CN113292543B - 一类具有靶向功能的近红外荧光化合物及应用 - Google Patents

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Abstract

一类具有靶向功能的近红外荧光化合物及应用，属于精细化工领域。这种具有靶向功能的近红外荧光化合物将具有线粒体、细胞膜和蛋白质标记功能的基团分别连接到长波长荧光发色团上，首创的提供一类既具有靶向细胞微观结构功能又具有近红外吸收和发射光谱同时能够用于超分辨成像的荧光化合物。解决了传统的荧光团不能标记线粒体、细胞膜和蛋白质的问题，同时克服了因激发光波长较短，在成像过程中造成细胞严重损伤的问题，为生物细胞细胞核成像提供了更多可选择的工具。

Description

一类具有靶向功能的近红外荧光化合物及应用
技术领域
本发明涉及一类具有靶向功能的近红外荧光化合物及应用，属于精细化工领域。
背景技术
荧光成像技术被广泛地应用到生命科学、医学、化学等各个领域，特别在生命科学领域得到了显著的发展。现代荧光成像、超分辨荧光成像及荧光检测技术对荧光团提出了新的要求，例如近红外荧光发射、大的摩尔消光系数、高的荧光量子产率等。近红外荧光团由于其吸收及发射波长长，生物相容性优于可见区荧光团、成像深度大于可见区染料、可提供额外的成像窗口配合其他染料实现多色荧光成像。近年来报道的染料化合物中，多数是具有靶向标记功能但是荧光波长比较短很难用于超分辨成像。而近红外染料能够用于超分辨成像却不具有靶向或者标记功能，部分近红外染料的成像稳定性比较差很难应用于活体中生物体微观结构的精细研究。因此，目前缺少即具有标记靶向功能又具有近红外吸收发射并用于超分辨成像研究的功能性染料化合物。
发明内容
本发明提供一类具有靶向功能的近红外荧光化合物及应用，该化合物具有如下结构通式：
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE002
其中，Y=
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE004
；
Y1=CH3、SO3H、CF3、COOH、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE006
或者
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE008
；
Y2=
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE010
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE012
或者
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE014
，其中，
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE016
取代所在苯环上4位或5位的碳原子；
R1=
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE018
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE020
，R2=
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE022
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE024
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE026
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE028
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE030
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE032
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE034
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE036
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE038
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE040
，其中：n各自独立的为0-18的整数，m各自独立的为0-18的整数，X1 -和X-为阴离子，所述X1 -、X-各自独立的为BF4 - 、Cl-、Br-、I-、NO3 -、SO4 2- 、ClO4 -、CH3COO-、CH3SO3 -或CF3SO3 -，
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE042
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE044
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE046
、
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE048
、
Figure DEST_PATH_IMAGE050
、
Figure DEST_PATH_IMAGE052
、
Figure DEST_PATH_IMAGE054
、
Figure DEST_PATH_IMAGE056
、
Figure DEST_PATH_IMAGE058
所带正电荷总数等于X1 -所带负电荷总数，所述
Figure DEST_PATH_IMAGE060
所带正电荷总数等于X-所带负电荷总数；
R3各自独立的为H或CH3；
所述的一类具有靶向功能的近红外荧光化合物的制备方法，该方法的反应式和采用的反应步骤如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE062
i）在氩气条件下，化合物A，Pd(OAc)2，BINAP，Cs2CO3和HR1在有机溶剂中加热反应得到化合物B；
ii）用分水器除水，化合物B、TsOH和R4的混合物加热反应得到化合物C；
iii）室温下，将化合物C加入有机溶剂中，分批次加入NBS，搅拌反应，分离提纯得到化合物D；
iv）氩气保护下，化合物D溶解在有机溶剂中，-78℃下加入叔丁基锂搅拌反应0.5h，升温至-20℃，将苯甲酸甲酯化合物溶解在有机溶剂中，滴加加入上述反应液中，升温至室温反应，反应混合物用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取，萃取后的有机相盐水洗涤干燥浓缩，向浓缩物中加入甲醇和R5室温搅拌，减压去除溶剂硅胶柱色谱提纯得到化合物E；
v)将化合物E，叠氮化物衍生物，抗坏血酸钠和硫酸铜加入到溶剂中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F；
所述R4=
Figure DEST_PATH_IMAGE064
、
Figure DEST_PATH_IMAGE066
、
Figure DEST_PATH_IMAGE068
、
Figure DEST_PATH_IMAGE070
、
Figure DEST_PATH_IMAGE072
、
Figure DEST_PATH_IMAGE074
或者
Figure DEST_PATH_IMAGE076
；
所述R5= HBF4、HCl、HBr、HI、HNO3、H2SO4、HClO4、CH3COOH、CH3SO3H或CF3SO3H；
R1、R2、R3、Y、Y1和Y2的定义通结构通式中的定义。
所述的一类具有靶向功能的近红外荧光化合物的应用，
Y2=
Figure DEST_PATH_IMAGE078
时，所述化合物用于标记线粒体；
Y2=
Figure DEST_PATH_IMAGE080
，所述化合物用于靶向SNP蛋白；
Y2=
Figure DEST_PATH_IMAGE082
，所述化合物用于标记细胞膜。
本发明的有益效果：一类具有靶向功能的近红外荧光化合物及应用，这种具有靶向功能的近红外荧光化合物将具有线粒体、细胞膜和蛋白质标记功能的基团分别连接到长波长荧光发色团上，首创的提供一类既具有靶向细胞微观结构功能又具有近红外吸收和发射光谱同时能够用于超分辨成像的荧光化合物。解决了传统的荧光团不能标记线粒体、细胞膜和蛋白质的问题，同时克服了因激发光波长较短，在成像过程中造成细胞严重损伤的问题，为生物细胞细胞核成像提供了更多可选择的工具。
附图说明
图1是KRh-MitoFix和线粒体染料对活体细胞中线粒体的共定位成像图。
图2是KRh-MitoFix定位活体细胞中线粒体的超分辨成像图。
图3是KRh-Mem定位活体细胞细胞膜的成像图。
图4是用KRh-Halo染色的活体细胞中组蛋白的超分辨率成像图。
具体实施方式
以下结合技术方案和附图详细叙述本发明的具体实施例。本发明用以下实例加以说明但不局限于此，其中除非另有说明，所有的份数和百分数均以重量计。
实施例1
Figure DEST_PATH_IMAGE084
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2 (0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和吡咯烷（1.2 mL）的混合物溶解在甲苯中， 110℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B1。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B1（0.94 mmol），乙二醇（2 mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B1反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C1。
iii）将化合物C1（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D1。
iv）在氩气下，化合物D1（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入AcOH（100μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F1、F2、F3、F4、F5或F6）。
实施例2
Figure DEST_PATH_IMAGE086
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和二乙胺（1.3 mL）的混合物溶解在甲苯中， 120℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B2。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B2（0.94 mmol），乙二醇（2 mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B2反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C2。
iii）将化合物C2（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D2。
iv）在氩气下，化合物D2（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入AcOH（100μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F7、F8、F9、F10、F11或F12）。
实施例3
Figure DEST_PATH_IMAGE088
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和环己胺（1.4 mL）的混合物溶解在甲苯中， 115℃搅拌反应，用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B3。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B3（0.94 mmol），乙二醇（2.1 mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B3反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C3。
iii）将化合物C3（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D3。
iv）在氩气下，化合物D3（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入浓HCl（100μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F13、F14、F15、F16、F17或F18）。
实施例4
Figure DEST_PATH_IMAGE090
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和哌嗪（1.4 mL）的混合物溶解在甲苯中， 125℃搅拌反应，用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B4。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B4（0.94 mmol），乙二醇（2.2 mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B4反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C4。
iii）将化合物C4（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D4。
iv）在氩气下，化合物D4（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入浓HCl（100μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F19、F20、F21、F22、F23或F24）。
实施例5
Figure DEST_PATH_IMAGE092
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和N-甲基哌嗪（1.3 mL）的混合物溶解在甲苯中， 120℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B5。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B5（0.94 mmol），丙二醇（2.5mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B5反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C5。
iii）将化合物C5（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D5。
iv）在氩气下，化合物D5（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入浓HCl（100μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F25、F26、F27、F28、F29或F30）。
实施例6
Figure DEST_PATH_IMAGE094
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和
Figure DEST_PATH_IMAGE096
（1.2mL）的混合物溶解在甲苯中， 116℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝1/25）提纯得淡黄色固体B6。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B6（0.94 mmol），丙二醇（2.3 mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B6反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C6。
iii）将化合物C6（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D6。
iv）在氩气下，化合物D6（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入乙酸（100μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F31、F32、F33、F34、F35或F36）。
实施例7
Figure DEST_PATH_IMAGE098
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和
Figure DEST_PATH_IMAGE100
（1.5mL）的混合物溶解在甲苯中， 130℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B7。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B7（0.94 mmol）,2-羟基乙硫醇（2.1 mL），TsOH（0.29 mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B7反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C7。
iii）将化合物C7（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D7。
iv）在氩气下，化合物D7（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入浓HCl（100μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F37、F38、F39、F40、F41或F42）。
实施例8
Figure DEST_PATH_IMAGE102
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和二乙胺（1.2mL）的混合物溶解在甲苯中， 120℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B8。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B8（0.94 mmol），乙二硫醇（2.2 mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B8反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C8。
iii）将化合物C8（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D8。
iv）在氩气下，化合物D8（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入CH3SO3H（100μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F43、F44、F45、F46、F47或F48）。
实施例9
Figure DEST_PATH_IMAGE104
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和二乙胺（1.6 mL）的混合物溶解在甲苯中， 110℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B9。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B9（0.94 mmol），庚二醇（2.3mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B9反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C9。
iii）将化合物C9（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D9。
iv）在氩气下，化合物D9（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入甲基磺酸（150μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F49、F50、F51、F52、F53或F54）。
实施例10
Figure DEST_PATH_IMAGE106
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和吡咯烷（1.2 mL）的混合物溶解在甲苯中， 110℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B1。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B1（0.94 mmol），乙二醇（2 mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B1反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体。
iii）将化合物C1（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D1。
iv）在氩气下，化合物D1（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入HBF4（120μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F55、F56、F57、F58、F59或F60）。
实施例11
Figure DEST_PATH_IMAGE108
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和吡咯烷（1.4 mL）的混合物溶解在甲苯中， 110℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B1。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B1（0.94 mmol），乙二醇（2 mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B1反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体。
iii）将化合物C1（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D1。
iv）在氩气下，化合物D1（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入HBF4（130μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F60、F62、F63、F64、F65或F66）。
实施例12
Figure DEST_PATH_IMAGE110
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和吡咯烷（1.5 mL）的混合物溶解在甲苯中， 110℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B1。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B10（0.94 mmol），2-羟基乙硫醇（2 mL），TsOH（0.29 mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B10反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C10。
iii）将化合物C10（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D10。
iv）在氩气下，化合物D10（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入HBF4（100μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F67、F68、F69、F70、F71或F72）。
实施例13
Figure DEST_PATH_IMAGE112
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和吡咯烷（1.2 mL）的混合物溶解在甲苯中， 110℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B11。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B11（0.94 mmol），乙二硫醇（2.2 mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在150℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B11反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C11。
iii）将化合物C11（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D11。
iv）在氩气下，化合物D11（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入AcOH（160μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F73、F74、F75、F76、F77或F78）。
实施例14
Figure DEST_PATH_IMAGE114
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和环己胺（1.2 mL）的混合物溶解在甲苯中， 110℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B3。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B3（0.94 mmol），3-羟基丙硫醇（2 mL），TsOH（0.29 mmol）的混合物，在130℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B3反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C12。
iii）将化合物C12（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D12。
iv）在氩气下，化合物D12（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入AcOH（200μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F79、F80、F81、F82、F83或F84）。
实施例15
Figure DEST_PATH_IMAGE116
i）在氩气条件下，A（2.97 mmol），Pd(OAc)2(0.45 mmol），BINAP（0.32 mmol），Cs2CO3（8.62 mmol）和N-甲基哌嗪（1.5 mL）的混合物溶解在甲苯中， 150℃搅拌反应。用TLC监测反应直至反应结束。冷却至室温后，将反应混合物用水洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱色谱（乙酸乙酯/己烷＝ 1/25）提纯得淡黄色固体B5。
ii）采用分水器除水，搅拌化合物B5（0.94 mmol），丙二硫醇（2 mL），TsOH（0.29mmol）的混合物，在160℃下反应，用TLC监测反应直至化合物B5反应完全。将反应混合物浓缩后经硅胶柱色谱提纯得淡黄色固体C13。
iii）将化合物C13（0.91mmol）加入5mL DMF中，在室温下搅拌。将NBS（1.82 mmol）分五部分添加到反应混合物中，搅拌反应过夜。反应液用50mL DCM稀释后水洗。有机项用无水MgSO 4干燥并真空浓缩，硅胶柱色谱提纯得到黄色固体化合物D13。
iv）在氩气下，化合物D13（0.58 mmol）溶解在40mL无水THF中，将溶液冷却至-78℃，加入叔丁基锂（2.25mL，1.3mol / L，2.61mmol），反应在-78℃下搅拌30分钟。然后，将反应混合物升温至-20℃，通过滴液漏斗在30分钟内滴加苯甲酸甲酯（1.45mmol）的THF（20mL）溶液。反应混合物升温至室温反应过夜（18小时）。随后用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于MeOH（2mL）中，并加入AcOH（100μL），搅拌10min浓缩硅胶柱色谱提纯得到绿色固体化合物E。
v）将化合物E（0.02 mmol），叠氮化物（0.08 mmol），抗坏血酸钠（5 mg）和硫酸铜（5mg）加入到2 mL THF和1 mL H2O的混合物中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F（F79、F80、F81、F82、F83或F84）。
实施例16
将化合物F3（编号KRh-MitoFix）进行细胞成像实验，将Hela细胞在添加了10％胎牛血清（FBS，Hyclone）的DMEM（Gibco）中，在5％CO2和95％空气中， 37 oC条件下培养。在使用前，将细胞接种在培养皿（Cellvis，D29-20-1.5-N）中达24 h，以达到70-90％汇合。对于线粒体的共定位成像，将细胞用KRh-MitoFix和TMRM（已知的线粒体定位染料）染色 5分钟并用新鲜的DMEM替换染色溶液后成像。
对于CCCP（一种扰动线粒体膜电位的药物）刺激测定实验，将细胞用5μM的KRh-MitoFix染色10分钟，并用新鲜DMEM替换染色溶液后再培养50分钟，然后将染色的细胞用5μTMRM进一步染色10分钟，再次用新鲜的DMEM替换染色溶液后用于共定位成像。然后将这些细胞用10μCCCP处理30分钟并再次成像。KRh-MitoFix的激发/收集波长为635 nm / 655-755 nm；TMRM的激发/收集波长为559 nm / 575-620 nm。
图1中a是添加CCCP之前，TMRM通道中的荧光图像， b是添加CCCP之前，KRh-MitoFix通道中的荧光图像；c是图a和b中单线的荧光强度对比图；d是添加CCCP之后，TMRM通道中的荧光图像，e是添加CCCP之后，KRh-MitoFix通道中的荧光图像；f是图d和e中单线的荧光强度对比图。从图a-c可以看出，添加CCCP之前，化合物F3定位图像和能够TMRM（已知的线粒体定位染料）图像很好的重合，化合物F3能够定位于细胞线粒体中。添加CCCP之后，在细胞膜药物刺激下，细胞膜电位发生改变，染料TMRM发生游离不再定位细胞膜，而化合物F3的通道仍然呈现较强的荧光，可见化合物F3能够通过苄基氯稳定的定位在细胞膜上。
实施例17
对化合物F3进行线粒体定位的超分辨成像研究，将Hela细胞在添加了10％胎牛血清（FBS，Hyclone）的DMEM（Gibco）中，在5％CO2和95％空气中， 37 oC条件下培养。在使用前，将细胞接种在培养皿（Cellvis，D29-20-1.5-N）中达24 h，以达到70-90％汇合。将细胞用KRh-MitoFix染色 5分钟并用新鲜的DMEM替换染色溶液后进行超分辨率成像。超分辨率成像在640 nm激光（15 mW），激发速率50 Hz和像素大小160 nm的激发下进行。图2中，a是KRH-MitoFix染色活细胞线粒体超分辨率成像图，b是KRH-MitoFix染色活细胞线粒体的宽视场成像图， c1-4是不同的标记时间下，所选区域的线粒体的超分辨图像，从图中可以看出，化合物F3能够在更高分辨率下展示线粒体的的微观结构。
实施例18
将化合物F63（编号KRh-Mem）进行细胞成像实验，在补充有10％胎牛血清（FBS，Hyclone）的DMEM（Gibco）中，5％CO2和95％air的气氛中，37 oC下培养Hela细胞。将细胞接种在预先清洁的25 mm盖玻片（Fisherbrand，12-545-102）上24小时，以在使用前达到30-50％的融合度。对于质膜的超分辨率成像，Hela细胞用20μM的KRh-Mem染色5分钟，然后用新鲜DMEM替换染色溶液后成像。图3是化合物F63标记细胞膜成像图，从成像图可以看出化合物F63能够很好的定位在细胞膜上。
实施例19
对化合物F57（编号KRh-Halo）进行蛋白标记实验，将Hela细胞通过基因工程改造，使得细胞上的组蛋白额外表达部分Halo蛋白后，用化合物F57（编号KRh-Halo）对细胞染色5分钟，然后用新鲜DMEM替换染色溶液后成像。图4是用KRh-Halo染色的活细胞中组蛋白的超分辨率成像，图4呈现了KRh-Halo标记组蛋白的超分辨率图像和广域图像的合并图，从图中可以高分辨率观察到化合物F57标记到细胞的组蛋白上。
实施例20
研究染料化合物的光谱性质，将相应的染料化合物溶解在DMSO中以获得1mM的储备溶液。将储备溶液用氯仿进一步稀释为1 µM测试溶液。将这些测试溶液进行吸收、发射光谱的测试。吸收光谱通过Agilent 8453紫外可见分光光度计进行测量，荧光光谱通过Agilent光谱仪测量。化合物F4、F11、F18、F24、F32、F40、F45、F51、F58、F65、F70、F79和F84的光谱性质数据以如下表格（表1）的形式给出。
表1 化合物光谱性质列表
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE059
通过表中数据可以看出，化合物F4、F11、F18、F24、F32、F40、F45、F51、F58、F65、F70、F79和F84具有较长的吸收和发生光谱，属于近红外染料化合物。

Claims (3)

1.一类具有靶向功能的近红外荧光化合物，其特征在于，该化合物具有如下结构通式：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
其中，Y=
Figure DEST_PATH_IMAGE002
；通式中含Y的结构片断
Figure DEST_PATH_IMAGE003
为
Figure DEST_PATH_IMAGE004
、
Figure DEST_PATH_IMAGE005
、
Figure DEST_PATH_IMAGE006
、
Figure DEST_PATH_IMAGE007
、
Figure DEST_PATH_IMAGE008
、
Figure DEST_PATH_IMAGE009
或者
Figure DEST_PATH_IMAGE010
；
Y1=CH3、SO3H、CF3、COOH、
Figure DEST_PATH_IMAGE011
或者
Figure DEST_PATH_IMAGE012
；
Y2=
Figure DEST_PATH_IMAGE013
、
Figure DEST_PATH_IMAGE014
或者
Figure DEST_PATH_IMAGE015
，其中，
Figure DEST_PATH_IMAGE016
取代所在苯环上4位或5位的碳原子；
R1=
Figure DEST_PATH_IMAGE017
Figure DEST_PATH_IMAGE018
，R2=
Figure DEST_PATH_IMAGE019
、
Figure DEST_PATH_IMAGE020
、
Figure DEST_PATH_IMAGE021
、
Figure DEST_PATH_IMAGE022
、
Figure DEST_PATH_IMAGE023
、
Figure DEST_PATH_IMAGE024
、
Figure DEST_PATH_IMAGE025
、
Figure DEST_PATH_IMAGE026
、
Figure DEST_PATH_IMAGE027
、
Figure DEST_PATH_IMAGE028
，其中：n各自独立的为0-18的整数，m各自独立的为0-18的整数，X1 -和X-为阴离子，所述X1 -、X-各自独立的为BF4 - 、Cl-、Br-、I-、NO3 -、SO4 2- 、ClO4 -、CH3COO-、CH3SO3 -或CF3SO3 -，
Figure DEST_PATH_IMAGE029
、
Figure DEST_PATH_IMAGE030
、
Figure DEST_PATH_IMAGE031
、
Figure DEST_PATH_IMAGE032
、
Figure DEST_PATH_IMAGE033
、
Figure DEST_PATH_IMAGE034
、
Figure DEST_PATH_IMAGE035
、
Figure DEST_PATH_IMAGE036
、
Figure DEST_PATH_IMAGE037
所带正电荷总数等于X1 -所带负电荷总数，所述
Figure DEST_PATH_IMAGE038
所带正电荷总数等于X-所带负电荷总数；
R3各自独立的为H或CH3。
2.根据权利要求1所述的一类具有靶向功能的近红外荧光化合物的制备方法，其特征在于，该方法的反应式和采用的反应步骤如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE039
i）在氩气条件下，化合物A，Pd(OAc)2，BINAP，Cs2CO3和HR1在有机溶剂中加热反应得到化合物B；
ii）用分水器除水，化合物B、TsOH和R4的混合物加热反应得到化合物C；
iii）室温下，将化合物C加入有机溶剂中，分批次加入NBS，搅拌反应，分离提纯得到化合物D；
iv）氩气保护下，化合物D溶解在有机溶剂中，-78℃下加入叔丁基锂搅拌反应0.5h，升温至-20℃，将苯甲酸甲酯化合物溶解在有机溶剂中，滴加加入上述反应液中，升温至室温反应，反应混合物用饱和NH4Cl和水稀释，并用EtOAc萃取，萃取后的有机相盐水洗涤干燥浓缩，向浓缩物中加入甲醇和R5室温搅拌，减压去除溶剂硅胶柱色谱提纯得到化合物E；
v)将化合物E，叠氮化物衍生物，抗坏血酸钠和硫酸铜加入到溶剂中，搅拌反应30分钟，粗产物经硅胶柱色谱提纯得化合物F；
所述R4=
Figure DEST_PATH_IMAGE040
、
Figure DEST_PATH_IMAGE041
、
Figure DEST_PATH_IMAGE042
、
Figure DEST_PATH_IMAGE043
、
Figure DEST_PATH_IMAGE044
、
Figure DEST_PATH_IMAGE045
或者
Figure DEST_PATH_IMAGE046
；
所述R5= HBF4、HCl、HBr、HI、HNO3、H2SO4 、HClO4、CH3COOH、CH3SO3H或CF3SO3H；
R1、R2、R3、Y、Y1和Y2的定义同权利要求1中结构通式中的定义。
3.根据权利要求1所述的一类具有靶向功能的近红外荧光化合物的应用，其特征在于，
Y2=
Figure DEST_PATH_IMAGE047
时，所述化合物用于标记线粒体；
Y2=
Figure DEST_PATH_IMAGE048
，所述化合物用于靶向SNP蛋白；
Y2=
Figure DEST_PATH_IMAGE049
，所述化合物用于标记细胞膜；
所述应用为非疾病的诊断或者治疗目的的。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011162486A (ja) * 2010-02-10 2011-08-25 Univ Of Tokushima 蛍光プローブ
CN102786509A (zh) * 2011-05-16 2012-11-21 杭州民生药业有限公司 2-(5,6-二甲基呫吨酮-4-基)-乙酸的衍生物及其制备方法和用途
CN107619390A (zh) * 2016-07-14 2018-01-23 大连理工大学 一类用于检测细胞膜附近一氧化氮的双光子荧光探针
CN109456304A (zh) * 2018-12-05 2019-03-12 武汉大学 易修饰近红外二区有机小分子染料及其合成方法和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011162486A (ja) * 2010-02-10 2011-08-25 Univ Of Tokushima 蛍光プローブ
CN102786509A (zh) * 2011-05-16 2012-11-21 杭州民生药业有限公司 2-(5,6-二甲基呫吨酮-4-基)-乙酸的衍生物及其制备方法和用途
CN107619390A (zh) * 2016-07-14 2018-01-23 大连理工大学 一类用于检测细胞膜附近一氧化氮的双光子荧光探针
CN109456304A (zh) * 2018-12-05 2019-03-12 武汉大学 易修饰近红外二区有机小分子染料及其合成方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Targetable Fluorescent Probe for Monitoring Exogenous and Endogenous NO in Mitochondria of Living Cells;Haibo Yu等;《Anal. Chem.》;20130705;第85卷;7076-7084 *
基于Nile Red的线粒体靶向性增强型硫化氢荧光探针及其细胞成像;于海波等;《化学学报》;20151231;第73卷;450-456 *

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