CN112779311A - 一种筛选和评估肿瘤免疫治疗药物的系统和方法 - Google Patents

一种筛选和评估肿瘤免疫治疗药物的系统和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112779311A
CN112779311A CN202011642136.4A CN202011642136A CN112779311A CN 112779311 A CN112779311 A CN 112779311A CN 202011642136 A CN202011642136 A CN 202011642136A CN 112779311 A CN112779311 A CN 112779311A
Authority
CN
China
Prior art keywords
test
cells
effect
assessing
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202011642136.4A
Other languages
English (en)
Inventor
何南海
王友平
路杨
杨东晖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Arnold Biomedical Technology Co ltd
Original Assignee
Hangzhou Arnold Biomedical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Arnold Biomedical Technology Co ltd filed Critical Hangzhou Arnold Biomedical Technology Co ltd
Publication of CN112779311A publication Critical patent/CN112779311A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
    • G01N33/5023—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects on expression patterns
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G01N33/5052—Cells of the immune system involving B-cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G01N33/5055—Cells of the immune system involving macrophages
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B40/00—ICT specially adapted for biostatistics; ICT specially adapted for bioinformatics-related machine learning or data mining, e.g. knowledge discovery or pattern finding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Computer Vision & Pattern Recognition (AREA)
  • Artificial Intelligence (AREA)
  • Bioethics (AREA)
  • Data Mining & Analysis (AREA)
  • Databases & Information Systems (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Evolutionary Computation (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Software Systems (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Evolutionary Biology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本申请涉及一种有效的筛选和评估肿瘤免疫治疗药物的系统和方法，其包括靶细胞，例如原代免疫细胞靶细胞的效果评估、非靶细胞效果评估和肿瘤浸润效果评估。本申请的系统和方法可以用于全面系统地评估所述药物相对肿瘤免疫细胞的有效性及安全性。

Description

一种筛选和评估肿瘤免疫治疗药物的系统和方法
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种筛选和评估肿瘤免疫治疗药物的系统和方法。
背景技术
肿瘤免疫治疗指通过药物来修正及维持肿瘤-免疫微循环，改善机体的抗肿瘤免疫效应，从而达到控制乃至清除肿瘤效果的一种治疗方法。肿瘤免疫治疗新药研发过程中，对药物有效性及安全性的有效评定是保证相关药物被成功研发的至关重要的因素。在常规的肿瘤免疫治疗新药研发过程中主要依据靶点的表达特点，有针对性的评估相关免疫细胞的有效性。然而抗肿瘤免疫系统的改善往往不是仅仅依靠单一种类细胞就能实现的，而是需要多种免疫细胞协同相互配合来共同完成；但在使用肿瘤免疫治疗药物治疗时，药物在发挥效应时除作用于目标靶点相关免疫细胞外，不可避免的会作用于其他非靶点的免疫细胞，而这种作用如果会阻碍其他免疫细胞正常机能的话，即使药物在靶点相关免疫细胞中表现较佳效果也将有极大可能会导致抗肿瘤免疫系统不能得到有效改善而导致肿瘤免疫治疗达不到预期效果。而常规的肿瘤免疫治疗新药研发环节却缺乏提供规避药物这一方面效应的有效方法，因此会造成新药研发风险加大。
因此，本领域亟需一种有效的筛选和评估肿瘤免疫治疗药物的系统和方法，以全面系统地评估所述药物相对肿瘤免疫细胞的有效性及安全性。
发明内容
本申请提供了一种有效的筛选和评估肿瘤免疫治疗药物的系统和方法，以全面系统地评估所述药物相对肿瘤免疫细胞的有效性及安全性。
第一方面，本申请提供了评估测试物对肿瘤免疫细胞的影响的方法，其包括以下步骤：i)评估所述测试物对靶细胞的影响，ii)评估所述测试物对非靶细胞的影响；以及iii)评估所述测试物对肿瘤免疫浸润的影响；其中所述步骤i)包括：i-1)评估所述测试物对免疫细胞系靶细胞的影响，以及i-2)评估所述测试物对原代免疫细胞靶细胞的影响；其中在进行所述步骤i-1)的评估之后，将评估结果分为正(+)与否(-)两种等级，且对于该评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
在一个具体实施方式中，所述步骤i-1)的评估结果为正的测试物，继续进行所述步骤i-2)，其评估结果实行双等级制，即表现分为正(+)与否(-)两种等级。
在一个具体实施方式中，其中所述步骤i-2)评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
在一个具体实施方式中，其中在进行所述步骤ii)的评估之后，将评估结果记录为多区间计分等级指数。
在一个具体实施方式中，其中所述步骤ii)包括评估所述测试物对免疫细胞系非靶细胞的影响，和/或评估所述测试物对原代免疫细胞非靶细胞的影响。
在一个具体实施方式中，其中在进行所述步骤iii)的评估之后，将评估结果记录为多区间计分等级指数。
在一个具体实施方式中，其中所述步骤iii)包括：评估所述测试物对肿瘤组织中T细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中树突状细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中巨噬细胞表型的影响，和/或评估所述测试物对肿瘤组织中自然杀伤细胞(NK细胞)表型的影响。
在一个具体实施方式中，其中所述T细胞表型包括：肿瘤组织中的所述T细胞的比例，所述T细胞的增殖能力，所述T细胞的活性，所述T细胞中白细胞介素-2(IL-2)的表达水平，所述T细胞中肿瘤坏死因子α(TNFα)的表达水平，所述T细胞中颗粒酶素的表达水平，所述T细胞中干扰素-γ(IFNγ)的表达水平，和/或所述T细胞中程序性死亡受体-1(PD1)的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述树突状细胞表型包括：肿瘤组织中的所述树突状细胞的比例，所述树突状细胞的增殖能力，所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述树突状细胞中PD-L1的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述NK细胞表型包括：肿瘤组织中的所述NK细胞的比例，所述NK细胞的增殖能力，所述NK细胞的活性，所述NK细胞中的C型凝集素受体家族成员A(NKG2A)的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIR的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述巨噬细胞表型包括：肿瘤组织中的所述巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞的增殖能力，所述巨噬细胞的活性，和/或肿瘤组织中的M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例。
第二方面，本申请提供了评估测试物对肿瘤免疫B细胞的影响的方法，其包括以下步骤：a)评估所述测试物对B细胞的影响，b)评估所述测试物对非靶细胞的影响；以及c)评估所述测试物对肿瘤免疫浸润的影响；其中所述步骤a)包括：a-1)评估所述测试物对免疫细胞系B细胞的影响，以及a-2)评估所述测试物对原代免疫细胞B细胞的影响；其中所述评估结果分为正(+)与否(-)两种等级，且对于该评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
在一个具体实施方式中，其中所述步骤a)包括：评估测试物对所述B细胞的增殖能力的影响，评估测试物对所述B细胞中IL-6的表达水平的影响，和/或评估测试物对所述B细胞产生抗体的水平的影响。
在一个具体实施方式中，其中所述非靶细胞包括T细胞、巨噬细胞、树突状细胞和/或NK细胞。
在一个具体实施方式中，其中所述步骤b)包括：评估测试物对T细胞表型的影响，评估测试物对树突状细胞表型的影响，评估测试物对巨噬细胞表型的影响，和/或评估测试物对NK细胞表型的影响。
在一个具体实施方式中，其中所述T细胞表型包括：所述T细胞中的细胞因子IL-2的表达水平，所述T细胞中的IFNγ的表达水平，和/或所述T细胞的细胞增殖能力。
在一个具体实施方式中，其中所述树突状细胞表型包括：所述树突状细胞的增殖能力及所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，以及所述树突状细胞中的IL-12的表达水平，所述树突状细胞中的I型干扰素的表达水平，和/或所述树突状细胞中的IL-6的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述NK细胞表型包括：所述NK细胞的增殖能力及所述NK细胞的活性，和所述NK细胞中的NKG2A的表达水平、所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述巨噬细胞表型包括：所述巨噬细胞的增殖能力及所述巨噬细胞的活性，M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述巨噬细胞中产生的I型干扰素的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述步骤c)包括：评估所述测试物对肿瘤组织中的T细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中的树突状细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中的巨噬细胞表型的影响，和/或评估所述测试物对肿瘤组织中的NK细胞表型的影响。
在一个具体实施方式中，其中所述T细胞表型包括：肿瘤组织中的所述T细胞的比例，所述T细胞的增殖能力，所述T细胞的活性，所述T细胞中的IL-2的表达水平，所述T细胞中的TNFα的表达水平，所述T细胞中的颗粒酶素的表达水平，所述T细胞中的IFNγ的表达水平，和/或所述T细胞中的PD1的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述树突状细胞表型包括：肿瘤组织中的所述树突状细胞的比例，所述树突状细胞的增殖能力，所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述树突状细胞中PD-L1的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述NK细胞表型包括：肿瘤组织中的所述NK细胞的比例，所述NK细胞的增殖能力，所述NK细胞的活性，所述NK细胞中的NKG2A的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述巨噬细胞表型包括：肿瘤组织中的所述巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞的增殖能力，所述巨噬细胞的活性，和/或肿瘤组织中的M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例。
第三方面，本申请提供了评估测试物对肿瘤免疫T细胞的影响的方法，其包括以下步骤：a’)评估所述测试物对T细胞的影响，b’)评估所述测试物对非靶细胞的影响；以及c’)评估所述测试物对肿瘤免疫浸润的影响；其中所述步骤a’)包括：a-1’)评估所述测试物对免疫细胞系T细胞的影响，以及a-2’)评估所述测试物对原代免疫细胞T细胞的影响；其中所述评估结果分为正(+)与否(-)两种等级，且对于该评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
在一个具体实施方式中，其中所述步骤a’)包括：评估测试物对所述T细胞中的IL-2的表达水平的影响，评估测试物对所述T细胞中的IFNγ的表达水平的影响，和/或评估测试物对所述T细胞的细胞增殖能力的影响。
在一个具体实施方式中，其中所述非靶细胞包括B细胞、巨噬细胞、树突状细胞和/或NK细胞。
在一个具体实施方式中，其中所述步骤b’)包括：评估测试物对B细胞表型的影响，评估测试物对树突状细胞表型的影响，评估测试物对巨噬细胞表型的影响，和/或评估测试物对NK细胞表型的影响。
在一个具体实施方式中，其中所述B细胞表型包括：所述B细胞的增殖能力，和/或所述B细胞产生抗体的情况。
在一个具体实施方式中，其中所述树突状细胞表型包括：所述树突状细胞的增殖能力及所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，以及所述树突状细胞中的IL-12的表达水平，所述树突状细胞中的I型干扰素的表达水平，和/或所述树突状细胞中的IL-6的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述NK细胞表型包括：所述NK细胞的增殖能力及所述NK细胞的活性，和所述NK细胞中的NKG2A的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述巨噬细胞表型包括：所述巨噬细胞的增殖能力及所述巨噬细胞的活性，M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述巨噬细胞中产生的I型干扰素的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述步骤c’)包括：评估所述测试物对肿瘤组织中的T细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中的树突状细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中的巨噬细胞表型的影响，和/或评估所述测试物对肿瘤组织中的NK细胞表型的影响。
在一个具体实施方式中，其中所述T细胞表型包括：肿瘤组织中的所述T细胞的比例，所述T细胞的增殖能力，所述T细胞的活性，所述T细胞中的IL-2的表达水平，所述T细胞中的TNFα的表达水平，所述T细胞中的颗粒酶素的表达水平，所述T细胞中的IFNγ的表达水平，和/或所述T细胞中的PD1的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述树突状细胞表型包括：肿瘤组织中的所述树突状细胞的比例，所述树突状细胞的增殖能力，所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述树突状细胞中PD-L1的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述NK细胞表型包括：肿瘤组织中的所述NK细胞的比例，所述NK细胞的增殖能力，所述NK细胞的活性，所述NK细胞中的NKG2A的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。
在一个具体实施方式中，其中所述巨噬细胞表型包括：肿瘤组织中的所述巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞的增殖能力，所述巨噬细胞的活性，和/或肿瘤组织中的M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例。
第四方面，本申请提供了一种系统，其包括测试单元、数据采集单元和数据评估单元；其中所述测试单元包括免疫细胞系测试模块S1、原代免疫细胞测试模块S2及肿瘤浸润免疫细胞测试模块S3；所述数据采集单元被设置为分别独立地记录由所述测试单元的各所述模块产生的数据；且所述数据评估单元被设置为对所述数据采集单元所记录的数据进行评估。
在一个具体实施方式中，所述数据评估单元还包括过滤元件，所述过滤元件被设置为，根据所述数据的评估结果，过滤所述数据对应的所述测试单元中的测试物。
在一个具体实施方式中，所述免疫细胞系测试模块S1包括免疫细胞系靶细胞测试子模块S1-1和免疫细胞系非靶细胞测试子模块S1-2。
在一个具体实施方式中，所述数据评估单元被设置为对输入的所述数据采集单元记录的所述子模块S1-1的数据进行评估，输出正(+)或否(-)等级的评估结果。
在一个具体实施方式中，所述过滤元件被设置为将所述子模块S1-1的评估结果为否的数据对应的测试物从所述测试单元中剔除。
在一个具体实施方式中，所述原代免疫细胞测试模块S2包括原代免疫细胞靶细胞测试子模块S2-1和原代免疫细胞非靶细胞测试子模块S2-2。
在一个具体实施方式中，所述数据评估单元对输入的所述数据采集单元记录的所述子模块S2-1的数据进行评估，输出正(+)或否(-)等级的评估结果。
在一个具体实施方式中，所述过滤元件被设置为将所述子模块S2-1的评估结果为否的数据对应的测试物从所述测试单元中剔除。
在一个具体实施方式中，所述数据评估单元对输入的所述数据采集单元记录的所述模块S1的数据、所述模块S2的数据和所述模块S3的数据进行评估，输出为多区间计分等级指数。
在一个具体实施方式中，所述数据评估单元根据所述等级指数进行药物研发风险评估预测。
第五方面，本申请提供了根据第四方面所述的系统在制备高通量肿瘤免疫治疗药物筛选系统中用途。
第六方面，本申请提供了根据第四方面所述的系统在制备肿瘤免疫治疗药物评估系统中的用途，所述肿瘤免疫治疗药物评估系统用于评估所述肿瘤免疫治疗药物对肿瘤免疫细胞的有效性和/或安全性。所述数据评估单元根据所述等级划分进行药物研发风险评估预测。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明书如下：
图1显示的是本申请所述的肿瘤免疫治疗药物的系统的示意图。
图2显示的是使用本申请所述的肿瘤免疫治疗药物的系统评估测试物的流程图。
图3显示的是使用本申请所述的肿瘤免疫治疗药物的系统评估测试物的一个实例。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
术语定义
在本申请中，术语“肿瘤免疫”通常可以包括肿瘤发生、发展、转移等过程中，机体对肿瘤抗原的效应、免疫细胞相关的肿瘤细胞逃逸以及免疫细胞表型变化。所述肿瘤免疫通常可以包括肿瘤相关的细胞免疫和体液免疫。例如，本申请所述测试物对肿瘤免疫细胞的影响，可以体现为在测试物存在时，靶细胞的表型、非靶细胞的表型以及肿瘤组织中各免疫细胞的表型。
在本申请中，术语“靶细胞”和“靶点相关细胞”可以互换，通常是指作为目标的细胞，或者关注的细胞。在存在测试物的情况下，所述靶细胞可以表现出某些变化，因此可以作为反映测试物性能的测试对象。在本申请中，术语“非靶细胞”通常是指不作为目标的细胞。在存在测试物的情况下，所述非靶细胞也可表现出某些变化。在本申请中，靶细胞和非靶细胞可以来自细胞系或原代细胞。例如，靶细胞和非靶细胞可以是免疫细胞系或原代免疫细胞。所述靶细胞常常是一种免疫细胞，在特殊情况下靶细胞也可以是多种免疫细胞。
在本申请中，术语“免疫细胞”通常是指参与免疫应答，例如促进免疫效应应答的细胞。免疫细胞的示例包括淋巴细胞，例如B细胞和T细胞；天然杀伤细胞；髓样细胞，例如单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性细胞、肥大细胞、嗜碱性细胞和粒细胞。
在本申请中，术语“肿瘤免疫细胞”通常是指肿瘤免疫相关的免疫细胞。
在本申请中，术语“细胞系”通常是指永生化的细胞克隆。在适宜条件下，细胞系可以在体外倍增多代，且各代细胞系间的表型通常是基本一致的；但也可能具有某些差别。
在本申请中，术语“原代细胞”通常是指从活体组织中直接获取，并在体外培养的细胞。原代细胞可以作为体内状态细胞的模型。
在本申请中，术语“表型”通常是指细胞表现出的可检测的特征。表型可以是外观方面或功能方面的特性。在本申请中，表型可以体现在细胞的生存活力、增殖能力、激活水平或分化方向的方面，也可以体现在细胞因子的分泌水平，或者其他蛋白如细胞表面受体、共刺激分子等的表达水平方面。
在本申请中，术语“肿瘤免疫浸润效果”和“对肿瘤免疫浸润的影响”可以互换，通常是指测试物对肿瘤浸润淋巴细胞的影响。在本申请中，术语“肿瘤浸润淋巴细胞”或“TIL”通常是指最初作为白细胞获得的细胞群，所述细胞已经离开受试者的血流并迁移到肿瘤中。TIL可以包括但不限于CD8+细胞毒性T细胞(淋巴细胞)、Th1和Th17CD4+T细胞、天然杀伤细胞、树突细胞和M1巨噬细胞。
在本申请中，术语“模块”通常是指相互间独立运行的测试方案，且一个模块中可以由几个相互独立而有相似特征的子模块组成。各模块可以同时运行或先后运行；但在特别注明情况下，各模块可以按照一定顺序运行。例如，在本申请中一种测试物可以首先运行免疫细胞系靶细胞测试子模块；仅当所述测试物通过所述免疫细胞系靶细胞测试的评估时，再进行测试单元中的其他模块的测试与评估。而对于原代免疫细胞靶细胞测试子模块、免疫细胞系非靶细胞测试子模块、原代免疫细胞非靶细胞测试子模块、肿瘤浸润免疫细胞测试模块可以同时运行或先后运行；可以随机顺序运行，也可以按照预定的顺序运行。例如，通过所述免疫细胞系靶细胞测试的测试物可以依次输入并运行原代免疫细胞靶细胞测试子模块、免疫细胞系非靶细胞测试子模块、原代免疫细胞非靶细胞测试子模块、肿瘤浸润免疫细胞测试模块；或者依次输入并运行免疫细胞系非靶细胞测试子模块、原代免疫细胞靶细胞测试子模块、原代免疫细胞非靶细胞测试子模块、肿瘤浸润免疫细胞测试模块。另外，在具体情况下，可以规定通过所述免疫细胞系靶细胞测试的测试物，先运行原代免疫细胞靶细胞测试子模块，然后将所述原代免疫细胞靶细胞测试子模块的评估为否(-)的测试物从平台中移除，只有正(+)的测试物可以在平台中继续运行，输入免疫细胞系非靶细胞测试子模块、原代免疫细胞非靶细胞测试子模块、肿瘤浸润免疫细胞测试模块；而所述免疫细胞系非靶细胞测试子模块、所述原代免疫细胞非靶细胞测试子模块、所述肿瘤浸润免疫细胞测试模块可以同时运行或先后运行；可以随机顺序运行，也可以按照预定的顺序运行。
发明详述
评估方法
本申请提供评估测试物对肿瘤免疫细胞的影响的方法，其包括以下步骤：i)评估所述测试物对靶细胞的影响，ii)评估所述测试物对非靶细胞的影响；以及iii)评估所述测试物对肿瘤免疫浸润的影响；其中所述步骤i)包括：i-1)评估所述测试物对免疫细胞系靶细胞的影响，以及i-2)评估所述测试物对原代免疫细胞靶细胞的影响；其中在进行所述步骤i-1)的评估之后，将评估结果分为正(+)与否(-)两种等级，且对于该评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
在本申请中，一种测试物可以首先进行免疫细胞系靶细胞的效果评估；仅当所述测试物通过所述免疫细胞系靶细胞的效果评估时，再进行其他评估。后续可以同时进行或先后进行原代免疫细胞靶细胞的效果评估、免疫细胞系非靶细胞的效果评估、原代免疫细胞非靶细胞的效果评估、肿瘤浸润免疫的效果评估；上述评估随机顺序进行，也可以按照预定的顺序进行。例如，所述免疫细胞系靶细胞的效果评估为正的测试物，后续可以先进行原代免疫细胞靶细胞的效果评估，然后进行免疫细胞系非靶细胞的效果评估、原代免疫细胞非靶细胞的效果评估，以及肿瘤浸润免疫细胞的效果评估；后续也可以先进行免疫细胞系非靶细胞的效果评估，然后进行原代免疫细胞靶细胞的效果评估、原代免疫细胞非靶细胞的效果评估，以及肿瘤浸润免疫细胞的效果评估。另外，在具体情况下，所述免疫细胞系靶细胞的效果评估为正的测试物，后续先进行原代免疫细胞靶细胞的效果评估，其中可以将所述原代免疫细胞靶细胞测试子模块的评估为否的测试物直接判定为阴性测试物，不再进行其他评估，而只有正的测试物可以继续进行免疫细胞系非靶细胞的效果评估、原代免疫细胞非靶细胞的效果评估以及肿瘤浸润免疫细胞的效果评估；而所述免疫细胞系非靶细胞的效果评估、所述原代免疫细胞非靶细胞的效果评估、所述肿瘤浸润免疫细胞的效果评估可以同时进行或先后进行；可以随机顺序进行，也可以按照预定的顺序进行。
具体地，当所述靶细胞为B细胞时，所述靶细胞即B细胞的效果评估可以包括：评估测试物对所述B细胞的增殖能力的影响，评估测试物对所述B细胞中IL-6的表达水平的影响，和/或评估测试物对所述B细胞产生抗体的水平的影响。至于非靶细胞，其可以包括T细胞、巨噬细胞、树突状细胞和/或NK细胞。其中，所述T细胞表型可以包括：所述T细胞中的细胞因子IL-2的表达水平，所述T细胞中的IFNγ的表达水平，和/或所述T细胞的细胞增殖能力。其中，所述树突状细胞表型可以包括：所述树突状细胞的增殖能力及所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，以及所述树突状细胞中的IL-12的表达水平，所述树突状细胞中的I型干扰素的表达水平，和/或所述树突状细胞中的IL-6的表达水平。其中，所述NK细胞表型可以包括：所述NK细胞的增殖能力及所述NK细胞的活性，和所述NK细胞中的NKG2A的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。其中，所述巨噬细胞表型可以包括：所述巨噬细胞的增殖能力及所述巨噬细胞的活性，M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述巨噬细胞中产生的I型干扰素的表达水平。
具体地，当所述靶细胞为T细胞时，所述靶细胞即T细胞的效果评估可以包括：评估测试物对所述T细胞中的IL-2的表达水平的影响，评估测试物对所述T细胞中的IFNγ的表达水平的影响，和/或评估测试物对所述T细胞的细胞增殖能力的影响。至于非靶细胞，其可以包括B细胞、巨噬细胞、树突状细胞和/或NK细胞。其中，所述B细胞表型可以包括：所述B细胞的增殖能力，和/或所述B细胞产生抗体的情况。其中，所述树突状细胞表型可以包括：所述树突状细胞的增殖能力及所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，以及所述树突状细胞中的IL-12的表达水平，所述树突状细胞中的I型干扰素的表达水平，和/或所述树突状细胞中的IL-6的表达水平。其中，所述NK细胞表型可以包括：所述NK细胞的增殖能力及所述NK细胞的活性，和所述NK细胞中的NKG2A的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。其中，所述巨噬细胞表型可以包括：所述巨噬细胞的增殖能力及所述巨噬细胞的活性，M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述巨噬细胞中产生的I型干扰素的表达水平。
所述靶细胞还可以是巨噬细胞、树突状细胞和/或NK细胞。
至于肿瘤浸润效果评估，所述肿瘤浸润效果评估包括：评估所述测试物对肿瘤组织中的T细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中的树突状细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中的巨噬细胞表型的影响，和/或评估所述测试物对肿瘤组织中的NK细胞表型的影响。其中，所述T细胞表型包括：存在测试物的条件下，肿瘤组织中的所述T细胞的比例，所述T细胞的增殖能力，所述T细胞的活性，所述T细胞中的IL-2的表达水平，所述T细胞中的TNFα的表达水平，所述T细胞中的颗粒酶素的表达水平，所述T细胞中的IFNγ的表达水平，和/或所述T细胞中的PD1的表达水平。其中，所述树突状细胞表型包括：存在测试物的条件下，肿瘤组织中的所述树突状细胞的比例，所述树突状细胞的增殖能力，所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述树突状细胞中PD-L1的表达水平。其中，所述NK细胞表型包括：存在测试物的条件下，肿瘤组织中的所述NK细胞的比例，所述NK细胞的增殖能力，所述NK细胞的活性，所述NK细胞中的NKG2A的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。其中，所述巨噬细胞表型包括：存在测试物的条件下，肿瘤组织中的所述巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞的增殖能力，所述巨噬细胞的活性，和/或肿瘤组织中的M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例。
系统
本申请提供一种系统，包括测试单元，所述测试单元包括免疫细胞系测试模块、原代免疫细胞测试模块及肿瘤浸润免疫细胞测试模块，并且可以通过阶梯时序实现所述测试单元的有效运行；本平台还包括数据采集单元，所述测试单元的各模块运行的数据都被所述数据采集单元分别记录；本平台还包括数据评估单元，所述数据评估单元对所述数据采集单元记录的数据进行评估、整合和等级划分。
测试单元中，免疫细胞系测试模块和原代免疫细胞测试模块分别可以包括免疫细胞系测试子模块和免疫细胞系测试子模块，所述免疫细胞系测试模块和所述原代免疫细胞测试模块所输出的数据将被区分并纳入不同的数据方法。在一个具体实施方式中，所述测试单元与所述数据采集单元可以实时对接，所述测试单元数据输出后被所述数据采集单元及时记录并归类。所述数据采集单元存储的数据被输出到所述数据评估单元，所述数据评估单元根据数据特性进行整合并输出药物研发风险评估等级指数。
具体地，输入测试单元的测试物，将首先输入所述免疫细胞系靶细胞测试子模块，测试针对靶点生物学效应的有效性，输出数据将由所述数据采集单元记录并输入所述数据评估单元进行等级指数评估，该测试的风险评估等级指数将实行双等级制，即表现为正(+)与否(-)两种等级。其中测试物若不通过所述免疫细胞系靶细胞测试的评估，即表现为否，将被从所述肿瘤免疫治疗药物的系统中移除，且输出的数据将不再被纳入后续方法中进行评估。而测试物通过所述免疫细胞系靶细胞测试的评估，即表现为正，输出数据将纳入所述数据采集单元并被记录和保存。
所述非靶细胞模块输出的数据由所述数据采集单元记录和保存，整合入所述数据方法进行评估，进行多等级制，即表现为多区间计分等级指数。所述肿瘤浸润免疫细胞测试模块输出的数据由所述数据采集单元记录和保存，整合入所述数据方法进行评估，进行多等级制，即表现为多区间计分等级指数。将所测试的每一个测试物所对应的测试数据由所述数据采集单元整合后，输入所述数据评估单元可以进行多等级指数风险评估，以预测评估测试物的成药性风险等级。
综上所述，所有测试物被输入此平台后都会在测试单元、数据采集单元和数据评估单元三个单元中运行。其中，特性达不到所述免疫细胞系靶细胞测试的风险评估双等级指数标准的测试物会被及时移除，这些测试物不需要在测试单元所有模块中运行，因此会提高整个平台的运作效率。而通过所述免疫细胞系靶细胞测试的测试物都会在测试单元中的免疫细胞系测试模块、原代免疫细胞测试模块和肿瘤浸润免疫细胞测试模块三个模块中运行；这些测试的数据被数据采集单元采集整合后输入所述数据评估单元，并依据多等级制体系方法进行测试物的指数评级，所输出的评级指数即可作为测试物的生物活性评价标准被研究人员纳入其成药性的判断依据中。
在本申请中，一种测试物可以首先运行免疫细胞系靶细胞测试子模块；仅当所述测试物通过所述免疫细胞系靶细胞测试的评估时，再进行测试单元中的其他模块的测试与评估。而对于原代免疫细胞靶细胞测试子模块、免疫细胞系非靶细胞测试子模块、原代免疫细胞非靶细胞测试子模块、肿瘤浸润免疫细胞测试模块可以同时运行或先后运行；可以随机顺序运行，也可以按照预定的顺序运行。例如，通过所述免疫细胞系靶细胞测试的测试物可以依次输入并运行原代免疫细胞靶细胞测试子模块、免疫细胞系非靶细胞测试子模块、原代免疫细胞非靶细胞测试子模块、肿瘤浸润免疫细胞测试模块；或者依次输入并运行免疫细胞系非靶细胞测试子模块、原代免疫细胞靶细胞测试子模块、原代免疫细胞非靶细胞测试子模块、肿瘤浸润免疫细胞测试模块。另外，所述数据评估单元还可以包括过滤元件，所述过滤元件被设置为，根据所述数据的评估结果，过滤所述数据对应的所述测试单元中的测试物。在具体情况下，可以规定通过所述免疫细胞系靶细胞测试的测试物，先运行原代免疫细胞靶细胞测试子模块，然后将所述原代免疫细胞靶细胞测试子模块的评估为否(-)的测试物从平台中移除，只有正(+)的测试物可以在平台中继续运行，输入免疫细胞系非靶细胞测试子模块、原代免疫细胞非靶细胞测试子模块、肿瘤浸润免疫细胞测试模块；而所述免疫细胞系非靶细胞测试子模块、所述原代免疫细胞非靶细胞测试子模块、所述肿瘤浸润免疫细胞测试模块可以同时运行或先后运行；可以随机顺序运行，也可以按照预定的顺序运行。
在一个具体实施方案中，测试物的测试流程包括如下实施步骤：
首先，测试物优先在免疫细胞系测试模块中的靶细胞测试子模块中开始进行测试，其数据经数据采集单元和所述数据评估单元运行后做出评估，其中所述数据评估单元采用双等级制方法进行评估，评估为否(-)的测试物将被从平台中移除，只有正(+)的测试物将继续在平台中运行。
然后，测试物在原代免疫细胞测试模块中的靶细胞测试子模块进行新一轮的评估，而其数据亦将经数据采集单元和所述数据评估单元运行后做出评估，其中所述数据评估单元亦采用双等级制方法进行评估，评估为否(-)的测试物可以从平台中移除，只有正(+)的测试物可以在平台中继续运行。
随后，测试物将分别在免疫细胞系测试模块中非靶细胞测试子模块、原代免疫细胞测试模块中非靶细胞测试子模块及肿瘤浸润免疫细胞测试模块中进行运行及数据采集，同时可以运行或暂时不运行所述数据评估单元。
最后，数据采集单元将所采集的测试物在测试单元运行得数据进行整合，数据输入所述数据评估单元，进行多等级制体系评估，所输出的评估指数可用于测试物在生物学特性上的可用于其成药性的评价。
本申请还涉及以下的实施方式：
1.评估测试物对肿瘤免疫细胞的影响的方法，其包括以下步骤：i)评估所述测试物对靶细胞的影响，ii)评估所述测试物对非靶细胞的影响；以及iii)评估所述测试物对肿瘤免疫浸润的影响；
其中所述步骤i)包括：
i-1)评估所述测试物对免疫细胞系靶细胞的影响，以及
i-2)评估所述测试物对原代免疫细胞靶细胞的影响；
其中在进行所述步骤i-1)的评估之后，将评估结果分为正(+)与否(-)两种等级，且对于该评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
2.根据实施方式1中所述的方法，其中对于在所述步骤i-1)中的评估结果为正的测试物，继续进行所述步骤i-2)，并且将评估结果分为正(+)与否(-)两种等级。
3.根据实施方式2中所述的方法，其中对于在所述步骤i-2)中的评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
4.根据实施方式1-3中任一项所述的方法，其中在进行所述步骤ii)的评估之后，将评估结果记录为多区间计分等级指数。
5.根据实施方式1-4中任一项所述的方法，其中所述步骤ii)包括评估所述测试物对免疫细胞系非靶细胞的影响，和/或评估所述测试物对原代免疫细胞非靶细胞的影响。
6.根据实施方式1-5中任一项所述的方法，其中在进行所述步骤iii)的评估之后，将评估结果记录为多区间计分等级指数。
7.根据实施方式1-6中任一项所述的方法，其中所述步骤iii)包括：评估所述测试物对肿瘤组织中T细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中树突状细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中巨噬细胞表型的影响，和/或评估所述测试物对肿瘤组织中自然杀伤细胞(NK细胞)表型的影响。
8.根据实施方式7中所述的方法，其中所述T细胞表型包括：肿瘤组织中的所述T细胞的比例，所述T细胞的增殖能力，所述T细胞的活性，所述T细胞中白细胞介素-2(IL-2)的表达水平，所述T细胞中肿瘤坏死因子α(TNFα)的表达水平，所述T细胞中颗粒酶素的表达水平，所述T细胞中干扰素-γ(IFNγ)的表达水平，和/或所述T细胞中程序性死亡受体-1(PD1)的表达水平。
9.根据实施方式7或8中所述的方法，其中所述树突状细胞表型包括：肿瘤组织中的所述树突状细胞的比例，所述树突状细胞的增殖能力，所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述树突状细胞中PD-L1的表达水平。
10.根据实施方式7-9中任一项所述的方法，其中所述NK细胞表型包括：肿瘤组织中的所述NK细胞的比例，所述NK细胞的增殖能力，所述NK细胞的活性，所述NK细胞中的C型凝集素受体家族成员A(NKG2A)的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIR的表达水平。
11.根据实施方式7-10中任一项所述的方法，其中所述巨噬细胞表型包括：肿瘤组织中的所述巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞的增殖能力，所述巨噬细胞的活性，和/或肿瘤组织中的M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例。
12.评估测试物对肿瘤免疫B细胞的影响的方法，其包括以下步骤：a)评估所述测试物对B细胞的影响，b)评估所述测试物对非靶细胞的影响；以及c)评估所述测试物对肿瘤免疫浸润的影响；
其中所述步骤a)包括：
a-1)评估所述测试物对免疫细胞系B细胞的影响，以及
a-2)评估所述测试物对原代免疫细胞B细胞的影响；
其中所述评估结果分为正(+)与否(-)两种等级，且对于该评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
13.根据实施方式12中所述的方法，其中所述步骤a)包括：评估测试物对所述B细胞的增殖能力的影响，评估测试物对所述B细胞中IL-6的表达水平的影响，和/或评估测试物对所述B细胞产生抗体的水平的影响。
14.根据实施方式12或13所述的方法，其中所述非靶细胞包括T细胞、巨噬细胞、树突状细胞和/或NK细胞。
15.根据实施方式12-14中任一项所述的方法，其中所述步骤b)包括：评估测试物对T细胞表型的影响，评估测试物对树突状细胞表型的影响，评估测试物对巨噬细胞表型的影响，和/或评估测试物对NK细胞表型的影响。
16.根据实施方式15中所述的方法，其中所述T细胞表型包括：所述T细胞中的细胞因子IL-2的表达水平，所述T细胞中的IFNγ的表达水平，和/或所述T细胞的细胞增殖能力。
17.根据实施方式15或16所述的方法，其中所述树突状细胞表型包括：所述树突状细胞的增殖能力及所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，以及所述树突状细胞中的IL-12的表达水平，所述树突状细胞中的I型干扰素的表达水平，和/或所述树突状细胞中的IL-6的表达水平。
18.根据实施方式15-17中任一项所述的方法，其中所述NK细胞表型包括：所述NK细胞的增殖能力及所述NK细胞的活性，和所述NK细胞中的NKG2A的表达水平、所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。
19.根据实施方式15-18中任一项所述的方法，其中所述巨噬细胞表型包括：所述巨噬细胞的增殖能力及所述巨噬细胞的活性，M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述巨噬细胞中产生的I型干扰素的表达水平。
20.根据实施方式12-19中任一项所述的方法，其中所述步骤c)包括：评估所述测试物对肿瘤组织中的T细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中的树突状细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中的巨噬细胞表型的影响，和/或评估所述测试物对肿瘤组织中的NK细胞表型的影响。
21.根据实施方式20中所述的方法，其中所述T细胞表型包括：肿瘤组织中的所述T细胞的比例，所述T细胞的增殖能力，所述T细胞的活性，所述T细胞中的IL-2的表达水平，所述T细胞中的TNFα的表达水平，所述T细胞中的颗粒酶素的表达水平，所述T细胞中的IFNγ的表达水平，和/或所述T细胞中的PD1的表达水平。
22.根据实施方式20或21所述的方法，其中所述树突状细胞表型包括：肿瘤组织中的所述树突状细胞的比例，所述树突状细胞的增殖能力，所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述树突状细胞中PD-L1的表达水平。
23.根据实施方式20-22中任一项所述的方法，其中所述NK细胞表型包括：肿瘤组织中的所述NK细胞的比例，所述NK细胞的增殖能力，所述NK细胞的活性，所述NK细胞中的NKG2A的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。
24.根据实施方式20-23中任一项所述的方法，其中所述巨噬细胞表型包括：肿瘤组织中的所述巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞的增殖能力，所述巨噬细胞的活性，和/或肿瘤组织中的M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例。
25.评估测试物对肿瘤免疫T细胞的影响的方法，其包括以下步骤：a’)评估所述测试物对T细胞的影响，b’)评估所述测试物对非靶细胞的影响；以及c’)评估所述测试物对肿瘤免疫浸润的影响；
其中所述步骤a’)包括：
a-1’)评估所述测试物对免疫细胞系T细胞的影响，以及
a-2’)评估所述测试物对原代免疫细胞T细胞的影响；
其中所述评估结果分为正(+)与否(-)两种等级，且对于该评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
26.根据实施方式25中所述的方法，其中所述步骤a’)包括：评估测试物对所述T细胞中的IL-2的表达水平的影响，评估测试物对所述T细胞中的IFNγ的表达水平的影响，和/或评估测试物对所述T细胞的细胞增殖能力的影响。
27.根据实施方式25或26所述的方法，其中所述非靶细胞包括B细胞、巨噬细胞、树突状细胞和/或NK细胞。
28.根据实施方式25-27中任一项所述的方法，其中所述步骤b’)包括：评估测试物对B细胞表型的影响，评估测试物对树突状细胞表型的影响，评估测试物对巨噬细胞表型的影响，和/或评估测试物对NK细胞表型的影响。
29.根据实施方式28中所述的方法，其中所述B细胞表型包括：所述B细胞的增殖能力，和/或所述B细胞产生抗体的情况。
30.根据实施方式28或29所述的方法，其中所述树突状细胞表型包括：所述树突状细胞的增殖能力及所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，以及所述树突状细胞中的IL-12的表达水平，所述树突状细胞中的I型干扰素的表达水平，和/或所述树突状细胞中的IL-6的表达水平。
31.根据实施方式28-30中任一项所述的方法，其中所述NK细胞表型包括：所述NK细胞的增殖能力及所述NK细胞的活性，和所述NK细胞中的NKG2A的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。
32.根据实施方式28-31中任一项所述的方法，其中所述巨噬细胞表型包括：所述巨噬细胞的增殖能力及所述巨噬细胞的活性，M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞中的共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述巨噬细胞中产生的I型干扰素的表达水平。
33.根据实施方式25-32中任一项所述的方法，其中所述步骤c’)包括：评估所述测试物对肿瘤组织中的T细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中的树突状细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中的巨噬细胞表型的影响，和/或评估所述测试物对肿瘤组织中的NK细胞表型的影响。
34.根据实施方式33所述的方法，其中所述T细胞表型包括：肿瘤组织中的所述T细胞的比例，所述T细胞的增殖能力，所述T细胞的活性，所述T细胞中的IL-2的表达水平，所述T细胞中的TNFα的表达水平，所述T细胞中的颗粒酶素的表达水平，所述T细胞中的IFNγ的表达水平，和/或所述T细胞中的PD1的表达水平。
35.根据实施方式33或34所述的方法，其中所述树突状细胞表型包括：肿瘤组织中的所述树突状细胞的比例，所述树突状细胞的增殖能力，所述树突状细胞的活性，所述树突状细胞中共刺激分子CD80和CD86的表达水平，和/或所述树突状细胞中PD-L1的表达水平。
36.根据实施方式33-35中任一项所述的方法，其中所述NK细胞表型包括：肿瘤组织中的所述NK细胞的比例，所述NK细胞的增殖能力，所述NK细胞的活性，所述NK细胞中的NKG2A的表达水平，所述NK细胞中的颗粒酶素的表达水平，和/或所述NK细胞中的KIR的表达水平。
37.根据实施方式33-36中任一项所述的方法，其中所述巨噬细胞表型包括：肿瘤组织中的所述巨噬细胞的比例，所述巨噬细胞的增殖能力，所述巨噬细胞的活性，和/或肿瘤组织中的M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例。
38.一种系统，其包括测试单元、数据采集单元和数据评估单元；其中所述测试单元包括免疫细胞系测试模块S1、原代免疫细胞测试模块S2及肿瘤浸润免疫细胞测试模块S3；所述数据采集单元被设置为分别独立地记录由所述测试单元的各所述模块产生的数据；且所述数据评估单元被设置为对所述数据采集单元所记录的数据进行评估。
39.根据实施方式38中所述的系统，所述数据评估单元还包括过滤元件，所述过滤元件被设置为，根据所述数据的评估结果，过滤所述数据对应的所述测试单元中的测试物。
40.根据实施方式38或39所述的系统，所述免疫细胞系测试模块S1包括免疫细胞系靶细胞测试子模块S1-1和免疫细胞系非靶细胞测试子模块S1-2。
41.根据实施方式40所述的系统，所述数据评估单元被设置为对输入的所述数据采集单元记录的所述子模块S1-1的数据进行评估，输出正(+)或否(-)等级的评估结果。
42.根据实施方式41所述的系统，所述过滤元件被设置为将所述子模块S1-1的评估结果为否的数据对应的测试物从所述测试单元中剔除。
43.根据实施方式38-42中任一项所述的系统，所述原代免疫细胞测试模块S2包括原代免疫细胞靶细胞测试子模块S2-1和原代免疫细胞非靶细胞测试子模块S2-2。
44.根据实施方式43所述的系统，所述数据评估单元对输入的所述数据采集单元记录的所述子模块S2-1的数据进行评估，输出正(+)或否(-)等级的评估结果。
45.根据实施方式44所述的系统，所述过滤元件被设置为将所述子模块S2-1的评估结果为否的数据对应的测试物从所述测试单元中剔除。
46.根据实施方式38-45中任一项所述的系统，所述数据评估单元对输入的所述数据采集单元记录的所述模块S1的数据、所述模块S2的数据和所述模块S3的数据进行评估，输出为多区间计分等级指数。
47.根据实施方式46中所述的系统，所述数据评估单元根据所述等级指数进行药物研发风险评估预测。
48.根据实施方式38-47中任一项所述的系统在制备高通量肿瘤免疫治疗药物筛选系统中用途。
49.根据实施方式38-47中任一项所述的系统在制备肿瘤免疫治疗药物评估系统中的用途，所述肿瘤免疫治疗药物评估系统用于评估所述肿瘤免疫治疗药物对肿瘤免疫细胞的有效性和/或安全性。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的融合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
试剂与材料信息
表1试剂货号及生产厂商信息
Figure BDA0002880172460000181
Figure BDA0002880172460000191
表2仪器规格货号及生产厂商信息
仪器 型号 品牌
二氧化碳培养箱 3111 Thermo Fisher Scientific
多功能读板仪 SpectraMax i3x Molecular Devices
生物安全柜 BSC-1600ⅡA2 苏净安泰
超纯水仪 Simplicity Millipore
Countstar自动细胞计数仪 IC 1000 上海睿钰生物科技有限公司
流式细胞仪 BD LSRFortessa 美国BD公司
表3细胞类型/批号及厂商信息
细胞 种类/批号 公司
Jurkat E6-1 Human Acute T cell Leukemia 中科院细胞库
THP1 Human Acute monocytic Leukemia 中科院细胞库
MC38 Mice colon adenocarcinoma cells 美迪西生物医药
人PBMC NPB-MNC/LP200511 澳赛尔斯生物技术(上海)有限公司
表4小鼠来源及厂商信息
品系 周龄 公司
C57BL/6 6-8周 上海斯莱克实验动物有限公司
BALB/C 6-8周 上海斯莱克实验动物有限公司
实施例
本实施例中所使用的测试物A，B，C和D针对的靶细胞为T淋巴细胞，因此所采用的免疫细胞系靶细胞Jurkat细胞为人来源的T淋巴细胞白血病细胞，而分析的原代细胞靶细胞者为人外周血单核细胞(PBMC)中的T细胞。
1.免疫细胞系靶细胞测试子模块
首先，对测试物A、B、C和D进行免疫细胞系靶细胞的生物功能测试，其步骤如下：
1.1将测试物A、B、C和D粉末用DMSO溶解至10mM，各取2ul测试物加入到998ul1640培养基(所提及的1640培养基均为RPMI 1640加入10％FBS)中，涡旋混匀作为第一个浓度点。用0.2％DMSO培养基3倍逐渐稀释测试物溶液，共8个浓度点。
1.2收集Jurkat细胞，用1640培养基调整细胞密度至1.1×106/ml，每孔取120ul细胞悬液以及120ul测试物溶液，细胞培养箱孵育1h。
1.3将anti-CD28和anti-CD3抗体用1640培养基稀释至10ug/ml，每孔中加入20ul(对照孔中加入20ul 1640培养基)，将测试物及细胞混合液(加入前混匀)180ul加入孔板中。细胞培养箱中培养24h后离心，每孔取上清备用。
1.4通过ELISA检测试剂检测细胞上清液中的细胞因子IL-2的水平，以判断测试物对靶细胞系Jurkat细胞的生物效应，其数据被采集后纳入评价系统中进行双等级制方法评估。
结果：测试物A的测试指数为否(-)等级指数，而测试物B、C和D测试指数为正(+)等级指数，因此测试物A被移除，测试物B、C和D将进行原代免疫细胞靶细胞测试。
2.原代免疫细胞靶细胞测试子模块
然后，对测试物B、C和D进行原代免疫细胞靶细胞的生物功能测试，其步骤如下：
2.1取10mM测试物B、C和D各2ul加入到998ul 1640培养基中，涡旋混匀作为第一个浓度点。用0.2％DMSO培养基3倍逐渐稀释测试物溶液，共8个浓度点。
2.2收集PBMC细胞，用1640培养基调整细胞密度至1.1×106/ml，每孔取120ul细胞悬液以及120ul测试物溶液，细胞培养箱孵育1h。
2.3将anti-CD28和anti-CD3抗体用1640培养基分别稀释至10ug/ml和0.1ug/ml，每孔中加入20ul(对照孔中加入20ul 1640培养基)，将测试物及细胞混合液180ul加入孔板中。细胞培养箱中培养24h后离心，每孔取上清备用。
2.4通过ELISA检测试剂检测细胞上清液中的细胞因子IL-2的水平，以判断测试物对T细胞原代靶细胞的生物效应，其数据被采集后纳入评价系统中进行双等级制方法评估。
结果：测试物B的测试指数为否(-)等级指数，而测试物C和D测试指数为正(+)等级指数，因此测试物B被移除。测试物C和D将进行开展免疫细胞系测试模块中非靶细胞测试单元，原代免疫细胞测试模块中非靶细胞测试单元及肿瘤浸润免疫细胞测试模块生物功能测试。
3免疫细胞系非靶细胞测试和原代免疫细胞非靶细胞测试
然后，对测试物C和D进行非靶细胞的生物功能测试。本实施例中非靶细胞测试主要关注测试物的细胞毒性，采用CTG细胞活力检测试剂进行细胞活力检测。本实施例中免疫细胞系非靶细胞使用人急性白血病单核细胞系THP1，原代细胞非靶细胞为小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)。
3.1取2ul浓度为10mM测试物C和D化合物加入到998ul 1640培养基中，涡旋混匀作为第一个浓度点。用0.2％DMSO培养基2倍逐渐稀释测试物溶液，共8个浓度点。
3.2THP1和BMDC收集后，用1640培养基调整细胞密度至1million/ml，每孔取100ul细胞悬液以及100ul测试物溶液，细胞培养箱孵育24h。
3.3在细胞培养箱中培养上述非靶细胞24h后离心，每孔去除上清100ul后，再加入25ul CTG检测溶液，室温避光放置15min后使用多功能读数仪读取数值，数据经数据采集单元记录。
4肿瘤浸润免疫细胞测试模块
最后，对测试物B、C和D进行肿瘤浸润免疫细胞测试。采用分离小鼠皮下接种小鼠结肠癌细胞株MC38细胞形成的原位肿瘤后在体外进行培养，同时添加不同剂量测试物处理，而后通过分析浸润的免疫细胞的特性，来评估测试物的生物效应。
4.1收集体外培养的MC38细胞，用PBS缓冲液重悬细胞后调整至5million/ml，将细胞接种至6-8周龄的C57BL/6小鼠腹部皮下，每只小鼠接种100ul。
4.2待肿瘤生长至500-1000mm3时将肿瘤剥离，研磨后细胞使用1640培养基调整至107/ml备用，取2ul浓度为10mM测试物C和D测试物加入到998ul 1640培养基中，涡旋混匀作为第一个浓度点。用0.2％DMSO培养基2倍逐渐稀释测试物溶液，共6个浓度点，每孔取100ul细胞悬液以及100ul测试物溶液，使用含有0.1％DMSO培养基作为对照组，细胞培养箱孵育24h。
4.3收集细胞，使用流式细胞仪分析细胞中的T细胞(CD3+)，树突状细胞(DC，CD11c+)，巨噬细胞(Mac，F4/80+)及NK细胞(NKp46+)细胞的比例及生存情况指示测试物在肿瘤浸润免疫细胞中的生物效应。
4.4数据采集单元整合所有记录的数据，输入数据方法，数据方法根据多区间计分等级指数评价体系输出C和D测试物的等级指数。

Claims (10)

1.评估测试物对肿瘤免疫细胞的影响的方法，其包括以下步骤：i)评估所述测试物对靶细胞的影响，ii)评估所述测试物对非靶细胞的影响；以及iii)评估所述测试物对肿瘤免疫浸润的影响；
其中所述步骤i)包括：
i-1)评估所述测试物对免疫细胞系靶细胞的影响，以及
i-2)评估所述测试物对原代免疫细胞靶细胞的影响；
其中在进行所述步骤i-1)的评估之后，将评估结果分为正(+)与否(-)两种等级，且对于该评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
2.根据权利要求1中所述的方法，其中对于在所述步骤i-1)中的评估结果为正的测试物，继续进行所述步骤i-2)，并且将评估结果分为正(+)与否(-)两种等级。
3.根据权利要求2中所述的方法，其中对于在所述步骤i-2)中的评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中在进行所述步骤ii)的评估之后，将评估结果记录为多区间计分等级指数。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述步骤ii)包括评估所述测试物对免疫细胞系非靶细胞的影响，和/或评估所述测试物对原代免疫细胞非靶细胞的影响。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中在进行所述步骤iii)的评估之后，将评估结果记录为多区间计分等级指数。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述步骤iii)包括：评估所述测试物对肿瘤组织中T细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中树突状细胞表型的影响，评估所述测试物对肿瘤组织中巨噬细胞表型的影响，和/或评估所述测试物对肿瘤组织中自然杀伤细胞(NK细胞)表型的影响。
8.评估测试物对肿瘤免疫B细胞的影响的方法，其包括以下步骤：a)评估所述测试物对B细胞的影响，b)评估所述测试物对非靶细胞的影响；以及c)评估所述测试物对肿瘤免疫浸润的影响；
其中所述步骤a)包括：
a-1)评估所述测试物对免疫细胞系B细胞的影响，以及
a-2)评估所述测试物对原代免疫细胞B细胞的影响；
其中所述评估结果分为正(+)与否(-)两种等级，且对于该评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
9.评估测试物对肿瘤免疫T细胞的影响的方法，其包括以下步骤：a’)评估所述测试物对T细胞的影响，b’)评估所述测试物对非靶细胞的影响；以及c’)评估所述测试物对肿瘤免疫浸润的影响；
其中所述步骤a’)包括：
a-1’)评估所述测试物对免疫细胞系T细胞的影响，以及
a-2’)评估所述测试物对原代免疫细胞T细胞的影响；
其中所述评估结果分为正(+)与否(-)两种等级，且对于该评估结果为否的测试物，不再进行任何后续步骤而直接判定其为阴性测试物。
10.一种系统，其包括测试单元、数据采集单元和数据评估单元；其中所述测试单元包括免疫细胞系测试模块S1、原代免疫细胞测试模块S2及肿瘤浸润免疫细胞测试模块S3；所述数据采集单元被设置为分别独立地记录由所述测试单元的各所述模块产生的数据；且所述数据评估单元被设置为对所述数据采集单元所记录的数据进行评估。
CN202011642136.4A 2020-11-17 2020-12-31 一种筛选和评估肿瘤免疫治疗药物的系统和方法 Pending CN112779311A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011284771 2020-11-17
CN202011284771X 2020-11-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112779311A true CN112779311A (zh) 2021-05-11

Family

ID=75753403

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011642136.4A Pending CN112779311A (zh) 2020-11-17 2020-12-31 一种筛选和评估肿瘤免疫治疗药物的系统和方法

Country Status (3)

Country Link
US (1) US11965875B2 (zh)
EP (1) EP4001918A1 (zh)
CN (1) CN112779311A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1645143A (zh) * 2004-01-14 2005-07-27 香港理工大学 检测免疫反应的方法
CN102258564A (zh) * 2011-07-01 2011-11-30 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种微重力环境下提高免疫力的药物及其筛选方法
CN105200110A (zh) * 2014-06-17 2015-12-30 武汉大学 一种用于新药物开发的免疫毒性评价方法
CN106957893A (zh) * 2016-01-11 2017-07-18 中国科学院上海生命科学研究院 一种肿瘤免疫治疗药物靶点及其应用
CN110187107A (zh) * 2019-04-26 2019-08-30 温州医科大学 一种基于肿瘤组织浸润免疫细胞特征建立的结直肠癌预后评估装置及方法
US20200191770A1 (en) * 2016-12-27 2020-06-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for evaluating immunogenicity of test substance

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106928335A (zh) * 2015-12-31 2017-07-07 杭州阿德莱诺泰制药技术有限公司 用于肿瘤的Her-2多肽、组合物及制备方法和应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1645143A (zh) * 2004-01-14 2005-07-27 香港理工大学 检测免疫反应的方法
CN102258564A (zh) * 2011-07-01 2011-11-30 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种微重力环境下提高免疫力的药物及其筛选方法
CN105200110A (zh) * 2014-06-17 2015-12-30 武汉大学 一种用于新药物开发的免疫毒性评价方法
CN106957893A (zh) * 2016-01-11 2017-07-18 中国科学院上海生命科学研究院 一种肿瘤免疫治疗药物靶点及其应用
US20200191770A1 (en) * 2016-12-27 2020-06-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for evaluating immunogenicity of test substance
CN110187107A (zh) * 2019-04-26 2019-08-30 温州医科大学 一种基于肿瘤组织浸润免疫细胞特征建立的结直肠癌预后评估装置及方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BRIAN A KIDD等: "Mapping the effects of drugs on the immune system", 《NATURE BIOTECHNOLOGY》 *
DANUTA J. HERZYK: "《Immunotoxicology Strategies for Pharmaceutical Safety Assessment》", 31 December 2008 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20220155282A1 (en) 2022-05-19
US11965875B2 (en) 2024-04-23
EP4001918A1 (en) 2022-05-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Feili-Hariri et al. Polarization of naive T cells into Th1 or Th2 by distinct cytokine-driven murine dendritic cell populations: implications for immunotherapy
Chauvin et al. TIGIT and PD-1 impair tumor antigen–specific CD8+ T cells in melanoma patients
Sarhan et al. Adaptive NK cells resist regulatory T-cell suppression driven by IL37
Wang et al. PD1 blockade reverses the suppression of melanoma antigen-specific CTL by CD4+ CD25Hi regulatory T cells
Biller et al. Use of FoxP3 expression to identify regulatory T cells in healthy dogs and dogs with cancer
Baecher-Allan et al. MHC class II expression identifies functionally distinct human regulatory T cells
KR20190037243A (ko) 면역치료를 위한 티 세포 조성물
Bar-Ephraim et al. Cross-tissue transcriptomic analysis of human secondary lymphoid organ-residing ILC3s reveals a quiescent state in the absence of inflammation
Ahn et al. Lineage relationships of human interleukin-22–producing CD56+ RORγt+ innate lymphoid cells and conventional natural killer cells
Zhang et al. A novel subset of B7-H3+ CD14+ HLA-DR−/low myeloid-derived suppressor cells are associated with progression of human NSCLC
Khalife et al. Overexpression of regulatory T cell-related markers (FOXP3, CTLA-4 and GITR) by peripheral blood mononuclear cells from patients with breast cancer
Sabins et al. Differential expression of immune checkpoint modulators on in vitro primed CD4+ and CD8+ T cells
Imbert et al. γδ T cells in tumor microenvironment
CA2651328A1 (en) T-cell vaccine
Pohl et al. Neonates at risk of atopy show impaired production of interferon‐gamma after stimulation with bacterial products (LPS and SEE)
CN1659285A (zh) 抗原呈递细胞的质量分析
US7659084B2 (en) Methods for detecting and isolating antigen-specific T lymphocytes with CD40/C154 inhibitors
Morandi et al. Human TCR γδ+ T cells represent a novel target for IL‐27 activity
Kerkar et al. Timing and intensity of exposure to interferon‐γ critically determines the function of monocyte‐derived dendritic cells
Suen et al. BCG vaccination induces innate immune memory in γδ T cells in humans
CN112779311A (zh) 一种筛选和评估肿瘤免疫治疗药物的系统和方法
Rouas et al. Dendritic cells generated in clinical grade bags strongly differ in immune functionality when compared with classical DCs generated in plates
Borchers et al. Detection of ABCB5 tumour antigen-specific CD8+ T cells in melanoma patients and implications for immunotherapy
US20230158073A1 (en) Modulation of t cell cytotoxicity and related therapy
CN108486055A (zh) 培养基及其在中央记忆型t淋巴细胞培养中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40047353

Country of ref document: HK