CN113208929A - 一种牙根表面处理剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种牙根表面处理剂，它包括去污组合物1和再生组合物2；去污组合物1中各组分及其所占质量百分比为：泊洛沙姆407 13‑17％，Triton X‑114 1‑3％，丙二醇3‑7％，甘油1‑2％，四氢胡椒碱1‑2％，野梧桐烯醇1‑3％，剩余为水；再生组合物2中各组分及其所占质量百分比为：葡萄糖酸氯己定0.5‑2％，再生剂15‑31％，盐酸米诺环素1‑3％，聚乙二醇二丙烯酸酯0.3‑0.5％，剩余为水；再生剂由釉基质衍生物、骨形成蛋白2、骨形成蛋白4和成纤维细胞生长因子2组成。本发明可实现牙根表面的高效清洁，并可提升牙龈成纤维细胞的再附着效果，适合推广应用。

Description

一种牙根表面处理剂

技术领域

本发明属于技术领域，具体涉及一种牙根表面处理剂

背景技术

健康的牙龈覆盖整个牙根的表面，起到保护牙根、稳定牙齿的作用。牙周炎是口腔内的牙齿周围的组织发生炎症、破坏。牙龈退缩是牙周炎的一个重要症状，导致牙根表面的牙龈向下方移位。牙龈退缩使原本被牙龈覆盖的牙根表面暴露，不仅导致美观问题，使患者显现出苍老感；也会引起牙根酸痛敏感；进一步发展的牙龈退缩导致牙齿支持组织大量破坏，最终导致牙龈松动脱落。牙根表面的牙龈退缩后，还会引起一些其他问题：如本身在牙龈覆盖保护之下的牙根表面会受外界细菌的侵袭，定居；一些细菌的代谢废物和其他外界污染物形成一层玷污层；牙根表面本身的牙骨质会破坏、软化。

目前临床上处理牙龈退缩的方法是将牙龈退缩的牙根表面进行清洁，使用酸性或者抗生素药物处理，以便于牙龈的进一步重新附着。但仍不能有效清除深层的细菌定居，存在再次侵袭牙龈的风险；对玷污层的清洁不能到位，影响牙龈中成纤维细胞的附着；对坏死牙骨质的清除不够彻底，不能够大量暴露出下方的健康胶原纤维，导致牙龈再附着效果较差。

发明内容

本发明的主要目的在于针对现有根面处理效果差等不足，提供一种新型高效的牙根表面处理剂。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种牙根表面处理剂，它包括去污组合物1和再生组合物2；去污组合物1中各组分及其所占质量百分比为：泊洛沙姆407 13-17％，Triton X-114 1-3％，丙二醇3-7％，甘油1-2％，四氢胡椒碱1-2％，野梧桐烯醇1-3％，剩余为水；再生组合物2中各组分及其所占质量百分比为：葡萄糖酸氯己定0.5-2％，再生剂15-31％，盐酸米诺环素1-3％，聚乙二醇二丙烯酸酯0.3-0.5％，剩余为水；其中再生剂由釉基质衍生物、骨形成蛋白2、骨形成蛋白4和成纤维细胞生长因子2组成。

上述方案中，所述泊洛沙姆407的相对分子量为10000-14500。

上述方案中，采用的聚氧乙烯单叔辛基苯基醚(Triton X-114)可发挥促使细菌菌体破膜的作用，使外周蛋白和膜整合蛋白的亚基分离，形成小孔；并进一步与四氢胡椒碱和野梧桐烯醇配合作用，显著降低细菌量并促进健康胶原纤维的暴露，提高成纤维细胞的附着量。

上述方案中，所述再生剂中各组分占组合物1总量的质量百分比为：EMD(釉基质衍生物)4-10％，BMP2(骨形成蛋白2)5-10％，BMP4(骨形成蛋白4)5-10％，FGF2(成纤维细胞生长因子2)1-2％；其中EMD为有利于促进牙龈附着于牙槽骨的生物活性物质，BMP2/4为修复牙槽骨缺损的成分，FGF2有利于使成纤维细胞附着于新生牙槽骨之上。

上述方案中，所述去污组合物1和再生组合物2分别将按配比称取的各组分室温搅拌混合均匀而成。

上述方案中，所述去污组合物1和再生组合物2先后涂覆于牙根表面。

上述方案中，所述涂覆去污组合物1后的作用时间为3-5min；清洁后再涂覆再生组合物2，再生组合物2的作用时间为3-5min。

上述方案中，所述涂覆去污组合物1后进行温敏固化，温敏固化温度为33-38℃，时间为1-3min。

上述方案中，涂覆去污组合物1温敏固化并作用3-5min后，擦干，水洗。

本发明的主要目的在于提升去污以及牙龈成纤维细胞的再附着效果，能有效清除深层的细菌定居，减少再次侵袭牙龈的风险；可彻底清洁玷污层；对坏死牙骨质的清除更彻底，并大量暴露出下方的健康胶原纤维，提高牙龈成纤维细胞的再附着效果。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1)传统的处理手段只能清理极少量细菌，且不能清除深层细菌，本发明所述牙根表面处理剂能将细菌基本清理干净，尤其可清除深层细菌，最终减少细菌侵袭牙龈的风险；

2)对玷污层的清洁能彻底；

3)传统手段无法暴露胶原纤维，本发明能对坏死牙骨质进行清理，并且能够暴露出下方的健康胶原纤维，最终使牙龈成纤维细胞的再附着效果明显更好。

附图说明

图1普通临床牙根表面处理后(A)和利用本发明所述牙根表面处理剂处理后(B)的牙根切片细菌量(Porphyromonas gingivalis，PG)的对比图。

图2Micro-CT检测普通临床牙根表面处理后和利用本发明所述牙根表面处理剂处理后的牙根表面玷污层的清理效果图。

图3偏光显微镜检测普通临床牙根表面处理后和利用本发明所述牙根表面处理剂处理后的牙根表面健康胶原纤维暴露量对比图。

图4扫描电子显微镜检测普通临床牙根表面处理后和利用本发明所述牙根表面处理剂处理后的牙龈成纤维细胞的再附着量对比图。

图5利用实施例2和对比例所述牙根表面处理剂处理后的牙根切片细菌量(Porphyromonas gingivalis，PG)的对比图。

图6偏光显微镜检测利用实施例2野梧桐烯醇和对比例所述牙根表面处理剂处理后的牙根表面健康胶原纤维暴露量对比图。

图7扫描电子显微镜检测利用实施例2和对比例所述牙根表面处理剂处理后的牙龈成纤维细胞的再附着量对比图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

以下实施例中所使用的化合物均为国内外市售产品。

以下实施例中，进一步采用普通的牙周刮治临床牙根表面处理方法与本发明进行对比。

实施例1

一种牙根表面处理剂，它包括去污组合物1和再生组合物2；具体制备步骤如下：

1)配制去污组合物1，按配比称取各组分，各组分及其所占质量百分比为：泊洛沙姆407(成品)15％，Triton X-114 1％，丙二醇5％，甘油1％，四氢胡椒碱2％，野梧桐烯醇1％，剩余为去离子水；将称取的各组分混合均匀，制得去污组合物1；

2)配制再生组合物2，按配比称取各组分，各组分及其所占质量百分比为：葡萄糖酸氯己定1％，EMD(釉基质衍生物)5％，BMP2(骨形成蛋白2)5％，BMP4(骨形成蛋白4)10％，FGF2(成纤维细胞生长因子2)1％，盐酸米诺环素2％，聚乙二醇二丙烯酸酯0.4％，剩余为去离子水；将称取的各组分混合均匀，制得凝胶状组合物2。

应用例

将所得牙根表面处理剂应用于处理牙根，具体步骤如下：

1)牙根切片的准备

在获得患者同意的情况下，获取患者已被拔除的牙周炎病变牙齿，先使用超声洁牙机除去牙根表面的牙结石，然后去除牙冠，垂直切下根部，并使用低速金刚砂车针在水冲洗下将牙根分成三个牙根切片样本(大小约为4×4×1mm)；然后将所得牙根切片在4℃下于pH 7.4的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中储存备用；

2)牙龈成纤维细胞培养

获取普通原代牙龈成纤维细胞，将其接种在T75烧瓶中，在含有10wt％胎牛血清(Gibco，Invitrogen)和1wt％抗生素-抗真菌溶液(Gibco，Invitrogen)的α-MEM培养基中连续传代；每周更换培养基两次，将细胞用胰蛋白酶消化，并在达到汇合后以1:4的比例传到新鲜的培养瓶中；将培养物在温度37℃培养箱中孵育备用；

3)处理牙根切片，分别采用普通临床牙根表面处理方法和本发明所述牙根表面处理剂对牙根切片进行处理，具体步骤分别如下：

采用普通临床牙根表面处理；采用牙周刮治的方法处理：将牙根切片从PBS中取出，并用去离子水冲洗干净；将牙根切片使用刮治器刮治5分钟；

采用本发明所述牙根表面处理剂处理：将牙根切片从PBS中取出，并用去离子水冲洗干净；对牙根切片涂抹组合物1，置于37℃培养箱中温敏固化，固化产物粘附在牙面上作用5分钟，擦干，使用去离子水冲洗干净；然后涂抹凝胶状组合物2，使其粘附于牙面上作用5min轻轻擦拭，得处理后的牙根切片；然后将其放入步骤2)所述细胞培养瓶底部，使培养基完全覆盖牙根切片。

采用Western blot检测牙根切片的细菌量(Porphyromonas gingivalis)，具体步骤如下：

将处理后的牙根切片取出，用手术刀片刮取牙根表面一层；使用蛋白试剂盒提取总蛋白，使用Pierce BCA蛋白测定试剂盒根据制造商的方案估算蛋白质浓度；将裂解液进行SDS-PAGE凝胶电泳，然后将蛋白质转移到PDVF膜上；然后在室温下用含5％干脱脂奶的TBST中的封闭膜1小时，用TBST洗涤3次，并与5％的一抗孵育在TBST中于4℃过夜；将膜用TBST洗涤，并与HRP二抗在室温下孵育30分钟，然后TBST洗涤；然后进行可视化分析，印迹使用免疫印迹分析检测系统(Biorad)进行分析。结果表明，与普通临床牙根表面处理手段相比，采用本发明所述处理剂处理后的细菌量明显减少(结果见图1)。

采用Micro-CT检测利用本发明所述处理剂处理牙根表面玷污层的清理效果，具体步骤包括：

将处理后的牙根切片取出，并在98％乙醇中固定24小时；使用高分辨率的Micro-CT扫描仪(μCT50机型)将这些样本进行体层扫描，其中Micro-CT的电压设置为20kVp，电流为431μA；应用NRecon软件对结果进行三维图像重建，分析采用本发明所述牙根表面处理剂(本发明处理组)和普通临床牙根表面处理(普通处理组)后牙根切片的表面参数及重建。Micro-CT检测结果见图2，结果表明，Micro-CT下可观察到普通处理组的根面仍被玷污层覆盖，将根面糊平，较为平滑；本发明处理组的玷污层处理更彻底，将暴露出真实的牙根面。

采用偏光显微镜检测处理剂使用后的健康胶原纤维暴露量，具体步骤如下：

将牙根切片蒸馏水浸洗2min，使用天狼猩红(Picrosirius Red)染液染15-30min，无水乙醇直接分色与脱水，使用二甲苯透明，风干后中性树胶封片；最后使用偏振光显微镜观察健康胶原纤维的暴露量。结果表明，采用本发明所述牙根表面处理剂处理后的健康胶原纤维暴露量明显更多，胶原纤维明显粗壮(结果见图3)。

采用扫描电子显微镜检测牙根表面处理剂使用后的牙龈成纤维细胞的再附着量，具体步骤如下：

新鲜提取的成纤维细胞覆盖的牙根切片，收集在无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，将这些牙根切片在室温下转移到Karnovsky固定剂中过夜；然后，将样品在PBS中洗涤3次，然后在去离子水中洗涤3次；再将样品在标准分级梯度的酒精(35％、50％、70％、85％、95％和100％)逐渐脱水15分钟；接下来，将样品进行临界点干燥，然后将样品喷金，使用FEIQuanta400F(SEM)，高真空模式对牙齿样品的表面进行分析。结果显示，使用本专利的牙根切片上的成纤维细胞的附着量明显更多，密度更高(见图4)。

上述结果表明，采用本发明所述牙根表面处理剂能有效清除深层的细菌定居，减少再次侵袭牙龈的风险；对玷污层的清洁能彻底；对坏死牙骨质的清除更彻底，能够大量暴露出下方的健康胶原纤维；最终使牙龈成纤维细胞的再附着效果明显更好。

实施例2

一种牙根表面处理剂，它包括去污组合物1和再生组合物2；具体制备步骤如下：

1)配制去污组合物1，按配比称取各组分，各组分及其所占质量百分比为：泊洛沙姆407(成品)15％，Triton X-114 1％，丙二醇5％，甘油1％，四氢胡椒碱2％，野梧桐烯醇2％，剩余为去离子水；将称取的各组分混合均匀，制得组合物1；

2)配制再生组合物2，按配比称取各组分，各组分及其所占质量百分比为：葡萄糖酸氯己定2％，EMD(釉基质衍生物)10％，BMP2(骨形成蛋白2)10％，BMP4(骨形成蛋白4)10％，FGF2(成纤维细胞生长因子2)1％，盐酸米诺环素2％，聚乙二醇二丙烯酸酯0.4％，剩余为去离子水；将称取的各组分混合均匀，制得凝胶状组合物2。

将本实施例所得牙根表面处理剂应用于对牙根面进行处理，具体使用方法为：

在牙龈退缩的牙根面先使用超声洁牙机清洁牙结石及软垢，并使用去离子水将牙根表面冲洗干净；使用抛光杯对牙龈退缩的牙根面进行抛光，并使用去离子水冲洗干净；

对牙龈退缩的牙根面涂抹组合物1，涂抹后温敏固化使固化物粘附在牙面上作用3min，使用医用棉球彻底擦干净，使用牙科治疗机的三用枪头，使用去离子水冲洗干净；

然后涂抹凝胶状组合物2，使其粘附于牙根表面上作用3min后，使用医用棉球轻轻擦拭即可，无需彻底擦除干净。

对比例

一种牙根表面处理剂野梧桐烯醇野梧桐烯醇野梧桐烯醇野梧桐烯醇野梧桐烯醇野梧桐烯醇聚乙二醇二丙烯酸酯藻酸盐野梧桐烯醇野梧桐烯醇，它包括去污组合物1和再生组合物2；具体制备步骤如下：

1)配制去污组合物1，按配比称取各组分，各组分及其所占质量百分比为：泊洛沙姆407(成品)15％，Triton X-114 1％，丙二醇5％，甘油1％，剩余为去离子水；将称取的各组分混合均匀，制得组合物1；

2)配制再生组合物2，按配比称取各组分，各组分及其所占质量百分比为：葡萄糖酸氯己定2％，EMD(釉基质衍生物)10％，BMP2(骨形成蛋白2)10％，BMP4(骨形成蛋白4)10％，FGF2(成纤维细胞生长因子2)1％，盐酸米诺环素2％，聚乙二醇二丙烯酸酯0.4％，剩余为去离子水；将称取的各组分混合均匀，制得凝胶状组合物2。

将本对比例所得牙根表面处理剂和实施例2所得牙根表面处理剂分别对牙根切片进行处理，其中牙根切片的准备和牙龈成纤维细胞培养步骤分别采用实施例1所述“牙根切片的准备”步骤和“牙龈成纤维细胞培养”步骤，牙根切片处理步骤具体如下：

实施例2所述牙根表面处理剂：将牙根切片从PBS中取出，并用去离子水冲洗干净；对牙根切片涂抹实施例2所述去污组合物1，置于37℃培养箱中温敏固化，固化产物粘附在牙面上作用5分钟，擦干，使用去离子水冲洗干净；然后涂抹凝胶状再生组合物2，使其粘附于牙面上作用5min轻轻擦拭，得处理后的牙根切片；然后将其放入步骤2)所述细胞培养瓶底部，使培养基完全覆盖牙根切片。

对比例所述牙根表面处理剂：将牙根切片从PBS中取出，并用去离子水冲洗干净；对牙根切片涂抹对比例所述去污组合物1，置于37℃培养箱中温敏固化，固化产物粘附在牙面上作用5分钟，擦干，使用去离子水冲洗干净；然后涂抹凝胶状对比例所述再生2，使其粘附于牙面上作用5min轻轻擦拭，得处理后的牙根切片；然后将其放入步骤2)所述细胞培养瓶底部，使培养基完全覆盖牙根切片。

参照实施例1所述方法采用Western blot检测牙根切片的细菌量(Porphyromonasgingivalis)，结果表明，与对比例(A组)相比，采用本发明实施例2(B组)所述处理剂处理后的细菌量明显减少(结果见图5)。

参照实施例1所述方法采用偏光显微镜检测处理剂使用后的健康胶原纤维暴露量，结果表明，与对比例(A组)相比，采用本发明实施例2(B组)所述处理剂处理后的健康胶原纤维暴露量明显更多，胶原纤维明显粗壮(结果见图6)。

参照实施例1所述方法采用扫描电子显微镜检测牙根表面处理剂使用后的牙龈成纤维细胞的再附着量，结果显示，结果表明，与对比例(A组)相比，采用本发明实施例2(B组)所述处理剂处理后的成纤维细胞的附着量明显更多，密度更高(见图7)。

综上所述结果，采用本发明所得组牙根表面处理剂能有效清除深层的细菌定居，减少再次侵袭牙龈的风险；对玷污层的清洁能彻底；对坏死牙骨质的清除更彻底，能够大量暴露出下方的健康胶原纤维；最终使牙龈成纤维细胞的再附着效果明显更好。而对比例所述牙根处理及处理后的细菌量仍较多，胶原纤维未明显暴露，最终成纤维细胞附着量明显较低。

上述实施例仅是为了清楚地说明所做的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或者变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举，因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种牙根表面处理剂，其特征在于，它包括去污组合物1和再生组合物2；去污组合物1中各组分及其所占质量百分比为：泊洛沙姆407 13-17％，Triton X-114 1-3％，丙二醇3-7％，甘油1-2％，四氢胡椒碱1-2％，野梧桐烯醇1-3％，剩余为水；再生组合物2中各组分及其所占质量百分比为：葡萄糖酸氯己定0.5-2％，再生剂15-31％，盐酸米诺环素1-3％，聚乙二醇二丙烯酸酯0.3-0.5％，剩余为水；其中再生剂由釉基质衍生物、骨形成蛋白2、骨形成蛋白4和成纤维细胞生长因子2组成。

2.根据权利要求1所述的牙根表面处理剂，其特征在于，所述泊洛沙姆407的相对分子量为10000-14500。

3.根据权利要求1所述的牙根表面处理剂，其特征在于，所述再生剂中各组分占再生组合物2用量的质量百分比为：釉基质衍生物4-10％，骨形成蛋白2 5-10％，骨形成蛋白4 5-10％，成纤维细胞生长因子2 1-2％。

4.根据权利要求1所述的牙根表面处理剂，其特征在于，所述去污组合物1和再生组合物2分别将按配比称取的各组分混合均匀而成。

5.根据权利要求1所述的牙根表面处理剂，其特征在于，所述去污组合物1和再生组合物2先后涂覆于牙根表面。

6.根据权利要求5所述的牙根表面处理剂，其特征在于，所述涂覆去污组合物1后的作用时间为3-5min；涂覆再生组合物2后的作用时间为3-5min。

7.根据权利要求5所述的牙根表面处理剂，其特征在于，所述涂覆去污组合物1后进行温敏固化，温敏固化温度为33-38℃，时间为1-3min。

8.根据权利要求5所述的牙根表面处理剂，其特征在于，涂覆去污组合物1温敏固化并作用3-5min后，擦干，水洗。

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