CN112584861A

CN112584861A - 使用组合疗法治疗癌症的方法

Info

Publication number: CN112584861A
Application number: CN201980042052.6A
Authority: CN
Inventors: S·J·拉塞尔; A·贝克森; 宾嘉慧; R·M·迪亚兹
Original assignee: Miaoyou Medical Education Research Foundation; Merck Patent GmbH; Virial Corp; Pfizer Inc
Current assignee: Miaoyou Medical Education Research Foundation; Merck Patent GmbH; Virial Corp; Pfizer Inc
Priority date: 2018-06-22
Filing date: 2019-06-21
Publication date: 2021-03-30
Also published as: IL279591A; AU2019290212A1; CA3104509A1; JP2021531330A; US20210252143A1; WO2019246528A1; EP3810192A1

Abstract

本申请涉及治疗癌症的治疗方案和方法，其中所述方案和方法包括向对象施用程序性死亡‑配体1(PD‑L1)抑制剂和经工程化以表达干扰素β的重组水泡性口炎病毒(VSV‑IFNβ‑NIS)。

Description

使用组合疗法治疗癌症的方法

在ASCII文本文件上提交序列表

以下提交的ASCII文本文件的内容通过引用全文并入本文中：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：56187-501001WO Sequence Listing_ST25.txt，创建日期：2019年4月8日；大小：11030字节)。

发明背景

发明领域

本申请涉及治疗癌症的治疗方案和方法，其中所述方案和方法包括向对象施用程序性死亡-配体1(PD-L1)抑制剂和经工程化以表达干扰素β和钠/碘同向转运体的重组水泡性口炎病毒(rVSV)(VSV-IFNβ-NIS)。

发明背景

2015年，据估计美国诊断出1658370例新的癌症病例，并发生589430例癌症死亡。2004至2010年所有癌症诊断的5年相对存活率仅为68％。此外，一些癌症的预后非常悲观，其中胰腺癌的5年相对存活率为7％，肝癌、肺癌和食道癌的5年相对存活率低于20％；具有远处转移的晚期恶性肿瘤的5年相对存活率在2％(对于胰腺癌)至55％(对于甲状腺癌)的范围内。

对于大多数患有转移性和/或晚期癌症的患者，化疗仍然是标准的治疗选择。但不幸的是，对于许多患者，化疗并没有疗效，并且他们的疾病将变成难治性的。患有难治性、转移性实体瘤的患者的治疗选择很少。一旦患者在标准的一线疗法中发生进展，则二线选择取决于癌症类型而在其疗效中具有显著差异。对于一些癌症(例如，乳腺癌)，有很多二线选择，并且允许对于一段时间有合理的临床益处。其他癌症，诸如头颈癌，缺乏有效的二线选择。患有罕见肿瘤的患者通常选择更少。因此，许多患有晚期、无法治愈的癌症的患者会寻求癌症临床试验，希望接受可提供临床益处的新型治疗剂。

癌症免疫疗法是一种迅速兴起的治疗类别，其中当化疗变得无效时，其提供潜在的临床益处。在过去的十年中，已经批准免疫检查点抑制剂，例如，伊匹单抗(ipilimumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、阿特朱单抗(atezolizumab)和纳武利尤单抗(nivolumab)。这些批准最初是针对黑色素瘤的，但近来已扩展到其他疾病类型，并且最近批准了额外的药剂，包括阿维单抗(avelumab)和度伐单抗(durvalumab)。这些药剂刺激了免疫疗法在临床管道(clinical pipeline)中的复兴。许多药物正在开发当中，包括溶瘤病毒疗法。

2015年，首个溶瘤病毒疗法Imlygic(talimogene Laherparepvec)被批准用在患有局部晚期黑色素瘤的患者中。为了进一步了解其安全性和疗效，必须在患有难治性实体瘤的患者中评估溶瘤病毒。目前，T-Vec(一种编码粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的溶瘤性单纯疱疹病毒1型)已被FDA批准用于治疗无法手术切除的黑色素瘤，这使其成为在美国的该类别中首例获批的(Andtbacka 2015)。另外三项研究溶瘤病毒疗法的III期试验正在进行中：瘤内施用编码GMCSF的溶瘤痘苗病毒(Pexa-Vec)用于治疗肝细胞癌、膀胱内施用同样编码GMCSF的腺病毒(CG0070)用于治疗膀胱癌，以及用于头颈癌的IV呼肠孤病毒(Reolysin)治疗。在其他溶瘤病毒临床试验中，一项使用瘤内施用表达IFNβ(并且不表达同向转运体)的溶瘤VSV用于治疗肝细胞癌的1期研究已公开并开始招募。

最新的数据显示，将检查点抑制剂与溶瘤病毒组合使用可通过释放新抗原(neoantigen)来增强抗肿瘤免疫应答，这导致有持久客观应答(objective response)的患者比例高于单用检查点抑制剂所预期的。尽管一些研究表明，检查点抑制剂和溶瘤病毒的组合可能是有用的，迄今为止还没有检查由检查点抑制剂和溶瘤病毒组成的组合疗法在人类中用于转移性结肠癌的研究。

发明内容

本申请涉及治疗转移性结肠癌的方法，其中所述方法包括向对象施用程序性死亡-配体1(PD-L1)抑制剂和经工程化以表达干扰素β和钠/碘同向转运体的重组水泡性口炎病毒(VSV-IFNβ-NIS)。

本申请还涉及用于治疗转移性结肠癌的后续治疗方案，所述治疗方案包括PD-L1抑制剂和经工程化以表达干扰素β和钠/碘同向转运体的重组水泡性口炎病毒(VSV-IFNβ-NIS)。

本申请还涉及试剂盒，所述试剂盒包含PD-L1抑制剂、VSV-IFNβ-NIS，以及包装说明书，所述包装说明书包括使用PD-L1抑制剂和VSV-IFNβ-NIS来在对象中治疗转移性结肠癌或延迟转移性结肠癌的进展的说明。

附图说明

图1示出了阿维单抗抗体的序列。互补决定区(CDR)带有下划线，并且无下划线的中间区表示框架区。阿维单抗的重链(SEQ ID NO:7)的带下划线的部分依次分别是重链的CRD 1-3，并且在本文中也是SEQ ID No:1-3。阿维单抗的轻链(SEQ ID NO:9)的带下划线的部分依次分别是轻链的CRD 1-3，并且在本文中也是SEQ ID No:4-6。

图2示出了用于转移性结肠癌的组合疗法的研究设计。

发明详述

本申请涉及治疗转移性结肠癌的方法，其中所述方法包括向对象施用程序性死亡-配体1(PD-L1)抑制剂和经工程化以表达干扰素β和钠/碘同向转运体的重组水泡性口炎病毒(VSV-IFNβ-NIS)。在本发明中，术语对象和患者可互换使用。

人感染野生型VSV通常是无症状的，但会引起急性、发热、流感样疾病，持续3-6天，特征是发烧(fever)、发冷、恶心、呕吐、头痛、球后痛、肌痛、胸骨下疼痛、不适、咽炎、结膜炎和淋巴结炎。虽然已公布的3岁巴拿马儿童患非致命性脑膜脑炎的病例归因于VSV感染，但在感染野生型VSV的人中通常没有发现并发症且没有死亡的记录。改良的印第安纳株VSV已在埃博拉疫苗接种计划中用于17000多名健康志愿者，使得研究人员得出结论，认为安全特性在健康成年人中是可接受的。基于VSV的疫苗通常被良好地耐受，并且很少有疫苗相关不良事件的报道。常见的不良事件包括头痛、发热(pyrexia)、疲劳和肌痛，其中大多数为轻度至中度，并且通常持续时间短。既没有看到活病毒脱落，也没有发现人与人之间的传播。

水泡性口炎病毒是弹状病毒科的成员。VSV基因组是编码以下五个主要多肽的反义RNA的单分子：核衣壳(N)多肽、磷蛋白(P)多肽、基质(M)多肽、糖蛋白(G)多肽和病毒聚合酶(L)多肽。本文提供的编码VSV N多肽、VSV P多肽、VSV M多肽、VSV G多肽和VSV L多肽的水泡性口炎病毒的核酸序列可来自于GenBank登录号NC_001560(GI No.9627229)所示的VSV印第安纳株，或可来自于VSV新泽西株。

在一个实施方案中，本发明的方法和方案包括施用VSV-IFNβ-NIS。VSV-IFNβ-NIS是一种经工程化以表达人干扰素β(hIFNβ)基因和甲状腺钠碘同向转运体(NIS)的活病毒。该病毒通过向印第安纳株水泡性口炎病毒(VSV)的全长感染性分子克隆中在M基因下游插入hIFNβ基因和在G蛋白基因下游插入NIS基因(cDNA)来进行构建。PCT/US2011/050227中描述了VSV-IFNβ-NIS，其通过引用并入本文。VSV-IFNβ-NIS是包含RNA分子的病毒。编码VSV-IFNβ-NIS的RNA在3'至5'的方向上包含以下各项或基本由以下各项组成：作为编码VSV N多肽的正义转录本的模板的核酸序列、作为编码VSV P多肽的正义转录本的模板的核酸序列、作为编码VSV M多肽的正义转录本的模板的核酸序列、作为编码人IFNβ多肽的正义转录本的模板的核酸序列、作为编码VSV G多肽的正义转录本的模板的核酸序列、作为编码人NIS多肽的正义转录本的模板的核酸序列，以及作为编码VSV L多肽的正义转录本的模板的核酸序列。当病毒感染哺乳动物细胞时，病毒可表达IFNβ多肽和NIS多肽。但是，这种病毒不被视为疫苗。

编码VSV-IFNβ-NIS的人NIS多肽的核酸序列如GenBank登录号NM_000453.2(GINo.164663746)、BC105049.1(GI No.85397913)或BC105047.1(GI No.85397519)所示，它们全部通过引用并入本文。编码VSV-IFNβ-NIS的人IFNβ多肽的核酸如GenBank登录号NM_002176.2(GI No.50593016)所示。

VSV-IFNβ-NIS在BHK细胞上繁殖(其动力学与病毒的亲代菌株相似)，并且可以生长至高滴度。它在人癌细胞中选择性繁殖，因为它们中的许多细胞无法引起通过IFN途径介导的有效抗病毒应答。但是，感染的细胞中产生的IFN可以保护非癌细胞免受病毒的影响。因此，病毒直接对肿瘤细胞具有细胞病变效应，导致随着病毒的扩增而迅速溶胞(lysis)。被VSV-IFNβ-NIS感染的肿瘤细胞也表达NIS(主动将碘转运到细胞中的膜离子通道)。表达NIS的细胞对放射性碘的摄取为99mTc高锝酸盐或放射性碘I-123的体内成像提供了基础，该成像可以揭示病毒传播和消除过程中VSV-IFNβ-NIS基因表达的时间依赖特性和VSV-IFNβ-NIS感染细胞的位置。

已经工程化了另一种VSV，以仅表达人干扰素β(hIFNβ)基因而不表达同向转运体(VSV-IFNβ)。该VSV-IFNβ完全是不同的载体，并且本领域技术人员应当理解，VSV-IFNβ和VSV-IFNβ-NIS之间的差异不仅仅是简单地是否包含同向转运体。例如，在VSV-IFNβ-NIS和VSV-IFNβ之间，IFNβ转基因位置不同，并且这种位置影响病毒的生命周期。事实上，VSV-IFNβ-NIS的复制要比VSV-IFNβ慢得多，并且复制上的这种差异可以直接影响VSV介导治疗的安全性和疗效。因此，本发明的方法和方案不包括使用VSV-IFNβ，而是包括使用VSV-IFNβ-NIS。

在本发明的方法和方案的某些实施方案中，PD-L1抑制剂包含特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段。在具体实施方案中，抗PD-L1抗体或其片段包含重链和轻链，其中所述重链包含分别具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)，并且所述轻链包含分别具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的三个CDR。

阿维单抗的重链CDR序列

CDR1-SYIMM(SEQ ID NO:1)

CDR2-SIYPSGGITF YADTVKG(SEQ ID NO:2)

CDR3-IKLGTVTTVDY(SEQ ID NO:3)

阿维单抗的轻链CDR序列

CDR1-TGTSSDVGGYNYVS(SEQ ID NO:4)

CDR2-DVSNRPS(SEQ ID NO:5)

CDR3-SSYTSSSTRV(SEQ ID NO:6)

在本发明的方法和方案的另一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体或其片段包含重链和轻链，其中，所述重链包含SEQ ID NO:7或8的氨基酸序列，并且所述轻链包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列。

在具体实施方案中，PD-L1抑制剂是介导抗体依赖性细胞介导细胞毒性(ADCC)的抗体或其片段。在更具体的实施方案中，所述抗PD-L1抑制剂是阿维单抗，其选择性结合PD-L1，并竞争性阻断其与PD-1的相互作用。与靶向T细胞的抗PD-1抗体相比，阿维单抗靶向肿瘤细胞，并因此自身免疫相关的安全性问题的风险可以更低，因为阻断PD-L1可使PD-L2/PD-1途径完整，以促进外周自身耐受性。

阿维单抗(BAVENCIO^TM)是特异性靶向和阻断PD-L1的lgG1同种型的完全人类单克隆抗体(mAb)。阿维单抗是抗PD-L1单克隆抗体MSB0010718C的国际非专利药品名称(INN)，并且已在PCT公开No.WO 2013/079174中通过其全长重链和轻链序列进行了描述，在该公开中将其称为A09-246-2，并且该公开的全部内容通过引用并入本文中。阿维单抗重链中C端赖氨酸的糖基化和截短在PCT公开No.WO 2017/097407中也进行了描述，该公开的全部内容通过引用并入本文。阿维单抗已经在临床开发中用于治疗梅克尔细胞癌(Merkel CellCarcinoma，MCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、尿路上皮癌(UC)、肾细胞癌(RCC)和许多其他癌症病况。

术语“结肠癌”在本文中可与“结肠直肠癌”互换使用。在本发明的方法和方案的某些实施方案中，对象已诊断出患有结肠癌。结肠癌可以处于任何阶段。在所选实施方案中，对象诊断出患有0期、1期、2期(及2A、2B、2C期)、3期(3A、3B、3C期中的任何)或4期(4A、4B期中的任何)结肠癌。在具体实施方案中，对象诊断出患有转移性结肠癌。术语“转移性”包括扩散到一个或多个淋巴结以及扩散到一个或多个器官或组织的癌症。在一个具体实施方案中，使用本文所公开的方法和方案治疗的转移性结肠癌是已经扩散到不在结肠附近的一个或多个器官或组织或扩散到一个或多个远处淋巴结的转移性结肠癌。在其他具体实施方案中，使用本文所公开的方法和方案治疗的转移性结肠癌已经扩散到选自肺、肾、肝、卵巢、脑、腹膜、骨、肾上腺和肌肉的至少一个器官或组织。

本文所使用的术语治疗是指本文所述的方法的执行或方案的施用以减轻任何症状(例如但不限于肿瘤生长或扩散)，或防止出现额外的症状。术语“延迟进展”用于表示，症状(例如，肿瘤生长或扩散)没有随时间而增加。

本发明的方法和方案还包括在对象接受至少一线、二线或三线结肠癌疗法后，在疾病进展后向对象施用PD-L1抑制剂和VSV-IFNβ-NIS。换言之，还预期在一线结肠癌疗法已经失败并且疾病已经进展之后，应用所述方法和方案。还预期在一线和二线结肠癌疗法已经失败并且疾病已经进展之后，应用所述方法和方案。还预期在一线、二线和三线结肠癌疗法已经失败并且疾病已经进展之后，应用所述方法和方案。

如本文所用，术语“疾病进展”是指，在对象已经接受至少一线、二线或三线结肠癌疗法后，癌症继续生长或扩散。疾病进展还可以包括在对象已经接受至少一线、二线或三线结肠癌疗法后，癌症肿瘤没有收缩或变小(即，生长静止)的情况。疾病进展还可包括在对象已经接受至少一线、二线或三线结肠癌疗法后，对象中可检测肿瘤的数量增加的情况。疾病进展还包括对象从先前的疗法的线中得到缓解，并且癌症，甚至是单个生长物或肿瘤，再次变得可检测的情况。在缓解期后可检测到的癌症并不一定可在结肠或周围组织或淋巴结内检测到，因为通常在缓解期后变得可检测的癌症可能返回到与结肠不同的器官或组织。本发明的方法和方案包括在对象接受至少一线、二线或三线结肠癌疗法后，在疾病进展后向对象施用PD-L1抑制剂和VSV-IFNβ-NIS，其中疾病进展使得癌症已经返回到结肠和/或紧邻的淋巴结以外的身体的不同器官或组织。当然，本发明的方法和方案包括在对象接受至少一线、二线或三线结肠癌疗法后，在疾病进展后向对象施用PD-L1抑制剂和VSV-IFNβ-NIS，其中疾病进展使得癌症返回到结肠和/或紧邻的淋巴结。

在所选实施方案中，在应用本文所述的方法和方案之前施用的这些一线、二线或三线结肠癌疗法包括施用选自由以下组成的组的至少一种治疗化合物：5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨(Capecitabine，XELODA^TM)、伊立替康(Irinotecan，CAMPTOSAR^TM)、奥沙利铂(Oxaliplatin，ELOXATIN^TM)、三氟尿苷(Trifluridine)、Tipiracil(LONSURF^TM)、帕尼单抗(Panitumumab，VECTIBIX^TM)、西妥昔单抗(Cetuximab，ERBITUX^TM)、贝伐单抗(Bevacizumab，AVASTIN^TM)、雷莫芦单抗(Ramucirumab，CYRAMZA^TM)、阿柏西普(Aflibercept，ZALTRAP^TM)、瑞格非尼(Regorafenib，STIVARGA^TM)和阿维单抗(BAVENCIO^TM)。

在所选实施方案中，在应用本文所述的方法和方案之前施用的这些一线、二线或三线结肠癌疗法包括放疗。

如本文所用，术语“施用”是指在对象内或对象上引入治疗剂。VSV-IFNβ-NIS和PD-L1抑制剂各自的施用途径可以相同或彼此不同。VSV-IFNβ-NIS和/或PD-L1抑制剂的施用途径包括但不限于静脉内(IV)、瘤内(IT)、腹膜内(IP)、肌内(IM)、皮下、口服、经鼻或直肠。

在具体实施方案中，将PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)以静脉内(IV)或瘤内(IT)或两者施用于对象。在一个具体实施方案中，将PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)静脉内施用于对象。PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)的总剂量可以以每次施用至少约200mg、300mg、400mg、600mg、800mg、1000mg、1200mg、1400mg、1600mg、1800mg或2000mg的量施用。当然，临床医生可以将阿维单抗(一般来说是在盐水溶液中)的浓度调节在约5mg/kg至约20mg/kg的范围内。在具体实施方案中，可以以至少约5mg/kg、至少约6mg/kg、至少约7mg/kg、至少约8mg/kg、至少约9mg/kg、至少约10mg/kg、至少约11mg/kg、至少约12mg/kg、至少约13mg/kg、至少约14mg/kg、至少约15mg/kg、至少约16mg/kg、至少约17mg/kg、至少约18mg/kg、至少约19mg/kg或至少约20mg/kg的浓度向对象施用阿维单抗。在更具体的实施方案中，可以以至少约5mg/kg、至少约6mg/kg、至少约7mg/kg、至少约8mg/kg、至少约9mg/kg、至少约10mg/kg、至少约11mg/kg、至少约12mg/kg、至少约13mg/kg、至少约14mg/kg、至少约15mg/kg、至少约16mg/kg、至少约17mg/kg、至少约18mg/kg、至少约19mg/kg或至少约20mg/kg的浓度向对象静脉内施用阿维单抗。

在一个具体实施方案中，将PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)通过输注静脉内施用于对象。通常，通过泵施用或“滴注”(利用重力)进行输注，并且本文所述的方法和方案考虑了PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)的泵输注或滴注输注两者。本文所述的方法和方案还考虑到了VSV-IFNβ-NIS的泵输注或滴注输注两者。

在所选实施方案中，本文所述的方法和方案包括在一段时间内通过输注施用PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)。例如，PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)的输注可以持续约10分钟至约180分钟、约20分钟至约150分钟、约30分钟至约120分钟、约40分钟至约90分钟、约50分钟至约80分钟、约45分钟至约75分钟，以及约50分钟至约70分钟。

在所选实施方案中，本文所述的方法和方案包括以静脉内、瘤内或两者施用VSV-IFNβ-NIS。在一个具体实施方案中，VSV-IFNβ-NIS通过瘤内施用。在更具体的实施方案中，VSV-IFNβ-NIS以至少约3×10⁶ 50％组织培养感染剂量(TCID₅₀)、1×10⁷TCID₅₀、3×10⁷TCID₅₀、1×10⁸TCID₅₀、3×10⁸TCID₅₀、1×10⁹TCID₅₀或3×10⁹TCID₅₀的剂量向对象施用。在甚至更具体的实施方案中，VSV-IFNβ-NIS以至少约3×10⁶TCID₅₀、1×10⁷TCID₅₀、3×10⁷TCID₅₀、1×10⁸TCID₅₀、3×10⁸TCID₅₀、1×10⁹TCID₅₀或3×10⁹TCID₅₀的剂量瘤内施用于对象。

在本发明的方法和方案的一个实施方案中，VSV-IFNβ-NIS和PD-L1抑制剂是依次施用的。在一个具体实施方案中，在施用PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)之前，向对象施用VSV-IFNβ-NIS。在一个具体实施方案中，在施用PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)之后，向对象施用VSV-IFNβ-NIS。当在施用VSV-IFNβ-NIS之后施用PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)时，可以在VSV-IFNβ-NIS初次施用的至少半天、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天或30天之后，施用PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)。

当依次施用时，本发明的方法和方案包括在主治医师的指导、控制或监督下施用PD-L1和VSV-IFNβ-NIS两者的情形。本发明的方法和方案还包括医师开具了在首次施用PD-L1抑制剂之前，不在主治医师指导、控制或监督下施用(例如但不限于，自身施用、门诊施用、非现场施用)VSV-IFNβ-NIS的处方的情形。

在另一个实施方案中，VSV-IFNβ-NIS和PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)彼此共同施用。如本文所用，术语共同施用用于表示，两种或更多种化合物或药剂的施用在时间上彼此接近。尽管共同施用可以包括两种或更多种化合物的“同时”施用，术语共同施用在本文中用于包括这样的时间范围，其为非同时的而是考虑到两种或更多种化合物施用之间的时间间隔小。例如，如果两种化合物的施用间隔时间少于12小时，例如但不限于约15分钟或更少、约30分钟或更少、约45分钟或更少、约60分钟或更少、约1.5小时或更少、约2小时或更少、约2.5小时或更少、约3小时或更少、约3.5小时或更少、约4小时或更少、约4.5小时或更少、约5小时或更少、约5.5小时或更少、约6小时或更少、约6.5小时或更少、约7小时或更少、约7.5小时或更少、约8小时或更少、约8.5小时或更少、约9小时或更少、约9.5小时或更少、约10小时或更好、约10.5小时或更少、约11小时或更少、约11.5小时或更少、或小于约12小时，则将VSV-IFNβ-NIS和PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)视为“共同施用”。在PD-L1抑制剂的施用是通过IV滴注或输注施用(例如，阿维单抗)的情况下，考虑何时共同施用一种化合物的时间窗是从第一个化合物完全施用到下一个化合物开始施用的时间。

在其他实施方案中，本发明的方法和方案包括向对象施用VSV-IFNβ-NIS多于一次。在一个具体实施方案中，在施用PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)之前以及还有之后施用VSV-IFNβ-NIS。在另一个具体实施方案中，在初次施用PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)之后，施用VSV-IFNβ-NIS多于一次。

在其他实施方案中，本发明的方法和方案包括将PD-L1抑制剂和/或VSV-IFNβ-NIS与药学上可接受的载体一起施用。本发明的PD-L1抑制剂和/或VSV-IFNβ-NIS组合物可以通过本领域技术人员已知的技术制备，并且包含例如治疗有效量的本文所公开的PD-L1抑制剂和/或VSV-IFNβ-NIS，任选地与以下组合或融合或缀合：一种或多种其他免疫原(包括脂质、磷脂、碳水化合物、脂多糖、灭活或减毒的完整生物和其他蛋白质)、药学上可接受的载体、任选地合适的佐剂及任选地本领域传统使用的其他材料。

PD-L1抑制剂和/或VSV-IFNβ-NIS和药学上可接受的载体可以制备成水溶液、乳液或悬浮液，或者可以是干燥的制备物。以下将这些制备物称为本发明的药物制备物。合适的载体是本领域技术人员已知的，并且包括稳定剂、稀释剂和缓冲剂。合适的稳定剂包括诸如山梨糖醇、乳糖、甘露糖醇、淀粉、蔗糖、葡聚糖和葡萄糖的碳水化合物，以及诸如白蛋白或酪蛋白的蛋白质。合适的稀释剂包括盐水、Hanks平衡盐(Hanks Balanced Salts)和林格氏液(Ringers solution)。合适的缓冲剂包括碱金属磷酸盐、碱金属碳酸盐或碱土金属碳酸盐。在所选实施方案中，本发明的组合物配制用于施用于人。

鉴于本文所包含的教导，可以通过本领域技术人员已知的技术来制备本发明的药物制备物。通常，将诸如PD-L1抑制剂和/或VSV-IFNβ-NIS的治疗剂与载体混合，以形成溶液、悬浮液或乳液。可以将本文所述的一种或多种添加剂添加到载体中，或者可以依次添加。本文所公开的制备物可以例如通过冷冻干燥或喷雾干燥而变干或冻干，以用于储存或配制目的。随后可以通过添加适当的液体载体将它们重构为液体疫苗，或者使用本领域技术人员已知的方法将它们以干燥制剂(特别是以胶囊或片剂形式)施用。

应施用有效量的本发明的药物制备物，其中“有效量”定义为足以在对象中产生所需的预防、治疗或改善应答(包括但不限于表明病毒正在有效繁殖的应答)的量。所需的量取决于所使用的治疗剂以及待被施用的对象的物种与体重而变化，但是可以使用标准技术来确定。

本发明的药物制备物还可包含一种或多种辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂或佐剂，以增强其效力。给药方案的各个组分可以通过多种施用途径施用于对象，包括肠胃外、皮内、腹膜内、皮下或肌内。给药方案的各个组分，例如PD-L1抑制剂和VSV-IFNβ-NIS，的施用途径不必相同。

PD-L1抑制剂和/或VSV-IFNβ-NIS组合物可以以在粘膜表面引起适当应答的方式配制和递送。因此，可以通过例如经鼻、口服(胃内)或直肠内等途径将PD-L1抑制剂和VSV-IFNβ-NIS组合物施用于粘膜表面。其他施用方式包括但不限于口服制剂。口服制剂可包括通常使用的辅料，例如药品级糖精、纤维素和碳酸镁。这些组合物可以采取微球、溶液、悬浮液、片剂、丸剂、胶囊、缓释制剂或粉剂的形式。PD-L1抑制剂和/或VSV-IFNβ-NIS组合物可以以与剂量制剂相容的方式，且以将是治疗有效的、保护性的或免疫原性的量施用。PD-L1抑制剂和/或VSV-IFNβ-NIS组合物可以任选地包含佐剂。

在一些实施方案中，PD-L1抑制剂和/或VSV-IFNβ-NIS组合物可以与一种或多种靶向分子组合或缀合而使用，以递送至对象的特定细胞。一些实例包括但不限于维生素B12、细菌毒素或其片段、单克隆抗体，以及其他特异性靶向性脂质、蛋白质、核酸或碳水化合物。

在其他实施方案中，本发明的PD-L1抑制剂和/或VSV-IFNβ-NIS组合物可以与以下一起施用：无菌盐水或无菌缓冲盐水胶体分散系统，诸如大分子复合物、纳米胶囊、二氧化硅微粒、钨微粒、金微粒、微球、珠粒和基于脂质的系统(包括水包油乳液、微胶粒(micelles)、混合微胶粒和脂质体)。体外和体内用作递送载体的一种胶体系统是脂质体(即，人工囊泡)。通过将核酸分子掺入可生物降解珠粒之中和/或掺入可生物降解珠粒之上，可以提高裸核酸分子(例如，编码VSV-IFNβ-NIS的核酸)的摄取，所述可生物降解珠粒可被有效地转运到细胞中。这种系统的制备和使用是本领域众所周知的。

在其他实施方案中，核酸分子(例如，编码VSV-IFNβ-NIS的核酸)可以与有助于细胞摄取的试剂缔合。其可以与改变细胞通透性的化学试剂(例如，布比卡因)配制(参见，例如，WO 94/16737)。阳离子脂质在本领域中也是已知的，并且通常用于核酸分子递送。此类脂质包括LIPOFECTIN^TM，也称为DOTMA(N-[1-(2,3-二油氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵)、DOTAP(1,2-二(油氧基)-3-(三甲氨基)丙烷)、DDAB(双十八烷基二甲基溴化铵)、DOGS(双十八烷基酰氨基甘氨酰精胺(dioctadecylamidologlycy spermine))，以及胆固醇衍生物诸如DC-Chol(3β-(N--(N',N'-二甲基氨基甲烷)-氨甲酰基)胆固醇)(3beta-(N--(N',N'-dimethyl aminomethane)-carbamoyl)cholesterol)。这些阳离子脂质的描述可以在EP187,702、WO 90/11092、美国专利No.5,283,185、WO 91/15501、WO 95/26356和美国专利No.5,527,928中找到。可以将用于核酸分子递送的阳离子脂质与诸如DOPE(二油酰基磷脂酰乙醇胺)的中性脂质结合使用，如例如WO 90/11092中所述。可以将其他转染促进化合物添加到含有阳离子脂质体的制剂中。它们包括例如，用于促进核酸分子通过核膜转运的精胺衍生物(参见，例如，WO 93/18759)以及诸如GAL4、Gramicidine S和阳离子胆盐的膜通透性化合物(参见，例如，WO 93/19768)。

在其他实施方案中，本发明的方法和方案包括向对象施用PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)多于一次。在一个具体实施方案中，PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)在施用VSV-IFNβ-NIS之前以及还有之后施用。在另一个具体实施方案中，在首次施用VSV-IFNβ-NIS之后，施用PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)多于一次。

当向对象施用多剂量PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)的情况下，可以在PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)初次施用或先前施用的至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天或30天之后，施用第二剂量及后续剂量。

多剂量的PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)可在预定或规定的时间段出现。例如，PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)可以以每周一次施用数周。在其他实例中，PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)可以以每周多于一次(例如每周两次、三次、四次、五次、六次或七次)施用数周。在具体实施方案中，PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)以每周两次施用至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周或20周。在一个具体实施方案中，PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)以约10mg/kg的剂量(对于每次施用)以每周两次施用至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周或20周。

在向对象施用多剂量VSV-IFNβ-NIS的情况下，可以在VSV-IFNβ-NIS初次施用或先前施用的至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天或30天之后，施用第二剂量及后续剂量。

多剂量的VSV-IFNβ-NIS可以在预定或规定的时间段发生。例如，VSV-IFNβ-NIS可以以每周一次施用数周。在其他实例中，VSV-IFNβ-NIS可以以每周多于一次(例如每周两次、三次、四次、五次、六次或七次)施用数周。在具体实施方案中，VSV-IFNβ-NIS以每周两次施用至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周或20周。在一个具体实施方案中，VSV-IFNβ-NIS以至少约3x10⁶ TCID₅₀的剂量(对于每次施用)以每周两次施用至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周或20周。

在其他实施方案中，所述方法和方案还包括在施用PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)之前，向对象施用抗组胺剂和/或扑热息痛(paracetamol)。如果所述方法和方案包括多剂量的PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)，则PD-L1抑制剂的每次施用可包括或不包括预施用抗组胺药和/或扑热息痛。

本发明还涉及试剂盒，其中试剂盒包括至少两个容器，其中第一容器包含至少一剂量的VSV-IFNβ-NIS，且第二容器包含至少一剂量的PD-L1抑制剂(例如，阿维单抗)。

实施例

实施例1—产生VSV-IFNβ-NIS

简而言之，使用PCR利用特异性限制位点生成期望转基因的核酸序列。将转基因在特异性插入位点沿5'至3'方向插入编码VSV基因组正链的质粒中。扩增经修饰的质粒，并通过用编码所需T7聚合酶的痘苗病毒感染和VSV病毒蛋白N、P和L的转染来回收感染性病毒。这允许产生所需的病毒多肽，使得生成组装成感染性病毒体的负义病毒基因组。扩增回收的病毒，并在培养物(例如，BHK-21细胞)中的合适细胞系上测量感染量。用于制备这些水泡性口炎病毒的人IFN-β多肽的核酸序列如GenBank登录号NM_002176.2(GI No.50593016)所示。用于制备这些水泡性口炎病毒的人NIS多肽的核酸序列如GenBank登录号NM_000453.2(GI No.164663746)示出。

当将编码人NIS多肽的核酸插入编码VSV G多肽的核酸上游时，不会生成功能性病毒体，因为NIS表达水平似乎对于细胞而言太高而无法保持活力和无法允许病毒繁殖。将编码NIS多肽的核酸插入编码VSV G多肽的核酸下游导致生成功能性表达NIS的病毒体，这是因为产生的NIS多肽数量较少，从而不仅使得病毒高效繁殖，还使得在感染细胞中有足够数量的用于功能性摄取碘的NIS多肽。

将编码IFNβ多肽的核酸插入编码VSV M多肽的核酸和编码VSV G多肽的核酸之间会产生病毒，其感染细胞并产生在感染的细胞的上清液中观察到明显升高的IFNβ多肽表达水平。VSV-IFNβ-NIS病毒能够在感染的细胞中体外高效复制，并且还能表达高水平的功能性NIS。

实施例2—研究设计

这是一项两部分的开放标签I期研究，旨在确定每两周一次向患有难治性晚期/转移性实体瘤的患者瘤内(IT)施用单剂量VSV-IFNβ-NIS、静脉内(IV)施用阿维单抗后的安全特性、最大耐受剂量(MTD)、药代动力学(PK)以及肿瘤和生物标记物应答。该研究包括在患有难治性晚期/转移性实体瘤的患者中与阿维单抗的组合疗法，之后为单一疗法，以及在患有转移性结肠癌的患者中VSV-IFNβ-NIS MTD或RP2D的组合疗法剂量扩大。

对于剂量上升(dose escalation)，根据RECIST 1.1，患者需要具有至少一个可测量病变，用于一次性IT注射VSV-IFNβ-NIS。根据RECIST 1.1，每群组中至少一名患者需要具有至少2个可测量病变，1个用于一次性IT注射VSV-IFNβ-NIS，且另一个用作对照。根据RECIST 1.1，具有2个可测量病变的患者将获得优先招募。每个剂量水平应有至少一名患者患有转移性结肠癌。为了满足这些要求，每个剂量群组将需要3或4位患者。

将通过使用改良的斐波那契(Fibonacci)群组3+3设计来定义和确定最大耐受剂量(MTD)。治疗将从剂量水平1(DL1)开始。直到对当前剂量水平中的患者观察至少3周(21天)，剂量才会上升至DL2和后续剂量。如果到该时间点未发生剂量限制性毒性(DLT)，则在这3名参与者中，可以发生剂量上升至下一个水平。在任何时候，如果一个剂量水平中的3名参与者中有1名在这3周的时间段内经历DLT，则在该剂量水平中必须招募额外3名患者。每个群组中的前3名参与者必须每次参与一人，从一名参与者到另一名参与者的治疗间隔至少7天。如果在该剂量水平下观察3周后，6名参与者中只有1名经历了DLT，则如前所述，可以发生3名参与者上升到下一个剂量水平。如果一个剂量水平的6名参与者中有2名发生DLT，则将确定已经超出MTD。在这种情况下，如果尚未完成这一点，则先前的剂量水平将被扩大到共6名患者，以确认6名患者中只有1名患有DLT。然后这将是最终推荐的2期剂量(RP2D)。

如果有2名或更多名患者在起始剂量DL1经历DLT，然后将修改或终止该研究。一旦使用VSV-IFNβ-NIS探索了单一疗法的剂量水平3，并且上升进行至剂量水平4，则将开始使用VSV-IFNβ-NIS和阿维单抗的组合进行剂量上升。组合上升将从VSV-IFNβ-NIS剂量水平3开始，并且直到在特定剂量水平完成单一疗法上升后才可以进行更高的上升。

如果发生可疑的DLT，则将尽快召开数据安全监查委员会(DSMB)会议。同时，将继续对该群组中正在进行的患者进行给药，除非基于观察到的DLT的性质和/或严重性有理由怀疑有不可接受的安全风险。如果单个患者经历DLT，则该患者将中断研究药物。

一旦确定了剂量上升中的MTD和/或RP2D，则将开放两个分两阶段的扩大群组(一个用于单一疗法，且一个用于组合疗法)，并且两者都将招募患有转移性结肠直肠癌的患者，以进一步表征与或不与阿维单抗一起的VSV-IFNβ-NIS的安全性、耐受性、药代动力学(PK)、药效学(PD)和抗肿瘤活性。扩大群组将使用Simon两阶段设计。在扩大研究阶段1中，将获得12名患者并评估疗效。如果这12名患者为0应答，则该群组将停止。否则，将获得额外9名患者，并按照研究时间表对总共21名患者进行评估。该研究不会在阶段1和阶段2之间停止。根据RECIST 1.1，每个群组中至少6名患者需要具有2个可测量病变，其中一个用于IT注射VSV-IFNβ-NIS，且另一个用作对照。每个群组中至少六名患者还需要进行SPECT/CT成像。

扩大群组中的患者将按照与该研究的剂量上升部分相同的研究程序进行治疗和监测。

实施例3—给药

将由经过适当培训的外科和介入放射学辅助研究者用VSV-IFNβ-NIS进行试验治疗。将按照主要研究者和施用辅助研究者所同意的，使用TB注射器(或等效物)和20至23号针头或用于较大肿瘤的

多管针头，在一个单个肿瘤位置IT施用VSV-IFNβ-NIS。允许向包括皮肤、软组织、结节、肺或肝病变的部位施用。施用标准如下：

表1：注射部位大小和图像指导标准

1沿最长尺寸测量的

2图像应包括记录最长可测量尺寸的测尺

3所测量的结节的最短尺寸为1.5cm

一旦分配给参与者VSV-IFNβ-NIS剂量后，将按照药房手册操作方案将病毒解冻并制备，并在施用前立即进行白蛋白稀释(理想地是大约30分钟，但最多6个小时)。最终体积取决于肿瘤病变大小，并根据以下公式进行估算：

注射体积(Vi)＝(a^2)(b)(0.5)

可注射产品的[a＝较短直径，且b＝较长直径]。

递送至肿瘤的体积将取决于肿瘤结节的大小，并将根据以下算法确定：

对于最长尺寸为1.0-1.5cm的肿瘤，多达0.5mL。

对于最长尺寸为1.5-2.5cm的肿瘤，多达1.0mL。

对于最长尺寸为2.5-5cm的肿瘤，多达2.0mL。

对于最长直径>5cm的肿瘤，多达4.0mL。

注意，仅对于DL 7(3x10⁹ TCID₅₀)，由于体积的限制，具有最大病变直径<1.5cm的患者不能包括在内。

一旦解冻并稀释试验治疗，将按以下进行施用：

注射部位将使用适当的试剂进行清洁，例如，双氯苯双胍己烷葡糖酸盐(chlorhexadine)或必妥碘(betadine)。

该区域将以无菌方式覆盖。

如果施用辅助研究者认为有必要，则按照常规护理标准为研究参与者提供轻微镇静。

根据常规护理标准如果施用辅助研究者认为有必要，则可以在注射部位使用用1％利多卡因进行的局部麻醉。但是，不应将其直接注射到病变上。如果在病变周围注射局部麻醉药，应达到足够的镇痛。

使用根据下表中概述的适当图像指导，施用辅助研究者或指定人员将从药房提供的小瓶中吸取研究药物溶液至TB注射器(或等效物)中，并通过20-23号针头，或用于较大肿瘤的

多管头针，将VSV-IFNβ-NIS施用至预先确定的肿瘤部位。

对于可见病变，可以使用局部麻醉剂对注射部位预处理。VSV-IFNβ-NIS应沿着病变内的多个不同轨道注射，以获得尽可能宽的分散。

病毒产品的注射应缓慢进行。如果肿瘤部位的直径>2cm，则由于溶解的病毒产品量，可能需要多次注射。如果需要多次注射，则应在距先前注射约2cm进行施用。该手术总时间预计将花费30-60分钟。

术后敷料应按照标准操作敷用。注射部位将用酒精擦拭，并盖上干燥的封闭敷料(吸收垫和封闭覆盖物—例如，

或带有吸收垫的

)。

手术后应在治疗室或麻醉后监护室(PACU)进行约2小时的术后监测，其中每15分钟检查一次生命体征。

术后监测结束后，研究参与者将在手术后入住医院病房，以门诊病床状态监测至多23小时。在病房的头4个小时，每小时将记录生命体征，然后在23小时停留的其他时间，每4个小时将记录生命体征。如9.4节所述，将提供支持性护理。

一旦23小时结束，并经由主要研究者或辅助研究者批准后，参与者将被解除监测。根据个体毒性，可能需要进行额外的监测。

阿维单抗药物产品是一种用于IV输注的无菌溶液，是在由橡胶塞封闭并由铝Flip

卷边密封闭合件密封的欧洲药典(Ph.Eur.)和美国药典(USP)I型玻璃瓶中的浓度为20mg/mL的透明、无色溶液浓缩液。

每2周一次，在1小时(-10分钟/+20分钟)内将以800mg的剂量以IV输注施用阿维单抗。将在第1天VSV后施用阿维单抗。

阿维单抗药物产品必须用输液袋中提供的0.9％盐水溶液(氯化钠注射液)进行稀释；或者，如果需要，也可以使用0.45％盐水溶液。有关剂量制备物的说明，请参阅获批的美国处方信息。

在所有需要用阿维单抗治疗的对象中，要求前4剂使用抗组胺药和扑热息痛(对乙酰氨基酚)进行强制性术前用药。为了减轻与输注相关的反应，在前4剂阿维单抗之前约30-60分钟，强制用抗组胺药和扑热息痛(对乙酰氨基酚)(例如，iv施用25-50mg苯海拉明和500-650mg扑热息痛[对乙酰氨基酚]，或口服施用等效物)进行术前用药。应根据临床判断和先前输注反应的存在/严重程度，针对随后的阿维单抗剂量来施用术前用药。该方案可根据当地治疗标准及指南进行适当修改。但是，预防性使用全身性皮质类固醇是不允许的。

作为常规预防措施，对于前4次输注，在输注后必须在有复苏设备和急救人员的区域内对本试验中招募的对象观察1小时。在阿维单抗治疗期间的任何时候，必须确保根据制度性规范立即紧急治疗输注相关反应或严重过敏性反应。例如，为了治疗可能的过敏性反应，应始终提供10mg地塞米松和1:1000稀释的肾上腺素或等效物，以及呼吸辅助设备。

研究者还应密切监测对象的潜在免疫相关AE(irAE)，这些AE可能在治疗期间的任何时间表现出来。此类事件包括但不限于，肺炎、肝炎、结肠炎、内分泌病(甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进、肾上腺功能不全、1型糖尿病)、心肌炎、肌炎、皮疹。有关irAE管理的详细信息，参见9.1.10.2节。

实施例4—疗效评估

RECIST 1.1版将在本研究中用于评估肿瘤应答。虽然根据RECIST 1.1可以使用CT或MRI，CT是本研究中优选的成像技术。

在IT注射研究药物后6周(就诊43天)将进行肿瘤测量以评估疗效。对CR或PR的放射学评估要求在初步评估所观察到的应答后至少4周进行确认性成像。

可测量疾病：肿瘤病变：必须在至少一维(要记录测量平面上的最大直径)尺寸上进行准确测量，其中最小尺寸为：

由计算机断层扫描(CT)为10mm(CT扫描切片的厚度不大于5mm)。

由临床检查为10mm卡尺测量(使用卡尺无法准确测量的病变应记录为不可测量)。

由胸部X光为20mm。

皮肤病变：建议通过彩色摄像术包括尺子进行记录来估计病变的大小。

恶性淋巴结：为了被认为在病理上是扩大和可测量的，通过CT扫描评估时，淋巴结的短轴必须>15mm。在基线和随访中，将仅测量和跟踪短轴。

不可测量疾病：所有其他病变，包括小病变(最长直径<10mm，或病理性淋巴结短轴≥10mm至<15mm)以及真正的不可测量病变。被认为是真正不可测量的病变包括：柔脑膜疾病、腹水、胸腔或心包积液、炎性乳腺疾病，以及皮肤或肺的淋巴管性损害、腹部包块、腹部器官肿大，这是无法通过可再现成像技术进行测量的而通过体格检查鉴定的。

靶病变：可再现性最高的可测量病变，每个器官多达最多2个病变，且总共5个病变，应将所有涉及的器官的代表鉴定为靶病变，并在基线时记录和测量。

靶病变应根据其大小(具有最长直径的病变)进行选择，应为所有涉及的器官的代表，此外，应是那些适于可再现重复测量的病变。被定义为可测量且可能被识别为靶病变的病理性结节必须满足短轴≥15mm的标准。将计算所有的靶病变，并记录为基线总直径。如果总和中包括淋巴结，则如上所述，仅将短轴添加到总和中。基线总直径将用作进一步表征任何客观肿瘤应答的参考。

非靶病变：将所有其他病变(或疾病部位)鉴定为非靶病变(根据所涉及器官的代表和在重复测量中再现能力而选择的)，并应记录为基线。不需要对这些病变进行测量，但是在整个随访过程中应记录每个存在与否。短轴≥10mm但<15mm的淋巴结应视为非靶病变。具有短轴<10mm的淋巴结被认为是非病理性的，并且不会进行记录或跟踪。

靶病变评估

完全应答(CR)：所有靶病变均消失。任何病理性淋巴结(无论是靶还是非靶)都必须将短轴缩小至<10mm。肿瘤标记物结果必须正常化。

部分应答(PR)：参考基线总直径，靶病变直径的总和减少至少30％。

病情稳定(SD)：参考从治疗开始以来的最小(最低点)直径总和，既没有足够的收缩率来达到PR，也没有足够的增加来达到PD。

进行性疾病(PD)：参考从治疗开始以来的最小(最低点)总和，靶病变直径的总和增加至少20％，或出现一个或多个新病变。总和不仅需要增加20％，而且需要绝对增加至少5mm。

非靶病变评估

完全应答(CR)：所有非靶病变均消失，且肿瘤标记物正常化。所有淋巴结的大小均必须是非病理性的(短轴<10mm)。

病情稳定(SD)：一种或多种非靶病变持续存在，和/或肿瘤标记物水平持续超过正常范围。

进行性疾病(PD)：出现一种或多种新病变，和/或现有非靶病变有明确进展。当患者也患有可检测疾病时，非靶标疾病的总体水平必须实质性恶化，即使在靶疾病中存在SD或PR，肿瘤总体负荷已充分增加以值得中止治疗。

表2：最佳总体应答评估

当结节疾病包括在靶病变的总和中，并且结节缩小至“正常”大小(<10mm)时，扫描时可能仍有测量值被报告。即使结节正常，也应记录此测量值，以避免夸大进展，其应当是基于节点大小的增加。如前所述，这意味着CR患者在病例报告表(CRF)上的总和可以不为“零”。

如果在计划的评估前根据临床或实验室发现怀疑有疾病进展，则应进行计划外评估。患者的健康状况出现整体恶化，需要中止治疗，而此时没有疾病进展的客观证据，则应报告为“症状性恶化”。即使在中止治疗后，应尽一切努力记录客观进展。

实施例5—统计学考量

安全人群：安全人群由接受至少一个剂量的研究药物的所有患者组成。所有安全性和耐受性评估将基于该分析组。

PK/PD人群：PK/PD人群包括没有影响PK和/或PD的可解释性的方案偏差的所有患者。

疗效人群：主要疗效分析将利用与安全人群相同的受治疗人群。

所有分析将在预先指定的分析组中按剂量和总体(即总体剂量水平)进行(将分开分析单一疗法和组合疗法)。扩大群组将按疗法(单一疗法组/组合疗法组)进行分析。

将显示筛选的、招募的患者数量和百分比、筛选失败的主要原因以及中止的主要原因。人口统计学变量、基线特征、主要和次要诊断以及既往和伴随疗法将通过描述性统计或分类表按治疗进行总结。

VSV-IFNβ-NIS和阿维单抗的暴露数据将报告为每名患者的总施用剂量和按剂量群组和总体来汇总的相对剂量强度(实际剂量/计划剂量)。

伴随药物将使用目前的世界卫生组织药物字典进行编码，且数据将汇总并示于表格和列表中。

由于这些端点的探索性，将只使用描述性统计。结果将按剂量群组和总体来呈现。

总体应答率(ORR)：分析人群中在第43天根据RECIST 1.1成像具有完全应答(CR)或部分应答(PR)的患者比例。对于每一个将计算频率和相对频率(总体、按剂量水平和按疾病类型)。

疾病控制率(DCR)：各个分析人群中在第43天根据RECIST 1.1成像具有完全应答(CR)、部分应答(PR)或病情稳定(SD)的患者比例。对于每一个将计算频率和相对频率(总体、按剂量水平和按疾病类型)。

被注射的病变(TNi)和远处病变(TNd)的肿瘤应答率：分析人群中TNi和TNd在第43天根据RECIST 1.1成像具有完全应答(CR)或部分应答(PR)的患者比例。对于每一个将计算频率和相对频率(总体、按剂量水平和按疾病类型)。

无进展存活期(PFS)：从第1天治疗施用到第一次记录的疾病进展或死亡(以先发生者为准)的时间。

应答持续时间(DOR)：从第一次观察到应答到第一次记录的疾病进展或死亡(以先发生者为准)的时间。

总体存活期(OS)：从第1天治疗施用到因任何原因而死亡的时间。

肿瘤坏死(TN)：被注射的病变(TNi)和远处病变(TNd)的坏死率将分别定义为坏死比基线增加30％以上的TNi和TNd。对于每一个将计算频率和相对频率(总体、按剂量水平和按疾病类型)。

表3：关键疗效端点的统计方法

本试验的主要安全性目标是表征VSV-IFNβ-NIS(与或不与阿维单抗一起)在患有难治性晚期/转移性实体瘤的患者中的安全性。主要安全性分析将基于VSV-IFNβ-NIS的MTD。MTD将由剂量限制性毒性(DLT)的发生来确定。安全性将通过使用CTCAE 4.03版和CRS分级系统所报告的副作用来评估。治疗的归因、发病时间、不良事件持续时间、其解决方案，以及施用的任何伴随药物将被记录。将分析AE，包括但不限于所有AE、SAE、致命AE和实验室变化。

安全性和耐受性将通过分析所有相关参数来评估，包括DLT、不良事件(AE)、实验室试验、ECG和生命体征。将提供AE的计数和等级百分比。根据二项式分布，利用精确的方法，来估计临床关注的AE比例的Clopper-Pearson 95％置信区间。所有安全性参数将按剂量群组和总体以及按与研究药物的关系来表示。

序列表

<110> 维里亚德公司

默克专利股份有限公司

辉瑞公司

妙佑医学教育研究基金会

<120> 使用组合疗法治疗癌症的方法

<130> 056187-501001WO

<150> 62/688,563

<151> 2018-06-22

<160> 9

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Ser Tyr Ile Met Met

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 11

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 14

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 4

Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 5

Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 6

Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Arg Val

1 5 10

<210> 7

<211> 450

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 7

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 8

<211> 449

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 8

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly

<210> 9

<211> 216

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 9

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser

85 90 95

Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

Claims

1.一种在需要此治疗的对象中治疗转移性结肠癌的方法，所述方法包括向所述对象施用程序性死亡-配体1(PD-L1)抑制剂和向所述对象施用经工程化以表达干扰素β和钠/碘同向转运体的重组水泡性口炎病毒(rVSV)，其中，所述PD-L1抑制剂是特异性结合PD-L1并包含重链和轻链的抗PD-L1抗体或其抗PD-L1抗体片段，其中所述重链包含分别具有SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)，并且所述轻链包含分别具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的三个CDR。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗PD-L1抗体片段介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述PD-L1抗体包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQ ID NO:7或8的氨基酸序列，并且所述轻链包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述PD-L1抑制剂是阿维单抗。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中在所述对象已经接受至少一线、二线或三线癌症疗法后，将所述PD-L1抑制剂和所述rVSV在疾病进展之后施用于所述对象。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述rVSV和所述PD-L1抑制剂以任一次序依次施用。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述rVSV在所述PD-L1抑制剂之前施用。

8.根据权利要求7所述的方法，所述方法包括：(a)在医师的指导或控制下，所述对象在首次接受所述PD-L1抑制剂之前接受所述rVSV；以及(b)在医师的指导或控制下，所述对象接受所述PD-L1抑制剂。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述PD-L1抑制剂在所述rVSV初次施用的至少半天、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天或30天之后施用。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述PD-L1抑制剂被施用多于一次，其中任选地多剂量的PD-L1抑制剂在PD-L1初次施用的至少半天、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天或30天之后施用。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述rVSV在瘤内施用。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述rVSV的剂量为每次施用至少约3×10⁶ 50％组织培养感染剂量(TCID₅₀)、1×10⁷TCID₅₀、3×10⁷TCID₅₀、1×10⁸TCID₅₀、3×10⁸TCID₅₀、1×10⁹TCID₅₀或3×10⁹TCID₅₀。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所施用的所述PD-L1抑制剂的总剂量为每次施用至少约200mg、300mg、400mg、600mg、800mg、1000mg、1200mg、1400mg、1600mg、1800mg或2000mg。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中通过测量外周血T细胞群体上的免疫检查点和共刺激分子而监测所述对象，其中任选地所述免疫检查点和共刺激分子包括PD-1、TIM3和LAG3。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中通过比较治疗前和治疗后免疫细胞浸润而监测所述对象。

16.一种包含程序性死亡-配体1(PD-L1)抑制剂和经工程化以表达干扰素β和钠/碘同向转运体的重组水泡性口炎病毒(rVSV)的组合，其中所述PD-L1抑制剂是特异性结合PD-L1并包含重链和轻链的抗PD-L1抗体或其抗PD-L1抗体片段，其中所述重链包含分别具有SEQID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)，并且所述轻链包含分别具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的三个CDR。

17.一种包含程序性死亡-配体1(PD-L1)抑制剂、经工程化以表达干扰素β和钠/碘同向转运体的重组水泡性口炎病毒(rVSV)和药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂和/或佐剂的药物组合物，其中所述PD-L1抑制剂是特异性结合PD-L1并包含重链和轻链的抗PD-L1抗体或其抗PD-L1抗体片段，其中所述重链包含具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)，并且所述轻链包含具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的三个CDR。

18.权利要求16所述的组合或权利要求17所述的药物组合物，其用作药物。

19.权利要求16所述的组合或权利要求17所述的药物组合物，其用于治疗转移性结肠癌；并且其中任选地所述PD-L1抑制剂和所述rVSV以单一或分开的单位剂型提供。