CN112672734A - 包含蛋白质和聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的组合物 - Google Patents

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Abstract

公开了一种组合物，其包含蛋白质和具有通式I(I)的聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂，其中R1‑C(＝O)是脂肪酰基，R2是H或取代或未取代的烃基，X1是O或NH，X2是O或NH，n是0或1‑5的整数，R3是包含具有通式II和III(II)(III)的聚合单元的聚合基团，其中所述蛋白质与所述聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的重量比为200:1至1000:1。

Description

包含蛋白质和聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的组合物
技术领域
本发明涉及包含蛋白质和聚氧基烷基脂肪酰基表面活性剂的组合物。
背景技术
生物制剂(衍生自蛋白质或其他生物衍生大分子的药物)已迅速成为一类重要的药物。由于蛋白质材料相对易碎的性质，开发具有治疗益处和足够稳定以经受住加工、分配和给药的生物活性物质仍然是一项重大挑战。蛋白质生物药物生产者和配制者采用各种加工技术和配制策略来提高配制品的储存稳定性，但目前的赋形剂工具箱相当小。蛋白质干粉通常是储存更稳定的，因此许多第一代产品都是通过冻干或最近的喷雾干燥来干燥的。然而，干燥产品可能具有与重构相关的挑战，导致可能造成免疫原性的不溶性物种。此外，重构是典型地需要医学专家进行的过程，导致成本增加和患者的不便。许多蛋白质药物在临床上是通过静脉输液递送的，特别是肿瘤药物。随着蛋白质药物被开发用于其他疾病，如类风湿性关节炎或其他自身免疫性疾病，患者更喜欢在家自我给药。随着从诊所移到家，在可行的情况下，液体配制品是优选的递送形式。
为了提高液体配制品的稳定性，配制者采用了设计为稳定生物制剂的各种赋形剂，包括缓冲剂、盐、糖和表面活性剂。这些赋形剂用于优化蛋白质周围的环境，以最大化其胶体稳定性，减少与邻近蛋白质的相互作用，并阻止与表面的相互作用。表面活性剂特别是通过阻止蛋白质接近疏水性表面(例如小瓶壁或空气界面)来稳定蛋白质，在疏水表面上蛋白质可以吸附、变性并最终聚集。对于一些生物制剂，还提出了表面活性剂来稳定某些蛋白质亚区或阻止也可能导致变性的蛋白质-蛋白质相互作用，尽管这不被认为是主要的作用机理。用表面活性剂配制的绝大多数产品都含有聚山梨酯(聚山梨酯80或聚山梨酯20)或泊洛沙姆188，因为它们具有公认的安全性。
虽然聚山梨酯和泊洛沙姆188因其在可注射配制品中的安全性而被使用，但它们仍具有显著的缺点，特别是由于表面活性剂降解。如WO 2017/044366中公开的，最近已经开发了一系列表面活性剂，其基于用于蛋白质配制品的常见惰性结构单元。这些新颖的表面活性剂包含天然脂质中常见的完全饱和的烷基链、可以微调表面活性剂功能的氨基酸残基和聚醚非离子亲水性头基。这些结构单元通过酰胺键结合，以抵抗疏水物的水解(与酯键相比)，这与聚山梨酯的降解有关。WO 2017/044367中公开了使用这些表面活性剂稳定水溶液中的蛋白质。在WO 2017/044367的配制品中报道的表面活性剂相对于蛋白质的浓度为1:200或更小，并且优选为1:100或更小。
发明内容
已经出人意料地发现，WO 2017/044366中公开的表面活性剂可以用于防止在比WO2017/044367中报道的那些低得多的相对于蛋白质浓度的浓度下的水溶液中的蛋白质聚集。
因此，本发明涉及一种组合物，其包含蛋白质和具有通式I的聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂化合物
Figure BDA0002966906790000021
其中R1-C(＝O)是脂肪酰基，R2是H或取代或未取代的烃基，X1是O或NH，X2是O或NH，n是0或1-5的整数，R3是包含具有通式II和III的聚合单元的聚合基团
Figure BDA0002966906790000022
其中所述蛋白质与所述聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的重量比为200:1至1000:1。
已经发现具有式(I)的表面活性剂表现出的临界胶束浓度(高于其表面活性剂自发聚集成胶束的浓度)低于常规表面活性剂如聚山梨酯或泊洛沙姆188的临界胶束浓度。较低的临界胶束浓度表明更强的聚集驱动力，这可能转化为界面的更快稳定。不希望限于特定理论，较低的临界胶束浓度可以解释以下发现：具有式(I)的表面活性剂比常规表面活性剂1至2个数量级更快地达到表面平衡，并且在界面处超过蛋白质，因此降低了蛋白质聚集的可能性。
具体实施方式
定义
聚烷氧基化合物是含有一个或多个具有结构-(-A-O)m-的基团的化合物，其中m是3或更大，并且A是未取代的烷基。基团A可以是直链、支链、环状或其组合。各种-(-A-O)-基团中的各种A基团可以彼此相同或不同。
脂肪族化合物是含有一个或多个脂肪族基团的化合物。脂肪族基团是含有8个或更多个碳原子的基团，每个碳原子与所述基团中的一个或多个其他碳原子键合。聚烷氧基脂肪族化合物是既是聚烷氧基化合物又是脂肪族化合物的化合物。
数均分子量定义为样品的总重量除以样品中分子的数量。
烃基是含有氢原子和碳原子的基团。未取代的烃基仅含有氢原子和碳原子。取代的烃基含有一个或多个取代基，所述取代基含有一个或多个除氢和碳以外的原子。
蛋白质是其中聚合单元是氨基酸的聚合单元的聚合物。氨基酸通过肽键键合在一起。蛋白质含有一种或多种氨基酸残基的20个或更多个聚合单元。术语蛋白质包括线性多肽链以及含有多肽链的更复杂的结构。
如果蛋白质的分子以溶解的单个分子的形式分布在整个连续的液体介质中，则认为所述蛋白质是呈液体介质中的溶液(或同义地，溶解在液体介质中)。如果连续液体介质含有的水量基于所述连续液体介质的重量为60重量％或更多，则认为蛋白质溶解在水中。
如果pH值为4.5至8.5，使得当化学基团在该pH值下与水接触时，存在的那些化学基团的50摩尔％或更多为离子形式，则所述化学基团是离子基团。
缓冲剂为(i)具有接受质子以形成所述化合物的共轭酸的能力并且所述化合物的共轭酸的pKa小于10的化合物，或(ii)具有释放质子的能力且所述化合物的pKa大于4的化合物。
实施例
在具有式I的聚烷氧基脂肪族化合物中，R1优选为取代或未取代的脂族基团。在取代的脂族基团中，优选的取代基是羟基。更优选地，R1是未取代的脂族基团；更优选地，R1是未取代的烷基。优选地，R1是具有9-22个碳原子、优选地10-18个碳原子、更优选地10-16个碳原子的直链烷基。
优选地，X1是NH。优选地，X2是NH。
优选地，n是0或1、2、3、4或5。更优选地，n是0或1。
优选地，R2具有20个或更少的原子；更优选15个或更少的原子。优选地，如果R2不是氢，则R2含有一个或多个碳原子。优选地，R2是氢或未取代的烃基；更优选地，R2是氢、未取代的烷基或其唯一取代基是未取代的芳烃基团的烷基。在未取代的烷基中，优选的是甲基。在其唯一取代基是未取代的芳烃基团的烷基中，优选的是-CH2-(C6H5)，其中-(C6H5)是苯环。优选地，R2表示天然存在的氨基酸的侧链。
优选地，R3具有600-5000道尔顿、更优选800-3000道尔顿的数均分子量。优选地，基团R3是(II)和(III)的统计共聚物或(II)和(III)的嵌段共聚物；更优选地，基团R3是(II)和(III)的统计共聚物。优选地，-R3具有结构-R4-CH3，其中R4是包含结构(II)和结构(III)的聚合单元的聚合基团。优选地，除了结构(II)和(III)之外R4没有其他聚合单元。
表征结构(II)的单元与结构(III)的单元的摩尔比(在本文中为“PO/EO比率”)是有用的。优选地，PO/EO比率是0.01:1至2:1；更优选地0.05:1至1:1、特别是0.1:1至0.5:1。
在具有式(I)的化合物的特别优选的实施例中，R1是CH3-(CH2)11-CH2-，n是1，X1和X2均为NH，R2是-CH2(C6H5)，并且R3是以CH3封端的PO和EO单元的共聚物、具有大约1000的数均分子量以及3:19的PO与EO的比率。已经发现此表面活性剂比用于稳定蛋白质水溶液的标准表面活性剂聚山梨酯或泊洛沙姆188稳定界面快1至2个数量级。已经发现更快的动力学导致模型蛋白质药物对抗搅拌诱导的聚集的提高的稳定性。
在具有式(I)的化合物的另一个优选的实施例中，R1是CH3-(CH2)11-CH2-，n是0，X2是NH，并且R3是以CH3封端的PO和EO单元的共聚物、具有大约1000的数均分子量以及3:19的PO与EO的比率。
优选地，具有式(I)的化合物不具有离子基团。
具有式(I)的化合物可以通过任何方法制成。优选的方法是使具有结构NH2-R3的化合物与选自以下的化合物反应：具有结构V的化合物
Figure BDA0002966906790000051
和具有结构VI的化合物
Figure BDA0002966906790000052
其中X3是O或NH。如果n是1-5，则每个X3独立地是O或NH。末端X3优选是O。优选地，R1、X2、R2、R3和n与以上所述的那些相同。优选地，X3是O。
制造具有式(I)的化合物的一些实施例的另一种优选方法如下。在第一步骤中，如下使酰氯与氨基酸反应形成羧基官能的脂肪酰胺：
Figure BDA0002966906790000053
然后，在第二步骤中，如下使羧基官能的脂肪酰胺与胺封端的聚烷氧基化合物反应：
Figure BDA0002966906790000054
其中PO是结构(II)并且EO是结构(III)。应当注意，当R3在上述结构中示为(PO)x和(EO)y时，不应将其视为表明PO和EO单元总是作为嵌段存在；实际上，它们也可以随机地分布在整个R3中。
有待包含在本发明组合物中的优选蛋白质选自单克隆抗体、生长因子、胰岛素、免疫球蛋白、多克隆抗体、抗体药物偶联物、激素、酶、多肽、肽融合体、糖基化蛋白质、抗原、抗原亚单位或其组合。优选的蛋白质具有治疗疾病或医学状况或充当疫苗的治疗功效。治疗性蛋白质的实例是免疫球蛋白-g、阿达木单抗、干扰素α、贝伐单抗、人生长激素、利妥昔单抗、人血清白蛋白、胰岛素、促红细胞生成素α、派姆单抗、依那西普、非格司亭、纳武单抗、曲妥单抗、度伐利尤单抗(durvalumab)、白介素-2、英利昔单抗、绒毛膜促性腺激素、阿维单抗(avelumab)、狄诺塞麦、兰尼单抗、阿柏西普、替西木单抗(tremelimumab)、因子viii、干扰素β、易普利姆玛、阿特朱单抗、阿巴西普、托珠单抗、优特克单抗、培非格司亭、苏金单抗、链激酶、西妥昔单抗、奥马珠单抗、雷莫芦单抗、尿激酶、妥珠单抗、度匹鲁单抗(dupilumab)、杰诺单抗(genolimzumab)、阿地白介素、莫拉司亭、聚乙二醇干扰素α-2b、替雷利珠单抗(tislelizumab)、促滤泡素α、格伐克单抗(gevokizumab)、戈利木单抗、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、康纳单抗、福雷芦单抗(foralumab)、伐立鲁单抗、尼妥珠单抗、红细胞生成素β、依伏库单抗、pegargiminase、贝迈奇单抗(bermekimab)、卡罗妥昔单抗(carotuximab)、达雷木单抗、依库丽单抗、昂妥昔珠单抗(ontuxizumab)、阿达木单抗、卡瑞利珠单抗、enoblituzumab、白介素-12、利瑞鲁单抗(lirilumab)、帕尼单抗、伽妥珠单抗(gatipotuzumab)、relatlimab、安德利昔单抗(andecaliximab)、贝利木单抗、cabiralizumab、isactuzumab govitecan、monalizumab、胰液素、帕妥珠单抗、特瑞普利单抗、inebilizumab、奥法木单抗、派比耐单抗、信迪利单抗、阿利库单抗、米拉组单抗、尼达利单抗、sotatercept、维多珠单抗、维妥珠单抗、贝伐单抗β、伊沙昔单抗(isatuximab)、orlotamab、蒂索瘤抑菌素(tisotumab vedotin)、贝那利珠单抗、柯希利单抗、艾马珠单抗、加尼妥单抗、纳索利单抗、匹地利珠单抗、沙利鲁单抗、曲妥珠单抗-厄塔毒素偶联物、雷星-阿奈妥单抗、柏替木单抗、博纳吐单抗、古塞尔库姆单抗(guselkumab)、衣克珠单抗、美泊利单抗、奥匹妥珠单抗(obinutuzumab)、乌布妥昔单抗(ublituximab)、阿仑单抗、依米妥珠单抗(emibetuzumab)、非卡妥珠单抗(ficlatuzumab)、伊波妥组单抗(ifabotuzumab)、mirikizumab、那他珠单抗、雷妥莫单抗、司妥昔单抗、替米妥珠单抗、曲妥珠单抗-deruxtecan、比美吉珠单抗、布罗达单抗、cetrelimab、法妥组单抗(farletuzumab)、opinercept、利纳西普、托木妥昔单抗(tomuzotuximab)、乌瑞芦单抗、阿伐苏单抗、溴珠单抗、克拉扎珠单抗、cusatuzumab、达洛珠单抗、伊利尤单抗、伊曲珠单抗(itolizumab)、以及马吉妥昔单抗(margetuximab)。还考虑了可用作医学诊断剂或对食品组合物具有有益效果，或掺入清洁组合物或涂料配制品中的蛋白质。
优选地，蛋白质与具有式(I)的化合物的重量比是250:1至900:1、更优选300:1至800:1、特别是400:1至700:1。可替代地，蛋白质与具有式(I)的化合物的重量比是201:1至250:1、优选205:1至245:1、更优选210:1至240:1。
在特别优选的实施例中，本发明涉及如上所述的组合物，其中单克隆抗体是西妥昔单抗，并且其中西妥昔单抗与具有式(I)的聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的比率为300:1至750:1。在此实施例中，聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂优选是具有式(I)的化合物，其中R1是CH3-(CH2)11-CH2-，n是1，X1和X2均为NH，R2是-CH2(C6H5)，并且R3是以CH3封端的PO和EO单元的共聚物、具有大约1000的数均分子量以及3:19的PO与EO的比率。
制造含有蛋白质和具有式(I)的化合物二者的组合物的优选方法是将水、一种或多种蛋白质、一种或多种具有式(I)化合物和任选的额外成分混合在一起，以提供其中蛋白质溶解在水中的组合物。
在本发明的组合物中，优选地蛋白质分子不聚集成大颗粒，即使聚集的颗粒分散在液体介质中。优选地，如果存在任何含有蛋白质分子的聚集颗粒，则此类颗粒的体积平均流体动力学半径为10nm或更小；更优选6nm或更小。
优选地，本发明组合物中蛋白质的量为0.01mg/ml至400mg/ml、优选0.1mg/ml至300mg/ml、更优选1mg/ml至250mg/ml。
本发明的组合物任选地含有一种或多种额外成分。额外成分是除水、蛋白质和具有式(I)的化合物以外的化合物。优选的额外成分是糖、糖醇、盐、缓冲剂、氨基酸、氨基酸盐及其混合物。当存在此类额外成分时，优选所有额外成分的总量为300mg/mL或更少。
为了包含在本发明的组合物中，优选的糖是蔗糖、葡萄糖、甘露糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖、右旋糖酐及其混合物。用于包含在本发明的组合物中的优选糖醇是山梨醇、甘露醇或木糖醇。
为了包含在本发明的组合物中，优选的盐具有选自氢、钠、钾、镁、钙、铵的阳离子及其混合物。优选的盐具有选自氟离子、氯离子、溴离子、碘离子、磷酸根、碳酸根、乙酸根、柠檬酸根、硫酸根及其混合物的阴离子。优选的缓冲剂具有选自氢、钠、钾、镁、钙、铵的阳离子及其混合物。优选的缓冲剂具有选自氟离子、氯离子、溴离子、碘离子、磷酸根、碳酸根、乙酸根、柠檬酸根、硫酸根及其混合物的阴离子。
为了包含在本发明的组合物中，优选的氨基酸及其盐选自赖氨酸、甘氨酸、精氨酸、组氨酸及其混合物。
本发明在以下实例中进一步描述，所述实例不旨在以任何方式限制本发明所要求保护的范围。
实例
材料
除非另有说明，否则所有材料均来自西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)或飞世尔公司(Fisher)，并无需进一步纯化即可使用。Jeffamine M-1000由亨斯迈公司(Huntsman)提供。聚山梨酯80(PS80)和聚山梨酯20(PS20)是“根据Ph.Eur.测试的”等级，分别为西格玛-奥德里奇公司产品编号59924和44112。将它们储存在氮气顶部空间下以使氧化最小化。作为10％无菌过滤水溶液购买泊洛沙姆188(PO188)，西格玛产品编号P5556。工业级牛IgG购自MP生物医疗公司(MP Biomedicals)(加利福尼亚州圣安娜)。
FM1000是具有式(I)的表面活性剂化合物，其中R1是CH3-(CH2)11-CH2-，n是1，X1和X2均为NH，R2是-CH2(C6H5)，并且R3是以CH3封端的PO和EO单元的共聚物、具有大约1000的分子量以及3:19的PO与EO的比率。如WO 2017/044366中报道的制备FM1000。简言之，在氢氧化钠和三乙胺的存在下，将肉豆蔻酰氯用苯丙氨酸在水中酰胺化。用浓HCl将得到的悬浮液酸化至pH 2，并过滤。然后将过滤的粉末从己烷中重结晶。通过与Jeffamine M-1000熔融缩合而使肉豆蔻酰基苯丙氨酸酰胺化。将粗FM1000产物溶解在甲醇中，并在Dow Amberlite IRN77和IRN78离子交换树脂上搅拌，以除去起始原料。将最终产物在真空下干燥。
OM1000是具有式(I)的表面活性剂化合物，其中R1是CH3-(CH2)11-CH2-，n是0，X1是NH，并且R3是以CH3封端的PO和EO单元的共聚物、具有大约1000的分子量以及3:19的PO与EO的比率。如WO 2017/044366中报道的制备OM1000。
方法
在0.9％氯化钠水溶液中制备具有20mg/mL IgG浓度的样品。表面活性剂浓度在实例中列出。动态光散射(DLS)测量如下进行。在Wyatt DynaProTM高通量DLS仪器上进行光散射测量。将30μL的每个样品放在Corning 96孔板的孔中。在分析之前，将板以1000rpm离心3分钟。在分析之前，使样品在25℃下平衡5分钟。连续获得DLS测量值，孔到孔循环，每循环每孔采集5x 3秒。
实例1
在1mL玻璃小瓶中制备600μL配制品。移出100μL用于t＝0分析，并且然后在35℃下以200rpm将样品侧摇动过夜。测量每个小瓶的相透明度，并通过DLS测量100μL等分试样的尺寸。数据在下表中示出：
相透明度：
Figure BDA0002966906790000101
光散射数据，平均尺寸(nm)
Figure BDA0002966906790000111
从光散射数据，可以计算出将平均半径保持小于一定尺寸所需的浓度：
Figure BDA0002966906790000112
实例2：聚集动力学
如实例1中那样进行实验，但是表面活性剂的设定浓度为：0.05mg/mL(比率为400:1)。在每个时间点，将样品从摇动器中取下，并通过光散射分析流体动力学半径。对于无法读取的数据，输入100的值。
流体动力学半径。
摇动时间(小时) PS80 PS20 PO188 FM1000 对照
0 7.7 7.9 7.8 8 100
0 7.7 8 7.9 7.9 100
0 8 7.9 8 8.1 100
1 7.7 7.7 9.4 7.8 7.9
1 7.4 7.7 9 7.7 8.2
1 7.6 7.4 8.9 7.6 100
2 10.3 8.2 20.8 7.6 10.3
2 8.7 8.2 14.1 7.9 9.1
2 8.6 7.9 11.7 7.9 100
4 14.5 8.6 100 8.2 12.1
4 11.9 9.4 100 8 11.7
4 14.4 8.8 100 8.1 100
6 100 10 100 9.2 13.9
6 21.3 11.3 100 8.4 16.2
6 11.5 10 100 10.4 100
可以拟合该数据并用于计算达到通过DLS测量的给定半径的时间：
Figure BDA0002966906790000121
实例3
如实例1中那样进行实验，但是使用不含氨基酸残基的具有式(I)的聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂(OM1000，n＝0，X1＝NH2)作为赋形剂，并与FM1000进行比较。IgG浓度为20mg/mL；表面活性剂浓度为0.05mg/mL(蛋白质与表面活性剂的比率为400:1)。还作为对照研究了聚山梨酯20。如其他实例中那样将500μL样品摇动18小时。数据如下：
Figure BDA0002966906790000122
(*：此实验不能测量半径)
实例4
如实例3中那样进行实验，但是溶液含有25mM柠檬酸盐(pH 6)而不是0.9％氯化钠。IgG浓度为20mg/mL；表面活性剂浓度为0.05mg/mL(蛋白质与表面活性剂的比率为400:1)。没有测量这些样品的透明度。数据如下：
表面活性剂 吸光度(350nm) 半径(nm)
FM1000 0.100 8.07
OM1000 0.116 9.81
PS20 0.137 17.73
PS80 0.112 10.21
这些数据示出，在低离子强度缓冲液中，在高蛋白质与表面活性剂比率下，FM1000和OM1000在稳定IgG方面比聚山梨酯更有效。
实例5
表面活性剂对西妥昔单抗稳定性的影响
西妥昔单抗以商品名
Figure BDA0002966906790000131
可商购，并且从药店获得。将其配制为在10mM磷酸盐缓冲液和145mM氯化钠中的2mg/mL溶液，pH 7.2。
在Biotechne微流成像装置上进行微流成像，以量化在显微镜下才能看到的颗粒。颗粒计数由软件自动进行。尺寸排阻色谱法在带有UV检测的Agilent 1260生物惰性液相色谱系统上运行。柱是Agilent AdvanceBio 300A SEC柱，并且运行缓冲液是磷酸盐缓冲液。UV吸收是在Molecular Devices M3板读取器上测量的。在Wyatt DynaPro II上测量动态光散射(DSC)。
重新配制西妥昔单抗以含有不同量的FM1000或聚山梨酯80。将1.5mg/mL西妥昔单抗样品直接从爱必妥(Erbitux)(2mg/mL)稀释成最终配制品。通过离心过滤将7.5mg/mL样品浓缩至10mg/mL，并且然后稀释至7.5mg/mL。制备在10mM磷酸盐、145mM NaCl中的表面活性剂储备溶液，pH 7.2。每个摇动样品在来自惠顿(Wheaton)的5mL血清小瓶中为3.0mL。移出摇动前样品的等分试样，使摇动样品的体积为3mL。将摇动样品在往复摇动器上以150个冲程/分钟摇动过夜。
Figure BDA0002966906790000141
Figure BDA0002966906790000151
从上表看出，在1.5mg/ml西妥昔单抗和0.075mg/ml或0.05mg/ml表面活性剂的水平下，当包含聚山梨酯80作为表面活性剂时，颗粒计数较低。在这些表面活性剂的水平下，两种表面活性剂之间以及摇动前与摇动后的样品之间的粒径(半径nm)均无显著差异。在0.02mg/ml的表面活性剂下，两种表面活性剂之间的颗粒计数和粒径均无显著差异。
在1.5mg/ml西妥昔单抗和0.01mg/ml聚山梨酯80或FM1000(蛋白质与表面活性剂的比率为150:1)的水平下，当包含FM1000作为表面活性剂时，颗粒计数较低(粒径也一样)。
在1.5mg/ml西妥昔单抗和0.005mg/ml聚山梨酯80或FM1000(蛋白质与表面活性剂的比率为300:1)的水平下，当包含FM1000作为表面活性剂时，颗粒计数低得多，并且粒径也显著更小。
在7.5mg/ml西妥昔单抗和0.01mg/ml聚山梨酯80和FM1000(蛋白质与表面活性剂的比率为750:1)的水平下，当包含FM1000作为表面活性剂时，颗粒计数较低。
这些结果示出，FM1000可以用作表面活性剂，以即使在非常低水平的表面活性剂下，在显著的搅拌应力后，将西妥昔单抗颗粒的形成减少至接近基线水平。

Claims (25)

1.一种组合物，其包含蛋白质和具有通式I的聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂
Figure FDA0002966906780000011
其中R1-C(＝O)是脂肪酰基，R2是H或取代或未取代的烃基，X1是O或NH，X2是O或NH，n是0或1-5的整数，R3是包含具有通式II和III的聚合单元的聚合基团
Figure FDA0002966906780000012
其中所述蛋白质与所述聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的重量比为200:1至1000:1。
2.如权利要求1所述的组合物，其中，所述蛋白质与所述聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的重量比为250:1至900:1。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其中，所述蛋白质与所述聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的重量比为300:1至800:1。
4.如权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中，所述蛋白质与所述聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的重量比为400:1至700:1。
5.如权利要求1或2所述的组合物，其中，蛋白质与所述聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的重量比为201:1至250:1。
6.如权利要求5所述的组合物，其中，蛋白质与所述聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的重量比为205:1至245:1。
7.如权利要求5或6所述的组合物，其中，蛋白质与所述聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的重量比为210:1至240:1。
8.如权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中，R1是C9-22直链烷基。
9.如权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中，X2是NH。
10.如权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中，n是1、2、3、4或5，优选1。
11.如权利要求1-10中任一项所述的组合物，其中，X1是NH。
12.如权利要求1-11中任一项所述的组合物，其中，n是1并且在具有式I的基团中的R2表示天然存在的氨基酸的侧链。
13.如权利要求1-12中任一项所述的组合物，其中，R2是H、未取代的C1-4烷基或-CH2-(C6H5)。
14.如权利要求1-13中任一项所述的组合物，其中，R3具有600-5000、优选800-3000的数均分子量。
15.如权利要求1-14中任一项所述的组合物，其中，亚丙基氧基(PO)单元与亚乙基氧基(EO)单元的比率为0.01:1至2:1、优选0.05:1至1:1、更优选0.1:1至0.5:1。
16.如权利要求1-15中任一项所述的组合物，其中，在式I中，R1是CH3-(CH2)11-CH2-，n是1，X1和X2均为NH，R2是-CH2(C6H5)，并且R3是以CH3封端的PO和EO单元的共聚物、具有大约1000的分子量以及3:19的PO与EO的比率。
17.如权利要求1-15中任一项所述的组合物，其中，在式I中，R1是CH3-(CH2)11-CH2-，n是0，X2是NH，并且R3是以CH3封端的PO和EO单元的共聚物、具有大约1000的分子量以及3:19的PO与EO的比率。
18.如权利要求1-18中任一项所述的组合物，其中，所述蛋白质选自由以下组成的组：单克隆抗体、多克隆抗体、抗体药物偶联物、生长因子、胰岛素、免疫球蛋白、肽激素、酶、多肽、融合蛋白质、糖基化蛋白质、抗原、抗原亚单位及其组合。
19.如权利要求1-18中任一项所述的组合物，其中，蛋白质的量为0.01mg/ml至400mg/ml、优选0.1mg/ml至300mg/ml、更优选1mg/ml至250mg/ml。
20.如权利要求1-19中任一项所述的组合物，其进一步包含选自由以下组成的组的糖或糖醇：蔗糖、葡萄糖、甘露糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖、右旋糖酐、山梨醇、甘露醇和木糖醇。
21.如权利要求1-20中任一项所述的组合物，其进一步包含盐，例如氟化物、氯化物、溴化物、碘化物、磷酸盐、碳酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐或硫酸盐的氢、钠、钾、镁、钙或铵盐。
22.如权利要求1-21中任一项所述的组合物，其进一步包含天然存在的氨基酸，优选赖氨酸、甘氨酸、精氨酸或组氨酸。
23.如权利要求1-21中任一项所述的组合物，其中，所述蛋白质是西妥昔单抗。
24.如权利要求23所述的组合物，其包含具有式(I)的聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂，其中R1是CH3-(CH2)11-CH2-，n是1，X1和X2均为NH，R2是-CH2(C6H5)，并且R3是以CH3封端的PO和EO单元的共聚物、具有大约1000的数均分子量以及3:19的PO与EO的比率。
25.如权利要求23或24所述的组合物，其中，西妥昔单抗与聚烷氧基脂肪酰基表面活性剂的比率为300:1至750:1。
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