

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-2HCDR3

<400> 9

His Ser Asn Pro Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 10

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-2LCDR1

<400> 10

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Thr Ser Gly Ile Ser Phe Met Asn

1 5 10 15

<210> 11

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-2LCDR2

<400> 11

Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser

1 5

<210> 12

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-2LCDR3

<400> 12

Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 13

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-3HCDR1

<400> 13

Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ser Ala Met Ser

1 5 10

<210> 14

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-3HCDR2

<400> 14

Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 15

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-3HCDR3

<400> 15

His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 16

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-3LCDR1

<400> 16

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Val Ser Gly Ile Ser Phe Met Asn

1 5 10 15

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-3LCDR2

<400> 17

Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser

1 5

<210> 18

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1-3LCDR3

<400> 18

Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 19

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1VH1

<400> 19

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 20

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1VL1

<400> 20

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Thr Ser

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 21

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1VH2

<400> 21

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Asn Pro Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 22

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1VL2

<400> 22

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Thr Ser

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 23

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1VH3

<400> 23

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 24

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1VL3

<400> 24

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Val Ser

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 25

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1VH4

<400> 25

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 26

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1VL4

<400> 26

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Val Ser

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 27

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1VH5

<400> 27

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 28

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1VL5

<400> 28

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Val Ser

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 29

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1HC1

<400> 29

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

<210> 30

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1LC1

<400> 30

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Thr Ser

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 31

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1HC2

<400> 31

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Asn Pro Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

<210> 32

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1LC2

<400> 32

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Thr Ser

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 33

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1HC3

<400> 33

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

<210> 34

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1LC3

<400> 34

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Val Ser

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 35

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1HC4

<400> 35

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

<210> 36

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1LC4

<400> 36

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Val Ser

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 37

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1HC5

<400> 37

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

<210> 38

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PD1LC5

<400> 38

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Val Ser

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 39

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用于B7-1和B7-2结合基序

<400> 39

Met Tyr Pro Pro Tyr

1 5

<210> 40

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-333E06mod-CDR1

<400> 40

Thr Tyr Thr Val Gly

1 5

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<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-333E06mod-CDR2

<400> 41

Ala Ile Arg Arg Arg Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 42

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-333E06mod-CDR3

<400> 42

Asp Thr Arg Thr Val Ala Leu Leu Gln Tyr Arg Tyr Asp Tyr

1 5 10

<210> 43

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-333G06-CDR1

<400> 43

Ser Tyr Ala Met Gly

1 5

<210> 44

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-333G06-CDR2

<400> 44

Ala Ile Arg Arg Ser Gly Arg Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 45

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-333G06-CDR3

<400> 45

Ala Arg Arg Val Arg Ser Ser Thr Arg Tyr Asn Thr Gly Thr Trp Trp

1 5 10 15

Trp Glu Tyr

<210> 46

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-332D03mod-CDR1

<400> 46

Arg Tyr Thr Met Gly

1 5

<210> 47

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-332D03mod-CDR2

<400> 47

Ala Ile Val Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 48

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-332D03mod-CDR3

<400> 48

Asp Arg Arg Gly Arg Gly Glu Asn Tyr Ile Leu Leu Tyr Ser Ser Gly

1 5 10 15

Arg Tyr Glu Tyr

20

<210> 49

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt3a-093A01-CDR1

<400> 49

Ser Tyr Ala Met Gly

1 5

<210> 50

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt3a-093A01-CDR2

<400> 50

Ala Ile Ser Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 51

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt3a-093A01-CDR3

<400> 51

Ser Pro Ile Pro Tyr Gly Ser Leu Leu Arg Arg Arg Asn Asn Tyr Asp

1 5 10 15

Tyr

<210> 52

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt3a-367B10-CDR1

<400> 52

Ser Tyr Ala Met Gly

1 5

<210> 53

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt3a-367B10-CDR2

<400> 53

Ala Ile Ser Trp Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 54

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt3a-367B10-CDR3

<400> 54

Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Val Ala Tyr Val Ser Ala Tyr Tyr Glu Tyr

1 5 10 15

<210> 55

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Alb11结构域CDR1

<400> 55

Ser Phe Gly Met Ser

1 5

<210> 56

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Alb11结构域CDR2

<400> 56

Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 57

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Alb11结构域CDR3

<400> 57

Gly Gly Ser Leu Ser Arg

1 5

<210> 58

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-333E06mod VHH

<400> 58

Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Thr Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Arg Arg Arg Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Thr Arg Thr Val Ala Leu Leu Gln Tyr Arg Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 59

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-333G06 VHH

<400> 59

Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Arg Arg Ser Gly Arg Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Ala Arg Arg Val Arg Ser Ser Thr Arg Tyr Asn Thr Gly Thr

100 105 110

Trp Trp Trp Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 60

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt1-332D03mod VHH

<400> 60

Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Val Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Arg Arg Gly Arg Gly Glu Asn Tyr Ile Leu Leu Tyr Ser

100 105 110

Ser Gly Arg Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 61

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt3a-093A01 VHH

<400> 61

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Ser Pro Ile Pro Tyr Gly Ser Leu Leu Arg Arg Arg Asn Asn

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 62

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Wnt3a-367B10 VHH

<400> 62

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Ser Trp Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Val Ala Tyr Val Ser Ala Tyr Tyr

100 105 110

Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 63

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Alb11 VHH

<400> 63

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 64

<211> 435

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽 (1)

<400> 64

Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Thr Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Arg Arg Arg Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Thr Arg Thr Val Ala Leu Leu Gln Tyr Arg Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val

145 150 155 160

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn Ser Leu

165 170 175

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly Met

180 185 190

Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser

195 200 205

Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

210 215 220

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr Leu Gln

225 230 235 240

Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile

245 250 255

Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

260 265 270

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

275 280 285

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

290 295 300

Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val

305 310 315 320

Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr

325 330 335

Phe Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu

340 345 350

Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr

355 360 365

Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys

370 375 380

Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

385 390 395 400

Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Pro Ile Pro Tyr Gly Ser Leu Leu Arg

405 410 415

Arg Arg Asn Asn Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

420 425 430

Ser Ser Ala

435

<210> 65

<211> 439

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽 (2)

<400> 65

Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Arg Arg Ser Gly Arg Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Ala Arg Arg Val Arg Ser Ser Thr Arg Tyr Asn Thr Gly Thr

100 105 110

Trp Trp Trp Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

145 150 155 160

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

165 170 175

Pro Gly Asn Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

180 185 190

Ser Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

195 200 205

Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala

210 215 220

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr

225 230 235 240

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val

245 250 255

Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr

260 265 270

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

275 280 285

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

290 295 300

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser

305 310 315 320

Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala

325 330 335

Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln

340 345 350

Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Arg Ser

355 360 365

Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser

370 375 380

Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg

385 390 395 400

Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Pro Arg Gly Tyr

405 410 415

Gly Val Ala Tyr Val Ser Ala Tyr Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

420 425 430

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala

435

<210> 66

<211> 440

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽 (3)

<400> 66

Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Val Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Arg Arg Gly Arg Gly Glu Asn Tyr Ile Leu Leu Tyr Ser

100 105 110

Ser Gly Arg Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val

165 170 175

Gln Pro Gly Asn Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr

180 185 190

Phe Ser Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

195 200 205

Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr

210 215 220

Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys

225 230 235 240

Thr Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala

245 250 255

Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly

260 265 270

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

275 280 285

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

290 295 300

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

305 310 315 320

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

325 330 335

Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Phe Arg

340 345 350

Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Arg

355 360 365

Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile

370 375 380

Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

385 390 395 400

Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Pro Arg Gly

405 410 415

Tyr Gly Val Ala Tyr Val Ser Ala Tyr Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly

420 425 430

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala

435 440

Claims

1.一种能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽，其用于治疗及/或预防优选为癌症的过度增殖疾病的方法中，其中该方法包括，能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽将与PD-1抗体组合投与有此需要的患者，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽选自由以下组成的组：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

(i)抗PD1抗体，其包含含有SEQ ID NO:1(HCDR1)、SEQ ID NO:2(HCDR2)及SEQ ID NO:3(HCDR3)的氨基酸序列的重链CDR及含有SEQ ID NO:4(LCDR1)、SEQ ID NO:5(LCDR2)及SEQID NO:6(LCDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；

(ii)抗PD1抗体，其包含含有SEQ ID NO:7(HCDR1)、SEQ ID NO:8(HCDR2)及SEQ ID NO:9(HCDR3)的氨基酸序列的重链CDR及含有SEQ ID NO:10(LCDR1)、SEQ ID NO:11(LCDR2)及SEQ ID NO:12(LCDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；

及

(iii)抗PD1抗体，其包含含有SEQ ID NO:13(HCDR1)、SEQ ID NO:14(HCDR2)及SEQ IDNO:15(HCDR3)的氨基酸序列的重链CDR及含有SEQ ID NO:16(LCDR1)、SEQ ID NO:17(LCDR2)及SEQ ID NO:18(LCDR3)的氨基酸序列的轻链CDR。

2.一种治疗及/或预防优选为癌症的过度增殖疾病的方法，其包括向有此需要的患者投与治疗有效量的能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽和治疗有效量PD-1抗体，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽选自由以下组成的组：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

(ii)抗PD1抗体，其包含含有SEQ ID NO:7(HCDR1)、SEQ ID NO:8(HCDR2)及SEQ ID NO:9(HCDR3)的氨基酸序列的重链CDR及含有SEQ ID NO:10(LCDR1)、SEQ ID NO:11(LCDR2)及SEQ ID NO:12(LCDR3)的氨基酸序列的轻链CDR，

及

3.一种PD-1抗体，其用于及/或预防优选为癌症的过度增殖疾病的方法中，其中该方法包括PD-1抗体将与能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽组合投与至有此需要的患者，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽选自由以下组成的组：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

4.一种能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽的用途，其用于制备用于治疗及/或预防优选为癌症的过度增殖疾病的方法中的医药组合物，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽将与PD-1抗体组合使用，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽选自由以下组成的组：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

5.一种PD-1抗体的用途，其用于制备用于治疗及/或预防优选为癌症的过度增殖疾病的方法中的医药组合物，其中该PD-1-抗体将与能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽组合使用，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽选自由以下组成的组：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

6.一种医药组合物，其包含：

能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽；PD-1抗体；及任选地一或多种医药上可接受的载剂、赋形剂及/或媒剂；

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

7.根据权利要求6的医药组合物，其用于治疗及/或预防优选为癌症的过度增殖疾病的方法中。

8.一种试剂盒，其在一或多个容器中包含

第一医药组合物或剂型，其包含能够特异性结合至LRP5及LRP6的多肽及任选地一或多种医药上可接受的载剂、赋形剂及/或媒剂；

第二医药组合物或剂型，其包含PD-1抗体及任选地一或多种医药上可接受的载剂、赋形剂及/或媒剂；

及任选地包含印刷说明书的包装插页；

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(ii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iii)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:49)

CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:50)

CDR3：SPIPYGSLLRRRNNYDY(＝SEQ ID NO:51)；

(iv)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：TYTVG(＝SEQ ID NO:40)

CDR2：AIRRRGSSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:41)

CDR3：DTRTVALLQYRYDY(＝SEQ ID NO:42)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

(v)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:43)

CDR2：AIRRSGRRTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:44)

CDR3：ARRVRSSTRYNTGTWWWEY(＝SEQ ID NO:45)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

及

(vi)多肽，其包含含有以下CDR序列的第一ISVD(a)：

CDR1：RYTMG(＝SEQ ID NO:46)

CDR2：AIVRSGGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:47)

CDR3：DRRGRGENYILLYSSGRYEY(＝SEQ ID NO:48)，及

包含以下CDR序列的第二ISVD(b)：

CDR1：SYAMG(＝SEQ ID NO:52)

CDR2：AISWRSGSTYYADSVKG(＝SEQ ID NO:53)

CDR3：DPRGYGVAYVSAYYEY(＝SEQ ID NO:54)；

且其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

及

9.根据权利要求8的试剂盒，其用于治疗及/或预防优选为癌症的过度增殖疾病的方法中。

10.根据权利要求1使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽，根据权利要求2的治疗方法、根据权利要求3使用的PD-1抗体，根据权利要求4或5的用途，根据权利要求6或7的医药组合物或根据权利要求8或9的试剂盒，

(v)多肽，其包含含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的第一ISVD及含有SEQ ID NO:62的序列的第二ISVD；

及

11.根据权利要求1使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽，根据权利要求2的治疗方法、根据权利要求3使用的PD-1抗体，根据权利要求4或5的用途，根据权利要求6或7的医药组合物或根据权利要求8或9的试剂盒，

其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽包含含有选自由SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65及SEQ ID NO:66组成的组的氨基酸序列的多肽。

12.根据权利要求1、10或11使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽，根据权利要求2、10或11的治疗方法、根据权利要求3、10或11使用的PD-1抗体，根据权利要求4、5、10或11的用途，根据权利要求6、7、10或11的医药组合物或根据权利要求8、9、10或11的试剂盒，

其中该抗PD1抗体选自由以下组成的组：

(iv)具有包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链可变结构域及含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链可变结构域的抗体；

及

13.根据权利要求1、10或11使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽，根据权利要求2、10或11的治疗方法、根据权利要求3、10或11使用的PD-1抗体，根据权利要求4、5、10或11的用途，根据权利要求6、7、10或11的医药组合物或根据权利要求8、9、10或11的试剂盒，

其中该PD-1抗体选自由以下组成的组：

(i)具有包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链的抗体；

(ii)具有包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链的抗体；

(iii)具有包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链的抗体；

(iv)具有包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链的抗体；

及

(v)具有包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链及含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链的抗体。

14.根据权利要求1、10、11、12或13使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽，根据权利要求2、10、11、12或13的治疗方法、根据权利要求3、10、11、12或13使用的PD-1抗体，根据权利要求4、5、10、11、12或13的用途，或根据权利要求9、10、11、12或13使用的试剂盒，

其中该PD-1抗体将与能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽同时、并行、依序、连续、交替或分开投与。

15.根据权利要求1、10、11、12或13使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽，根据权利要求2、10、11、12或13的治疗方法、根据权利要求3、10、11、12或13使用的PD-1抗体，根据权利要求4、5、10、11、12或13的用途，或根据权利要求9、10、11、12或13使用的试剂盒，

其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽及该PD-1抗体将根据以下治疗方案投与：

(i)第一治疗期，其中能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽及该PD-1抗体将同时或并行投与，优选每三周或四周一次；

及

(ii)第二治疗期，其中仅将投与该PD-1抗体，而能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽不投与，优选地其中该PD-1抗体将每三周或四周投与一次。

16.根据权利要求15的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽、治疗方法、使用的PD-1抗体、用途或使用的试剂盒，

其中在能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽及该PD-1抗体是每三周投与时，该第一治疗时段是3或6周；或

在能够特异性结合至LRP5及LRP6的该多肽及该PD-1抗体是每四周投与时，该第一治疗时段是4或8周。

17.根据权利要求14、15或16使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽、治疗方法、使用的PD-1抗体、用途或使用的医药组合物或使用的试剂盒，

其中该投与是静脉内投与。

18.根据权利要求1、10至17中的任一项使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽，根据权利要求2、10至17中的任一项的治疗方法、根据权利要求3、10至17中的任一项使用的PD-1抗体，根据权利要求4、5、10至17中的任一项的用途，根据权利要求7、10至17中的任一项使用的医药组合物或根据权利要求9至17中的任一项使用的试剂盒，

其中将治疗的该过度增殖疾病选自由以下组成的组的癌症：胃肠癌、黑色素瘤肿瘤、膀胱癌及肺癌(例如NSCLC)。

19.根据权利要求18的使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽、治疗方法、使用的PD-1抗体，用途，使用的医药组合物或使用的试剂盒，

其中该胃肠癌是食道癌(例如胃食道接合部癌)、胃(stomach或gastric)癌、肝细胞癌、胆道癌(例如胆管癌)、胆囊癌、胰脏癌或结肠直肠癌(CRC)。

20.根据权利要求18或19的使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽、治疗方法、使用的PD-1抗体，用途，使用的医药组合物或使用的试剂盒，

其中该癌症是免疫疗法抗性肿瘤。

21.根据权利要求1、10至17中的任一项使用的能够特异性结合至LRP5和LRP6的多肽，根据权利要求2、10至17中的任一项的治疗方法、根据权利要求3、10至17中的任一项使用的PD-1抗体，根据权利要求4、5、10至17中的任一项的用途，根据权利要求7、10至17中的任一项使用的医药组合物或根据权利要求9至17中的任一项使用的试剂盒，

其中将治疗的该过度增殖疾病是实体免疫疗法抗性肿瘤。