CN112980723A - 一种高耐砷硫氰化物降解菌株及其应用 - Google Patents

一种高耐砷硫氰化物降解菌株及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高耐砷硫氰化物降解菌株及其应用，该菌株经鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)，编号为TDB‑1，保藏于中国微生物菌种保藏管委会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21602。该菌株具有高耐砷的特性，其制成的菌剂可在高浓度砷环境中对硫氰化物进行有效降解，而且降解速度快且效果好。

Description

一种高耐砷硫氰化物降解菌株及其应用
技术领域
本发明涉及微生物及硫氰化物降解领域，更具体地，涉及一种高耐砷硫氰化物降解菌株及其应用。
背景技术
硫氰化物是一种含有S-C≡N的化合物，其毒性大约为氰化物的1/7。在金矿氰化堆浸场地中来源于氰化物的转化，为氰化物的衍生物，在硫化矿等还原环境中转化率可高达50％以上。长期接触硫氰酸盐会妨碍机体对碘元素的利用，抑制甲状腺活性，500mg NaSCN/kg体重是动物的最低致死量，如果摄入过多的硫氰酸盐则会引起人体中毒，当血液中SCN-含量达到150mg/L时是相当危险的。另外，硫氰酸盐在一定的条件下也可转化为氰化物。在硫氰酸盐的酸性溶液中，锌可以将其还原为氰化氢和硫化氢两种剧毒物质；在臭氧的氧化作用下硫氰酸盐也可部分转化为氰化物。在有色金属矿物提取金银铜、氰化电镀、化工、炼焦等行业中均伴有大量的硫氰酸盐废水、废渣以及场地污染土壤等。据统计，金矿工业废水中的硫氰化物浓度范围大致在500～1500mg/L；纺织印染工业废水中硫氰化物浓度大致在500～1000mg/L；焦化废水中则在50～400mg/L。
硫氰酸盐污染治理方法包括化学法、物理化学法、生物法、自然降解法及联合工艺法。其中生物法是指利用硫氰化物降解功能菌将硫氰化物分解为CO2、氨等去除。生物法降解硫氰化物因其成本低廉，环境友好，处理效果好等优点，被认为是最具潜力和前景的硫氰化物降解技术。
近年来，国内外研究人员在筛选分离硫氰化物降解菌剂方面做了大量工作，分离出假单胞菌、克雷伯菌、丙酸杆菌等多种菌株。Changsoo Lee从硫氰化物污染场地中筛选出一株克雷伯菌(Klebsiella sp.)，培养液中220mg/L的SCN-16天后完全降解；LukhanyoMekuto分离出的一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa STK 03)200h内降解250mg/L SCN-的效率达98％；Elaine M筛选出的假单胞菌BMV8(pseudomonas sp.)降解290mg/L的SCN-，3天内降解率达100％。
在有色冶炼行业采用氰化法提取金、银等金属时，矿石中伴生的各类复杂重金属也随之进入废水废渣中，经过检测分析，发现各类含氰废水废渣中砷的复合污染尤为突出。根据文献报道，砷作为一种高毒性污染物，其对环境微生物的自然代谢过程影响较大，可抑制微生物的活性。有研究表明，当土壤中的有效态砷含量下降后，土壤中的细菌总量升高，从而改变了土壤中微生物的生态功能多样性，说明砷对环境中微生物的生态功能有一定的影响。
生物法处理含砷场地中硫氰化物污染物的关键是寻找同时耐受高浓度硫氰化物和砷、降解效果好的微生物菌株，因此，从自然界筛选能在抗砷前提下降解硫氰化物的菌株成为研究人员的重要任务之一。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明的目的之一在于提供一种高耐砷硫氰化物降解菌株，该菌株属于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)，菌株编号为CGMCCNO.21602，于2021年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管委会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21602。
本发明的目的之二在于提供一种含有上述高耐砷硫氰化物降解菌株的菌剂。
本发明的目的之三在于提供上述菌剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
S1、菌种活化：在4℃条件下保存在营养琼脂培养基上的试管斜面菌种移至20℃～25℃条件下活化4h～8h；
S2、液体种子制备：在无菌操作台上，用10mL灭菌后的蒸馏水将经活化后的试管斜面菌种制成菌体悬浮液，无菌条件下冲洗入装有灭菌种子培养基的容器中，振荡培养10h～15h，得到液体种子；
S3、发酵：将所述液体种子以2％～5％(v/v)的接种量接到灭菌的发酵培养基中，液体发酵制备获得所述菌剂。
在一些实施方式中，步骤S2中，所述种子培养基为：葡萄糖2g/L，酵母粉1g/L，氯化钠0.5g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸铵0.95g/L，pH7.2，灭菌条件121℃，0.15Mpa，灭菌20min；培养温度30℃，摇床转速175r/min，培养时间15h；步骤S3中，所述发酵培养基组成为：酵母提取物5g/L，胰蛋白胨10g/L，氯化钠10g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸亚铁0.04g/L，氯化钙0.05g/L，pH7.7，灭菌条件121℃，0.15Mpa，灭菌20min；搅拌转速175r/min，30℃培养15h。
本发明的目的之四在于提供所述菌剂在降解硫氰化物中的应用。
本发明的目的之五在于提供所述菌剂在高砷浓度中降解硫氰化物的应用。
在一些实施方式中，所述应用的方法包括将所述菌剂加入到含硫氰化物的溶液中的步骤。
在一些实施方式中，所述应用的方法包括将所述菌剂加入含硫氰化物的溶液的好氧系统中，按好氧工艺进行处理。
在一些实施方式中，按质量百分数计，所述菌剂的加入量为总溶液质量的0～2％。
在一些实施方式中，含硫氰化物的溶液中，硫氰化物的浓度为0～1030mg/L；更优选的，硫氰化物浓度为0～836mg/L。
在一些实施方式中，砷浓度为0～1000mg/L。
相较于现有技术，本发明的有益效果如下：
本发明提供的高耐砷硫氰化物降解菌株，可在高浓度砷环境中对硫氰化物进行有效降解，而且降解速度快且效果好，制成的菌剂36h内对345mg/L硫氰化物降解率达到100％，最高可降解硫氰化物浓度达1030mg/L，在硫氰化物浓度为1030mg/L以内降解率均达96％以上，其中，浓度为836mg/L以内降解率可达100％。
本发明还具有以下优点：
(1)成本低。菌剂扩繁过程简便，废水处理只需加入少量发酵液即可按正常好氧处理工艺进行，无需其他药剂辅助。
(2)应用效果好，降解效率高。本发明的菌剂对于含砷环境中的硫氰化物具有良好的降解效果，可有效去除硫氰化物，砷浓度较高的水体中的硫氰化物污染物的去除率可达100％。
(3)环境友好，无二次污染。本发明的菌株无致病性，所用发酵液中成分均为微生物可利用的物质，无残留污染。
附图说明
图1为本发明的恶臭假单胞菌菌落形貌图；
图2为本发明的恶臭假单胞菌的系统发育树；
图3为不同浓度硫氰化物随时间的降解情况；
图4为不同浓度砷溶液中菌剂对硫氰化物的降解情况。
具体实施方式
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
一种高耐砷硫氰化物降解菌株，编号为CGMCC NO.21602，于2021年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管委会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏编号为：CGMCC NO.21602。
为了有助于进一步理解本发明，现结合优选实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1恶臭假单胞菌菌株的分离与鉴定
(1)分离纯化
发明人从湖南省长沙市阳湖湿地生活污水中分离出多株能够耐受砷和硫氰化物的菌株，并进行分离纯化，最终筛选得到对硫氰化物降解能力高的菌株。具体操作过程如下：
P1、从湖南省长沙市阳湖湿地生活污水池中采取典型富营养化活性污泥；
P2、配置LB液体富集培养基，将污泥按质量比10％加入LB培养基中，于150r/min，30℃恒温摇床中富集培养3d，得富集菌液；
P3、将以上富集菌液继续按质量比10％接种于新鲜LB培养基中，重复P2操作；
P4、将P3中培养的菌液按10％接种于含200mg/L砷、300mg/L硫氰化物的LB培养基中，30℃恒温培养3天；
P5、将P4培养液按10％传代接种于含200mg/L砷的硫氰化物LB培养基中，连续传代培养6次，至硫氰化物浓度达1000mg/L；
P6、将P5最终所得菌液按梯度10-1～10-7稀释涂布于300mg/L硫氰化物无机盐琼脂培养平板上，于30℃恒温培养箱培养5天；
P7、挑选单菌落接种于300mg/L硫氰化物无机盐液体种子培养基中培养，间隔一定时间测定培养液中残留硫氰化物的浓度，选取几株降解率高的菌株作为本发明的目标菌株。
(2)形态和生理生化鉴定
对筛选出的这几株待选菌进行生理生化特性、遗传稳定性探究。具体操作为：
S1、确定菌株生长及降解有关的影响因素，具体的包括pH、温度、需氧量、营养物质；
S2、通过改变初始pH、培养温度、摇床转速以及添加不同的碳源、氮源、硫源，在不同的培养条件下测定硫氰化物的降解量及降解速率；
S3、同时，将菌株进行传代培养并测定硫氰化物的降解情况；
S4、最终筛选出一株对硫氰化物降解能力强、易于培养并具有稳定传代特性的菌株，将其命名为TDB-1。
形态特征：如图1所示，该菌株在硫氰酸盐离子琼脂平板上形成圆形凸起的菌落，表面光滑有蜡光，不透明，不易挑起；革兰氏染色阴性，杆状，有鞭毛，呈短杆状排列，有荚膜。
生理生化特性：该菌株能耐受2000mg/L硫氰化物和1000mg/L的砷，pH7～11.5，20～35℃，有氧条件下，能够分解葡萄糖、乙酸钠，并以硫氰化物作为唯一氮源进行生长。
(3)16s rDNA序列鉴定和系统发育树比对
按照试剂盒说明提取菌株DNA，采用上海生工合成的细菌扩增通用引物27F/1429R进行16s rDNA测序的PCR扩增，扩增产物送上海生工进行16s rDNA测序。
根据16s rDNA序列分析结果，测序结果如Seq ID No:1所示，系统发育树如图2所示，综合考虑菌株的菌落形态特征、生理生化特征，其与明确标记为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)菌株有100％的同源性，鉴定此菌株为恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)菌株。
实施例2微生物菌剂的制备
(1)菌种活化：将4℃条件下保存在营养琼脂培养基上的试管斜面菌种移至25℃室温条件下活化4h；
(2)液体种子制备：在无菌操作台上，用10mL灭菌后的蒸馏水经过活化的试管斜面菌种制成菌体悬浮液，冲洗入装有灭菌液体种子培养基的锥形瓶中，1支试管接种1个锥形瓶，pH值自然，得到液体种子；
(3)发酵过程：取步骤(2)制成的液体种子以5％(v/v)的接种量接种于灭菌的发酵培养基中，液体发酵制备可获得含有假单胞菌菌株的菌剂。
其中，菌株产假单胞菌条件的确定，方法如下：
(1)采用单因子试验和正交试验原则，通过改变培养温度、初始pH值、接种量和摇床转速，确定液体种子最佳培养条件和液体发酵最佳培养条件；
(2)采用单因子试验和正交试验原则，通过改变培养基的碳、氮源和无机盐组成确定该菌株液体种子培养基最佳组成和液体发酵培养基的最佳组成。
经上述单因子试验和正交试验所获得的液体种子培养基组成及培养条件如下：
液体种子培养基组成为：葡萄糖1g/L～2g/L，酵母粉1g/L～4g/L，氯化钠0.5g/L～1.0g/L，硫酸镁0.1g/L～0.5g/L，硫酸铵0.95g/L，pH 7.2；液体种子培养条件为：接种量为每个三角瓶接种一个试管，培养温度25℃～35℃，摇床转速120pm～200pm，培养时间为10h～15h；
液体种子培养基最佳组成为：葡萄糖2g/L，酵母粉1g/L，氯化钠0.5g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸铵0.95g/L，pH 7.2，灭菌条件121℃，0.15Mpa，灭菌20min；培养温度为30℃，摇床转速150r/min，培养时间15h。
经上述单因子试验和正交试验所获得菌株液体发酵培养基最佳组成和发酵条件如下：
液体发酵培养基最佳组成为：酵母提取物5g/L，胰蛋白胨10g/L，氯化钠10g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸亚铁0.04g/L，氯化钙0.05g/L，pH7.7；液体发酵条件：接种量2％～5％(v/v)，培养温度30℃，摇床转速150rpm，培养时间为15h。
实施例3测定不同浓度的硫氰化物对降解效率的影响
配制分别含有345mg/L、642mg/L、836mg/L、1030mg/L、1240mg/L、1468mg/L硫氰化物的离子培养基，除硫氰化物外，其他组分具体配方为：每升含KH2PO4 1.0g、K2HPO4 1.0g、NaCl 0.1g、MgSO4·7H2O 0.1g、FeSO4·7H2O 0.04g、无水CaCl2 0.005g，葡萄糖/SCN-＝15(w/w)，2mL微量元素，去离子水定容至1L，pH 7.7，于30℃恒温摇床中培养；其中，微量元素配方为：CuCl2 40mg、KI 100mg、MnCl2·H2O 400mg、ZnCl2·7H2O 400mg、HBO3 500mg、NaMoO4·2H2O 195mg，用去离子水定容至200mL。
将实施例2中获得的菌剂添加量为2％(w/w)，一定时间取样测溶液中残余硫氰化物浓度，选用的测定方法为硝酸铁分光光度显色法，测定结果见图3。
如图3所示，1030mg/L以下的硫氰化物降解率均在96.6％以上，836mg/L以下的硫氰化物降解率可达100％。尤其地，345mg/L硫氰化物在36h内便完全降解。
实施例4测定不同浓度砷对降解效率的影响
在含336mg/L硫氰化物的不同离子培养基中，分别加入0、200、400、600、800、1000mg/L的砷，取实施例2中获得的菌剂以2％(w/w)的量接入，于30℃恒温摇床中培养，间隔一定时间测定溶液中残留硫氰化物的浓度，测定结果如图4所示。
由图4可以看出，本发明的菌剂对1000mg/L的砷依然有很强的抗性，在含砷浓度较高的溶液中对硫氰化物仍具备良好的降解效果。
实施例5菌剂在污水中对硫氰化物的降解效果
取实施例2制成的菌剂以2％(w/w)的量接种于含260mg/L硫氰化物的金矿尾矿库渗滤液中，废液pH7.2，于25℃恒温摇床中处理36h，测定硫氰化物残留量。经测定，菌剂对金矿尾矿库渗透液中的硫氰化物降解率达到100％。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 中南大学
<120> 一种高耐砷硫氰化物降解菌株及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1400
<212> DNA
<213> 恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)
<400> 1
gtcgagcgga tgacgggagc ttgctccttg attcagcggc ggacgggtga gtaatgccta 60
ggaatctgcc tggtagtggg ggacaacgtt tcgaaaggaa cgctaatacc gcatacgtcc 120
tacgggagaa agcaggggac cttcgggcct tgcgctatca gatgagccta ggtcggatta 180
gcttgttggt gaggtaatgg ctcaccaagg cgacgatccg taactggtct gagaggatga 240
tcagtcacac tggaactgag acacggtcca gactcctacg ggaggcagca gtggggaata 300
ttggacaatg ggcgaaagcc tgatccagcc atgccgcgtg tgtgaagaag gtcttcggat 360
tgtaaagcac tttaagttgg gaggaagggc agtaagttaa taccttgctg ttttgacgtt 420
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aaactcaaat gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag 900
caacgcgaag aaccttacca ggccttgaca tgcagagaac tttccagaga tggattggtg 960
ccttcgggaa ctctgacaca ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt 1020
gggttaagtc ccgtaacgag cgcaaccctt gtccttagtt accagcacgt tatggtgggc 1080
actctaagga gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc aagtcatcat 1140
ggcccttacg gcctgggcta cacacgtgct acaatggtcg gtacagaggg ttgccaagcc 1200
gcgaggtgga gctaatctca caaaaccgat cgtagtccgg atcgcagtct gcaactcgac 1260
tgcgtgaagt cggaatcgct agtaatcgcg aatcagaatg tcgcggtgaa tacgttcccg 1320
ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagtgggtt gcaccagaag tagctagtct 1380
aaccttcggg aggacggtac 1400

Claims (10)

1.一种高耐砷硫氰化物降解菌株，属于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)，菌株编号为TDB-1，于2021年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管委会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21602。
2.一种含有权利要求1所述的高耐砷硫氰化物降解菌株的菌剂。
3.根据权利要求2所述的菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、菌种活化：在4℃条件下保存在营养琼脂培养基上的试管斜面菌种移至20℃～25℃条件下活化4h～8h；
S2、液体种子制备：在无菌操作台上，用10mL灭菌后的蒸馏水将经活化后的试管斜面菌种制成菌体悬浮液，无菌条件下冲洗入装有灭菌种子培养基的容器中，振荡培养10h～15h，得到液体种子；
S3、发酵：将所述液体种子以2％～5％(v/v)的接种量接到灭菌的发酵培养基中，液体发酵制备获得所述菌剂。
4.根据权利要求3所述的菌剂的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述种子培养基为：葡萄糖2g/L，酵母粉1g/L，氯化钠0.5g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸铵0.95g/L，pH7.2，灭菌条件121℃，0.15Mpa，灭菌20min；培养温度30℃，摇床转速175r/min，培养时间15h；步骤S3中，所述发酵培养基组成为：酵母提取物5g/L，胰蛋白胨10g/L，氯化钠10g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸亚铁0.04g/L，氯化钙0.05g/L，pH7.7，灭菌条件121℃，0.15Mpa，灭菌20min；搅拌转速175r/min，30℃培养15h。
5.权利要求2-4任一项所述的菌剂在降解硫氰化物中的应用。
6.权利要求5所述的菌剂在降解高砷浓度中降解硫氰化物的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，应用方法包括将所述菌剂加入到含硫氰化物的溶液中的步骤。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，按质量百分数计，所述菌剂的加入量为总溶液质量的2％。
9.根据权利要求6-8任一项所述的应用，其特征在于，所述含硫氰化物的溶液中，硫氰化物的浓度为0～836mg/L。
10.根据权利要求6-8任一项所述的应用，其特征在于，砷浓度为1000mg/L以内。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114806954A (zh) * 2022-05-09 2022-07-29 南昌市国昌环保科技有限公司 一种用于降解硫氰酸盐的菌株、复合菌株、菌剂及应用
CN115044492A (zh) * 2022-02-16 2022-09-13 华北水利水电大学 一株恶臭假单胞菌及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102146353A (zh) * 2009-12-18 2011-08-10 南京工业大学 一种既能耐受高浓度As(Ⅲ)又能氧化As(Ⅲ)的基因工程菌及其应用
CN104261624A (zh) * 2014-09-29 2015-01-07 长春黄金研究院 一种黄金氰化企业含氰废水处理方法
CN104312938A (zh) * 2014-09-18 2015-01-28 浙江工业大学 恶臭假单胞菌菌株及其菌剂和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102146353A (zh) * 2009-12-18 2011-08-10 南京工业大学 一种既能耐受高浓度As(Ⅲ)又能氧化As(Ⅲ)的基因工程菌及其应用
CN104312938A (zh) * 2014-09-18 2015-01-28 浙江工业大学 恶臭假单胞菌菌株及其菌剂和应用
CN104261624A (zh) * 2014-09-29 2015-01-07 长春黄金研究院 一种黄金氰化企业含氰废水处理方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHAPATWALA ET AL.: "Biodegradation of cyanides, cyanates and thiocyanates to ammonia and carbon dioxide by immobilized cells of Pseudomonas putida", 《JOURNAL OF INDUSTRIAL MICROBIOLOGY & BIOTECHNOLOGY》 *
郭英兰等: "生物法降解氰化物的研究进展", 《化学与生物工程》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115044492A (zh) * 2022-02-16 2022-09-13 华北水利水电大学 一株恶臭假单胞菌及其应用
CN115044492B (zh) * 2022-02-16 2023-06-23 华北水利水电大学 一株恶臭假单胞菌及其应用
CN114806954A (zh) * 2022-05-09 2022-07-29 南昌市国昌环保科技有限公司 一种用于降解硫氰酸盐的菌株、复合菌株、菌剂及应用
CN114806954B (zh) * 2022-05-09 2024-03-12 南昌市国昌环保科技有限公司 一种用于降解硫氰酸盐的菌株、复合菌株、菌剂及应用

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