CN112516322A - 用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物，所述稳定剂组合物包含有乙二胺四乙酸、抗氧化剂、酸碱调节剂以及溶剂。本发明还提供了如上所述的稳定剂组合物的应用，将所述稳定剂组合物添加到包含有儿茶酚类神经递质的透析液中，用于抑制儿茶酚类神经递质在所述透析液发生分解。本发明提供的稳定剂组合物，其中：乙二胺四乙酸可与透析液中的金属离子络合从而抑制金属离子催化儿茶酚类神经递质分解，抗氧化剂可与环境中的氧气结合从而抑制儿茶酚类神经递质的氧化，由此，该稳定剂组合物对透析液中儿茶酚类神经递质起到良好的保护作用，有效抑制了儿茶酚类神经递质的分解，使得包含有儿茶酚类神经递质的透析液具有更长的稳定期。

Description

用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物及其应用
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物及其应用。
背景技术
儿茶酚类神经递质包括多巴胺、肾上腺素和去甲肾上腺素，大脑中儿茶酚类神经递质的浓度监测对于研究和诊断例如阿尔兹海默症、帕金森氏病和精神分裂症等神经系统疾病具有重要作用。微透析是评估大脑中神经递质实时水平的最新技术，在该技术中，将探针中的半透膜通过外科手术插入感兴趣的大脑区域：通过探针灌注的缓冲液(人工透析液)可以达到伪平衡，使细胞外未结合的溶质溶解在该大脑区域的细胞外液中，然后分析从不同时间窗口收集的透析液，以确定目标溶质(例如儿茶酚类神经递质)的浓度，该浓度代表其在脑区域中神经递质的浓度。
由于儿茶酚类神经递质会在数小时内在透析液中完全降解，给微透析中神经递质准确定量带来挑战。儿茶酚类神经递质的降解涉及多巴胺的自氧化和环化，主要由氧化还原活性金属离子和碱催化引发。在透析液中含有多种金属离子，如Mg2+、Ca2+、Na+等，它们可催化儿茶酚神经递质降解，透析液的pH在8.0～8.5之间，这种弱碱性环境进一步加速这类神经递质的降解。因此，如何抑制儿茶酚类神经递质在透析液中发生分解是需要解决的问题。
发明内容
鉴于现有技术存在的不足，本发明提供一种用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物，该稳定剂组合物可以有效地抑制儿茶酚类神经递质在透析液中发生分解。
为实现上述发明目的，本发明提供了一种用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物，其中，所述稳定剂组合物包含有乙二胺四乙酸、抗氧化剂、酸碱调节剂以及溶剂。
优选地，所述稳定剂组合物中，所述乙二胺四乙酸与所述抗氧化剂的质量比为(0.5～3):1。
更优选地，所述稳定剂组合物中，所述乙二胺四乙酸与所述抗氧化剂的质量比为(1～2):1。
更优选地，所述稳定剂组合物中，所述乙二胺四乙酸与所述抗氧化剂的质量比为1:1。
优选地，所述抗氧化剂为抗坏血酸或谷胱甘肽，所述酸碱调节剂为甲酸或乙酸，所述溶剂为水或甲醇或乙腈或异丙醇。
本发明提供了一种如上所述的稳定剂组合物的应用，其中，将所述稳定剂组合物添加到包含有儿茶酚类神经递质的透析液中，用于抑制儿茶酚类神经递质在所述透析液发生分解。
优选地，将所述稳定剂组合物添加到所述透析液中，使得所述乙二胺四乙酸在所述透析液的浓度为50μg/mL～150μg/mL，使得所述抗氧化剂在所述透析液的浓度为25μg/mL～450μg/mL，使得所述透析液的pH值为0.5～2.5。
更优选地，将所述稳定剂组合物添加到所述透析液中，使得所述乙二胺四乙酸在所述透析液的浓度为75μg/mL～125μg/mL，使得所述抗氧化剂在所述透析液的浓度为75μg/mL～250μg/mL，使得所述透析液的pH值为1.25～2。
更优选地，将所述稳定剂组合物添加到所述透析液中，使得所述乙二胺四乙酸在所述透析液的浓度为100μg/mL，使得所述抗氧化剂在所述透析液的浓度为100μg/mL，使得所述透析液的pH值为1.5。
本发明实施例提供的稳定剂组合物，包含有乙二胺四乙酸、抗氧化剂、酸碱调节剂，其中：乙二胺四乙酸可与透析液中的金属离子络合从而抑制金属离子催化儿茶酚类神经递质分解，抗氧化剂可与环境中的氧气结合从而抑制儿茶酚类神经递质的氧化，酸碱调节剂用于调节透析液酸碱度以避免儿茶酚类神经递质(特别是多巴胺)在碱性环境下的自身聚合反应；由此，本发明提供的稳定剂组合物可以有效地抑制儿茶酚类神经递质在透析液中发生分解，使得包含有儿茶酚类神经递质的透析液具有更长的稳定期。
附图说明
图1是实施例1中初始透析液的儿茶酚类神经递质浓度测试图谱；
图2是实施例1中透析液样品1的儿茶酚类神经递质浓度测试图谱；
图3是实施例1中透析液样品2的儿茶酚类神经递质浓度测试图谱；
图4是实施例2中透析液样品3的儿茶酚类神经递质浓度测试图谱；
图5是实施例3中透析液样品4的儿茶酚类神经递质浓度测试图谱；
图6是实施例4中透析液样品5的儿茶酚类神经递质浓度测试图谱。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。这些优选实施方式的示例在附图中进行了例示。附图中所示和根据附图描述的本发明的实施方式仅仅是示例性的，并且本发明并不限于这些实施方式。
在此，还需要说明的是，为了避免因不必要的细节而模糊了本发明，在附图中仅仅示出了与根据本发明的方案密切相关的结构和/或处理步骤，而省略了与本发明关系不大的其他细节。
本发明实施例首先提供了一种用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物，其中，所述稳定剂组合物包含有乙二胺四乙酸、抗氧化剂、酸碱调节剂以及溶剂。
优选的方案中，所述稳定剂组合物中，所述乙二胺四乙酸与所述抗氧化剂的质量比为(0.5～3):1。更为优选的方案中，所述乙二胺四乙酸与所述抗氧化剂的质量比为(1～2):1。最为优选的方案中，所述乙二胺四乙酸与所述抗氧化剂的质量比为1:1。
具体的方案中，所述抗氧化剂为抗坏血酸或谷胱甘肽，所述酸碱调节剂为甲酸或乙酸，所述溶剂为水或甲醇或乙腈或异丙醇。
本发明实施例还提供了一种如上所述的稳定剂组合物的应用，其中，将所述稳定剂组合物添加到包含有儿茶酚类神经递质的透析液中，用于抑制儿茶酚类神经递质在所述透析液发生分解。
优选的方案中，将所述稳定剂组合物添加到所述透析液中，使得所述乙二胺四乙酸在所述透析液的浓度为50μg/mL～150μg/mL，使得所述抗氧化剂在所述透析液的浓度为25μg/mL～450μg/mL，使得所述透析液的pH值为0.5～2.5。更为优选的方案中，将所述稳定剂组合物添加到所述透析液中，使得所述乙二胺四乙酸在所述透析液的浓度为75μg/mL～125μg/mL，使得所述抗氧化剂在所述透析液的浓度为75μg/mL～250μg/mL，使得所述透析液的pH值为1.25～2。最为优选的方案中，将所述稳定剂组合物添加到所述透析液中，使得所述乙二胺四乙酸在所述透析液的浓度为100μg/mL，使得所述抗氧化剂在所述透析液的浓度为100μg/mL，使得所述透析液的pH值为1.5。
本发明实施例提供的稳定剂组合物，包含有乙二胺四乙酸、抗氧化剂、酸碱调节剂，其中：乙二胺四乙酸可与透析液中的金属离子络合从而抑制金属离子催化儿茶酚类神经递质分解，抗氧化剂可与环境中的氧气结合从而抑制儿茶酚类神经递质的氧化，酸碱调节剂用于调节透析液酸碱度以避免儿茶酚类神经递质(特别是多巴胺)在碱性环境下的自身聚合反应；由此，本发明提供的稳定剂组合物可以有效地抑制儿茶酚类神经递质在透析液中发生分解，使得包含有儿茶酚类神经递质的透析液具有更长的稳定期。
实施例1
一、配制稳定剂组合物
称取40mg乙二胺四乙酸、40mg抗坏血酸加入到200mL容量瓶中，加入2m乙酸，加水定容至200mL，搅拌使各组分充分溶解，获得稳定剂组合物。
所述稳定剂组合物中，乙二胺四乙酸的浓度为200μg/mL、抗坏血酸的浓度为200μg/mL、乙酸的体积浓度为2％。
二、按照现有的微透析技术透析出小鼠脑部的儿茶酚类神经递质，获得包含有儿茶酚类神经递质的初始透析液，于-80℃的温度条件下避光存储。
三、使用液相色谱-三重四级杆联用仪测定初始透析液中儿茶酚类神经递质的浓度，测试图谱参见图1。其中，初始透析液中儿茶酚类神经递质的浓度：多巴胺为100ng/mL、肾上腺素为100ng/mL、去甲肾上腺素为100ng/mL。
四、从初始透析液中取两份透析液样品：样品1中添加了本实施例如上所述的稳定剂组合物，样品2则未添加任何试剂(即保持与初始透析液的成分相同)，将样品1和样品2于-80℃的温度条件下避光存储放置15天。
其中，所述样品1中，将稳定剂组合物添加到透析液中：使得乙二胺四乙酸在透析液样品中的浓度为100μg/mL，使得抗坏血酸在在透析液样品中的浓度为100μg/mL，使得所述透析液样品的pH值为1.5。
五、在样品1和样品2保存至第15天时，使用液相色谱-三重四级杆联用仪测定样品1和样品2中儿茶酚类神经递质的浓度，样品1的测试图谱参见图2，样品2的测试图谱参见图3。
从图2的图谱可以计算获知，透析液样品1中儿茶酚类神经递质的浓度：多巴胺为100ng/mL、肾上腺素为100ng/mL、去甲肾上腺素为100ng/mL，与初始透析液的测试结果相比，儿茶酚类神经递质的浓度几乎保持不变。
从图3的图谱可以计算获知，透析液样品2中儿茶酚类神经递质的浓度：多巴胺为41ng/mL、肾上腺素为36ng/mL、去甲肾上腺素为67ng/mL，与初始透析液的测试结果相比，儿茶酚类神经递质的浓度大幅度衰减，多巴胺的浓度衰减至起始浓度的41％，肾上腺素的浓度衰减至起始浓度的36％，去甲肾上腺素的浓度衰减至起始浓度的67％。
基于以上的测试结果可知，本发明实施例提供的稳定剂组合物对透析液中儿茶酚类神经递质起到良好的保护作用，有效抑制了儿茶酚类神经递质的分解。
实施例2
一、配制稳定剂组合物
称取40mg乙二胺四乙酸、40mg谷胱甘肽加入到200mL容量瓶中，加入1.5m乙酸，加甲醇定容至200mL，搅拌使各组分充分溶解，获得稳定剂组合物。
所述稳定剂组合物中，乙二胺四乙酸的浓度为200μg/mL、谷胱甘肽的浓度为200μg/mL、乙酸的体积浓度为1.5％，溶剂为甲醇。
二、参照实施例1的方式获取与实施例1相同的初始透析液。
三、从初始透析液中取一份透析液样品(样品3)：样品3中添加了本实施例如上所述的稳定剂组合物，将样品3于-80℃的温度条件下避光存储放置15天。
其中，所述样品3中，将稳定剂组合物添加到透析液中：使得乙二胺四乙酸在透析液样品中的浓度为100μg/mL，使得谷胱甘肽在在透析液样品中的浓度为100μg/mL，使得所述透析液样品的pH值为1.5。
四、在样品3保存至第15天时，使用液相色谱-三重四级杆联用仪测定样品3中儿茶酚类神经递质的浓度，样品3的测试图谱参见图4。
从图4的图谱可以计算获知，透析液样品3中儿茶酚类神经递质的浓度：多巴胺为100ng/mL、肾上腺素为100ng/mL、去甲肾上腺素为100ng/mL，与初始透析液(样品1)的测试结果相比，儿茶酚类神经递质的浓度几乎保持不变。
实施例3
一、配制稳定剂组合物
称取30mg乙二胺四乙酸、100mg抗坏血酸加入到200mL容量瓶中，加入0.5mL乙酸，加水定容至200mL，搅拌使各组分充分溶解，获得稳定剂组合物。
所述稳定剂组合物中，乙二胺四乙酸的浓度为150μg/mL、抗坏血酸的浓度为500μg/mL、乙酸的体积浓度为0.5％。
二、参照实施例1的方式获取与实施例1相同的初始透析液。
三、从初始透析液中取一份透析液样品(样品4)：样品4中添加了本实施例如上所述的稳定剂组合物，将样品4于-80℃的温度条件下避光存储放置15天。
其中，所述样品4中，将稳定剂组合物添加到透析液中：使得乙二胺四乙酸在透析液样品中的浓度为75μg/mL，使得抗坏血酸在在透析液样品中的浓度为250μg/mL，使得所述透析液样品的pH值为2。
四、在样品4保存至第15天时，使用液相色谱-三重四级杆联用仪测定样品4中儿茶酚类神经递质的浓度，样品4的测试图谱参见图5。
从图5的图谱可以计算获知，透析液样品4中儿茶酚类神经递质的浓度：多巴胺为69ng/mL、肾上腺素为90ng/mL、去甲肾上腺素为95ng/mL，与初始透析液的测试结果相比，儿茶酚类神经递质的浓度衰减的幅度较小，多巴胺的浓度衰减至起始浓度的69％，肾上腺素的浓度衰减至起始浓度的90％，去甲肾上腺素的浓度衰减至起始浓度的95％，与未添加稳定剂的样品(实施例1中的样品2)相比具有更好的效果，说明本实施例提供的稳定剂组合物对透析液中儿茶酚类神经递质起到保护作用，能够有效抑制了儿茶酚类神经递质的分解。
实施例4
一、配制稳定剂组合物
称取50mg乙二胺四乙酸、30mg抗坏血酸加入到200mL容量瓶中，加入2.5mL乙酸，加水定容至200mL，搅拌使各组分充分溶解，获得稳定剂组合物。
所述稳定剂组合物中，乙二胺四乙酸的浓度为250μg/mL、抗坏血酸的浓度为150μg/mL、乙酸的体积浓度为3％。
二、参照实施例1的方式获取与实施例1相同的初始透析液。
三、从初始透析液中取一份透析液样品(样品5)：样品5中添加了本实施例如上所述的稳定剂组合物，将样品5于-80℃的温度条件下避光存储放置15天。
其中，所述样品5中，将稳定剂组合物添加到透析液中：使得乙二胺四乙酸在透析液样品中的浓度为125μg/mL，使得抗坏血酸在在透析液样品中的浓度为75μg/mL，使得所述透析液样品的pH值为1.25。
四、在样品5保存至第15天时，使用液相色谱-三重四级杆联用仪测定样5中儿茶酚类神经递质的浓度，样品5的测试图谱参见图6。
从图5的图谱可以计算获知，透析液样品5中儿茶酚类神经递质的浓度：多巴胺为53ng/mL、肾上腺素为68ng/mL、去甲肾上腺素为95ng/mL，与初始透析液的测试结果相比，儿茶酚类神经递质的浓度衰减的幅度较小，多巴胺的浓度衰减至起始浓度的53％，肾上腺素的浓度衰减至起始浓度的68％，去甲肾上腺素的浓度衰减至起始浓度的95％，与未添加稳定剂的样品(实施例1中的样品2)相比具有更好的效果，说明本实施例提供的稳定剂组合物对透析液中儿茶酚类神经递质起到保护作用，能够有效抑制了儿茶酚类神经递质的分解。
综上所述，本发明实施例提供的用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物，该稳定剂组合物对透析液中儿茶酚类神经递质起到保护作用，可以有效地抑制儿茶酚类神经递质在透析液中发生分解。
以上所述仅是本申请的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本申请的保护范围。

Claims (9)

1.一种用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物，其特征在于，所述稳定剂组合物包含有乙二胺四乙酸、抗氧化剂、酸碱调节剂以及溶剂。
2.根据权利要求1所述的用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物，其特征在于，所述稳定剂组合物中，所述乙二胺四乙酸与所述抗氧化剂的质量比为(0.5～3):1。
3.根据权利要求2所述的用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物，其特征在于，所述稳定剂组合物中，所述乙二胺四乙酸与所述抗氧化剂的质量比为(1～2):1。
4.根据权利要求3所述的用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物，其特征在于，所述稳定剂组合物中，所述乙二胺四乙酸与所述抗氧化剂的质量比为1:1。
5.根据权利要求1-4任一所述的用于抑制儿茶酚类神经递质分解的稳定剂组合物，其特征在于，所述抗氧化剂为抗坏血酸或谷胱甘肽，所述酸碱调节剂为甲酸或乙酸，所述溶剂为水、甲醇、乙腈和异丙醇。
6.一种如权利要求1-5任一所述的稳定剂组合物的应用，其特征在于，将所述稳定剂组合物添加到包含有儿茶酚类神经递质的透析液中，用于抑制儿茶酚类神经递质在所述透析液发生分解。
7.根据权利要求6所述的稳定剂组合物的应用，其特征在于，将所述稳定剂组合物添加到所述透析液中，使得所述乙二胺四乙酸在所述透析液的浓度为50μg/mL～150μg/mL，使得所述抗氧化剂在所述透析液的浓度为25μg/mL～450μg/mL，使得所述透析液的pH值为0.5～2.5。
8.根据权利要求7所述的稳定剂组合物的应用，其特征在于，将所述稳定剂组合物添加到所述透析液中，使得所述乙二胺四乙酸在所述透析液的浓度为75μg/mL～125μg/mL，使得所述抗氧化剂在所述透析液的浓度为75μg/mL～250μg/mL，使得所述透析液的pH值为1.25～2。
9.根据权利要求8所述的稳定剂组合物的应用，其特征在于，将所述稳定剂组合物添加到所述透析液中，使得所述乙二胺四乙酸在所述透析液的浓度为100μg/mL，使得所述抗氧化剂在所述透析液的浓度为100μg/mL，使得所述透析液的pH值为1.5。
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CN116223690A (zh) * 2023-04-18 2023-06-06 苏州颐坤生物科技有限公司 一种从血浆中提取并检测6项儿茶酚胺及其代谢物的lc-ms/ms试剂盒

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CN116223690A (zh) * 2023-04-18 2023-06-06 苏州颐坤生物科技有限公司 一种从血浆中提取并检测6项儿茶酚胺及其代谢物的lc-ms/ms试剂盒
CN116223690B (zh) * 2023-04-18 2024-02-27 苏州颐坤生物科技有限公司 一种从血浆中提取并检测6项儿茶酚胺及其代谢物的lc-ms/ms试剂盒

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