CN113383653B - 同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法 - Google Patents

同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于嫁接技术领域，公开了一种同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，包括：砧木及接穗育苗；嫁接及嫁接苗愈合管理；Esculin、Acid Fuschin、EDTA·2Na试剂配置；根部及接穗子叶分别施加染料，进行木质部和韧皮部重连判断。本发明提供了一种同时检测瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，可作为判断嫁接愈合状况的依据，该方法减少了一半嫁接苗的用量，同时采用了较为低廉的染料。本发明采用Esculin以及Acid Fuschin可以同时检测瓜类作物嫁接苗的木质部及韧皮部重连情况，大大降低了实验成本。

Description

同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法
技术领域
本发明属于嫁接技术领域，尤其涉及一种同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法。
背景技术
目前，嫁接在提高西瓜、黄瓜和甜瓜等作物抗土传病害和多种非生物逆境中发挥重要作用，嫁接愈合对种苗成活和质量至关重要。维管组织的重连是植物嫁接愈合的一个标志性事件。实验中，大多采用5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA)来检测植物嫁接苗的木质部及韧皮部的重连情况。CFDA价格昂贵，且在一株嫁接苗中只能单一检测木质部或韧皮部的重连情况。
通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有的连通判断方法成本高，且在一株嫁接苗中只能单一检测木质部或韧皮部的重连情况，另外，西瓜在CFDA检测激发光下，存在自发荧光的问题，所以CFDA不适合进行西瓜作物木质部和韧皮部重连的检测。
解决以上问题及缺陷的难度为：
嫁接植株木质部和韧皮部重连的检测，对于嫁接苗愈合期的管理至关重要，直接牵涉种苗成活率和质量，解决以上问题及缺陷难度适中。
解决以上问题及缺陷的意义为：维管束的重连是判断嫁接愈合的重要指标，而维管束的重连包括木质部及韧皮部重连两方面。需要寻找合适的染料，实现在一株嫁接苗上同时检测木质部及韧皮部的重连，大大提升了检测效率。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法。
本发明是这样实现的，一种同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，所述同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法包括：
通过在激发光下分别以砧木茎段以及接穗茎段作为对照，观察接穗茎段、砧木茎段是否有荧光同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况。
进一步，所述同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法包括以下步骤：
步骤一，预先配置Esculin、Acid Fuschin、EDTA·2Na，并进行染料处理；
步骤二，于接穗嫁接愈合部5mm以上部位切取2mm茎段进行接穗取样；同时于砧木嫁接愈合部5mm以下部位切取2mm茎段进行砧木取样；
步骤三，在激发光下分别以砧木茎段以及接穗茎段作为对照，观察接穗茎段、砧木茎段是否有荧光同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况。
进一步，所述步骤一之前还需进行：
(1)砧木育苗：对砧木种子利用1‰高锰酸钾消毒5min，清洗干净后，室温浸种6-8h；随后30℃恒温催芽24-48h，胚根露白时播种于72孔穴盘，1穴1粒，第1片真叶微露时嫁接；
(2)接穗育苗：对西瓜或其他接穗种子利用1‰高锰酸钾消毒5min，清洗干净后，室温浸种6-8h；随后30℃恒温催芽24-48h，胚根露白时撒播于平盘中，子叶展平时嫁接；
(3)于砧木第1片真叶微露、接穗子叶展平时采用单子叶贴接或其他方式进行嫁接；并进行嫁接愈合期的管理。
进一步，步骤(3)中，所述单子叶贴接方法包括：
砧木处理：用刀片在子叶基部斜向45°向下切除一片子叶，切面约0.5cm；
接穗处理：嫁接刀片在距子叶基部0.5-1.0cm处向上成45°左右斜切，切面约0.5cm；
将砧木与接穗切面紧密贴合，夹上嫁接夹即可。
进一步，所述单子叶贴接方法还包括：用75％医用酒精进行刀片、嫁接夹的消毒，并将刀片、嫁接夹自然晾干后使用。
进一步，所述嫁接还包括：于嫁接前1d将基质浇透水。
进一步，所述进行嫁接愈合期的管理包括：
温度管理：温度控制在26℃，湿度管理：嫁接后前3d湿度保持在95％以上；
可选择用塑料薄膜覆盖；于嫁接后4-6d，逐渐通风，通风时间以接穗子叶不萎蔫为宜；10d后掀开薄膜，进入正常管理；
光照管理：嫁接后第1d，黑暗，1d后保持弱光，光强约80μmol/m2×s；10d后进入正常管理。
进一步，步骤一中，所述预先配置Esculin、Acid Fuschin、EDTA·2Na包括：
Esculin配置：取0.4g Esculin溶解于20mL 60％乙腈溶液中，棕色试剂瓶常温保存；
Acid Fuschin配置：取0.5g Acid Fuschin溶解于100mL蒸馏水中，棕色试剂瓶常温保存；
EDTA·2Na配置：取0.0931g EDTA·2Na溶解于100mL蒸馏水中，透明试剂瓶常温保存。
进一步，步骤一中，所述进行染料处理包括：
取嫁接后6d的嫁接苗，洗净根系基质，将根系浸泡于5mg/mL Acid Fuschin中；同时，用磨砂纸去除接穗子叶上表皮蜡质，于子叶表面均匀涂抹一层2.5mM EDTA·2Na；摇晃Esculin试剂瓶使之混匀，吸取50μl的20mg/mL的Esculin均匀涂抹于子叶表面，黑暗中静置2h。
进一步，步骤三中，所述在激发光下分别以砧木茎段以及接穗茎段作为对照，观察接穗茎段、砧木茎段是否有荧光同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况包括：
在630nm激发光下，以砧木茎段作为对照，利用体式荧光显微镜观察接穗茎段是否有荧光判断木质部连通情况；
在454nm激发光下，以接穗茎段作为对照，利用体式荧光显微镜观察砧木茎段是否有荧光判断韧皮部连通情况。
结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：本发明提供了一种同时检测西瓜等瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，可作为判断嫁接愈合状况的依据。相对于原有的检测技术，该技术减少了一半嫁接苗的用量，大大减少了人力成本及检测成本，便于科学研究和集约化大型育苗场使用。
本发明采用Esculin以及Acid Fuschin可以同时检测瓜类作物嫁接苗的木质部及韧皮部重连情况，大大降低了实验成本。
附图说明
图1是本发明实施例提供的同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法原理图。
图2是本发明实施例提供的同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法流程图。
图3是本发明实施例提供的西瓜嫁接第6d仅木质部连通示意图。
图4是本发明实施例提供的西瓜嫁接第6d仅韧皮部连通示意图。
图5是本发明实施例提供的西瓜嫁接第6d木质部和韧皮部均未连通示意图。
图6是本发明实施例提供的西瓜嫁接第6d木质部和韧皮部均连通示意图
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法包括：
通过在激发光下分别以砧木茎段以及接穗茎段作为对照，观察接穗茎段、砧木茎段是否有荧光同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况。
如图2所示，本发明实施例提供的同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法包括以下步骤：
S101，预先配置Esculin、Acid Fuschin、EDTA·2Na，并进行染料处理；
S102，于接穗嫁接愈合部5mm以上部位切取2mm茎段进行接穗取样；同时于砧木嫁接愈合部5mm以下部位切取2mm茎段进行砧木取样；
S103，在激发光下分别以砧木茎段以及接穗茎段作为对照，观察接穗茎段、砧木茎段是否有荧光同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况。
本发明实施例提供的步骤S101之前还需进行：
(1)砧木育苗：对砧木种子利用1‰高锰酸钾消毒5min，清洗干净后，室温浸种6-8h；随后30℃恒温催芽24-48h，胚根露白时播种于72孔穴盘，1穴1粒，第1片真叶微露时嫁接；
(2)接穗育苗：对西瓜或其他接穗种子利用1‰高锰酸钾消毒5min，清洗干净后，室温浸种6-8h；随后30℃恒温催芽24-48h，胚根露白时撒播于平盘中，子叶展平时嫁接；
(3)于砧木第1片真叶微露、接穗子叶展平时采用单子叶贴接或其他方式进行嫁接；并进行嫁接愈合期的管理。
步骤(3)中，本发明实施例提供的单子叶贴接方法包括：
砧木处理：用刀片在子叶基部斜向45°向下切除一片子叶，切面约0.5cm；
接穗处理：嫁接刀片在距子叶基部0.5-1.0cm处向上成45°左右斜切，切面约0.5cm；
将砧木与接穗切面紧密贴合，夹上嫁接夹即可。
本发明实施例提供的单子叶贴接方法还包括：用75％医用酒精进行刀片、嫁接夹的消毒，并将刀片、嫁接夹自然晾干后使用。
本发明实施例提供的嫁接还包括：于嫁接前1d将基质浇透水。
本发明实施例提供的进行嫁接愈合期的管理包括：
温度管理：温度控制在26℃，湿度管理：嫁接后前3d湿度保持在95％以上；
可选择用塑料薄膜覆盖；于嫁接后4-6d，逐渐通风，通风时间以接穗子叶不萎蔫为宜；10d后掀开薄膜，进入正常管理；
光照管理：嫁接后第1d，黑暗，1d后保持弱光，光强约80μmol/m2×s；10d后进入正常管理。
步骤S101中，本发明实施例提供的预先配置Esculin、Acid Fuschin、EDTA·2Na包括：
Esculin配置：取0.4g Esculin溶解于20mL 60％乙腈溶液中，棕色试剂瓶常温保存；
Acid Fuschin配置：取0.5gAcid Fuschin溶解于100mL蒸馏水中，棕色试剂瓶常温保存；
EDTA·2Na配置：取0.0931gEDTA·2Na溶解于100mL蒸馏水中，透明试剂瓶常温保存。
步骤S101中，本发明实施例提供的进行染料处理包括：
取嫁接后6d的嫁接苗，洗净根系基质，将根系浸泡于5mg/mLAcid Fuschin中；同时，用磨砂纸去除接穗子叶上表皮蜡质，于子叶表面均匀涂抹一层2.5mMEDTA·2Na；摇晃Esculin试剂瓶使之混匀，吸取50μl的20mg/mL的Esculin均匀涂抹于子叶表面，黑暗中静置2h。
步骤S103中，本发明实施例提供的在激发光下分别以砧木茎段以及接穗茎段作为对照，观察接穗茎段、砧木茎段是否有荧光同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况包括：
在630nm激发光下，以砧木茎段作为对照，利用体式荧光显微镜观察接穗茎段是否有荧光判断木质部连通情况；
在454nm激发光下，以接穗茎段作为对照，利用体式荧光显微镜观察砧木茎段是否有荧光判断韧皮部连通情况。
下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
实施例1：
一种同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法
(1)砧木育苗：对西瓜砧木“京欣砧1号”种子进行1‰高锰酸钾消毒5min，清洗干净后，室温浸种6-8h；随后30℃恒温催芽24-48h，胚根露白时播种于72孔穴盘，1穴1粒，第1片真叶微露时嫁接。
(2)接穗育苗：对西瓜“97103”种子进行1‰高锰酸钾消毒5min，清洗干净后，室温浸种6-8h；随后30℃恒温催芽24h，胚根露白时撒播于平盘中，子叶展平时嫁接。
(3)嫁接时期：砧木：第1片真叶微露，接穗：子叶展平。
(4)嫁接操作：采用单子叶贴接，砧木处理：用刀片在子叶基部斜向45°向下切除一片子叶，切面约0.5cm；接穗处理：嫁接刀片在距子叶基部0.5-1.0cm处向上成45°左右斜切，切面约0.5cm；最后将砧木与接穗切面紧密贴合，夹上嫁接夹。
(6)嫁接愈合期的管理：
温度控制在26℃，湿度管理：嫁接后前3d湿度保持在95％以上。可用塑料薄膜覆盖。嫁接后4-6d，应逐渐通风，通风时间以接穗子叶不萎蔫为宜。10d后掀开薄膜，进入正常管理。光照管理：嫁接后第1d，黑暗，1d后保持弱光，光强约80μmol/(m2×s)。10d后进入正常管理。
(7)木质部及韧皮部连通情况判断
Esculin配置：取0.4gEsculin溶解于20mL 60％乙腈溶液中,棕色试剂瓶常温保存。
Acid Fuschin配置：取0.5g AcidFuschin溶解于100mL蒸馏水中，棕色试剂瓶常温保存。
EDTA·2Na配置：取0.0931g EDTA·2Na溶解于100mL蒸馏水中，透明试剂瓶常温保存。
染料处理：取嫁接后6d的嫁接苗，洗净根系基质，将根系浸泡于5mg/mL AcidFuschin中。同时，用磨砂纸去除接穗子叶上表皮蜡质，于子叶表面均匀涂抹一层2.5mMEDTA·2Na。摇晃Esculin试剂瓶使之混匀，吸取50μl 20mg/mL Esculin均匀涂抹于子叶表面。黑暗中静置2h。
取样：接穗：嫁接愈合部5mm以上部位切取2mm茎段；砧木：嫁接愈合部5mm以下部位切取2mm茎段。
拍照观察：体式荧光显微镜下观察。木质部连通：在630nm激发光下，以砧木茎段作为对照，观察接穗茎段是否有荧光。韧皮部连通：在454nm激发光下，以接穗茎段作为对照，观察砧木茎段是否有荧光。
在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上；术语“上”、“下”、“左”、“右”、“内”、“外”、“前端”、“后端”、“头部”、“尾部”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，其特征在于，所述同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法包括：
通过在激发光下分别以砧木茎段以及接穗茎段作为对照，分析接穗茎段、砧木茎段是否有荧光同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况；
所述同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法包括以下步骤：
步骤一，预先配置Esculin、Acid Fuschin、EDTA•2Na，并进行染料处理；
步骤二，于接穗嫁接愈合部5mm以上部位切取2mm茎段进行接穗取样；同时于砧木嫁接愈合部5mm以下部位切取2mm茎段进行砧木取样；
步骤三，在激发光下分别以砧木茎段以及接穗茎段作为对照，观察接穗茎段、砧木茎段是否有荧光同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况；
所述步骤一之前还需进行：
（1）砧木育苗：对砧木种子利用1‰高锰酸钾消毒5min，清洗干净后，室温浸种6-8h；随后30℃恒温催芽24-48h，胚根露白时播种于72孔穴盘，1穴1粒，第1片真叶微露时嫁接；
（2）接穗育苗：对西瓜或其他接穗种子利用1‰高锰酸钾消毒5min，清洗干净后，室温浸种6-8h；随后30℃恒温催芽24-48h，胚根露白时撒播于平盘中，子叶展平时嫁接；
（3）于砧木第1片真叶微露、接穗子叶展平时采用单子叶贴接或其他方式进行嫁接；并进行嫁接愈合期的管理；
步骤一中，所述进行染料处理包括：
取嫁接后6d的嫁接苗，洗净根系基质，将根系浸泡于5mg/mLAcid Fuschin中；同时，用磨砂纸去除接穗子叶上表皮蜡质，于子叶表面均匀涂抹一层2.5mM EDTA•2Na；摇晃Esculin试剂瓶使之混匀，吸取50µl的20mg/mL的Esculin均匀涂抹于子叶表面，黑暗中静置2h；
步骤三中，所述在激发光下分别以砧木茎段以及接穗茎段作为对照，观察接穗茎段、砧木茎段是否有荧光同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况包括：
在630nm激发光下，以砧木茎段作为对照，利用体式荧光显微镜观察接穗茎段是否有荧光判断木质部连通情况；
在454nm激发光下，以接穗茎段作为对照，利用体式荧光显微镜分析砧木茎段是否有荧光判断韧皮部连通情况。
2.如权利要求1所述同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述单子叶贴接方法包括：
砧木处理：用刀片在子叶基部斜向45°向下切除一片子叶，切面0.5cm；
接穗处理：嫁接刀片在距子叶基部0.5-1.0cm处向上成45°左右斜切，切面0.5cm；
将砧木与接穗切面紧密贴合，夹上嫁接夹即可。
3.如权利要求2所述同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，其特征在于，所述单子叶贴接方法还包括：用75%医用酒精进行刀片、嫁接夹的消毒，并将刀片、嫁接夹自然晾干后使用。
4.如权利要求1所述同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，其特征在于，所述嫁接还包括：于嫁接前1d将基质浇透水。
5.如权利要求1所述同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，其特征在于，所述进行嫁接愈合期的管理包括：
温度管理：温度控制在26℃，湿度管理：嫁接后前3d湿度保持在95%以上；
可选择用塑料薄膜覆盖；于嫁接后4-6d，逐渐通风，通风时间以接穗子叶不萎蔫为宜；10d后掀开薄膜，进入正常管理；
光照管理：嫁接后第1d，黑暗，1d后保持弱光，光强约80μmol/m2×s；10d后进入正常管理。
6.如权利要求1所述同时判断瓜类作物嫁接苗木质部及韧皮部连通情况的方法，其特征在于，步骤一中，所述预先配置Esculin、Acid Fuschin、EDTA•2Na包括：
Esculin配置：取0.4g Esculin溶解于20mL 60%乙腈溶液中，棕色试剂瓶常温保存；
Acid Fuschin配置：取0.5g Acid Fuschin溶解于100mL蒸馏水中，棕色试剂瓶常温保存；
EDTA•2Na配置：取0.0931g EDTA•2Na溶解于100mL蒸馏水中，透明试剂瓶常温保存。
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Assignee: Qicai Vegetable Core (Beijing) Technology Co.,Ltd.

Assignor: HUAZHONG AGRICULTURAL University

Contract record no.: X2023980037951

Denomination of invention: Methods for judging the connection of Xylem and phloem of grafted melon seedlings at the same time

Granted publication date: 20220401

License type: Exclusive License

Record date: 20230714

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