CN112933019B - 一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液及其制备方法，按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.1‑3％，鼠李糖脂0.1‑2％，五味子提取物0.1‑1％，金银花提取物0.1‑1％，茶叶提取物0.1‑1％，桃拓酚0.01‑0.5％，生物活性透明质酸片段0.1‑1％，反式法尼醇0.05‑0.2％，甜味剂2.5‑22％，防腐剂0.25‑1.3％，余量为水。本发明提供的护理液不破坏真核细胞，通过抑制微生物群体感应达到清洁口腔的效果，对人体无毒性、无任何耐药性。

Description

一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液及其制备方法
技术领域
本发明涉及口腔护理技术领域，具体涉及一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液、一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液的制备方法。
背景技术
口腔是人体的第一道门户，也是消化系统的第一道关口，并与呼吸系统密切相关,是病原微生物侵入机体的重要途径之一。口腔内温度和湿度适宜，最早接触来自空气中的菌群，从而为微生物的生长繁殖提供了优越的条件。微生物生长在唾液基质中，并在柔软和坚硬的表面形成专门的生物膜。
宿主(唾液、健康饮食、口腔卫生)和生物膜之间的动态平衡限制了微生物的生长，并对机会性病原体产生了共同的抑制作用。自然界中大部分细菌都可以集聚形成三维的多细胞的社群，紧紧附着在基底层或物质表面，这些微生物社群即为生物膜。当自由游动、浮游细菌发现富有营养物质的适合环境时，它们就会形成生物膜附着在该环境中，生物膜的微生物多样性使得发现适合的和最有效的治疗方法变得颇具挑战，因为在生物膜和周围耐药菌群的保护下，平时非致病的微生物也获得了抗生素耐药性。其次，生物膜细胞外EPS基质被称为抗生素屏障，能够妨碍和延缓抗生素穿透生物膜，从而给予位于基质深部的成熟细胞更多的时间发展耐药性。任何口腔生态系统的失衡因素都会导致不受控制的微生物生长。口腔被微生物失调造成的感染有风险，主要是龋齿、口腔溃疡、牙周炎、念珠菌病和由此引起的口臭微环境。
传统的杀菌剂(洗必太、三氯生、季铵盐杀菌剂如氯化十六烷基铵基吡啶)滥用会造成口腔微生态失衡，加重牙齿老化而引起龋齿、牙龈炎和牙周炎的增加，产生耐药性，对人体存在潜在的风险，干扰人体内分泌系统，同时原料入口刺激味觉发苦，不可降解。
发明内容
因此，针对上述问题，本发明提供一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液，按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.1-3％，鼠李糖脂0.1-2％，生物活性透明质酸片段0.1-1％，桃拓酚0.01-0.5％，五味子提取物0.1-1％，金银花提取物0.1-1％，茶叶提取物0.1-1％，反式法尼醇0.05-0.2％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。
进一步地，所述甜味剂为赤藓糖醇和肌醇。更进一步地，所述赤藓糖醇的质量分数为2-20％，所述肌醇的质量分数为0.5-2％，
进一步地，所述防腐剂为葡糖酸内酯和苯甲酸钠。更进一步地，所述葡糖酸内酯的质量分数为0.2-1％，所述苯甲酸钠的质量分数为0.05-0.3％。
进一步地，所述口腔护理液按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.5-2.5％，鼠李糖脂0.5-1.5％，生物活性透明质酸片段0.1-1％，桃拓酚0.01-0.5％，五味子提取物0.1-1％，金银花提取物0.1-1％，茶叶提取物0.1-1％，反式法尼醇0.05-0.2％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。
进一步地，所述口腔护理液按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.1-3％，鼠李糖脂0.1-2％，生物活性透明质酸片段0.1-1％，桃拓酚0.01-0.5％，五味子提取物0.2-0.8％，金银花提取物0.2-0.8％，茶叶提取物0.2-0.8％，反式法尼醇0.05-0.2％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。
进一步地，所述口腔护理液按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.1-3％，鼠李糖脂0.1-2％，生物活性透明质酸片段0.2-0.8％，桃拓酚0.05-0.4％，五味子提取物0.1-1％，金银花提取物0.1-1％，茶叶提取物0.1-1％，反式法尼醇0.05-0.2％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。
进一步地，所述口腔护理液按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.1-3％，鼠李糖脂0.1-2％，生物活性透明质酸片段0.1-1％，桃拓酚0.01-0.5％，五味子提取物0.1-1％，金银花提取物0.1-1％，茶叶提取物0.1-1％，反式法尼醇0.08-0.18％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。
进一步地，一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液的制备方法，其特征在于：取0.1-3份一枝黄花提取物，0.1-2份鼠李糖脂，0.1-1份生物活性透明质酸片段，0.01-0.5份桃拓酚，0.1-1份五味子提取物，0.1-1份金银花提取物，0.1-1份茶叶提取物，0.05-0.2份反式法尼醇，2.5-22份甜味剂，0.25-1.3份防腐剂，混合均匀，加水滴定至100份，得到所述口腔护理液。
综上所述，本申请提供的技术方案可以具有如下一个或多个优点或有益效果：
1.对人体无毒性，无任何耐药性，并且在环境中可以降解。
2.针对口腔菌群，对抗机会性病原体，通过抑制白色念珠菌的菌丝形成，调控白色念珠菌的毒性基因，抑制和预防减少白色念珠菌的生物膜和细菌-真菌共生生物膜的形成来减少口腔念珠菌病，改善口腔微生物环境。
3.口感舒适柔和，无任何黏膜刺激，可以保持口腔健康和长效清洁。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为一枝黄花提取物抑制菌丝生成实验的对比图。
图2为一枝黄花提取物分离真菌-细菌混合生物膜实验的对比图。
图3为一枝黄花提取物对白色念珠菌抑菌测试结果。
图4为鼠李糖脂的抑菌测试结果。
图5为本发明提供的口腔护理液使用前后对比图。
图6为生理盐水与白色念珠球菌混合培养后得到的显微镜图。
图7为本发明实施例2提供的口腔护理液与白色念珠球菌混合培养后得到的显微镜图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
化学信号通讯(Chemical signaling)和群体感应(Quorum Sensing,QS)是重要的生物膜细菌耐药机制，QS调节生物膜发展和毒性因子的生产，增加对宿主免疫防御的抵抗力，允许狭小空间里容纳高密度细胞的生物膜基质结构能增强其效率，同时细菌生物膜的QS系统还能造成宿主免疫细胞的溶解。
因此，预防生物膜的生成，抑制菌群侵入牙周、减少白色念珠菌的定植对口腔微环境的控制来说至关重要。本发明利用影响微生物的群体感应来调节某些表型表达，构建了如下配方：一枝黄花提取物0.1-3％，鼠李糖脂0.1-2％，生物活性透明质酸片段0.1-1％，桃拓酚0.01-0.5％，五味子提取物0.1-1％，金银花提取物0.1-1％，茶叶提取物0.1-1％，反式法尼醇0.05-0.2％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。通过将各组分简单的混合即可制备得到。
所述一枝黄花提取物富含类黄酮，三萜糖苷和三萜皂苷等物质。皂苷已被认为是毛果一枝黄花提取物拥有生物活性的原因。体外测试证明，毛果一枝黄花提取物可阻止白色念珠菌酵母粘附至口腔上皮细胞，阻止菌丝形成，阻止关键酵母粘附素和菌丝特异性基因的表达，阻止真菌，真菌/细菌共聚体的产生，以及真菌菌膜和细菌-真菌混合生物膜的形成。
参见图1，阴性对照组为生理盐水，实验组为一枝黄花提取物。起始时刻，实验组和对照组均有3％的菌丝生成；随着时间的推移，实验组的抑制菌丝效果十分显著，4小时后，阴性对照组有65％的菌丝生成，实验组仅有5％的菌丝；24小时后，阴性对照组的菌丝达到90％，而实验组仅有13％。由此可见，一枝黄花提取物组可以显著抑制白色念珠菌菌丝形成。
参见图2，将白色念珠菌和转糖链球菌混合培养，图中左侧试管为PBS缓冲液阴性对照组，可见生物膜已生长到液面；右侧试管为加入0.3％一枝黄花提取物的实验组，酵母样圆形细胞与链球菌沉积在试管底部。
参见图3，体外测试可以通过三维微生物的生长和瓶壁生物膜的脱落来判断抵御或者减少分离真菌-细菌混合生物膜的形成。实验检测了1种真菌：白色念珠球菌；以及8种口腔细菌种：唾液链球菌、粘滑罗斯菌、溶血孪生球菌、粪肠球菌、藤黃微球菌、转糖链球菌、具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌。从图中可见，一枝黄花提取物可以抑制白色念珠菌-酵母菌菌丝产生从而抑制其群体效应，防止增殖，对于其他正常菌群的影响不大。
所述鼠李糖脂是由于鼠李糖环和脂肪酸组成的，是微生物为了创造适宜自己的生产环境而合成的一类天然两亲性分子，对环境友好安全，鼠李糖脂能显著降低物质的界面张力和表面张力，其疏水端与有机物结合，亲水端与有机物的孔际水结合，能够在细菌的细胞膜表面形成通透的孔洞，破坏细胞膜的完整性，导致细菌死亡。参见图4，图中的亮区表示牙齿上附着的细菌数量，对口腔常见细菌的抑菌实验表明，鼠李糖脂对于多种口腔细菌具有显著的抑制作用。
所述生物活性透明质酸片段是将普通的透明质酸利用安全无过敏性的重组人透明质酸酶剪切，再通过在CD44阳性细胞上筛选后，形成活化片段，TLR4受体(Toll样受体4)和CD44受体相结合，减少多和炎症因子分泌，控制炎症细胞游走，促进人体防卫素2分泌，杀灭微生物和皮肤黏膜炎症，也是细菌内毒素的拮抗剂。
所述桃拓酚是一种天然植物提取成分，有广谱的抗菌特性，且没有任何耐药性。本发明提供的技术方案种桃拓酚的含量微小，质量分数为0.01-0.5％，并不具备杀菌能力；其作用在于通过抑制细菌的FtsZ蛋白的组装和菌丝之间的捆扎和交联，进而抑制菌群的繁殖，但是不影响真核细胞，对人体友好。
所述五味子提取物、金银花提取物和茶叶提取物含有绿原酸、黄酮类和鞣酸类等药理活性成分，安全无毒副作用，细菌不易产生耐药性，不会引起长期使用抗生素产生的菌群失调。绿原酸和黄酮类可以抑制口腔致病菌变异链球菌的生长。鞣酸对变形链球菌、血链球菌、粘性放线菌致龋菌形成的多菌种生物膜发挥了有效的抑制及清除。
所述反式法尼醇主要起到辅助作用，可以抑制细菌的群体反应。
所述甜味剂为赤藓糖醇和肌醇；其中，所述赤藓糖醇的质量分数为2-20％，所述肌醇的质量分数为0.5-2％。
所述防腐剂为葡糖酸内酯和苯甲酸钠；其中，所述葡糖酸内酯的质量分数为0.2-1％，所述苯甲酸钠的质量分数为0.05-0.3％。
【实施例1】
本实施例提供一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液的制备方法：取1.5g一枝黄花提取物，1g鼠李糖脂，0.5g生物活性透明质酸片段，0.3g桃拓酚，0.5g五味子提取物，0.5g金银花提取物，0.5g茶叶提取物，0.1g反式法尼醇，10g赤藓糖醇，1g肌醇，0.5g葡糖酸内酯，0.1g苯甲酸钠，混合均匀，加水滴定至100g，得到所述口腔护理液。
【实施例2】
本实施例提供一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液，由实施例1提供的方法制备得到，包括以下组分：一枝黄花提取物1.5％，鼠李糖脂1％，生物活性透明质酸片段0.5％，桃拓酚0.3％，五味子提取物0.5％，金银花提取物0.5％，茶叶提取物0.5％，反式法尼醇0.1％，赤藓糖醇10％，肌醇1％，葡糖酸内酯0.5％，苯甲酸钠0.1％，余量为水。
参见图5，将牙菌斑显示剂涂抹于牙齿表面，可以看到深色部位即为牙菌斑附着部位。使用本实施例提供的护理液漱口30秒后，再次测试可以看到牙菌斑清除明显，抑菌作用显著。
【实施例3】
本实施例提供一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液，按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物3％，鼠李糖脂2％，生物活性透明质酸片段1％，桃拓酚0.5％，五味子提取物1％，金银花提取物1％，茶叶提取物1％，反式法尼醇0.2％，赤藓糖醇20％，肌醇2％，葡糖酸内酯1％，苯甲酸钠0.3％，余量为水。
参见图6-7，使用白色念珠球菌对本实施例提供的口腔护理液及进行抑菌测试，对照组为生理盐水，其他实验条件均相同。图6为生理盐水与白色念珠球菌混合培养后得到的显微镜图，可以看见大量的菌丝生成。图7为本实施例提供的口腔护理液与白色念珠球菌混合培养后得到的显微镜图，与图6进行对比，仅有少量的真菌存在。由此可见，本发明提供的口腔护理液几乎可以完全抑制白色念珠球菌的菌丝生成。
【实施例4】
本实施例提供一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液，按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.1％，鼠李糖脂0.1％，生物活性透明质酸片段0.1％，桃拓酚0.01％，五味子提取物0.1％，金银花提取物0.1％，茶叶提取物0.1％，反式法尼醇0.05％，赤藓糖醇2％，肌醇0.5％，葡糖酸内酯0.2％，苯甲酸钠0.05％，余量为水。
【实施例5】
本发明提供的护理液还可以是以下组分：
Figure BDA0003007135610000081
Figure BDA0003007135610000091
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种基于抑制微生物群体感应的口腔护理液，其特征在于，按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.1-3％，鼠李糖脂0.1-2％，生物活性透明质酸片段0.1-1％，桃拓酚0.01-0.5％，五味子提取物0.1-1％，金银花提取物0.1-1％，茶叶提取物0.1-1％，反式法尼醇0.05-0.2％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。
2.根据权利要求1所述的口腔护理液，其特征在于，所述甜味剂为赤藓糖醇和肌醇。
3.根据权利要求2所述的口腔护理液，其特征在于，所述赤藓糖醇的质量分数为2-20％，所述肌醇的质量分数为0.5-2％。
4.根据权利要求1所述的口腔护理液，其特征在于，所述防腐剂为葡糖酸内酯和苯甲酸钠。
5.根据权利要求4所述的口腔护理液，其特征在于，所述葡糖酸内酯的质量分数为0.2-1％，所述苯甲酸钠的质量分数为0.05-0.3％。
6.根据权利要求1所述的口腔护理液，其特征在于，按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.5-2.5％，鼠李糖脂0.5-1.5％，生物活性透明质酸片段0.1-1％，桃拓酚0.01-0.5％，五味子提取物0.1-1％，金银花提取物0.1-1％，茶叶提取物0.1-1％，反式法尼醇0.05-0.2％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。
7.根据权利要求1所述的口腔护理液，其特征在于，按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.1-3％，鼠李糖脂0.1-2％，生物活性透明质酸片段0.1-1％，桃拓酚0.01-0.5％，五味子提取物0.2-0.8％，金银花提取物0.2-0.8％，茶叶提取物0.2-0.8％，反式法尼醇0.05-0.2％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。
8.根据权利要求1所述的口腔护理液，其特征在于，按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.1-3％，鼠李糖脂0.1-2％，生物活性透明质酸片段0.2-0.8％，桃拓酚0.05-0.4％，五味子提取物0.1-1％，金银花提取物0.1-1％，茶叶提取物0.1-1％，反式法尼醇0.05-0.2％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。
9.根据权利要求1所述的口腔护理液，其特征在于，按照质量分数包括以下组分：一枝黄花提取物0.1-3％，鼠李糖脂0.1-2％，生物活性透明质酸片段0.1-1％，桃拓酚0.01-0.5％，五味子提取物0.1-1％，金银花提取物0.1-1％，茶叶提取物0.1-1％，反式法尼醇0.08-0.18％，甜味剂2.5-22％，防腐剂0.25-1.3％，余量为水。
10.一种如权利要求1所述的口腔护理液的制备方法，其特征在于：取0.1-3份一枝黄花提取物，0.1-2份鼠李糖脂，0.1-1份生物活性透明质酸片段，0.01-0.5份桃拓酚，0.1-1份五味子提取物，0.1-1份金银花提取物，0.1-1份茶叶提取物，0.05-0.2份反式法尼醇，2.5-22份甜味剂，0.25-1.3份防腐剂，混合均匀，加水滴定至100份，得到所述口腔护理液。
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