CN113004286B - 作为血浆激肽释放酶抑制剂的三环类化合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种结构新颖、活性好、选择性高的三环类血浆激肽释放酶抑制剂化合物，可广泛用于涉及血浆激肽释放酶活性相关的疾病的预防或治疗。

Description

作为血浆激肽释放酶抑制剂的三环类化合物及其用途
技术领域
本发明涉及对血浆激肽释放酶具有选择性抑制活性的三环类化合物及其用途。
背景技术
血浆激肽释放酶(plasma kallikrein,PK)属丝氨酸蛋白酶家族的一员，最早是在哺乳动物的血浆中被发现。它由位于4q35染色体上单个基因(KLKB1)编码，主要在肝脏中合成并以血浆激肽释放酶原(PPK)形式大量存在于血液循环中，PPK进一步通过凝血因子XIIa剪切其内在的Arg-IIe键激活转化成PK(Yousef,G.M.et al.An overview of thekallikrein gene families in humans and other species:Emerging candidatetumour markers.Clin.Biochem.2003,36,443-452)。PK是激肽释放酶-激肽系统(KKS)的一个关键酶，可作用于高分子量激肽原(KH)，从而使其活化释放小分子缓激肽(BK)，进而通过作用于缓激肽受体参与凝血、纤维蛋白溶解、补体激活以及炎症发生等生物学过程。
近年来，随着对血浆激肽释放酶的基因学、分子学和药理学的研究更加深入，人们对其生理和病理角色有了深入的认识。研究表明，血浆激肽释放酶与炎症性疾病、肿瘤、心血管疾病、肾病、中枢神经系统疾病、视网膜病以及糖尿病视网膜疾病等多种疾病密切相关(Costa-Neto,C.M.et al.Participation of kallikrein-kinin system in differentpathologies.Int.Immunopharmacol.2008,8,135-142)。例如遗传性血管水肿(HAE)，它是一种常染色体显性遗传性，主要是由于患者体内C1-INH缺乏，导致其对血浆激肽释放酶的抑制作用减弱，不受控制的激活KKS系统，释放血管活性物质，使血管通透性增加引起典型的肿胀(Farkas,H.Orphan drugs for the treatment of hereditaryangioedema.Expert Opinion on Orphan Drugs,2015,1,141-156)。目前已有艾卡拉肽和Lanadelumab等大分子血浆激肽释放酶抑制剂上市在临床上用于治疗遗传性血管水肿，疗效显著。又例如，在糖尿病黄斑水肿患者眼部玻璃体中，发现其KKS系统过度激活，导致视网膜血管通透性增加和视网膜增厚。近年来已公开多项资料表明血浆激肽释放酶抑制剂可以降低视网膜血管通透性，用于治疗糖尿病视网膜疾病和糖尿病黄斑水肿(Feener,E.P.Plasma kallikrein and diabetic macular edema.Curr.Diab.Rep.2010,10,270-275；Liu J.et al.Plasma kallikrein-kinin system and diabeticretinopathy.Biol.Chem.2013,394,319-328)。目前已有小分子(NCT03466099)和多肽类(NCT03511898)血浆激肽释放酶抑制剂用于治疗糖尿病黄斑水肿进入临床研究。
然而，现有报道的多肽和小分子类血浆激肽释放酶抑制剂又存在诸多限制。如艾卡拉肽被报道存在引起过敏性反应的风险(Banta,E.et al.Overview of ecallantide inthe treatment of hereditary angioedema types I and II.Therapy.2010,7,565-571)。而现有报道的绝大部分小分子血浆激肽释放酶抑制剂具有高度极性和可离子化的胍基或脒基官能团，这被认为难以透过生物膜导致口服生物利用度非常差(Tamie,J.etal.ASP-634:an oral drug candidate for diabetic macular edema.ARVO AnnualMeeting Abstract,2012,53,2240)。Biocryst开发了口服血浆激肽酶抑制剂BCX4161(Collis,P.et al.,BCX4161,an oral kallikrein inhibitor:safety andpharmacokinetic results of a Phase 1study in healthy volunteers.J.AllergyClin.Immunol 2014,133,Volume 133,Issue 2,Supplement,2014,AB39)，但是其临床给药剂量为400mg每次，每日三次给药。结构中苯甲脒或胍基虽构成BCX4161的药效基团，但其较差的理化性质可能影响了药物的生物利用度，因此需以较大剂量给药。此外现有的血浆激肽释放酶抑制剂还存在对相关酶如KLK1、凝血酶和其他丝氨酸蛋白酶选择性较差的问题。至今还没有小分子的血浆激肽释放酶抑制剂被批准上市。因此，研究新型、作用力更强、副作用更小的选择性血浆激肽释放酶抑制剂仍有需求。
发明内容
本发明涉及血浆激肽释放酶抑制剂化合物、所述化合物的药物组合物、所述化合物的制药用途以及化合物的治疗方法。
在某一方面，本发明提供式(I)的化合物，其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药：
Figure BDA0002844757160000021
其中，
A选自5元或6元芳环或芳杂环，所述芳杂环含有1-3个选自N、O和S的杂原子，所述芳环或芳杂环任选地被下述取代基取代：卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、OH、CN、COOR1、CONR1R2、NR1R2、NR1COR2、(CH2)1-3NR1R2、(CH2)1-3OR1和C(R1)(R2)NH2；
或者A选自稠合的6，5-或6，6-芳杂双环，所述芳杂双环含有N和任选的另外独立地1-2个选自N、O和S的杂原子，所述芳杂双环任选地被下述取代基取代：卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、OH、CN、COOR1、CONR1R2、NR1R2、NR1COR2、(CH2)1-3NR1R2、(CH2)1-3OR1和-C(R1)(R2)NH2；
L1选自(CR3R4)m或(CR3R4)mO，其中m为0、1、2；
X1和X2为CR5或N，且不同时为N；其中R5选自H、OH、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、环烷基、CN、COOR1、CONR1R2、NR1R2、NR1COR2、(CH2)1-3NR1R2、(CH2)1-3OR1和-C(R1)(R2)NH2；
-C-D-选自-NH-CH2-、-N＝CH-、-NCH3-CH2-、-NHCO-、-CH＝CH-或-CH2-CH2-；
L2选自键、(CH2)n、(CH2)nNH、(CH2)nO，其中n为1或2；
B选自5-6元芳环或者芳杂环，其中所述芳杂环含有1-3选自N、O或S的杂原子，任选地，所述芳环或者芳杂环被烷基、烷氧基、OH、卤素、CN、酮基、COOR1、CONR1R2、NR1R2、NR1COR2、(CH2)1-3NR1R2、(CH2)1-3OR1和-C(R1)(R2)NH2取代；
或者B选自饱和的或不饱和的5-10元单环或稠合多环非芳族环系，所述非芳族环系任选地含有0-3个选自N、O和S的杂原子，所述非芳族环系任选地被下述取代基取代：卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、酮基、OH、CN、COOR1、CONR1R2、NR1R2、NR1COR2、(CH2)1-3NR1R2、(CH2)1-3OR1和-C(R1)(R2)NH2；
R1和R2独立地选自H和烷基，或者R1和R2与它们所连接的碳一起形成环烷基；
R3和R4独立地选自H和烷基，或者R3和R4与它们所连接的碳一起形成环烷基。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，A选自
Figure BDA0002844757160000031
其中，X3为CR10或N，R6、R7、R8、R9、R10独立地选自氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、OH、CN、COOR1、CONR1R2、NR1R2、NR1COR2、(CH2)1-3NR1R2、(CH2)1-3OR1和C(R1)(R2)NH2；R1和R2独立地选自H和烷基，或者R1和R2与它们所连接的碳一起形成环烷基。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，R8为NH2或者C(R1)(R2)NH2，其中R1和R2独立地选自H和C1-3的烷基，或者R1和R2与它们所连接的碳一起形成3元或4元环烷基。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，R8为NH2。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，R8为CH2NH2。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，R8为C(R1)(R2)NH2，其中R1和R2与它们所连接的碳一起形成环丙基。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，R6、R7、R9、R10独立地选自H、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，R6、R7、R9、R10立地选自H、卤素或者CH3。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，A选自：
Figure BDA0002844757160000032
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，A选自异喹啉和1H-吡咯[2,3-b]吡啶，其中异喹啉和1H-吡咯[2,3-b]吡啶任选地被卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、OH、CN、COOR1、CONR1R2、NR1R2、NR1COR2、(CH2)1-3NR1R2、(CH2)1-3OR1和C(R1)(R2)NH2取代；R1和R2独立地选自H和烷基，或者R1和R2与它们所连接的碳一起形成环烷基。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，A选自异喹啉和1H-吡咯[2,3-b]吡啶，其中异喹啉和1H-吡咯[2,3-b]吡啶任选地被卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基和氨基取代。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，A选自异喹啉和1H-吡咯[2,3-b]吡啶，其中异喹啉和1H-吡咯[2,3-b]吡啶任选地被卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基和氨基取代。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，A选自：
Figure BDA0002844757160000033
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，L1选自键、CH2、(CH2)2O。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，L1选自CH2。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，X2为CR5，其中R5选自H、烷基、卤代烷基和烷氧基。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，X2为CR5，其中R5选自H、CH3、CF3、CH2OCH3。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，-C-D-选自-NH-CH2-、-N＝CH-、-NHCO-。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，L2选自键、O、NH、CH2、CH2NH、CH2O。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，L2选自CH2。
在另一实施方案中，在式(I)的化合物中，B选自：
Figure BDA0002844757160000041
在另一实施方案中，式(I)的化合物选自：
Figure BDA0002844757160000051
Figure BDA0002844757160000061
Figure BDA0002844757160000071
本发明的第二目的在于提供一种药物组合物，所述组合物包含本发明第一目的所述的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药，和药学上可接受的赋形剂。
本发明的第三目的在于提供本发明第一目的所述的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药，在制备用于治疗或预防涉及血浆激肽释放酶活性的疾病或病症的药物中的用途。
本发明的第四目的在于提供本发明第一目的所述的化合物，其溶剂化物、互变异构体或药学上可接受的盐治疗或预防哺乳动物中涉及血浆激肽释放酶活性的疾病或病症的方法，包括向有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一目的所述的化合物。
在另一实施方案中，涉及血浆激肽释放酶活性的疾病为炎症。
在另一实施方案中，涉及血浆激肽释放酶活性的疾病选自视力受损、糖尿病视网膜病变、糖尿病黄斑水肿、遗传性血管水肿、糖尿病、胰腺炎、脑出血、肾病、心肌病、神经病、炎性肠病、关节炎、感染性休克、低血压、癌症、成人呼吸窘迫综合征、弥散性血管内凝血、心肺旁路手术和外科手术后出血。
在另一实施方案中，涉及血浆激肽释放酶活性的疾病是与糖尿病视网膜病变和糖尿病黄斑水肿相关的视网膜血管通透性疾病。
在另一实施方案中，涉及血浆激肽释放酶活性的疾病为糖尿病黄斑水肿。
在另一实施方案中，涉及血浆激肽释放酶活性的疾病为遗传性血管水肿。
本发明的化合物可以与其他的治疗剂联合施用。联合施用疗法包括式(I)化合物和一种或多种其他的治疗剂，其他的治疗剂选自：抑制血小板衍生因子(PDGF)的治疗剂，血管内皮生长因子(VEGF)，整联蛋白α5β1，类固醇，抑制血浆激肽释放酶的其他治疗剂以及其他的炎症抑制剂。
当采用联合疗法时，本发明化合物和所述联用的治疗剂可以存在于相同或不同的药物组合物中，并且可以单独地、顺序地或同时地施用。
另一方面，本发明的化合物可以联合视网膜的激光治疗给药。激光光凝联合抗VEGF药物(如雷珠单抗)治疗糖尿病黄斑水肿为本领域所熟知且被验证疗效显著。
定义
如本文所用，术语“烷基”自身或作为另一取代基的部分意指(除非另外说明)具有指定碳原子数目的饱和直链或支链烃基。包括：至多10个碳原子(C1-C10)，或至多6个碳原子(C1-C6)，或至多4个碳原子(C1-C4)，或至多3个碳原子(C1-C3)的直链基团；或者3至10个碳原子(C3-C10)，或至多7个碳原子(C3-C7)，或至多4个碳原子(C3-C4)的支链基团。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基。
如本文所用，“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基。包括：1至6个碳原子(C1-C6)，或1至4个碳原子(C1-C4)的直链基团；-3至6个碳原子(C3-C6)，或3至4个碳原子(C3-C4)的支链基团。烷氧基的实例包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。
如本文所用，“环烷基”是3至7个碳原子的单环饱和烃基。环烷基可以含有3至7个碳原子或3至6个碳原子或3至5个碳原子或3至4个碳原子。单环环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
如本文所用，“卤代烷基”是如上述的烷基上氢原子部分或全部被卤素原子取代形成的基团；除非另有说明，卤素选自Cl、F、Br和I。
如本文所用，术语“芳环”是指单环、双环或多环芳烃基团，例如苯、萘。术语“芳基”还包括具有两个或多个环系，其中两个或多个碳为两个相邻环共用(所述环为“稠合环”)，其中至少一个环为芳族烃，其他的环可以是如环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。在某些实施例中，术语“芳基”是指苯基基团。在某些实施例中，“芳基”具有6至10个碳原子。
如本文所用，术语“芳杂环”是指单环、双环和多环芳族基团，在环结构中具有3至12个总原子，其中包括一个或多个杂原子，如氮、氧或硫。示例性芳杂环团包括氮杂吲哚基、苯并(b)噻吩基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并恶二唑基、呋喃基、咪唑基、咪唑并吡啶基、吲哚基、吲哚啉基、吲唑基、异吲哚啉基、异恶唑基、异噻唑基、异喹啉基、恶唑基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、吡咯并[2,3-d]嘧啶基、吡唑并[3,4-d]嘧啶基、喹啉基、喹唑啉基、三唑基、噻唑基、噻吩基、四氢吲哚基、四唑基、噻二唑基、噻吩基、硫代吗啉基、三唑基或托烷基等等。术语“芳杂环”还包括具有两个或多个环的多环系，其中两个或多个碳为两个相邻环共用(所述环是“稠合环”)，其中至少一个环是在环结构中具有一个或多个杂原子的芳族基团，例如，其他的环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。
如本文所用，“芳杂双环”指双环芳族基团，在环结构中具有3至12个总原子，其中包括一个或多个杂原子，如氮、氧或硫。示例性芳杂双环包括氮杂吲哚基、苯并(b)噻吩基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并恶二唑基、咪唑并吡啶基、吲哚基、吲哚啉基、吲唑基、异吲哚啉基、异恶唑基、异噻唑基、异喹啉基、吡咯并[2,3-d]嘧啶基、吡咯并[2,3-b]吡啶、吡唑并[3,4-d]嘧啶基、喹啉基、喹唑啉等等。术语“芳杂环”还包括具有两个或多个环的多环系，其中两个或多个碳为两个相邻环共用(所述环是“稠合环”)，其中至少一个环是在环结构中具有一个或多个杂原子的芳族基团，例如，其他的环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。
如本文所用，术语“单环或稠合多环非芳族环系”是指排除芳族或杂芳族以外的所有环系，包括饱和或不饱和的单环或稠合多环(包括双环)，其可以任选包含0-3个独立选自N、O和S的杂原子，含杂原子的基团不具有芳香性，在环结构中具有5-10个总原子。所述“单环或稠合多环非芳族环系”可以包括但不限于：5元单环，如四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基，吡咯啉基；或6元单环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7元但环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述“单环或稠合多环非芳族环系”可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基。所述“单环或稠合多环非芳族环系”可以是双环的，例如但不限于氮杂双环[3.1.0]己烷，六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基环，六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基环。
如本文所用，术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为羰基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。羰基取代不会发生在芳香基上。术语“任选地被下述取代基取代”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
如本文所用，在化学结构中与键相交的波浪线指示键的附连点，其在化学结构中的波浪键与分子的其余部分相交。
如本文所用，“药学上可接受的盐”，包括衍生自无机酸或有机酸的盐，所述无机酸或有机酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、磷酸、甲酸、乙酸、乳酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、乙醇酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、苯磺酸、苯甲酸、丙二酸、三氟乙酸、三氯乙酸、萘-2-磺酸和其他酸。药学上可接受的盐包括化合物碱与盐的分子摩尔比例不是1:1的情形。作为一个实例，盐可以包含相对于每个碱分子有两个分子的有机酸或者无机酸。作为另一个实例，盐可以包含相对于每个碱分子有1/2个分子的有机酸或者无机酸。
如本文所用，“溶剂化物”是指本申请化合物与一个或多个溶剂分子的物理缔合；该物理缔合涉及各种程度的离子键和共价键，其包括氢键；在某些情况下，例如当将一个或多个溶剂分子引入到结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够被分离；“溶剂化物”涵盖溶液相和可分离的溶剂化物；合适的溶剂非限制性实例包括但不限于异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺等；“水合物”为其中溶剂分子为H2O的溶剂化物。
除非另有规定，本文所描绘的结构也意味着包括该结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构))形式；例如每一不对称中心的R与S构型，(Z)与(E)双键异构体，和(Z)与(E)构象异构体。因此，这些化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)混合物都属于本发明的范围。除非另有规定，本发明化合物的所有互变异构形式都属于本发明的范围。
本发明包括所有可药用的同位素标记的化合物，即式(I)化合物中一或多个原子被具有相同原子数但通常与自然形成的原子质量或质量数不同的原子替代。本发明化合物中适合的同位素实例包括但不限于：氢的同位素，例如2H和3H；碳的同位素，例如11C、13C和14C；氯的同位素，例如36Cl；氟的同位素，例如18F；碘的同位素，例如123I和125I；氮的同位素，例如13N和15N；氧的同位素，例如15O、17O和18O；磷的同位素，例如32P；和硫的同位素，例如35S。
如本文所用，“前药”是指在体内通过代谢方式(例如，通过水解、还原或氧化)而可转化成本发明化合物的化合物。
术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性化合物、不干扰活性化合物生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质，包括任何本领域普通技术人员已知的溶剂、分散介质、包衣材料、表面活性剂、抗氧剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等张剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等及其组合
术语“赋形剂”在本文中用来描述不同于本发明的化合物的任何成分，其可以对所述制剂赋予功能性(如药物释放速率控制)和/或非功能性(如加工助剂或稀释剂)。赋形剂的选择很大程度上取决于诸如具体给药方式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响、以及剂型的性质等因素。示例性的赋形剂可以包括但不限于缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、不透明剂、助流剂、加工助剂、着色剂、增甜剂、芳香剂、调味剂、稀释剂和其它已知的添加剂中的一种或多种。
本发明化合物可以以任何便利的使用形式被施用，如片剂、粉末、胶囊、溶液、分散体、悬浮液、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶剂、乳剂、贴剂等。此类组合物可以包含药物制剂中常规的组分，如稀释剂、载体、pH调节剂、增甜剂、填充剂和另外的活性剂。本发明的活性化合物也可以被配制成持续释放的剂型。
本发明化合物可以通过任何合适的方式施用，包括口服、局部(包括颊部和舌下)、直肠、阴道、透皮、肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、皮肤内、鞘内和硬膜外以及鼻内，并且，如果需要用于局部治疗，病灶内施用。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内、大脑内、眼内、病灶内或皮下施用。
对于病症如与糖尿病视网膜病变和糖尿病黄斑水肿相关的视网膜血管通透性疾病的治疗，本发明的化合物可以以适于注射到患者眼内部区域的形式，尤其是，以适于玻璃体内注射的形式施用。
本发明化合物术语“治疗有效的量”指引起患者生物学或医学反应的本发明化合物的量，所述反应为例如降低或抑制酶或蛋白活性或者改善症状、缓解病症、减慢或延迟疾病发展或者预防疾病等。在一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效的量”指当给药于细胞或组织或非细胞性生物学物质或介质时，本发明化合物的量能够至少部分降低或抑制血浆激肽释放酶活性；或至少部分降低或抑制血浆激肽释放酶表达。化合物、药用组合物或结合的治疗有效剂量取决于患者的种属、体重、年龄和个体情况、疾病或病症或者需要治疗的严重性。本发明化合物和组合物总的每日用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。
化合物经手工或者Chemdraw软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
与现有技术相比，本发明的主要优点在于：
提供了一系列结构新颖、活性好、选择性高的的三环类血浆激肽释放酶抑制剂化合物，可广泛用于涉及血浆激肽释放酶活性相关的疾病的预防或治疗。
附图说明
图1显示化合物22、6、71和73化合物对大鼠中CA-1刺激的血管通透性模型中的荧光素渗漏评分；
图2显示化合物1、6、22和73化合物对大鼠中CA-1刺激的血管通透性模型中的视网膜厚度变化；
图3显示部分化合物对视网膜色素上皮细胞ARPE19的毒性。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。实施例(制备)中描述的化学反应可按照本领域熟知的方法制备本发明的其它化合物，并且用于制备本发明化合物的其他方法属于本发明的范围。
实施例1
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000112
-2-甲酰胺(化合物1)的制备
Figure BDA0002844757160000111
步骤a)：2-氨基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯的制备
将水(110mL)缓慢加入氰基甲酸乙酯(30.0g，0.303mol)、盐酸羟胺(31.6g，0.455mol)和碳酸钠(80.3g，0.758mol)的乙醇(200mL)混合液中，加毕，反应液20℃搅拌反应10h，反应结束后减压蒸除溶剂，残余物以乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得2-氨基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯，收率65.0％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.66-9.12(m,1H),8.24(s,2H),5.79-5.31(m,2H),4.07-3.97(m,2H),1.18-1.13(m,3H)，ESI-MS(m/z)：133.2[M+H]+。
步骤b)：3-(((1-氨基-2-乙氧基-2-氧亚乙基)氨基)氧基)丙烯酸叔丁酯的制备
将2-氨基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯(9.0g，68.120mmol)、丙炔酸叔丁酯(8.59g，68.120mmol)、三乙胺(10.4mL，74.932mmol)和乙醇(90mL)加入反应瓶中，35℃搅拌反应10h，反应结束后，减压蒸除溶剂，残余物加水(150mL)稀释，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，所得粗品经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得3-(((1-氨基-2-乙氧基-2-氧亚乙基)氨基)氧基)丙烯酸叔丁酯，收率62.5％，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85(d,J＝12.4Hz,1H),5.56(d,J＝12.4Hz,1H),5.37(br s,2H),4.39(q,J＝7.2Hz,2H),1.47(s,9H),1.42-1.37(m,3H)，ESI-MS(m/z)：297.2[M+K]+。
步骤c)：1H-咪唑-2-甲酸乙酯-4-甲酸叔丁酯的制备
将3-(((1-氨基-2-乙氧基-2-氧亚乙基)氨基)氧基)丙烯酸叔丁酯(2.0g，7.744mmol)和二甲苯(15mL)加入反应瓶中，155℃微波反应3h，反应结束后，减压蒸除溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得黄色固体，收率89.2％，1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.85-7.57(m,1H),4.41-4.32(m,2H),1.51(d,J＝2.4Hz,9H),1.38-1.32(m,3H)。
步骤d)：4-甲基-2-硝基-苯甲酰氯的制备
将草酰氯(200mL)在15℃条件下滴加至4-甲基-2-硝基-苯甲酸(43.0g，0.237mol)和二氯甲烷(200mL)的混合液中，滴毕，升温至45℃反应5h，反应结束后，减压浓缩，得4-甲基-2-硝基-苯甲酰氯，无需进一步纯化直接用于下一步反应。
步骤e)：4-甲基-2-硝基-苯甲酸甲酯的制备
将4-甲基-2-硝基-苯甲酰氯(50.0g，0.248mol)的二氯甲烷(100mL)溶液在15℃缓慢滴入甲醇(200mL)和三乙胺(51.7mL，0.372mol)的混合液中，滴毕，15℃搅拌反应5h，反应结束后，减压蒸除溶剂，残余物加水(500mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(600mL×3)，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(600mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得黄色固体，所得粗品直接用于下一步反应，粗品收率82.6％，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69-7.56(m,2H),7.44(br d,J＝8.0Hz,1H),3.91-3.85(m,3H),2.56-2.27(m,3H)。
步骤f)：4-溴甲基-2-硝基-苯甲酸甲酯的制备
将4-甲基-2-硝基-苯甲酸甲酯(40.0g，0.204mol)的乙腈(200mL)溶液在0℃滴入N-溴代琥珀酰亚胺(NBS，36.4g，0.204mol)、过氧化二苯甲酰(BPO，2.98g，12.302mmol)和乙腈(100mL)的混合液中，滴毕，在氮气保护下升温至80℃反应4h，反应结束后，减压蒸除溶剂，残余物加水(400mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(500mL×3)，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(300mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得4-溴甲基-2-硝基-苯甲酸甲酯，粗品直接用于下一步反应。
步骤g)：4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲酸甲酯的制备
将4-溴甲基-2-硝基-苯甲酸甲酯(24.0g，87.578mmol)、3-溴-5-甲基-1H-吡唑(14.1g，87.578mmol)、碳酸钾(24.2g，175.155mmol)和乙腈(400mL)加入反应瓶中，40℃搅拌反应50h，反应结束后减压蒸除溶剂，残余物加水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(100mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，所得粗品经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲酸甲酯，收率50.9％，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(d,J＝1.6Hz,1H),7.40-7.34(m,1H),6.12(d,J＝0.8Hz,1H),5.32(s,2H),3.93-3.86(m,3H),2.21(d,J＝0.8Hz,3H)；ESI-MS(m/z)：354.1[M+H]+。
步骤h)：(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇的制备
在0℃将硼氢化钠(2.32g，61.326mmol)和氯化钙(6.82g，61.441mmol)加入4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲酸甲酯(14.5g，40.942mmol)的四氢呋喃(200mL)溶液中，0℃搅拌反应5h，反应液在0℃用氯化铵水溶液淬灭，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(100mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇，无需纯化直接用于下一步反应，ESI-MS(m/z)：326.0[M+H]+。
步骤i)：4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇甲磺酸酯的制备
将甲磺酰氯(2.85mL，36.794mmol)滴加至(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇(7.5g，22.996mmol)和三乙胺(6.4mL，45.992mmol)的二氯甲烷(70mL)溶液中，35℃反应4h，反应结束后，反应液用冰水(200mL)稀释，用二氯甲烷(150mL×3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(100mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇甲磺酸酯，无需纯化直接用于下一步反应。
步骤j)：4-(叔丁基)-2-乙基-1-(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸的制备
将4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇甲磺酸酯(7.0g，17.316mmol)、1H-咪唑-2-甲酸乙酯-4-甲酸叔丁酯(3.96g，16.491mmol)、碳酸钾(5.98g，43.290mmol)和乙腈(70mL)加入反应瓶中，50℃搅拌反应5h，反应结束后减压蒸除溶剂，残余物加水(150mL)稀释，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(100mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，所得粗品经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得4-(叔丁基)2-乙基1-(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸，收率64.2％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.95(d,J＝1.6Hz,1H),7.72-7.61(m,1H),7.31-7.24(m,1H),6.69(d,J＝8.0Hz,1H),6.13(d,J＝0.8Hz,1H),6.01(s,2H),5.30(s,2H),4.37-4.29(m,2H),2.24(d,J＝0.8Hz,3H),1.61(s,9H),1.36(t,J＝7.2Hz,3H)，ESI-MS(m/z)：580.4[M+Na]+。
步骤k)：4-(叔丁基)2-乙基1-(2-氨基-4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸的制备
在20℃将锌粉(7.2g，109.411mmol)加入4-(叔丁基)2-乙基1-(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸(6.0g，10.941mmol)和氯化铵(5.85g，109.411mmol)的乙醇(60mL)混合液中，20℃继续搅拌反应5h，反应结束后，过滤，滤液减压浓缩，得4-(叔丁基)2-乙基1-(2-氨基-4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸，收率52.8％，无需纯化直接用于下一步反应，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.6(s,1H),6.61(d,J＝7.6Hz,1H),6.43(d,J＝1.2Hz,1H),6.30(d,J＝7.6Hz,1H),6.19(s,1H),5.45-5.24(m,4H),5.10(s,2H),4.29(q,J＝7.2Hz,2H),2.19(s,3H),1.48(s,9H),1.27(t,J＝7.2Hz,3H)；ESI-MS(m/z)：520.2[M+H]+。
步骤l)：8-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000131
-2-甲酸叔丁酯的制备
将4-(叔丁基)2-乙基1-(2-氨基-4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸(2.0g，3.858mmol)、叔丁醇钾(541mg，4.821mmol)和DMF(35mL)加入反应瓶中，25℃搅拌反应2h，反应结束后，反应液在20℃用氯化铵水溶液(10mL)淬灭，用二氯甲烷(80mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得白色固体，粗品收率93.2％，无需纯化直接用于下一步反应，ESI-MS(m/z)：474.0[M+H]+。
步骤m)：8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000141
-2-甲酸叔丁酯的制备
将8-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000142
-2-甲酸叔丁酯(1.6g，3.387mmol)、Pd/C(500mg)和HCOONH4(2.14g，33.874mmol)和二氧六环(3mL)加入反应瓶中，45℃搅拌反应0.5h，反应结束后，减压蒸除溶剂，残余物加水(100mL)稀释，用二氯甲烷(80mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得白色固体，粗品收率82.5％，无需纯化直接用于下一步反应，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.93-10.63(m,1H),8.11-7.87(m,1H),7.44-7.27(m,2H),6.97(s,1H),6.90(d,J＝7.6Hz,1H),6.07(s,1H),5.28(d,J＝11.6Hz,4H),2.18(s,3H),1.48(s,9H)；ESI-MS(m/z)：394.1[M+H]+。
步骤n)：8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000143
-2-甲酸叔丁酯的制备
在25℃将BH3.THF(7.63mL，7.625mmol)滴加至8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000144
-2-甲酸叔丁酯(1.0g，2.542mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中，50℃反应3h，加甲醇(200mL)淬灭，减压浓缩，得白色固体，无需纯化直接用于下一步；ESI-MS(m/z)：380.2[M+H]+。
步骤o)：8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000145
-2-羧酸
将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000146
-2-甲酸叔丁酯(700mg，1.845mmol)和8N盐酸(30mL)加入反应瓶中，升温至60℃反应2h，反应结束后，减压蒸除溶剂，制备HPLC纯化，得白色固体，收率60.3％；ESI-MS(m/z)：324.3[M+H]+。
步骤p)：N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000147
-2-甲酰胺的制备
将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000148
-2-羧酸(130mg，0.361mmol)、5-(氨甲基)-4,6-二甲基吡啶-2-二胺二盐酸盐(81mg，0.361mmol)、HBTU(192mg，0.505mmol)、三乙胺(0.18mL，1.264mmol)和DMF(5mL)加入反应瓶中，室温搅拌反应1h，反应结束后，减压浓缩，残余物经制备HPLC纯化，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000149
-2-甲酰胺，收率31.2％，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.252(s,1H),8.15(d,J＝2.8Hz,1H),7.33(d,J＝7.6Hz,1H),6.74(s,1H),6.71-6.68(m,2H),6.65(d,J＝2.8Hz,1H),5.60(s,2H),5.53(s,2H),4.75(s,2H),5.53(s,2H),2.62(s,3H),2.48(s,3H)；ESI-MS(m/z)：457.2[M+H]+。
实施例2
8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000152
-2-甲酰胺(化合物2)的制备
Figure BDA0002844757160000151
步骤a)：4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲酸甲酯的制备
将4-溴甲基-2-硝基-苯甲酸甲酯(10.0g，36.487mmol)、1H-吡唑(2.48g，36.487mmol)、碳酸钾(10.08g，72.974mmol)和乙腈(50mL)加入反应瓶中，氮气保护下50℃搅拌反应12h，反应结束后减压蒸除溶剂，残余物加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，所得粗品经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲酸甲酯，收率83.9％，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75-7.69(m,1H),7.68-7.64(m,1H),7.63-7.58(m,1H),7.50-7.47(m,1H),7.46-7.41(m,1H),6.40-6.30(m,1H),5.47-5.41(m,2H),3.95-3.86(m,3H)；ESI-MS(m/z)：262.1[M+H]+。
步骤b)：4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇的制备
在0℃将硼氢化钠(2.32g，61.248mmol)和氯化钙(2.55g，22.968mmol)加入4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲酸甲酯(4.0g，15.312mmol)的四氢呋喃(40mL)溶液中，0℃搅拌反应5h，反应液在0℃用氯化铵水溶液(100mL)淬灭，用乙酸乙酯(200mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，所得粗品用甲基叔丁基醚打浆纯化，得4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇，收率82.3％，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93-7.89(m,1H),7.77-7.71(m,1H),7.62-7.57(m,1H),7.49-7.43(m,2H),6.38-6.33(m,1H),5.45-5.38(m,2H),4.99-4.93(m,2H)，ESI-MS(m/z)：234.1[M+H]+。
步骤c)：4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇甲磺酸酯的制备
将甲磺酰氯(0.786mL，10.146mmol)滴加至4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇(1.5g，6.431mmol)和三乙胺(1.79mL，12.862mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中，35℃反应8h，反应结束后，将反应液倾入冰水(50mL)中，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(100mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇甲磺酸酯，无需纯化直接用于下一步反应。
步骤d)：4-(叔丁基)-2-乙基-1-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸的制备
将4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇甲磺酸酯(1.8g，5.782mmol)、1H-咪唑-2-甲酸乙酯-4-甲酸叔丁酯(1.32g，5.493mmol)、碳酸钾(2.0g，14.455mmol)和乙腈(9mL)加入反应瓶中，50℃搅拌反应5h，反应结束后减压蒸除溶剂，残余物加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，所得粗品经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得4-(叔丁基)2-乙基1-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸，收率36.8％，ESI-MS(m/z)：456.2[M+H]+。
步骤e)：4-(叔丁基)2-乙基1-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-氨基苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸的制备
在20℃将锌粉(1.72g，26.346mmol)加入4-(叔丁基)2-乙基1-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸(1.2g，2.635mmol)和氯化铵(1.41g，26.346mmol)的乙醇(40mL)混合液中，25℃继续搅拌反应2h，反应结束后，过滤，滤液减压浓缩，所得粗品经制备型HPLC纯化，得4-(叔丁基)2-乙基1-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-氨基苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸，收率44.6％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74-7.72(m,1H),7.71-7.69(m,1H),7.44-7.41(m,1H),6.63-6.59(m,1H),6.51-6.48(m,1H),6.39-6.33(m,1H),6.27-6.22(m,1H),5.42-5.37(m,2H),5.33-5.27(m,2H),5.18-5.13(m,2H),4.33-4.25(m,2H),1.60-1.40(m,9H),1.30-1.24(m,3H)；ESI-MS(m/z)：426.3[M+H]+。
步骤f)：8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000161
-2-甲酸叔丁酯的制备
将4-(叔丁基)2-乙基1-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-氨基苄基)-1H-咪唑-2,4-二羧酸(500mg，1.175mmol)、叔丁醇钾(165mg，1.469mmol)和DMF(5mL)加入反应瓶中，25℃搅拌反应10h，反应结束后，加水(20mL)淬灭，用二氯甲烷(20mL×4)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得白色固体，粗品收率67.2％，无需纯化直接用于下一步反应，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.87-10.71(m,1H),8.56-8.54(m,1H),7.99-7.97(m,1H),7.80-7.76(m,1H),7.46-7.43(m,1H),7.36-7.32(m,1H),7.05-7.02(m,1H),6.99-6.95(m,1H),6.27-6.24(m,1H),5.32-5.29(m,2H),5.28-5.24(m,2H),1.49-1.45(m,9H)；ESI-MS(m/z)：380.3[M+H]+。
步骤g)：8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000162
-2-甲酸叔丁酯的制备
在25℃将BH3.THF(2.64mL，2.635mmol)滴加至8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000163
-2-甲酸叔丁酯(200mg，0.527mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中，50℃反应2h，加甲醇(5mL)淬灭，减压浓缩，得黄色固体，无需纯化直接用于下一步；ESI-MS(m/z)：366.2[M+H]+。
步骤h)：8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000164
-2-羧酸的制备
将8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000165
-2-甲酸叔丁酯(150mg，0.410mmol)和8N盐酸(2.05mL)加入反应瓶中，升温至60℃反应2h，反应结束后，减压蒸除溶剂，制备HPLC纯化，得8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000173
-2-羧酸，收率70.4％；ESI-MS(m/z)：310.2[M+H]+。
步骤i)：8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000174
-2-甲酰胺的制备
将8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000175
-2-羧酸(100mg，0.289mmol)、5-(氨甲基)-4,6-二甲基吡啶-2-二胺二盐酸盐(71mg，0.318mmol)、HBTU(153mg，0.404mmol)、三乙胺(0.12mL，0.867mmol)和DMF(1mL)加入反应瓶中，室温搅拌反应1h，反应结束后，减压浓缩，残余物经制备HPLC纯化，得8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000176
-2-甲酰胺，收率41.9％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.56-13.45(m,1H),8.30-8.22(m,1H),7.76-7.74(m,1H),7.73-7.71(m,1H),7.68-7.60(m,2H),7.46-7.40(m,1H),7.00-6.96(m,1H),6.61-6.59(m,1H),6.43-6.39(m,2H),6.25-6.22(m,1H),5.33-5.30(m,2H),5.15-5.13(m,2H),4.43-4.41(m,2H),4.30-4.28(m,2H),2.51-2.51(m,3H),2.38-2.35(m,3H)；ESI-MS(m/z)：443.2[M+H]+。
实施例3
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000177
-2-甲酰胺(化合物3)的制备
Figure BDA0002844757160000171
操作过程同实施例2，只是将步骤a中起始原料1H-吡唑用4-甲基-1H-吡唑替代，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000178
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18(brs,1H),7.70(s,1H),7.45-7.44(m,3H),7.26(s,1H),6.96(d,J＝7.6Hz,1H),6.60(s,1H),6.41-6.38(m,2H),5.30(s,2H),5.04(s,2H),4.40(s,2H),4.28(d,J＝6.0Hz,2H),2.51(s,3H),2.37(s,3H),1.97(s,3H)；ESI-MS(m/z)：457.1[M+H]+。
实施例4
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000179
-2-甲酰胺(化合物4)的制备
Figure BDA0002844757160000172
操作过程同实施例2，只是将步骤a中起始原料1H-吡唑用4-氟-1H-吡唑替代，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600001710
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(brs,1H),8.01(s,1H),7.95(s,1H),7.50(d,J＝3.6Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),7.07-7.01(m,2H),6.50(s,1H),6.32-6.29(m,2H),5.32(s,2H),5.14(s,2H),4.51(s,2H),4.28(d,J＝6.0Hz,2H),2.51(s,3H),2.37(s,3H)；ESI-MS(m/z)：461.3[M+H]+。
实施例5
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000184
-2-甲酰胺(化合物5)的制备
Figure BDA0002844757160000181
操作过程同实施例2，只是将步骤a中起始原料1H-吡唑用3,5-二甲基-1H-吡唑替代，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000185
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.79(s,1H),7.12(d,J＝7.6Hz,1H),6.68(s,1H),6.50-6.45(m,2H),5.96(s,1H),5.35(s,2H),5.14(s,2H),4.51(s,2H),4.48(s,2H),2.58(s,3H),2.46(s,3H),2.20(s,3H),2.18(s,3H)；ESI-MS(m/z)：471.3[M+H]+。
实施例6
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000186
-2-甲酰胺(化合物6)的制备
Figure BDA0002844757160000182
操作过程同实施例2，只是将步骤a中起始原料1H-吡唑用吡啶-2(1H)-酮替代，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000187
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(t,J＝5.2Hz,1H),7.73(s,1H),7.64(dd,J1＝1.8,J2＝6.8Hz,1H),7.59(brs,2H),7.40(m,1H),6.98(d,J＝7.6Hz,1H),6.60(s,1H),6.49-6.45(m,2H),6.38(d,J＝8.8Hz,1H),6.20(dt,J1＝1.2,J2＝6.7Hz,1H),5.31(s,2H),4.91(s,2H),4.41(s,2H),4.29(d,J＝5.2Hz,2H),2.49-2.49(m,3H),2.36(s,3H)；ESI-MS(m/z)：470.2[M+H]+。
实施例7
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000188
-2-甲酰胺(化合物7)的制备
Figure BDA0002844757160000183
操作过程同实施例2，只是将步骤a中起始原料1H-吡唑用噁唑烷-2-酮替代，将碳酸钾用NaH替代，将乙腈用四氢呋喃替代，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000189
-2-甲酰胺；1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.68(s,1H),7.10(d,J＝8.0Hz,1H),6.58(s,1H),6.48-6.40(m,2H),5.84(s,1H),5.35(s,2H),5.10(s,2H),4.53(dd,J1＝7.6,J2＝6.4Hz,2H),4.49(s,2H),4.31(s,2H),4.13(dd,J1＝7.6,J2＝6.4Hz,2H),2.58(s,3H),2.41(s,3H)；ESI-MS(m/z)：462.3[M+H]+。
实施例8
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000193
-2-甲酰胺(化合物8)的制备
Figure BDA0002844757160000191
操作过程同实施例2，只是将步骤a中起始原料1H-吡唑用3-氮杂双环[3.1.0]己-2-酮替代，将碳酸钾用NaH替代，将乙腈用四氢呋喃替代，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000194
-2-甲酰胺；1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.91(s,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,1H),6.68(s,1H),6.60(d,J＝7.6Hz,1H),6.45(s,1H),5.37(s,2H),5.09(s,2H),4.50(s,2H),4.39-4.36(m,2H),3.62-3.48(m,1H),3.17-3.12(m,1H),2.58(s,3H),2.46(s,3H),1.99-1.96(m,1H),1.83-1.78(m,1H),1.10-1.03(m,1H),0.58-0.53(m,1H)；ESI-MS(m/z)：472.2[M+H]+。
实施例9
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-苯胺基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000195
-2-甲酰胺(化合物9)的制备
Figure BDA0002844757160000192
步骤a)：2-硝基-4-(苯胺基)苯甲酸甲酯的制备
将4-溴-2-硝基苯甲酸甲酯(5.0g，19.228mmol)、苯胺(1.97g，21.151mmol)、碳酸铯(9.40g，28.842mmol)、二环己基[3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基[1,1'-联苯]-2-基]膦(BrettPhos，516mg，0.961mmol)和Pd2(dba)3(880mg，0.961mmol)加入反应瓶中，氩气置换出反应瓶中空气后加无水四氢呋喃(100mL)，加毕，氩气保护下升温至回流反应2h，反应结束后，减压浓缩，残余物加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和氯化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得2-硝基-4-(苯胺基)苯甲酸甲酯，收率75.6％，ESI-MS(m/z)：273.1[M+H]+。步骤b-i)：N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-苯胺基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000203
-2-甲酰胺的制备
操作过程同实施例2中的步骤b-i，只是将实施例2中的4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲酸甲酯用相应的2-硝基-4-(苯胺基)苯甲酸甲酯替代，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-苯胺基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000204
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.02(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.12(d,J＝7.6Hz,1H),7.08-7.04(m,3H),6.68(s,1H),6.50-6.45(m,2H),5.30(s,2H),4.89(s,2H),4.47(s,2H),2.51-49(m,3H),2.41(m,3H)；ESI-MS(m/z)：454.3[M+H]+。
实施例10
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000205
-2-甲酰胺(化合物10)的制备
Figure BDA0002844757160000201
操作过程同实施例9，只是分别将步骤a中的苯胺用苯酚替代，碳酸铯用磷酸钾替代，二环己基[3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基[1,1'-联苯]-2-基]膦用(2-联苯基)二叔丁基膦替代，Pd2(dba)3用Pd(OAc)2替代，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000206
-2-甲酰胺；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.19(s,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,2H),7.16(d,J＝7.6Hz,1H),7.08-7.04(m,3H),6.65(s,1H),6.50-6.45(m,2H),5.27(s,2H),4.81(s,2H),4.27(s,2H),2.56(s,3H),2.40(s,3H)；ESI-MS(m/z)：455.3[M+H]+。
实施例11
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-(苄胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000207
-2-甲酰胺(化合物11)的制备
Figure BDA0002844757160000202
操作过程同实施例9，只是分别将步骤a中的苯胺用苄胺替代，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-(苄胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000208
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.91(s,1H),7.31-7.26(m,5H),7.12(d,J＝7.6Hz,1H),6.68(s,1H),6.57(d,J＝7.6Hz,1H),6.41(s,1H),5.30(s,2H),4.89(s,2H),4.47(s,2H),4.32(s,2H),2.47(s,3H),2.38(s,3H)；ESI-MS(m/z)：468.3[M+H]+。
实施例12
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-(苄氧基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000212
-2-甲酰胺(化合物12)的制备
Figure BDA0002844757160000211
步骤a)：4-(苄氧基)-2-硝基苯甲酸甲酯的制备
将4-羟基-2-硝基苯甲酸甲酯(5.0g，25.361mmol)、苯甲醇(2.74g，25.361mmol)、三苯基膦(7.32g，27.897mmol)和无水四氢呋喃(100mL)加入反应瓶中，以氩气置换瓶中空气，在0℃条件下缓慢加入偶氮二甲酸二乙酯(4.86g，27.897mmol)，升温至室温搅拌反应过夜，反应结束后，减压浓缩，所得粗品以乙酸乙酯(200mL)溶解，依次用水(100mL)和饱和氯化钠水溶液(80mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得4-(苄氧基)-2-硝基苯甲酸甲酯，收率30.2％，1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(d,J＝7.6Hz,1H),7.50-7.27(m,5H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),7.15(dd,J1＝7.6Hz,J2＝2.0Hz,1H),5.14(s,2H),3.88(s,3H)；ESI-MS(m/z)：288.1[M+H]+。
步骤b-i)：N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-(苄氧基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000213
-2-甲酰胺的制备
操作过程同实施例2中的步骤b-i，只是将实施例2中的4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲酸甲酯用相应的4-(苄氧基)-2-硝基苯甲酸甲酯替代，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-(苄氧基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000214
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.01(s,1H),7.48-7.27(m,5H),7.16(d,J＝7.6Hz,1H),6.58(s,1H),6.56(d,J＝7.6Hz,1H),6.43(s,1H),5.30(s,2H),5.12(s,2H),4.89(s,2H),4.47(s,2H),2.56(s,3H),2.42(s,3H)；ESI-MS(m/z)：469.3[M+H]+。
实施例13
N-((1-氨基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000223
-2-甲酰胺(化合物13)的制备
Figure BDA0002844757160000221
操作过程同实施例2，只是分别将步骤a中的1H-吡唑用4-甲基-1H-吡唑替代，将步骤i中的5-(氨甲基)-4,6-二甲基吡啶-2-二胺二盐酸盐用6-(氨甲基)异喹啉-1-胺替代，得N-((1-氨基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000224
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90(brs,1H),8.72(t,J＝6.4Hz,1H),8.47(d,J＝8.4Hz,1H),7.75(s,2H),7.68(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(d,J＝7.20Hz,1H),7.45(s,1H),7.25-7.19(m,2H),6.97(d,J＝7.2Hz,1H),6.44-6.39(m,2H),5.35(s,2H),5.06-5.05(m,2H),4.59(brd,J＝5.60Hz,2H),4.44(s,2H),1.98(s,3H)；ESI-MS(m/z)：479.3[M+H]+。
实施例14
N-((1-氨基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000225
-2-甲酰胺(化合物14)的制备
Figure BDA0002844757160000222
操作过程同实施例2，只是分别将步骤a中的1H-吡唑用4-氟-1H-吡唑替代，将步骤i中的5-(氨甲基)-4,6-二甲基吡啶-2-二胺二盐酸盐用6-(氨甲基)异喹啉-1-胺替代，得N-((1-氨基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000226
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97-8.81(m,2H),8.59-8.47(m,1H),7.96(s,1H),7.91-7.87(m,1H),7.76(s,1H),7.60(s,1H),7.52(d,J＝7.2Hz,1H),7.48-7.41(m,2H),7.23(d,J＝6.8Hz,1H),7.04-6.97(m,1H),6.47-6.40(m,2H),5.36(s,2H),5.07(s,2H),4.58-4.44(m,4H)；ESI-MS(m/z)：483.3[M+H]+。
实施例15
N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000227
-2-甲酰胺(化合物15)的制备
Figure BDA0002844757160000231
步骤a)：7-甲氧基-1-((4-甲氧基苄基)氨基)异喹啉-6-甲腈的制备
将1-氯-7-甲氧基异喹啉-6-甲腈(900mg，4.116mmol)、4-甲氧基苄胺(2.26g，16.464mmol)和二氧六环(1mL)加入反应瓶中，氮气保护下升温至120℃反应12h，反应结束后，冷却至室温，加入甲基叔丁基醚(15mL)搅拌30min，过滤，滤饼减压真空干燥，得7-甲氧基-1-((4-甲氧基苄基)氨基)异喹啉-6-甲腈，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.07-8.03(m,2H),7.41(d,J＝8.8Hz,2H),7.01(s,1H),6.98-6.94(m,3H),5.20(brs,1H),4.77(d,J＝5.2Hz,2H),4.02(s,3H),3.85(s,3H)；ESI-MS(m/z)：320.1[M+H]+。
步骤b)：6-(氨甲基)-7-甲氧基-N-(4-甲氧基苄基)异喹啉-1-胺的制备
将7-甲氧基-1-((4-甲氧基苄基)氨基)异喹啉-6-甲腈(1.40g，4.384mmol)和甲醇(40mL)加入反应瓶中，搅拌溶解，加入氨水(40mL)和Raney-Ni(700mg)，反应液在30℃通氢气(50psi)反应12h，反应结束后，过滤，滤饼适量甲醇洗涤，合并滤液，减压浓缩，得6-(氨甲基)-7-甲氧基-N-(4-甲氧基苄基)异喹啉-1-胺，ESI-MS(m/z)：324.2[M+H]+。
步骤c)：6-(氨甲基)-7-甲氧基异喹啉-1-胺的制备
将6-(氨甲基)-7-甲氧基-N-(4-甲氧基苄基)异喹啉-1-胺(200mg，0.618mmol)和三氟乙酸(3mL)加入反应瓶中，氮气保护下升温至50℃反应5h，反应结束后，冷却至室温，加水搅拌30min，以二氯甲烷(15mL×3)萃取，水层加入浓盐酸(3mL)，减压浓缩除去大部分水，再加入适量甲苯共沸除水，得6-(氨甲基)-7-甲氧基异喹啉-1-胺，收率78.1％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18(brs,2H),8.50(brs,2H),8.19(s,1H),7.98(s,1H),7.63(d,J＝6.8Hz,1H),7.15(d,J＝6.8Hz,1H),4.15(s,2H),4.02(s,3H)；ESI-MS(m/z)：204.1[M+H]+。
步骤d)：N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000232
-2-甲酰胺的制备
以8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000233
-2-羧酸和6-(氨甲基)-7-甲氧基异喹啉-1-胺为原料，操作过程同实施例2中的步骤i，得N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000234
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92-8.73(m,2H),8.61-8.52(m,1H),7.96(s,1H),7.91-7.87(m,1H),7.78(s,1H),7.59(s,1H),7.52(d,J＝6.8Hz,1H),7.48-7.45(m,1H),7.23(d,J＝6.8Hz,1H),7.04-6.97(m,1H),6.47-6.40(m,2H),5.36(s,2H),5.07(s,2H),4.56-4.44(m,4H),4.06-3.96(m,3H)；ESI-MS(m/z)：513.2[M+H]+。
实施例16
N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000235
-2-甲酰胺(化合物16)的制备
Figure BDA0002844757160000241
以8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000244
-2-羧酸和6-(氨甲基)-7-甲氧基异喹啉-1-胺为原料，操作过程同实施例2中的步骤i，得N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000245
-2-甲酰胺；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88-8.71(m,2H),8.57-8.52(m,1H),8.01-7.94(m,1H),7.91-7.87(m,1H),7.78(s,1H),7.59-7.52(m,2H),7.52(d,J＝6.8Hz,1H),7.23(d,J＝6.8Hz,1H),7.04-6.97(m,1H),6.60(d,J＝7.6Hz,1H),6.47-6.40(m,2H),6.39(d,J＝7.6Hz,1H),5.31(s,2H),4.91(s,2H),4.41(s,2H),4.29(d,J＝5.2Hz,2H),4.00(s,3H)；ESI-MS(m/z)：522.3[M+H]+。
实施例17
N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000246
-2-甲酰胺(化合物17)的制备
Figure BDA0002844757160000242
以8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000247
-2-羧酸和6-(氨甲基)-7-甲氧基异喹啉-1-胺为原料，操作过程同实施例2中的步骤i，得N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000248
-2-甲酰胺；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.98(s,1H),7.63(d,J＝6.8Hz,1H),7.38(d,J＝7.6Hz,1H),7.15(d,J＝6.8Hz,1H),7.04-7.00(m,2H),5.36(s,2H),5.11(s,2H),4.56-4.49(m,4H),4.15(s,2H),4.03(dd,J1＝7.6,J2＝6.4Hz,2H),4.02(s,3H)；ESI-MS(m/z)：514.2[M+H]+。
实施例18
N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000249
-2-甲酰胺(化合物18)的制备
Figure BDA0002844757160000243
以8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002410
-2-羧酸和6-(氨甲基)-7-甲氧基异喹啉-1-胺为原料，操作过程同实施例2中的步骤i，得N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002411
-2-甲酰胺；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.19(s,1H),8.16-7.93(m,1H),7.98(s,1H),7.60(d,J＝6.8Hz,1H),7.38(d,J＝7.6Hz,1H),7.15(d,J＝6.8Hz,1H),7.04-6.84(m,2H),5.36(s,2H),5.11(s,2H),4.50(s,2H),4.39-4.36(m,2H),3.50-3.28(m,1H),3.14-3.0(m,1H),1.99-1.78(m,2H),1.10-1.03(m,1H),0.58-0.51(m,1H)；ESI-MS(m/z)：524.3[M+H]+。
实施例19
N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000254
-2-甲酰胺(化合物19)的制备
Figure BDA0002844757160000251
以N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000255
-2-羧酸和6-(氨甲基)-7-甲氧基异喹啉-1-胺为原料，操作过程同实施例2中的步骤i，得N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000256
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：484.3[M+H]+。
实施例20
N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000257
-2-甲酰胺(化合物20)的制备
Figure BDA0002844757160000252
以N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000258
-2-羧酸和6-(氨甲基)-7-甲氧基异喹啉-1-胺为原料，操作过程同实施例2中的步骤i，得N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000259
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：506.3[M+H]+。
实施例21
N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002510
-2-甲酰胺(化合物21)的制备
Figure BDA0002844757160000253
以N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002511
-2-羧酸和6-(氨甲基)-7-甲氧基异喹啉-1-胺为原料，操作过程同实施例2中的步骤i，得N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002512
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：507.3[M+H]+。
实施例22
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000263
-2-甲酰胺(化合物22)的制备
Figure BDA0002844757160000261
步骤a)：8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000264
-2-羧酸的制备
将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000265
-2-甲酸叔丁酯(350mg，0.890mmol)和5N盐酸(0.71mL)加入反应瓶中，升温至45℃反应6h，反应结束后，减压蒸除溶剂，所得粗品直接用于下一步反应，收率86.6％；ESI-MS(m/z)：338.1[M+H]+。
步骤b)：N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000266
-2-甲酰胺的制备
将N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000267
-2-羧酸(200mg，0.593mmol)、5-(氨甲基)-4,6-二甲基吡啶-2-二胺(95.6mg，0.652mmol)、HATU(338mg，0.890mmol)、三乙胺(0.17mL，1.186mmol)和DMF(4mL)加入反应瓶中，室温搅拌反应5h，反应结束后，减压浓缩，残余物经制备HPLC纯化，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000268
-2-甲酰胺，收率58.5％，1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.01(s,1H),7.95(d,J＝2.0Hz,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,1H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.01(s,1H),6.72(s,1H),6.52(s,1H),5.55(s,2H),5.42(s,2H),4.51(s,2H),2.61(s,3H),2.49(s,3H),2.42(s,3H)；ESI-MS(m/z)：471.3[M+H]+。
实施例23
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000269
-2-甲酰胺(化合物23)的制备
Figure BDA0002844757160000262
以8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002610
-2-甲酸叔丁酯为原料，其他操作过程同实施例22，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002611
-2-甲酰胺；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.09(d,J＝4.0Hz,1H),8.01(s,1H),7.97(d,J＝2.0Hz,1H),7.53(d,J＝4.0Hz,1H),7.46(d,J＝7.8Hz,1H),7.07(d,J＝7.6Hz,1H),7.01(s,1H),5.35(s,2H),5.07(s,2H),4.56-4.44(m,4H),2.51(s,3H),2.41(s,3H)；ESI-MS(m/z)：475.3[M+H]+。
实施例24
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000274
-2-甲酰胺(化合物24)的制备
Figure BDA0002844757160000271
以11-氧代-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000275
-2-甲酸叔丁酯为原料，其他操作过程同实施例22，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000276
-2-甲酰胺；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(brs,1H),8.17(m,1H),7.75(s,1H),7.64-7.60(m,1H),7.60(m,2H),7.40(m,1H),6.98(d,J＝7.6Hz,1H),6.59(s,1H),6.44-6.40(m,2H),6.38(d,J＝7.6Hz,1H),6.20(dt,J1＝1.2,J2＝6.8Hz,1H),5.31(s,2H),4.41(s,2H),4.29(d,J＝5.2Hz,2H),2.49(s,3H),2.31(s,3H)；ESI-MS(m/z)：484.3[M+H]+。
实施例25
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000277
-2-甲酰胺(化合物25)的制备
Figure BDA0002844757160000272
以11-氧代-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000278
-2-甲酸叔丁酯为原料，其他操作过程同实施例22，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000279
-2-甲酰胺；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.01(s,1H),7.50-7.27(m,1H),6.58(s,1H),6.48-6.40(m,2H),5.84(s,1H),5.35(s,2H),5.10(s,2H),4.53(dd,J1＝7.6,J2＝6.4Hz,2H),4.49(s,2H),4.31(s,2H),4.13(dd,J1＝7.6,J2＝6.4Hz,2H),2.58(s,3H),2.41(s,3H)；ESI-MS(m/z)：476.3[M+H]+。
实施例26
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002710
-2-甲酰胺(化合物26)的制备
Figure BDA0002844757160000273
11-氧代-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002711
-2-甲酸叔丁酯为原料，其他操作过程同实施例22，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000284
-2-甲酰胺；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.06(s,1H),7.11(d,J＝7.6Hz,1H),6.80(s,1H),6.64(d,J＝7.6Hz,1H),6.43(s,1H),5.32(s,2H),4.99(s,2H),4.51(s,2H),4.39-4.31(m,2H),3.70-3.56(m,1H),3.17-3.12(m,1H),2.52(s,3H),2.40(s,3H),1.99-1.96(m,1H),1.83-1.78(m,1H),1.21-1.16(m,1H),0.57-0.53(m,1H)；ESI-MS(m/z)：486.2[M+H]+。
实施例27
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000285
-2-甲酰胺(化合物27)的制备
Figure BDA0002844757160000281
以11-氧代-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000286
-2-甲酸叔丁酯为原料，其他操作过程同实施例22，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000287
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：446.3[M+H]+。
实施例28
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000288
-2-甲酰胺(化合物28)的制备
Figure BDA0002844757160000282
以11-氧代-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000289
-2-甲酸叔丁酯为原料，其他操作过程同实施例22，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002810
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：468.3[M+H]+。
实施例29
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002811
-2-甲酰胺(化合物29)的制备
Figure BDA0002844757160000283
以11-氧代-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002812
-2-甲酸叔丁酯为原料，其他操作过程同实施例22，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002813
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：469.2[M+H]+。
实施例30
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000293
-2-甲酰胺(化合物30)的制备
Figure BDA0002844757160000291
步骤a)：8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000294
-2-羧酸的制备
将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000295
-2-羧酸(350mg，1.082mmol)、MnO2(941mg，10.824mmol)和二氯乙烷(10mL)加入反应瓶中，升温至68℃反应5h，反应结束后，过滤，减压浓缩，所得粗品采用制备型HPLC纯化，得8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000296
-2-羧酸，收率57.5％；ESI-MS(m/z)：322.1[M+H]+。
步骤b)：N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000297
-2-甲酰胺
以8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000298
-2-羧酸为原料，操作过程同实施例22中的步骤b，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000299
-2-甲酰胺，收率14.5％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,1H),7.92(s,1H),7.77(t,J＝5.2Hz,1H),7.42-7.31(m,2H),7.16-6.99(m,2H),6.08(d,J＝3.6Hz,2H),5.67-5.57(m,2H),5.33(s,2H),5.19(s,2H),4.30(d,J＝5.2Hz,2H),2.28(s,3H),2.19(s,3H),2.16(s,3H)；ESI-MS(m/z)：455.3[M+H]+。
实施例31
8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002910
-2-甲酰胺(化合物31)的制备
Figure BDA0002844757160000292
以8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002911
-2-羧酸为原料，其他操作过程同实施例30，得8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002912
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49-8.47(m,2H),7.92(s,1H),7.84(s,1H),7.73-7.58(m,2H),7.49-7.43(m,1H),7.40-7.34(m,1H),7.23-7.16(m,2H),6.59(s,1H),6.26(s,1H),5.37(s,2H),5.20(s,2H),4.29(d,J＝5.2Hz2H),2.49(s,3H),2.33(s,3H)；ESI-MS(m/z)：441.3[M+H]+。
实施例32
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600002913
-2-甲酰胺(化合物32)的制备
Figure BDA0002844757160000301
以8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000305
-2-羧酸为原料，其他操作过程同实施例30，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000306
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：459.3[M+H]+。
实施例33
N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000307
-2-甲酰胺(化合物33)的制备
Figure BDA0002844757160000302
以8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000308
-2-羧酸和6-(氨甲基)-7-甲氧基异喹啉-1-胺为原料，其他操作过程同实施例22中的步骤b，得N-((1-氨基-7-甲氧基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000309
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：511.3[M+H]+。
实施例34
N-((1-氨基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003010
-2-甲酰胺(化合物34)的制备
Figure BDA0002844757160000303
以8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003011
-2-羧酸和6-(氨甲基)异喹啉-1-胺为原料，其他操作过程同实施例22中的步骤b，得N-((1-氨基异喹啉-6-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003012
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：481.2[M+H]+。
实施例35
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003013
-2-甲酰胺(化合物35)的制备
Figure BDA0002844757160000304
以8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003014
-2-羧酸为原料，其他操作过程同实施例30，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003015
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：468.3[M+H]+。
实施例36
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000315
-2-甲酰胺(化合物36)的制备
Figure BDA0002844757160000311
以8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000316
-2-羧酸为原料，其他操作过程同实施例30，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000317
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：460.3[M+H]+。
实施例37
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000318
-2-甲酰胺(化合物37)的制备
Figure BDA0002844757160000312
以8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000319
-2-羧酸为原料，其他操作过程同实施例30，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003110
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：470.3[M+H]+。
实施例38
N-((6-氨基-2,4-二甲氨基吡啶-3-基)甲基)-8-(吡咯烷-1-基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003111
-2-甲酰胺(化合物38)的制备
Figure BDA0002844757160000313
以8-(吡咯烷-1-基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003112
-2-羧酸为原料，其他操作过程同实施例30，得N-((6-氨基-2,4-二甲氨基吡啶-3-基)甲基)-8-(吡咯烷-1-基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003113
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：430.3[M+H]+。
实施例39
N-((6-氨基-2,4-二甲氨基吡啶-3-基)甲基)-8-(苯胺基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003114
-2-甲酰胺(化合物39)的制备
Figure BDA0002844757160000314
以8-(苯胺基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003115
-2-羧酸为原料，其他操作过程同实施例30，得N-((6-氨基-2,4-二甲氨基吡啶-3-基)甲基)-8-(苯胺基)-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000323
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：452.3[M+H]+。
实施例40
N-((6-氨基-2,4-二甲氨基吡啶-3-基)甲基)-8-苯氧基-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000324
-2-甲酰胺(化合物40)的制备
Figure BDA0002844757160000321
以8-苯氧基-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000325
-2-羧酸为原料，其他操作过程同实施例30，得N-((6-氨基-2,4-二甲氨基吡啶-3-基)甲基)-8-苯氧基-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000326
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：453.3[M+H]+。
实施例41
N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000327
-2-甲酰胺(化合物41)的制备
Figure BDA0002844757160000322
步骤a)：(4-((8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000328
-2-甲酰胺)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000329
-2-羧酸(100mg，0.309mmol)、(4-(氨甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.464mmol)、三乙胺(78mg，0.773mmol)、HBTU(176mg，0.464mmol)和DMF(3mL)加入反应瓶中，室温搅拌反应1h，反应结束后，反应液加水稀释，以乙酸乙酯(30mL)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(10mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得白色固体，无需纯化直接用于下一步反应；ESI-MS(m/z)：542.2[M+H]+。
步骤b)：N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003210
-2-甲酰胺
将(4-((8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003211
-2-甲酰胺)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，0.332mmol)和盐酸(5mL,6N)加入反应瓶中，室温搅拌反应1h，反应结束后，减压浓缩，所得粗品经制备型HPLC纯化，得N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003212
-2-甲酰胺，收率22.5％，1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.67(s,1H),7.38(d,J＝1.6Hz,1H),7.33-7.25(m,4H),7.06(d,J＝7.6Hz,1H),6.41-6.38(m,2H),6.10(d,J＝1.6Hz,1H),5.28(s,2H),5.18(s,2H),4.51(s,2H),4.44(s,2H),3.79(d,J＝2.8Hz,2H),2.20(s,3H)；ESI-MS(m/z)：442.3[M+H]+。
实施例42
N-(4-(1-氨基环丙基)苄基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000334
-2-甲酰胺(化合物42)的制备
Figure BDA0002844757160000331
以8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000335
-2-羧酸和1-(4-(氨甲基)苯基)环丙基-1-胺为原料，其他操作过程同实施例22中的步骤b，得N-(4-(1-氨基环丙基)苄基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000336
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.79(s,1H),7.42(d,J＝1.6Hz,1H),7.33-7.27(m,4H),7.06(d,J＝7.6Hz,1H),6.41-6.38(m,2H),6.10(m,1H),5.28(s,2H),5.11(s,2H),4.51(s,2H),3.79(d,J＝2.8Hz,2H),2.21(s,3H),1.22(m,2H),1.10(m,2H)；ESI-MS(m/z)：468.3[M+H]+。
实施例43
N-(4-(氨甲基)苯基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000337
-2-甲酰胺(化合物43)的制备
Figure BDA0002844757160000332
操作过程同实施例41，只是将(4-(氨甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯用(4-氨基苄基)氨基甲酸叔丁酯替代，得N-(4-(氨甲基)苯基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000338
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.68(s,1H),7.58(d,J＝7.6Hz,2H),7.38(d,J＝7.6Hz,2H),7.32(d,J＝2.0Hz,1H),7.06(d,J＝7.6Hz,1H),6.41-6.38(m,2H),6.06(d,J＝2.0Hz,1H),5.31(s,2H),5.18(s,2H),4.51(s,2H),4.37(s,2H),2.21(s,3H)；ESI-MS(m/z)：428.3[M+H]+。
实施例44
N-((1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000339
-2-甲酰胺(化合物44)的制备
Figure BDA0002844757160000333
以8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003310
-2-羧酸和(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-基)甲胺为原料，操作过程同实施22中的步骤b，得N-((1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000344
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：453.3[M+H]+。
实施例45
N-(2-(3-氯苯氧基)乙基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000345
-2-甲酰胺(化合物45)的制备
Figure BDA0002844757160000341
以8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000346
-2-羧酸和2-(3-氯苯氧基)乙基-1-胺为原料，操作过程同实施22中的步骤b，得N-(2-(3-氯苯氧基)乙基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000347
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.96(t,J＝6.0Hz,1H),7.77-7.59(m,1H),7.37-7.18(m,2H),7.02(t,J＝2.0Hz,1H),7.00-6.88(m,3H),6.33-6.26(m,2H),6.23(t,J＝4.4Hz,1H),6.02(d,J＝0.8Hz,1H),5.28(s,2H),5.15-4.99(m,2H),4.39(d,J＝5.2Hz,2H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),3.54(q,J＝5.6Hz,2H),2.21-2.07(m,3H)；ESI-MS(m/z)：477.2[M+H]+。
实施例46
N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000348
-2-甲酰胺(化合物46)的制备
Figure BDA0002844757160000342
操作过程同实施例41，只是将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000349
-2-羧酸用8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003410
-2-羧酸替代，得N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003411
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：446.3[M+H]+。
实施例47
N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003412
-2-甲酰胺(化合物47)的制备
Figure BDA0002844757160000343
操作过程同实施例41，只是将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003413
-2-羧酸用8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003414
-2-羧酸替代，得N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003415
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：455.3[M+H]+。
实施例48
N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000354
-2-甲酰胺(化合物48)的制备
Figure BDA0002844757160000351
操作过程同实施例41，只是将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000355
-2-羧酸用8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000356
-2-羧酸替代，得N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000357
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：447.3[M+H]+。
实施例49
N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000358
-2-甲酰胺(化合物49)的制备
Figure BDA0002844757160000352
操作过程同实施例41，只是将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000359
-2-羧酸用8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003510
-2-羧酸替代，得N-(4-(氨甲基)苄基)-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003511
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：457.3[M+H]+。
实施例50
N-(4-(氨甲基)苄基)-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003512
-2-甲酰胺(化合物50)的制备
Figure BDA0002844757160000353
操作过程同实施例41，只是将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003513
-2-羧酸用8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003514
-2-羧酸替代，得N-(4-(氨甲基)苄基)-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003515
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：417.3[M+H]+。
实施例51
N-(4-(氨甲基)苄基)-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003516
-2-甲酰胺(化合物51)的制备
Figure BDA0002844757160000361
操作过程同实施例41，只是将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000364
-2-羧酸用8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000365
-2-羧酸替代，得N-(4-(氨甲基)苄基)-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000366
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：439.3[M+H]+。
实施例52
N-(4-(氨甲基)苄基)-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000367
-2-甲酰胺(化合物52)的制备
Figure BDA0002844757160000362
操作过程同实施例41，只是将8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000368
-2-羧酸用8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000369
-2-羧酸替代，得N-(4-(氨甲基)苄基)-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003610
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：440.3[M+H]+。
实施例53
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003611
-2-甲酰胺(化合物53)的制备
Figure BDA0002844757160000363
步骤a)：3-溴-1-(4-(氯甲基)-3-硝基苄基)-5-甲基-1H-吡唑的制备
将甲磺酰氯(6.21mL，54.209mmol)滴加至(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇(8.0g，24.529mmol)和三乙胺(10.2mL，73.587mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中，25℃反应12h，反应结束后，反应液用冰水(100mL)稀释，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(80mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得3-溴-1-(4-(氯甲基)-3-硝基苄基)-5-甲基-1H-吡唑，无需纯化直接用于下一步反应；ESI-MS(m/z)：344.0[M+H]+。
步骤b)：1-(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-吡咯-2,4-二甲酸乙酯的制备
将1H-吡咯-2,4-二甲酸乙酯(2.45g，11.608mmol)、(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苯甲醇(5.0g，14.510mmol)、碳酸铯(14.2g，43.530mmol)和KI(240mg，1.451mmol)的DMF(50mL)溶液中，25℃反应5h，反应结束后，反应液用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(80mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得1-(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-吡咯-2,4-二甲酸乙酯，无需纯化直接用于下一步反应；ESI-MS(m/z)：519.1[M+H]+。步骤c-e)：8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000371
-2-甲酸乙酯的制备
以1-(4-((3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-吡咯-2,4-二甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例1中的步骤k-m，得8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000372
-2-甲酸乙酯；ESI-MS(m/z)：365.2[M+H]+。
步骤f)：8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000373
-2-羧酸的制备
将LiOH.H2O(25.3mg，0.602mmol)的水溶液(1mL)加入8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000374
-2-甲酸乙酯(110mg，0.301mmol)的甲醇(1mL)/四氢呋喃(1mL)溶液中，25℃反应12h，反应结束后，反应液冷冻干燥，所得固体以二氯甲烷/甲醇混合液(20mL，1:1)溶解，过滤除去不溶物，滤液减压浓缩，得8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000375
-2-羧酸；ESI-MS(m/z)：337.2[M+H]+。
步骤g)：N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000376
-2-甲酰胺的制备
以8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000377
-2-羧酸和5-(氨甲基)-4,6-二甲基吡啶-2-胺为原料，其他操作过程同实施例1中的步骤p，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000378
-2-甲酰胺，收率39.1％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),8.11(t,J＝4.8Hz,1H),7.48-7.59(m,3H),7.32-7.38(m,2H),7.21(d,J＝2.0Hz,1H),6.94(s,1H),6.84-6.89(m,1H),6.62(s,1H),6.07(s,1H),5.25(s,2H),5.17(s,2H),4.26(d,J＝4.8Hz,2H),2.49(br s,3H),2.36(s,3H),2.20(s,3H)；ESI-MS(m/z)：470.3[M+H]+。
实施例54
8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000379
-2-甲酰胺(化合物54)的制备
Figure BDA0002844757160000381
步骤a-b)：1-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-吡咯-2,4-二甲酸乙酯的制备
以(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基)苯甲醇为起始原料，其他操作过程同实施例53中的步骤a-b，得1-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-吡咯-2,4-二甲酸乙酯；ESI-MS(m/z)：427.2[M+H]+。
步骤c-d)：8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000383
-2-甲酸乙酯的制备
以1-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基苄基)-1H-吡咯-2,4-二甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例2中的步骤e-f，得8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000384
-2-甲酸乙酯；ESI-MS(m/z)：351.2[M+H]+。
步骤e-f)：8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000385
-2-甲酰胺的制备
以8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000386
-2-甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例53中的步骤f-g，得8-((1H-吡唑-1-基)甲基)-N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000387
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：456.3[M+H]+。
实施例55
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000388
-2-甲酰胺(化合物55)的制备
Figure BDA0002844757160000382
以(4-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基)苯甲醇为原料，其他操作过程同实施例54，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000389
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：470.3[M+H]+。
实施例56
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000395
-2-甲酰胺(化合物56)的制备
Figure BDA0002844757160000391
以(4-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-2-硝基)苯甲醇为原料，其他操作过程同实施例54，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-氟-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000396
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：474.3[M+H]+。
实施例57
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000397
-2-甲酰胺(化合物57)的制备
Figure BDA0002844757160000392
以1-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)吡啶-2(1H)-酮为原料，其他操作过程同实施例54，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000398
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：483.3[M+H]+。
实施例58
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11--二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000399
-2-甲酰胺(化合物58)的制备
Figure BDA0002844757160000393
以3-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)噁唑烷-2-酮为原料，其他操作过程同实施例54，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11--二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003910
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：475.3[M+H]+。
实施例59
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600003911
-2-甲酰胺(化合物59)的制备
Figure BDA0002844757160000394
以3-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-酮为原料，其他操作过程同实施例54，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000404
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：485.3[M+H]+。
实施例60
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000405
-2-甲酰胺(化合物60)的制备
Figure BDA0002844757160000401
以2-硝基-4-(吡咯烷-1-基)苯甲醇为原料，其他操作过程同实施例54，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000406
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：445.3[M+H]+。
实施例61
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000407
-2-甲酰胺(化合物61)的制备
Figure BDA0002844757160000402
以2-硝基-4-(苯胺基)苯甲醇为原料，其他操作过程同实施例54，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000408
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：467.3[M+H]+。
实施例62
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000409
-2-甲酰胺(化合物62)的制备
Figure BDA0002844757160000403
以2-硝基-4-(苯氧基)苯甲醇为原料，其他操作过程同实施例54，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-11-氧代-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004010
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：468.3[M+H]+。
实施例63
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004011
-2-甲酰胺(化合物63)的制备
Figure BDA0002844757160000411
步骤a)：8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000413
-2-甲酸乙酯的制备
以8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11--二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000414
-2-甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例1中的步骤n，得8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000415
-2-甲酸乙酯；ESI-MS(m/z)：351.2[M+H]+。步骤b-c)：N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000416
-2-甲酰胺的制备
以8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000417
-2-甲酸乙酯为原料，其他操作同实施例53中的步骤f-g，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000418
-2-甲酰胺，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.88-7.81(m,1H),7.62-7.41(m,2H),7.32-7.28(m,2H),6.93-6.87(m,1H),6.63-6.60(m,1H),6.31-6.28(m,1H),6.20-6.15(m,2H),6.04-6.00(m,1H),5.21-5.16(m,2H),5.08-5.03(m,2H),4.32-4.26(m,2H),4.25-4.20(m,2H),2.55-2.52(m,3H),2.41-2.35(m,3H),2.19-2.11(m,3H)；ESI-MS(m/z)：456.2[M+H]+。
实施例64
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000419
-2-甲酰胺(化合物64)的制备
Figure BDA0002844757160000412
以8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-11-氧代-10,11--二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004110
-2-甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例63，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004111
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：456.3[M+H]+。
实施例65
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004112
-2-甲酰胺(化合物65)的制备
Figure BDA0002844757160000421
以11-氧代-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000425
-2-甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例63，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000426
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：469.3[M+H]+。
实施例66
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000427
-2-甲酰胺(化合物66)的制备
Figure BDA0002844757160000422
以11-氧代-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000428
-2-甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例63，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000429
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：461.3[M+H]+。
实施例67
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004210
-2-甲酰胺(化合物67)的制备
Figure BDA0002844757160000423
以11-氧代-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004211
-2-甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例63，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((2-氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004212
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：471.3[M+H]+。
实施例68
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004213
-2-甲酰胺(化合物68)的制备
Figure BDA0002844757160000424
以11-氧代-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000434
-2-甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例63，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-(吡咯烷-1-基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000435
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：431.3[M+H]+。
实施例69
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000436
-2-甲酰胺(化合物69)的制备
Figure BDA0002844757160000431
以11-氧代-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000437
-2-甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例63，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-(苯胺基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000438
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：453.3[M+H]+。
实施例70
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)基)-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000439
-2-甲酰胺(化合物70)的制备
Figure BDA0002844757160000432
以11-氧代-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004310
-2-甲酸乙酯为原料，其他操作过程同实施例63，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)基)-8-苯氧基-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004311
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：454.3[M+H]+。
实施例71
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004312
-2-甲酰胺(化合物71)的制备
Figure BDA0002844757160000433
以8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-10,11-二氢-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004313
-2-羧酸为起始原料，其他操作过程同实施例30，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-((4-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA00028447571600004314
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：454.3[M+H]+。
实施例72
N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-苯基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000443
-2-甲酰胺(化合物72)的制备
Figure BDA0002844757160000441
以(3-硝基-[1,1'-联苯基]-4-基)甲醇为起始原料，其他操作过程同实施例2中的步骤c-i，得N-((6-氨基-2,4-二甲基吡啶-3-基)甲基)-8-苯基-10,11-二氢-5H-苯并[e]咪唑[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0002844757160000444
-2-甲酰胺；ESI-MS(m/z)：439.3[M+H]+。
实施例73
N-((R)-1-(((S)-1-((4-(氨甲基)苄基)氨基)-1-氧代-3-苯丙基-2-基)氨基)-3-(4-乙氧基苯基)-1-氧丙基-2-基)苯甲酰胺(化合物73)的制备
Figure BDA0002844757160000442
步骤a)：(R)-2-氨基-3-(4-乙氧基苯基)丙酸盐酸盐的制备
将(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-乙氧基苯基)丙酸(2.0g，6.465mmol)置于反应瓶中，加入自制的盐酸二氧六环溶液(5.3M，50mL)，室温反应3小时，过滤收集产生的白色固体，滤饼用二氧六环(20mL)，石油醚(50mL)，乙醚(10mL)洗涤，真空干燥得到白色固体产品，收率98.0％，ESI-MS(m/z)：210.1[M+H]+。
步骤b)：((苄氧)羰基)-D-苯丙氨酸的制备
将(R)-2-氨基-3-(4-乙氧基苯基)丙酸盐酸盐(500mg，2.035mmol)和氢氧化钠(179mg，4.478mmol)加入反应瓶中，加水(15mL)搅拌溶解，冷却至0℃，缓慢滴加氯甲酸苄酯(382mg，2.239mmol)的二氧六环溶液(15mL)，滴加完毕，室温搅拌反应过夜，反应结束后，蒸除溶剂，加水稀释(30mL)，再加入乙醚(30mL)萃取，弃去有机相，水层用1N盐酸水溶液调节pH＝3-4，以乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得((苄氧)羰基)-D-苯丙氨酸，收率99.0％，ESI-MS(m/z)：300.1[M+H]+。
步骤c)：(S)-(1-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)苄基)氨基)-1-氧-3-苯丙基-2-基)氨基甲酸苄酯的制备
将((苄氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(1.39g，4.655mmol)、(4-(氨甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，4.232mmol)、HATU(3.22g，8.464mmol)、三乙胺(1.77mL，12.696mmol)和干燥二氯甲烷(30mL)加入反应瓶中，氮气保护下室温搅拌反应4h，反应结束后，向反应液中加入二氯甲烷(50mL)和饱和氯化铵水溶液(100mL)萃取，水层再以二氯甲烷(50mL)萃取，合并有机层，依次用饱和碳酸钾水溶液(100mL)和饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得粗品分散到石油醚和乙酸乙酯混合液(v/v＝8:1，25mL)中，搅拌25min，抽滤，滤饼以相应的混合液洗涤，40℃减压真空干燥，得类白色固体，收率97.0％；ESI-MS(m/z)：518.3[M+H]+。
步骤d)：(S)-(4-((2-氨基-3-苯丙氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将(S)-(1-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)苄基)氨基)-1-氧-3-苯丙基-2-基)氨基甲酸苄酯(2.0g，3.864mmol)和甲醇(150mL)加入反应瓶中，搅拌混匀，加入Pd/C(400mg)，通氢气室温搅拌反应24h，反应结束后，过滤，滤饼用甲醇(100mL)洗涤，合并滤液，减压浓缩，得类白色固体，收率92.0％，ESI-MS(m/z)：384.3[M+H]+。
步骤e)：(4-((5R,8S)-8-苄基-5-(4-乙氧基苄基)-3,6,9-三氧代-1-苯基-2-氧-4,7,10-三氮十一烷-11-基)苄基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将((苄氧)羰基)-D-苯丙氨酸(257mg，0.860mmol)、(S)-(4-((2-氨基-3-苯丙氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.782mmol)、HATU(595mg，1.564mmol)、三乙胺(237mg，2.346mmol)和二氯甲烷加入反应瓶中(10mL)中，室温反应过夜，反应结束后，向反应液中加入二氯甲烷(100mL)稀释，依次用1N盐酸水溶液(100mL)、饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得粗品以石油醚/乙酸乙酯混合溶剂(9:1，v/v，50mL)打浆，过滤，减压真空干燥得类白色的固体，收率90.5％；ESI-MS(m/z)：709.4[M+H]+。
步骤f)：(4-(((S)-2-((R)-2-氨基-3-(4-乙氧基苯基)丙氨基)-3-苯丙氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将(4-((5R,8S)-8-苄基-5-(4-乙氧基苄基)-3,6,9-三氧代-1-苯基-2-氧-4,7,10-三氮十一烷-11-基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，0.705mmol)和甲醇(70mL)加入反应瓶中，搅拌溶解，加入Pd/C(100mg)，通氢气室温反应4小时，过滤，滤饼用甲醇(50mL)洗涤，合并滤液，减压浓缩，得白色固体，收率89.1％；ESI-MS(m/z)：575.4[M+H]+。
步骤g)：(4-(((S)-2-((R)-2-苯甲酰氨基-3-(4-乙氧基苯基)丙氨基)-3-苯丙氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将(4-(((S)-2-((R)-2-氨基-3-(4-乙氧基苯基)丙氨基)-3-苯丙氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(361mg，0.628mmol)、三乙胺(191mg，1.884mmol)和二氯甲烷(20mL)加入反应瓶中，搅拌混匀，缓慢滴加苯甲酰氯(106mg，0.754mmol)的二氯甲烷溶液(2mL)中，室温反应6小时，加入二氯甲烷(80mL)稀释，依次用饱和氯化铵(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至5mL，冷却，过滤析出的固体，滤饼用适量乙酸乙酯洗涤，减压真空干燥，得白色固体，收率57.1％；ESI-MS(m/z)：679.4[M+H]+。步骤h)：N-((R)-1-(((S)-1-((4-(氨甲基)苄基)氨基)-1-氧代-3-苯丙基-2-基)氨基)-3-(4-乙氧基苯基)-1-氧代丙基-2-基)苯甲酰胺的制备
将(4-(((S)-2-((R)-2-苯甲酰氨基-3-(4-乙氧基苯基)丙氨基)-3-苯丙氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.158mmol)和盐酸二氧六环溶液(3mL)加入反应瓶中，室温搅拌反应1.5h，反应结束后，减压蒸干，残余物加乙醇(2mL)超声粉碎打浆，抽滤，滤饼以少量乙醇洗涤，40℃减压真空干燥，得白色固体，收率83.0％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(t,J＝6.0Hz,1H),8.59(d,J＝8.4Hz,1H),8.50(d,J＝8.4Hz,1H),8.29(s,3H),7.81-7.65(m,2H),7.51(t,J＝7.6Hz,1H),7.46-7.33(m,4H),7.30-7.08(m,8H),6.76(d,J＝8.4Hz,2H),4.69-4.53(m,2H),4.40-4.21(m,2H),4.04-3.85(m,4H),3.06(dd,J1＝13.6Hz,J2＝4.8Hz,1H),2.83(dd,J1＝13.6,J2＝10.0Hz,1H),2.69(d,J＝7.6Hz,2H),1.27(t,J＝7.6Hz,3H)；ESI-MS(m/z)：579.3[M+H]+。
实施例74生物活性测试
1.人血浆激肽释放酶(Human PK)抑制活性测定
采用Johansen等(Johansen el al.,Int.J.Tiss.Reac.1986,8,185)报道的方法，并做出部分改进，反应液为10mM PBS,1mM EDTA,0.1％BSA,pH＝7.4。向384微孔板中依次加入0.4nM人血浆激肽释放酶(商购自Enzyme Research Laboratories)10μL，待测化合物溶液5μL，加毕混匀后，37℃孵育15min，向各孔加入5μL加反应底物N-Benzoyl-pro-phe-Arg-p-Nitroanilide(商购自sigma)(500μM)显色，用酶标仪动力学模式测定405nm处各孔的光密度(OD值)，与不加待测样品的空白孔比较，计算化合物对酶的抑制率[抑制率＝(1-样品组OD值/空白组OD值)x100％]，在Prism GraphPad中用四参数模式计算IC50值；每个化合物每次测定2个复孔，每组实验独立重复三次。测试数据如表1所示：
表1
Figure BDA0002844757160000461
Figure BDA0002844757160000471
Figure BDA0002844757160000481
2.人凝血酶(thrombin)抑制活性测定
采用H.C.Hemker等(Handbook of Synthetic Substrates)报道的方法，并做出部分改进，反应液为50mM Tris-HCl,pH＝8.3,130mM NaCl,0.5％BSA。向384微孔板中依次加入0.2nM人凝血酶(商购自Enzyme Research Laboratories)10μL，待测化合物溶液5μL，加毕混匀后，37℃毕孵育15min，向各孔加入5μL 75μM反应底物BOC-Val-Pro-AFC(商购自sigma)显色，用酶标仪动力学模式于380nm激发波长，500nm发射波长处测定各孔的荧光值，与不加待测样品的空白孔比较，计算化合物对酶的抑制率[抑制率＝(1-样品组荧光值/空白组荧光值)x100％]，在Prism GraphPad中用四参数模式计算IC50值；每个化合物每次测定2个复孔，每组实验独立重复三次。
3.胰蛋白酶(Trypsin)抑制活性测定
采用H.C.Hemker等(Handbook of Synthetic Substrates)报道的方法，并做出部分改进，反应液为200mM Tris-HCl,20mM CaCl2，pH＝7.8。向384微孔板中依次加入12.5nM胰蛋白酶(商购自Biovision)10μL，待测化合物溶液5μL，加毕混匀后，37℃孵育15min，向各孔加入5μL 200μM L-BAPA(商购自sigma)显色，用酶标仪动力学模式测定405nm处各孔的光密度(OD值)，与不加待测样品的空白孔比较，计算化合物对酶的抑制率[抑制率＝(1-样品组OD值/空白组OD值)x100％]，在Prism GraphPad中用四参数模式计算IC50值；每个化合物每次测定2个复孔，每组实验独立重复三次。
4.人凝血因子XIa(Factor XIa)抑制活性测定
采用H.C.Hemker等(Handbook_of_Synthetic_Subst)报道的方法，并做出部分改进，反应液为0.05M Tris/HCl,0.15M NaCl，BSA(0.1mg/ml)，pH＝8.0。向384微孔板中依次加入15nM人凝血因子XIa(商购自Enzyme Research Laboratories)10μL，待测化合物溶液5μL，加毕混匀后，37℃孵育15min，向各孔加入5μL 400μM反应底物N-Benzoyl-pro-phe-Arg-p-Nitroanilide(商购自sigma)显色，用酶标仪动力学模式测定405nm处各孔的光密度(OD值)，与不加待测样品的空白孔比较，计算化合物对酶的抑制率[抑制率＝(1-样品组OD值/空白组OD值)x100％]，在Prism GraphPad中用四参数模式计算IC50值；每个化合物每次测定2个复孔，每组实验独立重复三次。
5.人凝血因子Xa(Factor Xa)抑制活性测定
采用H.C.Hemker等(Handbook of Synthetic Substrates)报道的方法，并做出部分改进，反应液为0.05M Tris,0.1M NaCl，pH＝7.4。向384微孔板中依次加入3nM人凝血因子Xa(商购自Enzyme Research Laboratories)10μL，待测化合物溶液5μL，加毕混匀后，37℃孵育15min，向各孔加入5μL 400μM反应底物N-Benzoyl-Val-Gly-Arg p-nitroanilidehydrochloride显色，用酶标仪动力学模式测定405nm处各孔的光密度(OD值)，与不加待测样品的空白孔比较，计算化合物对酶的抑制率[抑制率＝(1-样品组OD值/空白组OD值)x100％]，在Prism GraphPad中用四参数模式计算IC50值；每个化合物每次测定2个复孔，每组实验独立重复三次。
6.人血纤维蛋白溶酶(plasmin)抑制活性测定
采用H.C.Hemker等(Handbook of Synthetic Substrates)报道的方法，并做出部分改进，反应液为0.05M Tris/HC1,0.13M NaCl，BSA(5mg/ml)，pH＝8.3。向384微孔板中依次加入2nM人血纤维蛋白溶酶(商购自Enzyme Research Laboratories)10μL，待测化合物溶液5μL，加毕混匀后，37℃孵育15min，向各孔加入5μL 1.2mM反应底物Tosyl-Gly-Pro-Lys-4-nitranilide(商购自Sigma)显色，用酶标仪动力学模式测定405nm处各孔的光密度(OD值)，与不加待测样品的空白孔比较，计算化合物对酶的抑制率[抑制率＝(1-样品组OD值/空白组OD值)x100％]，在Prism GraphPad中用四参数模式计算IC50值；每个化合物每次测定2个复孔，每组实验独立重复三次。
上述人凝血酶、胰蛋白酶、人凝血因子XIa、人凝血因子Xa、人血纤维蛋白溶酶抑制活性测试数据如表2：
表2
Figure BDA0002844757160000491
Figure BDA0002844757160000501
实施例75化合物的溶解度测试
将10μL化合物1、化合物6、化合物22、化合物30、化合物53、化合物71、化合物73的DMSO溶液(10mM)分别添加到whatman miniuniprep小瓶的下腔室中，然后在whatmanminiuniprep小瓶的下腔室中分别添加490μL的50mM PB(磷酸盐缓冲液，将15mL 50mMNa2HPO4添加到50mL管中，然后用50mM NaH2PO4将pH调节至7.4)。将样品涡旋至少2分钟，在室温下以800rpm的速度将miniuniprep小瓶在barnstead摇床上摇动24小时，之后离心20分钟(例如4000rpm)，压缩的miniunipreps制备的滤液注入HPLC系统，色谱柱：WatersXBridge C18 4.6*100mm，流动相A：0.1％TFA的乙腈/水溶液(5:95)，流动相B：0.1％TFA的乙腈/水溶液(95:5)，流速1.4mL/min，检测波长305nm，进样量5μL，梯度洗脱条件如表3：
表3
时间(min) A(％) B(％)
0.01 100 0
4.00 50 50
4.01 100 0
5.00 100 0
以标准曲线计算浓度，结果如下表4所示：
表4
编号 动力学溶解度(μM)
化合物1 45.0
化合物6 29.2
化合物22 79.4
化合物30 17.0
化合物53 3.36
化合物71 36.2
化合物73 12.0
实施例76人肝微粒体稳定性测试
1.材料
1.1肝微粒体
人和动物微粒体购买于Corning或Xenotech，储存于-80℃冰箱。
1.2还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)，供应商：Chem-impexinternational，
1.3对照化合物：睾酮，双氯芬酸，普罗帕酮
1.4主要仪器质谱仪Sciex API4000；高效液相色谱LC20-AD，Shimadzu；进样器ADDA，Apricot Designs
2.实验步骤
2.1供试品溶液的配制
称取实施例化合物适量，加入DMSO溶解为10mM的母液；取适量体积母液，100％乙腈稀释到100μM。
2.2实验步骤
准备2块96孔孵育板，分别命名为T60孵育板和NCF60孵育板。在T60孵育板和NCF60孵育板上分别加入445μL微粒体工作液(肝微粒体蛋白浓度为0.56mg/mL)，然后将上述孵育板放置于37℃水浴锅中预孵育大约10分钟。
预孵育结束后，在T60孵育板和NCF60孵育板上分别加入5μL供试品或对照化合物溶液，混匀。在NCF60孵育板上每孔添加50μL磷酸钾盐缓冲液启动反应；在T0终止板中加入180μL的终止液(含200ng/mL tolbutamide和200ng/mL labetalol的乙腈溶液)和6uL的NADPH再生体系工作液，从T60孵育板中取出54μL样品至T0终止板(T0样品产生)。在T60孵育板上每孔添加44μLNADPH再生体系工作液启动反应。在Blank板中只添加54μL微粒体样品溶液、6uL的NADPH再生体系工作液和180μL的终止液。因此，在供试品或对照化合物的样品中，化合物、睾酮、双氯芬酸和普罗帕酮的反应终浓度为1μM，肝微粒体的浓度为0.5mg/mL，DMSO和乙腈在反应体系中的终浓度分别为0.01％(v/v)和0.99％(v/v)。孵育适当时间(如5、10、20、30和60分钟)后，分别在每个终止板的样品孔中加入180μL的终止液(含200ng/mLtolbutamide和200ng/mL labetalol的乙腈溶液)，之后从T60孵育板中取出60μL样品以终止反应。所有样品板摇匀并在3220×g离心20分钟，然后每孔取80μL上清液稀释到240μL纯水中用于液相色谱串联质谱分析。
3.液相色谱串联质谱对所有样品进样分析，以体外代谢半衰期(T1/2,min)和固有清除率(CLint)作为指标，考察化合物的代谢稳定性，结果如表5所示：
表5
Figure BDA0002844757160000521
实施例77细胞色素P450同工酶抑制性实验
1.材料
1.1细胞色素P450同工酶
人肝微粒体细胞色素P450同工酶CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4。
1.2阳性抑制剂
α-萘黄酮、磺胺苯吡唑、(S)-(+)-N-3-苄基苯乙基内酰脲、奎尼丁、酮康唑
1.3特异性底物
非那西丁、双氯芬酸、(S)-美芬妥英、右美沙芬、咪哒唑仑
1.4主要仪器
质谱仪Sciex API4000TM；超高效液相色谱LC30-AD，Shimadzu；自动进样器SIL30-ACMP,Shimadzu
2.实验步骤
2.1工作液的配制
储备液：受试化合物采用DMSO溶解，制备成10mM DMSO储备液；
工作浓度配制：将适量的K2HPO4·3H2O(分析纯)和KH2PO4(分析纯)溶解在适量的超纯水中，用H3PO4或KOH将pH调至7.40±0.10，配成浓度为100mM的缓冲液，即得磷酸钾缓冲液(PB)。
2.2实验步骤
(1)首先将受试化合物储备液(10.0mM)用甲醇(分析纯)稀释至1mM备用；
(2)同时准备P450同工酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4)混合物(5合1)的工作液：将保存在低于-60℃冰箱的人肝微粒体置于冰上解冻，待人肝微粒体全部溶解，用PB进行稀释，制备一定浓度工作液(0.253mg/mL)；各阳性抑制剂配成0.3mM备用；
(3)先将20.0μL底物混合液加至反应板中(Blank孔中加入20.0μL PB)，然后将158μL人肝微粒体工作液加入反应板中，将反应板置于冰上，待用；此时将2.00μL受试化合物(N＝2)及特异性抑制剂(N＝2)加入对应孔中，无抑制剂(受试化合物或阳性抑制剂)组加入对应的有机溶剂，作为对照组样品(受试化合物对照样品为1:1DMSO:MeOH，阳性对照样品为1:9DMSO:MeOH)；
(4)在37℃水浴预孵育10min后，将20.0μL辅酶因子(NADPH)溶液加入反应板中，置于37℃水浴孵育反应10min；
(5)加入400μL预冷的乙腈溶液(含200ng/mL Tolbutamide和Labetalol的内标)终止反应；(6)将反应板置于摇床，振荡10min混匀；然后在4℃、4000rpm条件下离心20min；取200μL上清加至100μL水中，进行样品稀释；最后封板，振荡10min混匀，进行液相色谱串联质谱检测。
3.液相色谱串联质谱分析
所有样品进样分析。以受试化合物对人肝微粒体细胞色素P450同工酶的抑制率作为指标，考察受试化合物对肝脏代谢酶的影响，结果表明化合物6和化合物22对五种重要CYP酶均无明显抑制，IC50大于10μM，具体结果如表6：
表6 10μM受试化合物对P450的抑制率
Figure BDA0002844757160000531
实施例78碳酸酐酶I诱导的视网膜血管通透性模型
1、实验系统
种属：SD大鼠(购自成都达硕实验动物有限公司)；
等级：SPF级；
使用动物数量和性别：雄性，9只/组(共6组，合计54只)；
年龄：购入时年龄6-8周龄；
购买时体重：250±20g；
2、样品溶液配制
称取实施例化合物适量，加入DMSO溶解为10mM的母液；取适量母液，加入一定体积的超纯水进行稀释，配制为100μM工作液；再取适量工作液，加入一定体积生理盐水进行稀释，配制为0.25μM或2.5μM的最终工作液作为供试品溶液。
3、动物分组
组别设计：空白对照组(生理盐水+生理盐水Sham group)、模型对照组(生理盐水+CA-Ⅰgroup)、供试品组(化合物22、6、71、73，共计6组)；其中，CA-I为大鼠碳酸酐酶1(购自Sigma-Aldrich)。
4、模型制作
复方托吡卡胺滴眼液散瞳，使用1％戊巴比妥钠腹腔注射全身麻醉，显微镜下固定大鼠于操作台上，使用妥布霉素地塞米松滴眼液冲洗结膜囊，聚角巩膜缘1mm处垂直进针，玻璃体注射2uL生理盐水或供试品化合物(化合物22、6、71、73)，30min后，玻璃体内第二次注射2uL生理盐水或CA-I(60ng/眼)造模(单眼)。
5、眼底血管造影观察
检查方法：所有入组动物在第二次玻璃体内注射后30min腹腔注射10％荧光素钠注射液1.5ml/kg，10-15min后行荧光造影，观察眼底视网膜血管渗漏情况，并对渗漏情况进行评分。0：无渗漏；1：轻微渗漏；2：中度渗漏；3：剧烈/重度渗漏。
6、数据分析
各组动物实验定量数据采用均数±标准误(x±S E M)描述。正态和方差齐的多组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，组间比较采用方差分析LSD法检验；不满足正态分布或者方差不齐，采用Kruskal-Wallis H检验(K-W法)进行分析，组间多重比较采用Mann-Whitney U方法。P<0.05为差异具有统计学意义。所有的统计分析，均使用SPSS 24软件完成。
结果如图1所示。
实施例79碳酸酐酶I诱导的视网膜血管通透性模型
1、实验系统
种属：SD大鼠(购自浙江维通利华实验动物技术有限公司)；
等级：SPF级；
使用动物数量和性别：雄性，4只/组(共6组，合计24只)；
年龄：购入时年龄56-69天；
购买时体重：252.73-391.52g；
2、样品溶液配制
称取实验化合物适量，加入DMSO溶解为10mM的母液；取适量母液，加入一定体积的超纯水进行稀释，配制为100μM工作液；取适量工作液，加入一定体积生理盐水进行稀释，配制为0.1μM或1μM的最终工作液作为供试品组。
3、动物分组
组别设计：空白对照组(生理盐水+生理盐水Sham group)、模型对照组(生理盐水+CA-Ⅰgroup)、供试品组(化合物1、6、22、73，共计6组)；其中，CA-I为大鼠碳酸酐酶1(购自Sigma-Aldrich)。
4、模型制作
以5～15mg/kg和2～12mg/kg的剂量肌肉注射舒泰(Zoletil)和甲苯噻嗪(Xylazine)麻醉动物，同时将奥昔卡因(Oxybuprocaine)滴眼液滴入结膜囊中进行眼表麻醉。将动物放在立体显微镜下的手术台上，玻璃体注射5uL/眼生理盐水或供试品化合物(化合物1、6、22、73)，30min后，玻璃体内第二次注射5uL/眼生理盐水或CA-I(100ng/眼)造模(单眼)。肌注盐酸苯嗯唑(Idzoxan Hydrochloride)注射液使动物正常醒来。然后将它们放回笼中，并每天3次给予抗生素眼药水。
5、光学相干断层扫描(OCT)检查
检查方法：对所有动物双眼在注射前进行一次OCT(Blue Spectrails OCT，海德堡)检查，在建模后约48小时再进行一次OCT检查，记录两次OCT检测的视网膜厚度(μM)。
6、数据分析
使用Microsoft Excel软件进行组均值和标准差的计算。每当有两个以上的组时，使用Levene检验以0.05的显着性水平评估组间方差的齐次性。如果发现组方差之间的差异不显着(p>0.05)，则进行参数单向方差分析(ANOVA)。当通过ANOVA检验表明平均值之间存在显着差异(p≤0.05)时，将Dunnett检验用于进行对照组和每个供试品组之间的组均值比较。结果如图2所示。
实施例80视网膜色素上皮细胞ARPE19毒性测试
1、细胞系
视网膜色素上皮细胞ARPE19
2、供试品制备
称取实施例化合物适量，加入DMSO，充分混匀。然后以2％培养基(DMEM-F12，购自Gibco)进行稀释，获得终浓度分别为1μM和10μM的样品溶液。
3、实验过程：
取细胞密度为1*105/mL的ARPE19细胞，100μL/孔接种于96孔板，细胞贴壁过夜后，吸除培养板中旧培养基，每孔加入90μL 2％培养基，其中空白组和对照组加入100μL 2％培养基；每孔加入10μL(空白组和对照组除外)供试品溶液，充分混匀，置于培养箱中继续培养24h；24h后，每孔加入10μL CCK-8(C0039，碧云天)溶液(避光)，充分混匀，置于培养箱中继续培养2h；2h后，450nm测OD值。
4、实验结果
实验结果如图3所示，结果表明1μM和10μM的实施例化合物均对视网膜色素上皮细胞没有毒性。

Claims (9)

1.一种式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003707135080000011
式中，
A选自：
Figure FDA0003707135080000012
L1选自CH2；
X1为CH，X2为N；
-C-D-选自-NH-CH2-、-N＝CH-、-NHCO-；
L2选自键、O、NH、CH2、CH2O；
B选自：
Figure FDA0003707135080000013
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，L2选自CH2。
3.化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物选自：
Figure FDA0003707135080000021
Figure FDA0003707135080000031
4.一种药物组合物，其特征在于包含权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。
5.如权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗涉及血浆激肽释放酶活性相关的疾病。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述涉及血浆激肽释放酶活性的疾病为炎症。
7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述涉及血浆激肽释放酶活性的疾病为视力受损、糖尿病视网膜病变、糖尿病黄斑水肿、遗传性血管水肿、糖尿病、胰腺炎、脑出血、肾病、心肌病、神经病、炎性肠病、关节炎、感染性休克、低血压、癌症、成人呼吸窘迫综合征、弥散性血管内凝血、心肺旁路手术或外科手术后出血。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述涉及血浆激肽释放酶活性的疾病是与糖尿病视网膜病变和糖尿病黄斑水肿相关的视网膜血管通透性疾病。
9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述涉及血浆激肽释放酶活性的疾病为糖尿病黄斑水肿或遗传性血管水肿。
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