CN113337504A - 一种长非编码rna及其在诊断及治疗原发性肝癌中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种长非编码RNA及其在诊断及治疗原发性肝癌中的应用，所述长非编码RNA为长非编码RNA LINC01123，长非编码RNA LINC01123的核苷酸序列如Seq ID NO.1所示。本发明首次提出LINC01123在肝癌中的作用机制，并提出LINC01123在评估HCC患者预后情况以及作为HCC患者药物治疗靶标方面有着巨大的潜力，并提供用于诊断HCC预后情况或作为治疗HCC药物治疗的靶点，为HCC病人精准治疗的实现奠定了基础。

Description

一种长非编码RNA及其在诊断及治疗原发性肝癌中的应用

技术领域：

本发明涉及基因工程领域，具体讲是一种长非编码RNA及其在诊断及治疗原发性肝癌中的应用。

背景技术：

肝细胞癌(HCC)是最常见的肝脏恶性肿瘤，是全球癌症相关死亡的主要原因之一。由于乙型肝炎病毒(HBV)的高感染率，中国占全球肝癌新发病例和死亡病例的一半。尽管近年来肝癌的治疗策略取得了很大进展，但由于术后复发和转移的频率较高，患者的临床预后仍然很差。因此，研究肝癌发生发展的机制，探索新的治疗靶点是至关重要的。

长的非编码RNA(LncRNAs)，不能翻译成蛋白质，长度超过两百个核苷酸，已被证明是各种癌症发生和发展的关键调节因子。例如，lncRNA LINC00689促进胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和糖酵解。LncRNA IQCJ-SCHIP1-AS1在结直肠癌中低水平表达，通过调节细胞周期进程和凋亡抑制癌细胞增殖。已有广泛报道，lncRNAs作为竞争内源性RNAs(CeRNAs)在肝癌的生长和转移调控中发挥重要作用。例如，lncRNA MCM3AP-AS1通过充当miR-194-5p的分子海绵，促进叉头盒A1(FOXA1)的表达，从而促进肝癌的生长。LncRNA CASC2通过靶向 miR-367/F-box和包含7(FBXW7)轴的WD重复结构域，抑制肝癌细胞的迁移、侵袭和上皮向间充质转化(EMT)。SNHG7的上调通过隔离miR-122-5p和增加核糖体蛋白L4(RPL4)的表达来增强肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。这些发现表明 lncRNAs在人类恶性肿瘤发生发展过程中扮演至关重要的角色。因此，发现更多的肿瘤相关的lncRNAs并研究他们的生物功能和机制，对更好地理解HCC发生发展的的分子生物学有重要的意义。LINC01123，此前已被确认为非小细胞肺癌 (NSCLC)的肿瘤驱动因子。LINC01123被c-Myc转录激活，通过靶向 miR-199a-5p/c-Myc途径促进NSCLC细胞的增殖和有氧糖酵解。此外，LINC01123 与其他三个LncRNAs联合使用可作为头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)一种有前途的新的预后生物标志物。然而，LINC01123在肝细胞癌中的功能和相关机制仍然很大程度上是未知的，在既往研究中，LINC01123在非小细胞肺癌中高表达并于预后不良相关，但是在肝癌细胞中作用机制却未有报道。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是，提供一种用于诊断HCC预后情况或作为治疗HCC药物靶点的长非编码RNA，为HCC病人精准治疗的实现奠定了基础。

本发明的技术解决方案是，提供一种用于诊断原发性肝癌预后情况或作为治疗原发性肝癌药物靶点的长非编码RNA，所述长非编码RNA为长非编码RNA LINC01123，长非编码RNA LINC01123的核苷酸序列如Seq ID NO.1所示。发现在肝癌组织中，LINC01123相较于癌旁组织高表达，LINC01123的高表达与患者的临床预后相关。在HCC细胞中，通过现有技术敲低和过表达LINC01123后，阐明了LINC01123在HCC肿瘤发生和发展的作用并研究了LINC01123在HCC细胞中的靶基因。

作为优选，还提供所述的长非编码RNA在作为筛选判断原发性肝癌预后情况的诊断试剂中的应用。

作为优选，还提供长非编码RNA在作为筛选治疗原发性肝癌的药物中的应用。

本发明还提供一种识别上述的长非编码RNA的标记物在制备判断原发性癌治疗预后诊断产品中的应用，所述的标记物包括但不限于：

(1)结合长非编码RNA LINC01123的引物或荧光标记的结合长非编码RNALINC01123的引物；

(2)结合长非编码RNA LINC01123的小分子化合物；

(3)结合长非编码RNA LINC01123的生物大分子，其中，所述生物大分子包括但不限于：抗体或抗体功能片段、荧光标记的抗体或抗体功能片段、RNA结合蛋白或其功能片段、荧光标记的RNA结合蛋白或其功能片段。

具体的，所述引物或荧光标记的引物的核苷酸序列如Seq ID NO.2和Seq ID NO.3所示。其中，

Primer F(Seq ID NO.2)：5’-ACAGTGGCCGCACGCATAGCTG-3’

Primer R(Seq ID NO.3)：5’-CTGACGACCGAGGTGACAACGATGA-3’

本发明还公开一种用于判断原发性肝癌治疗预后情况的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包含上述的标记物。

本发明还提供一种抑制所述的长非编码RNA的抑制剂在制备诊断或治疗原发性肝癌的药物中的应用，所述抑制剂包括但不限于：

(1)抑制所述长非编码RNA的siRNA、shRNA或功能类似的干扰小RNA；

(2)抑制所述长非编码RNA的小分子化合物；

(3)抑制所述长非编码RNA的生物大分子，其中，所述生物大分子包括但不限于：抗体或抗体功能片段、高底物专一性的酶或其功能片段。

作为优选，所述siRNA的编码DNA的核苷酸序列如Seq ID NO.4、Seq ID NO.5 或Seq ID NO.6、Seq ID NO.7所示。具体的，

Seq ID NO.4：(si-1123-1forward)5’-CUGAACGUCUUGCAACAGUTT-3’

Seq ID NO.5：(si-1123-1reverse)5’-ACUGUUGCAAGACGUUCAGTT-3’

Seq ID NO.6：(si-1123-2forward)5’-GCCCUAGGAAAUCCGUAAUTT-3’

Seq ID NO.7：(si-1123-2reverse)5’-AUUACGGAUUUCCUAGGGCTT-3’

另外，本发明还公开了包含有上述抑制剂的用于治疗原发性肝癌的药物或药物组合物。

以及，上述药物或药物组合物在治疗原发性肝癌中的应用。

本技术方案中，

组织收集

收集西安交通大学第一附属医院手术切除并签署书面知情同意书的肝癌患者的肿瘤组织和癌旁组织80对。所有参与者都没有接受过任何术前治疗。所有组织均经病理证实，并立即保存在液氮中。本研究经西安交通大学第一附属医院伦理委员会批准，符合1964年赫尔辛基宣言及其后来的修正案。

细胞系

三株人肝癌细胞株(HepG2、HuH7和Hep3B)和一株正常人肝细胞株(LO2)。这些细胞系于2018年在中国科学院(上海)类型培养细胞库中通过了DNA图谱(STR) 测试。HepG2、HuH7和Hep3B、LO2细胞用DMEM培养基(GIBCO-BRL)培养，培养基中均含有10％的胎牛血清、100U/ml的青霉素和100mg/ml的链霉素。5％CO2 的37℃恒温培养箱中常规培养。每2-3天更换新鲜培养基，当细胞融合度达到 80％-90％时传代。

RNA提取和定量PCR分析

用TRIzol试剂(Thermo Fisher Science)提取总RNA，Takara试剂盒((Takara, 大阪,日本)逆转录。定量实时聚合酶链反应使用CFX96Touch^TM实时聚合酶链反应检测系统(Bio-Rad Laboratory，Hercules，CA，USA)，使用SYBR Green PCR Master Mix(上海翊圣生物科技有限公司)进行。用2-ΔΔCt法计算LINC01123相对ACTB的相对水平。

质粒构建

将全长LINC01123插入表达载体pcDNA3.1(OE-1123；Invitgen，USA)，构建pcDNA3.1/LINC01123载体。

细胞转染

LINC01123 siRNA(si-1123-1和si-1123-2)、干扰siRNA(si-NC)、慢病毒介导的LINC01123 shRNA(sh-1123)和非靶向shRNA(sh-NC)均来自中国上海的 GenePharma。脂质体2000(Thermo Fisher Science，Waltham，MA，USA)用于肝癌细胞的转染。

细胞增殖活性检测

CCK8实验

在细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测中，96孔板接种转染的肝癌细胞(5×10～3 个/孔)，加入10μL CCK-8溶液(都津道实验室，都津道，日本)。用微板阅读器 (Multiskan^TMFC，Thermo Fisher Science)在450nm处测量细胞活力。

EdU实验

将转染的肝癌细胞(5×103个/孔)接种于96孔板中。然后，使用细胞光^TMEDU

体外成像试剂盒(RIBOBIO)对细胞进行染色。细胞核用DAPI染色，然后用荧光显微镜观察(奥林巴斯，东京，日本)。

细胞迁移和侵袭实验

将无血清培养基中转染的肝癌细胞(1×104)加入到涂有Matrigel(BDBiosciences，富兰克林湖，新泽西州，美国)的Transwell上室中，下室充满500μL的完全培养液。培养24h后，用4％多聚甲醛固定侵袭细胞，0.1％结晶紫染色，在奥林巴斯倒置显微镜下成像。除侵袭实验外，细胞迁移实验不用Matrigel 包被。

肿瘤形成实验

使用BALB/C裸鼠进行了体内肿瘤生长实验。简言之，将1个×106Hep3B细胞(含或不含LINC01123基因敲除)注射到裸鼠皮下(n＝5)。肿瘤体积计算公式为：肿瘤体积(mm～3)＝(长轴×短轴2)/2，每3d一次。种植3周后，取移植瘤组织进行 Ki-67免疫组织化学染色。这些动物研究是由西安交通大学机构动物保护与利用委员会批准的。

数据处理

数据以来自三个独立生物重复的平均值±SD(标准差)表示，并使用GraphPadPrism 8.0(GraphPad Inc.，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)进行统计分析。采用t检验、单因素方差分析(ANOVA)和Tukey多重比较检验评价组间差异的显著性。采用Kaplan-Meier＇s法和log-rank检验对肝癌患者的生存情况进行分析。采用皮尔逊相关系数进行相关分析。采用卡方检验探讨临床变量与 LINC01123表达的相关性。使用SPSS版本22(SPSS，芝加哥，伊利诺伊州，美国)进行单变量和多变量Cox回归分析，以确认总生存期的预测因素。α值 P<0.05被定义为有统计学意义。

采用以上方案后与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明首次提出LINC01123在肝癌中的作用机制，并提出LINC01123在评估HCC患者预后情况以及作为HCC患者药物治疗靶标方面有着巨大的潜力，并提供用于诊断HCC预后情况或作为治疗HCC药物治疗的靶点，为HCC病人精准治疗的实现奠定了基础。

附图说明：

图1为LINC01123在肝癌组织中表达上调，并与病人预后差密切相关的结果图。

其中，1A采用定量RT-PCR方法检测LINC01123在肝癌组织(n＝80)和癌旁非肿瘤组织(n＝80)中的表达差异。LINC01123在肿瘤组织中的表达较癌旁组织表达升高；

1B LINC01123在正常肝细胞系(LO2)和三种肝癌细胞系(HepG2、HuH7和 Hep3B)中的表达水平；

1C LINC01123水平的“低”或“高”表达根据临界值来定义，该临界值被定义为被测患者队列的中位数。LINC01123的高表达预示着肝癌患者的生存不良。*P<0.05。

图2为RNAi技术敲低LINC01123的表达抑制原发性肝癌细胞的增殖能力的结果图。

其中，2A将对照siRNA(si-NC)或LINC01123 siRNA(si-1123-1和si-1123-2) 转染Hep3B细胞，qRT-PCR检测LINC01123的表达；

2B CCK-8实验证实LINC01123基因敲除可抑制Hep3B细胞的活力；

2C沉默LINC01123可降低EdU阳性的Hep3B细胞百分率。原始放大倍数： 200×；

2D Transwell实验表明LINC01123沉默可减少Hep3B细胞的迁移和侵袭。原始放大率：100×。*P<0.05。

图3为LINC01123的过表达促进原发性肝癌细胞的增殖能力的结果图。

其中，3A用pcDNA3.1/LINC01123(OE-1123)或空载体转染Hep3B细胞， qRT-PCR检测LINC01123的表达；

3B CCK-8检测表明，LINC01123过表达促进了Hep3B细胞的存活；

3C异位表达LINC01123可使EdU阳性的Hep3B细胞百分率增加。原始放大倍数：200×；

3D Transwell实验中LINC01123过表达可增加Hep3B细胞的迁移和侵袭数量。原始放大率：100×。*P<0.05。

图4为LINC01123沉默抑制小鼠肝癌生长结果图。

其中，4A将阴性对照shRNA(sh-NC)或LINC01123 shRNA(sh-1123)转染Hep3B 细胞，qRT-PCR检测LINC01123的表达；

4B、4C将携带或不携带LINC01123基因敲除的Hep3B细胞接种于裸鼠皮下。LINC01123基因敲除组(n＝5)肿瘤体积和重量明显低于对照组(n＝5)。基因敲除组 (n＝5)肿瘤体积和重量明显低于对照组(n＝5)。

4D LINC01123基因敲除组(n＝5)肿瘤组织Ki-67阳性细胞百分率明显低于对照组(n＝5)。标尺：25μm.*P<0.0 5。

具体实施方式：

下面结合附图就具体实施方式对本发明作进一步说明：

需要说明的是，在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是，本发明还可以采用不同于在此描述的其他方式来实施。因此，本发明并不限于下面公开说明书的具体实施例的限制。实施例中未注明具体条件的的实验方法，基本上都按照Sambrook，J等人编著的《分子克隆实验指南(第3 版)》(MolecularCloning：ALaboratoryManual，3rded.黄培堂等译，科学出版社.2002.8)中所述的条件及方法或按照材料提供商所建议的条件及方法进行，其它没有详细描述的技术相应于本领域人员来说是熟知的标准方法。

本发明的材料：本申请中提及的细胞株、慢病毒干扰载体以及培养基均有商品供应或以别的途径能为公众所得，它们仅作举例，对本发明不是唯一的，可分别用其它适合的工具和生物材料来代替。

实施例1 检测LINC01123在组织和细胞中的表达情况

取80例原发性肝癌组织及80例癌旁组织提取总RNA，紫外吸收测定法测定 RNA的浓度。在凝胶成像仪上观察结果。

实时定量PCR

HCC组织及癌旁组织标本，HCC细胞的总R N A，逆转录反应应用takara试剂盒((Takara,大阪,日本)。逆转录反应体系按说明书配成20ul的体系，反转录反应条件如下：37℃15min(反转录反应)；85℃5sec(反转录酶的失活反应)。根据Genebank提供的基因序列，设计引物序列，按照说明书配成12.5ul的反应体系，qPCR应用CFX96Touch^TM实时聚合酶链反应检测系统系统(Bio-Rad Laboratories,Hercules,CA,USA)。

反应条件：

结果分析：分析引物的特异性及扩增效率，根据溶解曲线判断引物的反应特异性。根据扩增曲线得到Ct值，采用相对量法与内参ACTB进行目的基因相对表达量的分析。计算公式为：2^(-△Ct)，△Ct＝Ct gene-Ct control。

LINC01123的引物如下：

Primer F(Seq ID NO：2)：5’-ACAGTGGCCGCACGCATAGCTG-3’，

Primer R(Seq ID NO：3)：5’-CTGACGACCGAGGTGACAACGATGA-3’

内参ACTB的引物如下：

Primer F(Seq ID NO：8)：5’-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3’

Primer R(Se ID NO：9)：5’-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3’

为了阐明LINC01123在肝癌中是否可以作为癌基因或抑癌基因，采用 qRT-PCR方法分析了LNC01123在80对肝癌组织和配对的癌旁组织中的表达。结果表明：LNC01123在肝癌组织中的表达明显高于癌旁肝组织(P＝0.0007，图1A)。此外，我们还检测了LINC01123在Huh7、HepG2、Hep3B和LO2细胞中的表达。结果表明：肝癌细胞表达较高水平的LINC01123，而LO2细胞表达较低水平的 LINC01123(P<0.05，图1B)。卡方检验发现，LINC01123过表达与肿瘤大小≥5 cm(P＝0.004)、静脉浸润(P＝0.025)和分期(P＝0.003，表1)显著相关。LINC01123 的表达与肝癌患者的总生存期(OS)相关(P＝0.0147，图1C)。低LINC01123组的5年OS明显高于高LINC01123组(中位生存期分别为57.5个月和18.5个月)。因此，我们的数据显示LINC01123的表达上调可能参与了HCC的进展。

表1 HCC患者的临床表型与LINC01123表达关联情况

实施例2 构建LINC01123小干扰病毒干扰载体转染细胞：

设计特异性的针对LINC01123的干扰序列，其编码的DNA序列为：

Seq ID NO.4：(si-1123-1 forward)5’-CUGAACGUCUUGCAACAGUTT-3’

Seq ID NO.5：(si-1123-1 reverse)5’-ACUGUUGCAAGACGUUCAGTT-3’

Seq ID NO.6：(si-1123-2 forward)5’-GCCCUAGGAAAUCCGUAAUTT-3’

Seq ID NO.7：(si-1123-2 reverse)5’-AUUACGGAUUUCCUAGGGCTT-3’

以干扰ACTB基因的序列片作为对照，并将其插入慢病毒载体中(以上载体及片段由invitrogen公司合成)。将包装好的慢病毒载体感染原发性肝癌细胞株Hep3B细胞，起到下调LINC01123表达的作用，48h后用嘌呤霉素筛选稳定转染细胞系，命名为si-1123(对照为si-NC)。

为了研究LINC01123对HCC细胞表型的影响，CCK8检测发现，在Hep3B细胞中敲低LINC01123表达后抑制细胞生长(图2B)。此外，EdU染色证明，敲低LINC01123 后减少原发性肝癌细胞的增殖，而过表达LINC01123后原发性肝癌细胞增殖增强 (图2C)，在Hep3B细胞中过表达LINC01123促进了肝癌细胞的增殖(图3B、3C)。

实施例3 LINC01123参与原发性肝癌细胞迁移和侵袭

用transwells研究了LINC01123对HCC细胞迁移和侵袭能力影响。结果表明，敲低LINC01123后与对照组细胞相比，HCC细胞在侵袭、迁移方面表现出明显的抑制(图2D)。这些结果表明，敲低LINC01123表达后抑制肿瘤恶性表型，阻碍了原发性肝癌细胞迁移和侵袭。

实施例4 敲低LINC01123后抑制原发性肝癌细胞体内肿瘤形成

采用皮下移植模型评价LINC01123对肝癌体内生长的影响。特异性shRNA转染Hep3B细胞后，qPCR证实LINC01123基因被敲除(P<0.05，图4A)。与对照组相比， LINC01123基因敲除组的肿瘤体积较小，肿瘤重量较轻，说明LINC01123沉默抑制了肝癌的体内生长(P<0.05，图4B和4C)。免疫组化结果显示，LINC01123基因敲除组移植瘤组织中Ki-67阳性细胞较对照组明显减少(P<0.05，图4D)。综上所述，这些体内数据与体外结果是一致的.

本发明首次提出LINC01123在肝癌中的作用机制，并提出LINC01123在评估 HCC患者预后情况以及作为HCC患者药物治疗靶标方面有着巨大的潜力，并提供用于诊断HCC预后情况或作为治疗HCC药物治疗的靶点，为HCC病人精准治疗的实现奠定了基础。

以上仅就本发明较佳的实施例作了说明，但不能理解为是对权利要求的限制。凡是利用本发明说明书所做的等效结构或等效流程变换，均包括在本发明的专利保护范围之内。

序列表

<110> 杭州医学院

浙江省人民医院

西安交通大学医学院第一附属医院

<120> 一种长非编码RNA及其在诊断及治疗原发性肝癌中的应用

<160> 9

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 4458

<212> DNA/RNA

<213> 人源(Human)

<400> 1

acccgcggga agggcggcga gaccgcgcac ggaaggcggc gcgcaggggc ggaccaggcg 60

aaacggcaga gcgcagcgag aaggacgcca cacacggcgc acgggcggcc cccccgaggg 120

agaacaggcg ggcgccgagc gaacgcgcaa cagggccgca cgcaagcgcc ccagacccgg 180

aagaaaaccc ccacaccacg agcagagagg ccagggggca ggaaccccgc acgcgcgcag 240

cagcagcagg aggaagccgg cagcacagcg ggaaggaagg agggcggccc cccgggccgc 300

cacccgccgc ccgccacggc cacgcagccc gcacggcacc cggcgcaggg gccgcggaca 360

ggaggggagg caccaagccc ccggcggcag ggcgggggcg caggcagcgc aaaccgcggg 420

ccggcgcgca ccgcggcgcg gcaccggggg ccccgggggg cgcagccagc aggggcgcag 480

gcgggacgca gcgccagggc gagggcgggg gcacaggggg ggcaggggcg cggggcagag 540

ggccgcgggg cagaggagcg cggcgaaacg cggcacgcga aacgcagcga agcaccgacg 600

cagccagaga ccgcggggcc accggccaca acgagcgaac cgcgacagga gccgacagcg 660

cgcaccgcgc acaggcacca ccgaaggcac acggaccaga ggggccgagc agcagcgcgg 720

aaggagggcg agccgagcca gcccgcagcg ggcgcacgca gcgaagccag aagcacacag 780

cacgcgcaga aggcccaccc agccgcccag agggccaagc agagagcgga gaagcgcaga 840

gagggcgcac agcccacagc cgccgacccg acccccaggc accaggccgg ccgggccgcc 900

ccaccgaccc aaggcagcac ccgggcgccc aaacagagag aaaaacagca ccagcccaca 960

caaggaccag caagggggaa acacagaggg accacaccac gagaacacac acccagaaga 1020

aacacgaccc acagcagcca cgcccacccg acgccccgcc caggaaaccg aacaccagca 1080

ggagccacag accacaaaaa gaagcacaca acacgggcag gacggccaca aaggcaaggc 1140

aagcagcgag aaaaacggcc agagccaaga cgaccacacc accaaccaag gcacacgaca 1200

gaggccaacc caaggagggg gcaggcagac ccagcggggg aggaaagagc gcagaggaga 1260

cggagcccac agaggccccg agggaacaag ccacaagggg cgaccccaca ggacaccgcg 1320

caccagccac acacaacaca gcgccgccgc cgcagggaaa gccccccccc cgcccccgcc 1380

cacacaccgg caccccccca aagaaccacc acaacaggag gagggaaagg ggggccggca 1440

ggaaaagcca gaacccccag ccagcagaga gagagaggaa ggcgcagccc cccagccaag 1500

gcacgggcgg cggggaaggc caagcgcccc gcggcgggag cggcaaccgc aaccccgaag 1560

gccagcagca cgagccaggg acccccaggc cggagacgcc gcacacggga gaggagaagg 1620

aaagagaaca cacaaaccaa cgaccagggg ccacacgcag agcaagcaaa cagcagagaa 1680

agacggggga gcggagcgca caaacccagg cggaacggcc caccggaagg gaagaccgcc 1740

aggaccagcc cccgggccaa cacgcaggga agaggaccgc ggggggggga ggggggcggg 1800

aaaacagcgc aaacaagcca aaaagaaaac ccacagagag aaggcaaaga gagaaacaaa 1860

aaaaggaaaa aaaaggaaaa aagcaaagcg agaaagccga gcccaaagga gcgacaggaa 1920

gaaccgaccg cccccaaaaa ctcttctgcg ggaagggctt ggcgtagacc gcgcactgga 1980

aggcgtgcgc gcaggtgtgc gtgaccatgt gcttgaaacg gcagtagcgc agcgagaagg 2040

atcgccatca cacggcgcac tggtgcggct tctcccccga gtggatgaac atgtgcttgg 2100

tgtcgttttt ccttgagctg aacgtcttgc aacagtggcc gcacgcatag ctgccccaga 2160

tcccggaaga aaatctctcc cacaccactg tagtcagaga ggccagtggg tgcatggaac 2220

tcctcgcacg cgctgtcagc agcagcagtg aggaagccgg cagcacagtc tgggaaggaa 2280

ggaggtgctt ggctctctcc cgggccgcca ccttcgccgt cctcgccatc ggtctcatcg 2340

tcagtttcct cgtcatcgtt gtcacctcgg tcgtcagggg ccgcggacag tgaggggtag 2400

gcaccaagcc cctcggcttt ggcaggtgtc gggggcgcag gcagctgcaa actcgcgggc 2460

cggcgctgct taccgctgtg cgcggcaccg gggtgccccg ggggtgcgca gccagcaggt 2520

ggcgcaggcg gtgacgcagc tgctcaggtg cgagtggcgg gggcacaggg gtgggcaggg 2580

gcgcgggtgc agaggtgctc gcgggtgcag aggagcgcgt gcgataatct gcgtgcattc 2640

gtcgataact gtctatgcga agcaccgacg cagccatgag tacctgcggg gcttcactct 2700

gtgccacaac gagcgaaccg ctgtacagga gctcgactag ctgtcgcacc gtctgcacag 2760

gcaccaccga aggcacacgg atctcagagg ggccgagcag cagcttgtct tggaaggagg 2820

gcgagccgat tgccagcccg cagcggtgcg cacgcagcga agcttcatga atgcacacag 2880

tcacgtcgca gaagtgccca cccagcttct gcccattgag ggtctcaagc agagagcgtg 2940

agaagttctg cagatgtatg tggcgcacag cctctacagc cgccgactcc gactcctctt 3000

caggcaccag gcctggccgt ggccgccttc tcaccgactc caaggcagca cttccgggcg 3060

cttctcttta tttttataca gttttattga gatataattt acatgctatc cagcccatct 3120

atttcaagtg taccatgcaa ggggtttgta tatattcaca gagttgtgta tccatcacca 3180

tcgttttaga acattcatca ctccagaaga aactacgtac ccatcagcag ccactgccca 3240

tttccctgat ctgccccgcc ctaggaaatc cgtaatcact ttcagtctat ggatttgcct 3300

attctagacc attcatataa atgaagtcac acaacactgg gtcttatgtg actggcttct 3360

atcaaagttt gcaaggttca tttatgttca tgctgatgat ataaactggc tcatttgatg 3420

ccaagactga ccatcaccac cataccaagg tcatcactga tcagaggcct aacccaagga 3480

gggggtcatg tgcagaccca gctgtgggga ggaaagatgc tgcagaggag acggatgccc 3540

acagaggccc ctgagtggat acaatgctca ctaagtgggc tgaccccaca ttggacaccg 3600

ctgcatccat gtccatcaca caacacagct gccgtttctt ctgcctgctt atgggaaagt 3660

cccctcttct cctccgtttt cttctcttcc tgccctatca caccgtgcac ttctcccttt 3720

ccttaaagaa ccaccatcaa ctttaggagg agggaaaggg gtggctctgg caggaaaagc 3780

cagaatcccc tctagccagc agagagagag aggaatggct gcatgttttc tcccccagtc 3840

caaggcactg ggtcttggct gggttgaagg ttccaagctg ctctcctgct gtgtcggtga 3900

gttctggtca acctgcaacc tcctgatatg gccattgcag ttcatcgagt cttcagggac 3960

tccccatggc ctggagtact ttgccttgct tacacgggag aggagaatgg atttatagag 4020

aacatcatct aaatccaact tgaccattgt gtggccacac ttgctagatt gctatagtct 4080

aaatctagca ttgtagaaag acgggggagc ttggagctgc acaaacccag gtctggaact 4140

ggctccttac cttggaaggt gaatgatcct gccaggactc ttagcctccc tgggtctcaa 4200

tttctttatc tgtttcatgg gaatgaggat ctctgctggg tggttgggtg atgtgggggc 4260

tgtgtgaaaa cagcttgtca atacaagcca aaatagaaat atttctccac agagtatgaa 4320

ggtcaaatga gagaatacat ttaaattaaa tggaaaatta aaatggtaaa aaatgcaaag 4380

ctgtattgaa agttccgagc ttctctataa ggagcttttt gactatggaa gaatcctgta 4440

ctcgttcccc ctaaatat 4458

<210> 2

<211> 22

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

acagtggccg cacgcatagc tg 22

<210> 3

<211> 25

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ctgacgaccg aggtgacaac gatga 25

<210> 4

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

cugaacgucu ugcaacagut t 21

<210> 5

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

acuguugcaa gacguucagt t 21

<210> 6

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gcccuaggaa auccguaaut t 21

<210> 7

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

auuacggauu uccuagggct t 21

<210> 8

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

catgtacgtt gctatccagg c 21

<210> 9

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

ctccttaatg tcacgcacga t 21

Claims (10)

1.一种用于诊断原发性肝癌预后情况或作为治疗原发性肝癌药物靶点的长非编码RNA，其特征在于，所述长非编码RNA为长非编码RNA LINC01123，长非编码RNA LINC01123的核苷酸序列如Seq ID NO.1所示。

2.权利要求1所述的长非编码RNA在作为筛选判断原发性肝癌预后情况的诊断试剂中的应用。

3.权利要求1所述的长非编码RNA在作为筛选治疗原发性肝癌的药物中的应用。

4.识别权利要求1所述的长非编码RNA的标记物在制备判断原发性肝癌治疗预后诊断产品中的应用，其特征在于，所述的标记物包括但不限于：

(1)结合长非编码RNA LINC01123的引物或荧光标记的结合长非编码RNA LINC01123的引物；

(2)结合长非编码RNA LINC01123的小分子化合物；

(3)结合长非编码RNA LINC01123的生物大分子，其中，所述生物大分子包括但不限于：抗体或抗体功能片段、荧光标记的抗体或抗体功能片段、RNA结合蛋白或其功能片段、荧光标记的RNA结合蛋白或其功能片段。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述引物或荧光标记的引物的核苷酸序列如Seq ID NO.2和Seq ID NO.3所示。

6.一种包含权利要求4或5所述的的标记物的用于判断原发性肝癌治疗预后情况的试剂或试剂盒。

7.抑制权利要求1所述的长非编码RNA的抑制剂在制备诊断或治疗原发性肝癌的药物中的应用，其特征在于，所述抑制剂包括但不限于：

(1)抑制所述长非编码RNA的siRNA、shRNA或功能类似的干扰小RNA；

(2)抑制所述长非编码RNA的小分子化合物；

(3)抑制所述长非编码RNA的生物大分子，其中，所述生物大分子包括但不限于：抗体或抗体功能片段、高底物专一性的酶或其功能片段。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述siRNA的编码DNA的核苷酸序列如SeqID NO.4、Seq ID NO.5或Seq ID NO.6、Seq ID NO.7所示。

9.包含有权利要求7或8所述的抑制剂的用于治疗原发性肝癌的药物或药物组合物。

10.权利要求9所述的药物或药物组合物在治疗原发性肝癌中的应用。

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