CN112423783A - 组合的预防性和治疗性疫苗 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及包含(i)B细胞表位、(ii)T细胞表位和(iii)支架多肽的免疫原性多肽，其中所述支架多肽是硫氧还蛋白多肽。本发明还涉及所述免疫原性多肽用于医学以及用于治疗和/或预防细胞的不适当增殖和/或被感染原感染，优选HPV感染，以及涉及编码所述免疫原性多肽的多肽和载体。
Description
本发明涉及包含(i)B细胞表位、(ii)T细胞表位和(iii)支架多肽的免疫原性多肽，其中所述支架多肽是硫氧还蛋白多肽。本发明还涉及所述免疫原性多肽用于医学以及用于治疗和/或预防细胞的不适当增殖和/或被感染原感染，优选HPV感染，以及涉及编码所述免疫原性多肽的多肽和载体。
宫颈癌是在全球女性第二常见的癌症。临床和分子研究表明，某些类型的人乳头状瘤病毒(HPV)(被称为高风险类型)是该疾病的病因。默克(GardasilTM)和葛兰素史克(GardasilTM)最近已批准了两种预防宫颈癌的抗HPV疫苗(Schmiedeskamp等人，(2006)，AnnPharmacother，40：1344-1352)。两种疫苗都以病毒样颗粒(VLP)形式的主要衣壳蛋白L1作为抗原(Roden等人，(2006)，Nat Rev Cancer，6：753-763)；它们抵御衍生自L1-VLP的HPV类型，但对最密切相关的HPV类型以外的所有病毒均在很大程度上是无效的。两种疫苗的主要靶标是两种最突出的高风险HPV类型，即16型和18型HPV，尽管有证据表明对31型和45型HPV有部分交叉抵御作用(由Muller和Gissmann综述(2007)，Dis Markers，23：331-336；Huh和Roden，(2008)，Gynecol Oncol，109：S48-56)。基于L1的疫苗的交叉抵御能力有限，这是继续努力开发改进的疫苗接种策略的主要原因，这可能反映了L1中和表位的HPV类型特异性(Giroglou等人，(2001)，Vaccine，19：1783-1793)。
针对次要衣壳蛋白L2的抗体也中和HPV感染，并且通常能够交叉中和各种非同源病毒体，尽管效率有所不同(Kondo等人(2007)，Virology，358：266-272；Gambhira，R.，(2007)，J Virol，81：13927-13931)。L2的N端区域与靶细胞表面上尚未识别的第二受体相互作用(Yang等人.(2003)，J Virol，77：3531-3541)，该相互作用可以被抗L2抗体阻断。可能最突出的N端表位是位于17位至36位氨基酸之间的N端表位。这被确定为HPV16中和和保护性单克隆抗体(RG-1)的靶标，也是用扩展版L2免疫的兔和人血清中发现的中和活性的主要决定因素(1位至88位、11位至200位氨基酸或全长蛋白质)(Gambhira，2007，如上所述)。由于已经发现L2氨基酸18位和19位或氨基酸20位和21位的突变破坏了L2与细胞表面的结合和病毒感染(Yang，R.等人，(2003)，J.Virol.77：3531-3541)，得出的结论是RG-1抗体识别的表位与HPV16L2的表面结合基序重叠。
最近开发的增加肽免疫原性的替代策略依赖于使用硫氧还蛋白(Trx)作为支架蛋白，并能够限制插入其表面暴露的活性位点环中的单拷贝以及多聚(串联重复)肽表位的结构(Moretto等人，(2007)，J Biol Chem，282，11436-11445)。该策略也已经用于呈递用于免疫的HPV L2肽(WO 2010/070052)。在硫氧还蛋白支架的后续改进中，发现通过使用古细菌的Trx变体可以显著减少抗宿主硫氧还蛋白抗体的诱导(Canali等人，(2014)，ScientificReports 4，Art.No 4729：1)。
B细胞在免疫系统中的主要作用是在其激活后产生抗原特异性抗体。激活需要B细胞表面的B细胞受体(BCR)与其同源抗原(B细胞表位)结合。BCR的这种活化导致B细胞的活化，其经历成熟和克隆扩增，此后以这种方式产生的部分细胞变成产生对所述抗原特异的抗体的浆细胞。
适应性免疫系统的另一个重要分支是表位特异性T细胞。在人类中，这些细胞在其表面上具有T细胞受体，其识别结构域对抗原肽(T细胞表位)和主要组织相容性复合物(MHC)蛋白之间的确定复合物具有特异性。如果T细胞受体参与同源相互作用，则T细胞在免疫反应中被激活、繁殖并执行其激活或抑制任务。
MHC分子有两种形式：MHC I类在每个人类细胞的表面表达，基本上随机地呈递由细胞胞质溶胶中的蛋白质衍生的肽；因此，它们提供了细胞蛋白全貌的连续概况，并允许识别非正常的蛋白表达，例如在细胞的病毒感染或致癌过程中。为了识别MHC I类分子-肽复合物，T细胞受体需要CD8表面蛋白作为共受体。因此，存在表达CD8共受体的T细胞亚类，称为CD8+-T细胞；它们主要但非排他性的功能是消除呈递指示所述细胞中潜在致病过程例如病毒感染的肽的体细胞，这就是为什么它们也被称为细胞毒性T细胞。
MHC II类仅在专业抗原呈递细胞(APC)上表达。在这些细胞上，呈递的肽衍生自主要通过胞吞作用而被APC吸收的蛋白质。识别MHC II类需要共受体CD4，其仅在CD4+T细胞表面上表达。这些T细胞也称为T辅助细胞，其主要作用是激活CD8+-T细胞、巨噬细胞和B细胞。因此，将合适的表位递送至APC使得经由MHC II类将这些表位呈递至辅助T细胞，继而激活这些T细胞并使得激活免疫系统的其他分支。
因此，在本领域中仍然需要用于治疗和预防例如乳头状瘤病毒感染的传染性疾病以及癌症的治疗和预防的改进的免疫学试剂。可以将本发明的技术问题视为提供了满足上述需求的手段和方法。通过权利要求和下文中的实施方案解决了该技术问题。
因此，本发明涉及包含(i)T细胞表位、(ii)B细胞表位和(iii)支架多肽的免疫原性多肽，其中所述支架多肽是硫氧还蛋白多肽。
如下所使用的，术语“具有”、“包含”或“包括”以非排他性方式使用。因此，这些术语既可以指除了由这些术语引入的特征之外在该文本中描述的实体中不存在其他特征的情况，也可以指存在一个或多于一个其他特征的情况。例如，表述“A具有B”、“A包含B”和“A包括B”都可以指除B之外A中不存在其他要素的情况(即，A由且仅由B构成的情况)，以及除B之外实体A中还存在一个或多于一个其他要素，例如要素C，要素C和要素D或甚至其他要素的情况。
此外，如下所使用的，术语“优选地”、“更优选地”、“最优选地”、“特别地”、“更特别地”、“具体地”、“更具体地”或类似的术语与任选的特征结合使用，而不限制其他可能性。因此，由这些术语引入的特征是任选的特征，并且不旨在以任何方式限制权利要求的范围。如技术人员将认识到的，本发明可以通过使用替代特征来进行。类似地，通过“在本发明的实施方案中”或类似表述引入的特征指任选的特征，而不是对本发明的其他实施方案进行任何限制、不是对本发明的范围进行任何限制并且不是对将以这种方式引入的特征与本发明的其他任选或非任选的特征相结合的可能性进行任何限制。
如本文所使用的，除非另有说明，否则术语“标准条件”涉及IUPAC标准环境温度和压力(SATP)条件，即优选25℃的温度和100kPa的绝对压强；还优选标准条件包括pH为7。此外，如果没有另外说明，则术语“约”涉及具有相关领域中公认的技术精度的指示值，优选涉及指示值±20％，更优选±10％，最优选±5％。此外，术语“基本上”表示不存在对所指示的结果或使用有影响的偏差，即潜在的偏差不会使所指示的结果偏差超过±20％，更优选±10％，最优选±5％。因此，“基本上组成为”是指包括指定的组分，但不包括作为杂质存在的材料、由于用于提供组分的工艺而存在的不可避免的材料以及为实现本发明的技术效果以外的目的而添加的组分以外的组分。例如，使用短语“基本上组成为”定义的组合物包括任何已知的可接受的添加剂、赋形剂、稀释剂、载体等。优选地，基本上组成为一组组分的组合物将包含小于5重量％，更优选小于3重量％，甚至更优选小于1重量％，最优选小于0.1重量％的非特定组分。在核酸序列的上下文中，术语“基本上相同”表示至少80％，优选至少90％，更优选至少98％，最优选至少99％的％同一性值。如将会理解的，术语基本上相同包括100％的同一性。经必要的修改，前述内容适用于术语“基本上互补”。
如本文所使用的，术语“免疫原性多肽”优选涉及包含如本文所指定的元件的非天然存在的多肽。本文所指的免疫原性多肽至少包括T细胞表位、B细胞表位和支架多肽，所有这些均在本文其他地方指定。如下文所指定的，免疫原性多肽可包含其他结构域，例如优选免疫增强剂、寡聚结构域等。优选地，所述结构域通过非共价键连接并且具有至多10-6mol/l，更优选至多10-7mol/l，最优选至多10-8mol/l的解离常数。更优选地，至少两个结构域优选通过肽键共价连接。最优选地，免疫原性多肽的所有结构域共价连接，优选通过肽键共价连接；即优选地，免疫原性多肽是具有氨基酸连续链的多肽。因此，优选地，免疫原性多肽由单个开放阅读框编码。优选地，免疫原性多肽具有免疫原性的生物学功能，包括在对象中诱导体液和/或细胞免疫应答，更优选在对象中诱导体液和细胞免疫应答。最优选地，免疫原性多肽具有针对至少一种，更优选至少三种，还更优选至少八种，最优选至少十种HPV基因型的诱导免疫力的生物学功能。优选地，在免疫原性多肽中，所述B细胞表位和所述T细胞表位中的至少一个是肿瘤抗原和/或感染原抗原的表位；更优选地，B细胞表位和T细胞表位均为肿瘤抗原和/或抗原或感染原抗原的表位。更优选地，所述B细胞表位和所述T细胞表位中的至少一个是病毒多肽的表位；最优选地，B细胞表位和T细胞表位均为病毒多肽的表位。优选地，免疫原性多肽的B细胞表位和T细胞表位衍生自不同的多肽，更优选衍生自非同源的多肽。优选地，免疫原性多肽含有多个对应于如下文所指定的HPV16的L2多肽的第15位至50位氨基酸的PV L2 N端肽。更优选地，所述多个是5个至20个，优选6个至19个，最优选6个至16个PV L2 N端肽。还优选地，免疫原性多肽包含至少两种，优选至少四种，更优选至少六种，最优选所有选自HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 6、HPV 51和HPV 59的HPV基因型的PV L2 N端肽。还优选地，免疫原性多肽包含三个拷贝，更优选两个拷贝，最优选一个拷贝的每个所述PV L2 N端肽作为B细胞表位。优选地，免疫原性多肽包含含有多个B细胞表位的肽，优选如本文其他地方所指定的PV L2 N端肽，优选地，其中所述含有多个PV L2 N端肽的肽具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列或与SEQ ID NO：1具有至少80％同一性的序列；所述肽优选由SEQ ID NO：30的核酸序列编码。更优选地，免疫原性多肽包含含有多个PV L2 N端肽的肽，其中所述含有多个PV L2 N端肽的肽具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列。优选地，免疫原性多肽包含含有多个T细胞表位的肽，优选如本文其他地方所指定的E7肽，优选地，其中所述含有多个E7肽的肽具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列或与SEQ ID NO：2具有至少80％同一性的序列；所述肽优选由SEQ ID NO：31的核酸序列编码。更优选地，免疫原性多肽包含含有多个E7肽的肽，其中所述含有多个E7肽的肽具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列。优选地，免疫原性多肽包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列或与所述序列具有至少80％同一性的序列；SEQ ID NO：2的氨基酸序列或与所述序列具有至少80％同一性的序列。更优选地，免疫原性多肽包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或与所述序列具有至少80％同一性的序列，特别地，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；所述肽优选由SEQ ID NO：32的核酸序列编码。还更优选地，免疫原性多肽包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或与所述序列具有至少80％同一性的序列，特别地，其包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列；所述免疫原性肽优选由SEQ ID NO：33的核酸序列编码。最优选地，免疫原性多肽包含(i)SEQ ID NO：5的氨基酸；(ii)与SEQ ID NO：5的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列；(iii)由SEQ ID NO：34编码的多肽序列和/或(iv)由与SEQ ID NO：34的序列具有至少70％同一性的多核苷酸序列编码的多肽。
优选地，术语免疫原性多肽包括本文所述的特定免疫原性多肽的变体。如本文所使用的，术语“多肽变体”是指至少包含本文指定的多肽的任何化学分子，其具有所示的活性，但是结构与本文所示的所述多肽不同。优选地，多肽变体包含具有如下氨基酸序列的肽，该氨基酸序列对应于如本文指定的多肽中包含的25个至500个，更优选30个至300个，最优选35个至150个连续的氨基酸的氨基酸序列。还涵盖了上述多肽的其他多肽变体。这样的多肽变体具有至少与特定多肽相同的基本生物学活性。此外，应理解，根据本发明的多肽变体应具有由于至少一个氨基酸置换、缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中变体的氨基酸序列仍优选与特定多肽的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％或99％的同一性。两个氨基酸序列之间的同一性程度可以通过本领域众所周知的算法来确定。优选地，同一性程度将通过在比较窗口中比较两个最佳比对的序列来确定，其中为获得最佳比对，比较窗口中的氨基酸序列的片段与比较序列相比可包含添加或缺失(例如，间隔或突出端)。通过以下方法计算百分比，优选在肽的全长上确定两个序列中出现相同氨基酸残基的位置数，以产生匹配位置数，将匹配位置数除以比较窗口中的总位置数，并将结果乘以100以得出序列同一性的百分比。通过Smith和Waterman(1981)的局部同源性算法、Needleman和Wunsch(1970)的同源性比对算法、Pearson和Lipman(1988)的检索相似性的方法、通过这些算法的计算机化实现(威斯康星州遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、BLAST、PASTA和TFASTA，Genetics Computer Group(GCG)，575Science Dr.，Madison，WI)、或通过目测检查，可以进行比较序列的最佳比对。假定已经确定了用于比较的两个序列，则优选采用GAP和BESTFIT来确定它们的最佳比对，从而确定同一性程度。优选地，对于间隙权重使用默认值5.00，对于间隙权重长度使用默认值0.30。以上提及的多肽变体可以衍生自等位基因变体或任何其他物种特异性的同源物、旁系同源物或直系同源物。此外，本文所指的多肽变体包括特定多肽的片段或上述类型的多肽变体，只要这些片段和/或变体具有上述生物学活性即可。这样的片段可以来自或衍生自例如多肽的降解产物或剪接变体。还包括由于翻译后修饰，例如磷酸化、糖基化、泛素化、类泛素化或肉豆蔻基化、包含非天然氨基酸和/或是拟肽而不同的变体。此外，本发明的免疫原性多肽的变体优选包括变体，其中至少一个结构域是本文所述结构域的变体。
术语“表位”是技术人员已知的，其涉及免疫系统可识别的抗原的(亚)结构。如本文所使用的，表位是氨基酸序列，优选氨基酸的连续序列，即肽。优选地，表位的长度为至少三个，更优选至少四个，更优选至少五个，最优选至少六个氨基酸。还优选地，表位的长度为至多50个，更优选至多25个，甚至更优选至多20个，最优选至多15个氨基酸。因此，优选地，表位的长度为3个至50个，更优选为4个至25个，甚至更优选为5个至20个，最优选6个至15个氨基酸。
如本文所使用的，术语“B细胞表位”涉及包含在免疫系统的抗体可识别的肽中的氨基酸的连续序列。因此，优选地，B细胞表位是在对象中诱导体液(抗体)应答的肽。本领域技术人员知道如何预测B细胞表位，例如根据Larsen等人，(2006)，Immunome Research 2：2。优选地，B细胞表位是衍生自肿瘤抗原的表位，即基本上仅在不适当增殖的细胞(例如肿瘤细胞或癌细胞)内或上表达的蛋白质中包含的氨基酸序列；因此，优选地，B细胞表位是在对象的正常细胞上，即在所述对象的非不适当增殖的细胞上基本上不存在或不存在的表位，如下文所述。优选地，B细胞表位是肿瘤抗原和/或感染原抗原的表位，如下文所述。更优选地，B细胞表位是感染原的表位，更优选病毒多肽，最优选病毒结构多肽；优选地，所述病毒多肽是乳头状瘤病毒(PV)多肽，更优选人PV(HPV)，还更优选高风险HPV基因型，最优选高风险黏膜HPV基因型。优选地，B细胞表位衍生自选自HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV35、HPV 6、HPV 51和HPV 59的至少一种HPV基因型。如本领域技术人员将理解的，免疫原性多肽可包含多于一个B细胞表位，例如优选2个至20个，更优选6个至19个，最优选6个至16个B细胞表位。在这种情况下，B细胞表位优选衍生自不同的多肽，更优选衍生自同源多肽；更优选地，在这种情况下，B细胞表位衍生自同源多肽的对应区域。优选地，B细胞表位是衍生自晚期PV多肽的肽，优选衍生自L1或L2，更优选是对应于HPV16的L2多肽的第15位至50位氨基酸(SEQ ID NO：6)或应于HPV16 L2多肽的第65位至89位氨基酸(SEQ ID NO：7)，还更优选是对应于HPV16 L2多肽的第20位至38位氨基酸(SEQ ID NO：8)的PV L2 N端肽。
术语“同源多肽”被技术人员理解为涉及在进化上相关并因此在氨基酸序列上相似的多肽。优选地，如本文所使用的，术语同源多肽用于与优选地如上文所指定确定的氨基酸序列，更优选不论其进化关系如何的氨基酸序列具有至少75％，更优选至少80％，还更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％同一性的多肽。
如本文所使用的，术语“T细胞表位”涉及肽中包含的氨基酸的连续序列，其可以与在细胞(MHC-I)或专业抗原呈递细胞(MHC-II)的表面上呈递的主要组织相容性复合物(MHC)I类或II类分子结合。技术人员知道如何预测在MHC-I或MHC-II上呈递的免疫原性肽(Nielsen等人，(2004)，Bioinformatics，20(9)，1388-1397)，Bordner(2010)，PLoS ONE 5(12)：e14383)以及如何评估特异性肽的结合(例如Bernardeau等人，(2011)，J ImmunolMethods，371(1-2)：97-105)。优选地，T细胞表位是MHC-I表位。优选地，T细胞表位是衍生自肿瘤抗原的表位，即基本上仅在例如肿瘤细胞或癌细胞的不适当增殖的细胞内或上表达的蛋白质中包含的氨基酸序列；因此，优选地，T细胞表位是在对象的正常细胞上，即在所述对象的非不适当增殖的细胞上基本上不存在或不存在的表位。优选地，T细胞表位是肿瘤抗原和/或感染原抗原的表位，如下文所述。更优选地，T细胞表位是感染原的表位，特别是病毒多肽，更优选乳头状瘤病毒(PV)多肽，甚至更优选人PV(HPV)，优选高风险HPV基因型，更优选高风险黏膜HPV基因型。优选地，T细胞表位衍生自选自HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 6、HPV 51和HPV 59的至少一种HPV基因型。优选地，T细胞表位是衍生自PV的早期基因的肽，更优选衍生自E6或E7多肽，最优选衍生自E7多肽。优选地，T细胞表位具有的氨基酸序列对应于HPV16 E7的第49位至57位氨基酸的氨基酸序列，更优选地，所述T细胞表位具有氨基酸序列RAHYNIVTF(SEQ ID NO：9)。优选地，T细胞表位在N端和/或C端侧接至少3个，优选至少4个，更优选至少5个氨基酸；更优选地，N端侧接序列的氨基酸序列为QAEPD(SEQ ID NO：10)和/或C端侧接序列的氨基酸序列为CCKCD(SEQ ID NO：11)。因此，优选地，N端和C端侧接的T细胞表位的氨基酸序列为QAEPDRAHYNIVTFCCKCD(SEQ ID NO：12)。如本领域技术人员将理解的，免疫原性多肽可包含多于一个T细胞表位，例如优选2个至15个，更优选2个至10个，甚至更优选2个至8个T细胞表位，最优选3个T细胞表位。在这种情况下，T细胞表位优选MHC-I和MHC-II表位；更优选地，T细胞表位是由具有不同基因的MHC呈递的表位。更优选地，T细胞表位是由不同的MHC等位基因和/或亚型呈递的表位。优选地，免疫原性多肽中包含的所有T细胞表位均衍生自同源多肽。更优选地，免疫原性多肽中包含的所有T细胞表位均衍生自相同的多肽，甚至更优选包含相同的T细胞表位，最优选相同的T细胞表位。
术语“支架多肽”是技术人员已知的，并且包括提供免疫原性多肽的表位的附着，优选共价附着的骨架的所有多肽。优选地，支架多肽是球状多肽。还优选地，处于其天然状态即与本文指定的表位无缔合的支架多肽是单体多肽或寡聚多肽。在支架多肽是寡聚多肽的情况下，其优选为同源寡聚体。更优选地，处于其天然状态的支架多肽是单体多肽。这些表位原则上可以连接在支架多肽的N端、C端和/或内部。
如本文所使用的，支架多肽是硫氧还蛋白。术语“硫氧还蛋白”是技术人员已知的，其涉及基本上在所有活生物体上保守的小氧化还原多肽家族。优选地，硫氧还蛋白是哺乳动物硫氧还蛋，更优选人硫氧还蛋、细菌硫氧还蛋或古细菌硫氧还蛋白。更优选地，硫氧还蛋白是古细菌硫氧还蛋白，优选来自嗜热古细菌(archeon)，优选激烈火球菌或嗜热甲烷鬃毛菌(Methanosaeta thermophila)。因此，硫氧还蛋白优选具有SEQ ID NO：13的氨基酸序列(人硫氧还蛋白)，优选由SEQ ID NO：14的核酸序列编码，或是其变体；或具有SEQ ID NO：15的氨基酸序列(小鼠硫氧还蛋白)，优选由SEQ ID NO：16的核酸序列编码，或是其变体；或具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列(大肠杆菌硫氧还蛋白)，优选由SEQ ID NO：18的核酸序列编码，或是其变体。更优选地，硫氧还蛋白具有SEQ ID NO：19的氨基酸序列(激烈火球菌硫氧还蛋白)，优选由SEQ ID NO：20的核酸序列编码，或是其变体；或具有SEQ ID NO：21的氨基酸序列(嗜热甲烷鬃毛菌硫氧还蛋白)，优选由SEQ ID NO：22的核酸序列编码，或是其变体。合适的硫氧还蛋白多肽特别是由WO 2010/070052已知的。如本领域技术人员将理解的，本发明的硫氧还蛋白具有作为支架的生物学活性，而不需要它们的氧化还原活性。因此，根据本发明，与前述硫氧还蛋白中的一种具有至少50％序列同一性的变体硫氧还蛋白适用于免疫原性多肽。优选地，如WO 2010/070052中详细描述的，将多个L2 N端肽插入硫氧还蛋白的“显示位点”。
术语“接头”和“接头肽”原则上是技术人员已知的。本领域技术人员知道如何选择合适的接头肽。优选地，接头包含1个至5个氨基酸，其优选地选自甘氨酸(G)、脯氨酸(P)或丝氨酸(S)。特别优选的接头肽包含氨基酸序列GGP(SEQ ID NO：23)。但是，还可以使用其他接头，例如GP(SEQ ID NO：24)、GS(SEQ ID NO：25)、GPGP(SEQ ID NO：26)、GPGPG(SEQ IDNO：27)或SGSG(SEQ ID NO：28)。优选地，所述接头肽位于支架多肽，即如本文其他地方所述的硫氧还蛋白多肽和B细胞表位和/或T细胞表位的连接处。还优选地，独立选择的接头可以插入B细胞表位和T细胞表位之间。还优选地，在免疫原性多肽中存在多于一个B细胞表位和/或T细胞表位的情况下，独立选择的接头还可以干预所述B细胞表位和/或T细胞表位。
如本文所使用的，术语“乳头状瘤病毒”(PV)涉及来自乳头状瘤病毒科病毒的DNA病毒，其感染哺乳动物，优选牲畜，更优选牛和马，最优选人类的皮肤和黏膜。对于人类PV(HPV)，已经描述了大于110种HPV基因型(de Villiers，E.M.，C.Fauquet，T.R.Broker，H.U.Bernard和H.zur Hausen.2004.Classification of papillomaviruses.Virology324：17-27)。已知约50种HPV基因型感染黏膜。根据它们与癌症的流行病学的关联，将这些黏膜基因型分为三类：“低风险”人乳头状瘤病毒(LR-HPV)、“高风险”人乳头状瘤病毒(HR-HPV)和“推定的高风险”人乳头状瘤病毒(pHR-HPV)。还已知HR-HPV可引起外阴癌、肛门癌、阴道癌、阴茎癌和口咽癌，以及阴道上皮内瘤变、肛门上皮内瘤变、外阴上皮内瘤变和阴茎上皮内瘤变。优选地，HPV是黏膜HPV；更优选地，本发明的HPV是高风险HPV基因型(HR-HPV)，其是宫颈癌发展的主要原因。优选地，HPV是HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV51、HPV 52、HPV 56、HPV 58、HPV 59、HPV 68、HPV 73和HPV 82，更优选HPV 6、HPV 16、HPV18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45，HPV 51、HPV 56、HPV 59和HPV 82，最优选HPV6、HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 51和HPV 59。
术语“不适当的细胞增殖”是指对象体细胞的异常增殖；其结果是可能导致身体组织的细胞组成不平衡、体液失衡和/或肿瘤形成。不适当的细胞增殖可被感染原，优选病毒，更优选致癌病毒，更优选乳头状瘤病毒、EB病毒、肝炎病毒、人T淋巴病毒1、人疱疹病毒8，更优选乳头状瘤病毒(PV)，最优选人乳头状瘤病毒(HPV)诱导。但是，不适当的细胞增殖也可能由化合物，例如致癌物质，或内源性地例如由自发突变引起而诱导。优选地，不适当的细胞增殖是良性的，即优选不威胁对象的健康或生命。优选的良性的细胞的不适当增殖为疣、外生性乳头状瘤、尖锐湿疣、内翻性乳头状瘤和肿瘤前HPV诱导的病变。更优选地，不适当的细胞增殖是恶性的，即确实威胁对象的健康或生命；因此，优选地，恶性的不适当的细胞增殖是癌症。如本文所使用的，术语“癌症”涉及动物，包括人的疾病，其特征在于一组体细胞(“癌细胞”)的不受控制的生长。这种不受控制的生长可能伴随着对周围组织的侵入和破坏，并可能使癌细胞扩散到体内其他位置。优选地，术语癌症还包括复发。因此，优选地，癌症是实体癌、转移或复发。
优选地，癌症选自急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、肾上腺皮质癌、艾滋病相关的淋巴瘤、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸胎样、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、脑干胶质瘤、乳腺癌、伯基特淋巴瘤、类癌、小脑星形细胞瘤、宫颈癌、脊索瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、子宫内膜癌、室管膜母细胞瘤、室管膜瘤、食管癌、颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞瘤、肝外胆管癌、纤维肉瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道间质瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、下丘脑和视通路神经胶质瘤、眼内黑色素瘤、卡波西肉瘤、喉癌、髓母细胞瘤、髓上皮瘤、黑色素瘤、梅克尔细胞癌、间皮瘤、口腔癌、多发性内分泌瘤综合征、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞瘤、卵巢低恶性潜能肿瘤、胰腺癌、乳头状瘤病、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、胸膜肺母细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、塞扎里综合征、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、鳞状颈癌、睾丸癌、喉癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺癌、尿道癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、华氏巨球蛋白血症和肾母细胞瘤。更优选地，癌症是实体癌、转移癌或复发癌。最优选地，癌症是HPV阳性癌症的肿瘤，优选HPV阳性头颈癌和/或宫颈癌。因此，优选地，癌细胞是乳头状瘤病毒阳性的癌细胞，优选地人乳头状瘤病毒阳性的癌细胞。
如本文所使用的，术语“肿瘤抗原”涉及在不适当的增殖细胞中可检测到，但在正常的体细胞、特别是相同组织的周围细胞中检测不到或降低为至少5分之一，优选至少10分之一程度的任何抗原化合物，优选其多肽或表位。因此，优选地，肿瘤抗原对不适当增殖的细胞具有特异性，优选与包含所述不适当增殖的细胞的对象的其余细胞相比具有特异性。优选地，肿瘤抗原是对肿瘤细胞特异性的抗原，优选针对如上文所指定的PV相关的良性病变和/或癌细胞特异性的抗原。
如本文所使用的，术语“对象”涉及动物，优选脊椎动物，更优选哺乳动物，特别是牲畜，例如牛、马、猪、绵羊和山羊，或实验动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠。最优选地，对象是人类。
如本文所使用的，术语“感染原”涉及导致对象患有传染性疾病的物质，优选微生物。优选地，感染原是细菌、真核感染原，例如疟原虫或病毒，更优选病毒，例如乳头状瘤病毒、肝炎病毒或人免疫缺陷病毒(HIV)，更优选感染原是致癌病毒，更优选乳头状瘤病毒、EB病毒、肝炎病毒、人T淋巴病毒1、人疱疹病毒8，更优选乳头状瘤病毒(PV)，最优选人乳头状瘤病毒(HPV)。优选地，感染原是引起慢性疾病的原因。更优选地，感染原是引起慢性感染和/或持续感染的原因。
优选地，免疫原性多肽还包含寡聚结构域。术语“寡聚结构域”以其常规含义使用，并且涉及具有以下性质的多肽：包含所述结构域的多肽具有聚集的倾向。优选地，作为单独分子的寡聚结构域的解离常数至多为10-4mol/l，更优选至多为10-5mol/l，最优选至少为10-6mol/l。如将理解的，聚集的分子数量将特别取决于所选择的寡聚结构域的类型。合适的寡聚结构域在本领域是已知的。优选地，免疫原性多肽包含选自以下的至少一种寡聚结构域：(i)C4结合蛋白，优选哺乳动物的C4结合蛋白，更优选人或小鼠的C4结合蛋白，最优选小鼠的C4结合蛋白；(ii)胶囊蛋白(encapsulin)多肽，优选来自嗜热古细菌的胶囊蛋白多肽，更优选激烈火球菌胶囊蛋白多肽；(iii)铁蛋白多肽，优选来自嗜热古细菌的铁蛋白多肽，更优选激烈火球菌铁蛋白多肽；(iv)两种不同的鸡C4结合蛋白的杂交多肽，优选IMX313多肽或其变体，特别是如WO 2007/062819 A2中所述的，最优选IMX313T多肽(SEQ ID NO：29)。IMX313T多肽也被称为“OVX313结构域”。
有利地，在本发明基础的工作中发现，通过将免疫原性多肽中的T细胞表位和B细胞表位与作为支架的硫氧还蛋白相结合，不仅可诱导对B细胞抗原稳定的抗体应答，而且可诱导改善的对T细胞抗原的T细胞应答。因此，公开的免疫原性多肽可用于清除对象的持续感染，并同时对所述对象接种疫苗以抵抗新感染。
经适当修改，以上作出的定义适用于以下内容。经适当修改，下面做出的附加定义和解释也适用于本说明书中所述的所有实施方案。
本发明还涉及本发明的免疫原性多肽用于医药，并且涉及本发明的免疫原性多肽用于治疗和/或预防细胞的不适当增殖和/或被感染原感染，优选HPV感染。
术语“治疗”指在很大程度上减轻本文所指的疾病或病症或伴随的症状。如本文所使用的所述治疗还包括本文所指的疾病或病症的整体康复。应当理解，如本文所使用的术语，治疗可能并非在所有待治疗的对象中都是有效的。然而，术语将优选地要求统计学显著性部分的患有本文所指的疾病或病症的对象可以被成功治疗。本领域技术人员可以使用各种众所周知的统计评估工具，例如确定置信区间、确定p值、学生t检验、Mann-Whitney检验等来确定该部分是否在统计上是显著的，而无需费力。优选的置信区间为至少90％，至少95％，至少97％，至少98％或至少99％。p值优选为0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。优选地，治疗应对于给定队列或群体的对象的至少10％，至少20％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％或至少90％是有效的。优选地，治疗癌症是减轻对象的肿瘤负担。如本领域技术人员将理解的，例如，癌症治疗的有效性取决于各种因素，包括例如癌症阶段和癌症类型。优选地，治疗引起不适当增殖的细胞，优选肿瘤细胞，更优选癌细胞被对象的T细胞识别。因此，优选地，治疗具有引起肿瘤停止生长，更优选引起肿瘤消退，更优选引起肿瘤消散的作用。如本文所使用的，经适当修改，以上涉及治疗HPV相关的病变。
术语“预防”指在对象中相对于本文所指的疾病或病症保持一段时间的健康。将理解的是，所述时间段可以取决于已经施用的药物化合物的量以及本说明书中其他地方讨论的对象的个体因素。应当理解，在用根据本发明的化合物治疗的所有对象中，预防可能不是有效的。但是，术语将优选地要求统计学显著性部分的对象的队列或群体被有效地预防患有本文所指的疾病或病症或其伴随的症状。优选地，在这种情况下，预期对象的队列或群体通常即没有根据本发明的预防措施将发展出本文所指的疾病或病症。本领域技术人员可以使用该说明书其他地方讨论的各种众所周知的统计评估工具来确定该部分是否在统计上是显著的，而无需费力。因此，优选地，在由感染原引起的疾病的情况下，预防可以是疫苗接种。因此，优选地，术语预防涉及施用本文所指定的化合物以引发针对至少一种感染原的免疫应答。因此，疫苗接种刺激了免疫系统，并建立或提高了针对原感染感染的免疫力。优选地，根据本发明的疫苗接种可以建立或改善针对感染原，优选人乳头状瘤病毒基因型感染的免疫力。应该理解，根据本发明的疫苗可以包含其他组分，特别是如本文其他地方所指定的组分。技术人员将理解，接种疫苗可能不会在所有接种疫苗的对象中引起显著的免疫应答。另外，应当理解，接种疫苗可能不能有效地预防所有接种疫苗的对象被感染。但是，术语要求队列或群体优选在统计学上显著的部分的对象被有效地接种疫苗。在感染原是HPV的情况下，有效的疫苗接种优选预防或减少HPV诱导的病变例如疣的数量。
本发明还涉及编码根据本发明的免疫原性多肽的多核苷酸。
如本文所使用的，术语多核苷酸优选包括具体指出的多核苷酸的变体。更优选地，术语多核苷酸涉及所示的特定多核苷酸。然而，应当理解，由于遗传密码的简并性，具有特定氨基酸序列的多肽也可以被多种多核苷酸编码。技术人员知道如何选择编码具有特定氨基酸序列的多肽的多核苷酸，并且还知道如何根据用于表达所述多核苷酸的生物的密码子使用来优化多核苷酸中使用的密码子。因此，如本文所使用的术语“多核苷酸变体”涉及与本文相关的多核苷酸的变体，其包含特征在于序列可以通过至少一个核苷酸置换、添加和/或缺失而从上述特异性核酸序列中衍生的核酸序列，其中多核苷酸变体应具有针对特定多核苷酸所指定的活性，即应编码根据本发明的免疫原性多肽。此外，应理解，根据本发明的多核苷酸变体应具有由于至少一个核苷酸置换、缺失和/或添加而不同的核酸序列。优选地，所述多核苷酸变体是特定多核苷酸的直系同源物、旁系同源物或另一种同源物。还优选地，所述多核苷酸变体是特定多核苷酸的天然等位基因。多核苷酸变体还涵盖包含核酸序列的多核苷酸，其优选能够在严格的杂交条件下与上述特定多核苷酸杂交。这些严格条件是本领域技术人员已知的，并且可以在Current Protocols in Molecular Biology，JohnWiley&Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6中找到。严格的杂交条件的优选实例是在约45℃下6x氯化钠/柠檬酸钠(＝SSC)中，然后在50℃至65℃下在0.2xSSC，0.1％SDS中进行一个或多于一个洗涤步骤的杂交条件。本领域技术人员知道，这些杂交条件根据核酸的类型以及例如存在有机溶剂时，在缓冲液的温度和浓度方面有所不同。例如，在“标准杂交条件”下，温度根据在浓度为0.1x至5xSSC(pH 7.2)的含水缓冲液中42℃至58℃的核酸类型而不同。如果上述缓冲液中存在有机溶剂，例如50％甲酰胺，则标准条件下的温度约为42℃。DNA：DNA杂交体的杂交条件优选为例如0.1xSSC和20℃至45℃，优选30℃至45℃。DNA：RNA杂交体的杂交条件优选为例如0.1xSSC和30℃至55℃，优选45℃至55℃。上述杂交温度是例如在不存在甲酰胺的情况下，对于长度大约为100bp(＝碱基对)且G+C含量为50％的核酸确定的。技术人员知道如何通过参考例如以上提到的教科书或以下的教科书来确定所需的杂交条件：Sambrook等人，″Molecular Cloning”，Cold Spring Harbor Laboratory，1989；Hames和Higgins(Ed.)1985，”Nucleic Acids Hybridization：A Practical Approach”，IRL Pressat Oxford University Press，Oxford；Brown(Ed.)1991，″Essential MolecularBiology：A Practical Approach”，IRL Press at Oxford University Press，Oxford。或者，可通过基于PCR的技术，例如基于混合的寡核苷酸引物的DNA扩增，即使用针对本发明的多肽的保守结构域的简并引物来获得多核苷酸变体。多肽的保守结构域可以通过将本发明的多核苷酸的核酸序列或多肽的氨基酸序列与其他生物的序列进行序列比较来识别。作为模板，可以使用来自细菌、真菌、植物或优选来自动物的DNA或cDNA。此外，变体包括包含与特别指出的核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％同一性的核酸序列的多核苷酸。此外，还包括包含编码与特别指出的氨基酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的核酸序列的多核苷酸。优选地在整个氨基酸或核酸序列区域上计算同一性百分比值。技术人员可以获得基于各种算法的一系列程序来比较不同的序列。在这种情况下，Needleman和Wunsch或Smith和Waterman的算法给出了特别可靠的结果。为了进行序列比对，使用程序PileUp(J.Mol.Evolution.，25，351-360，1987，Higginset al.，CABIOS，51989：151-153)或程序Gap和BestFit Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48；443-453(1970))和Smith和Waterman(AdV.Appl.Math.2；482-489(1981))，它们是GCG软件数据包(Genetics Computer Group，575Science Drive，Madison，Wisconsin，USA 53711(1991))的一部分。上面列出的以百分比(％)表示的序列同一性值优选通过以下设置在整个序列区域中使用程序GAP来确定：间隙权重：50，长度权重：3，平均匹配：10.000和平均错配：0.000，除非另有说明，否则应始终用作序列比对的标准设置。
包含任何一种特别指出的核酸序列的片段的多核苷酸也包括在本发明的变体多核苷酸中。片段仍应编码还具有指定的活性的免疫原性多肽。因此，编码的免疫原性多肽可包含或组成为赋予所述生物活性的本发明的免疫原性多肽的结构域。如本文所指的片段优选地包含任何一个特定核酸序列的至少50个、至少100个、至少250个或至少500个连续的核苷酸或编码包含任何一个特定氨基酸序列的至少20个、至少30个、至少50个、至少80个、至少100个或至少150个连续的氨基酸的氨基酸序列。
本发明的多核苷酸组成为、基本上组成为或包括上述核酸序列。因此，它们还可以包含其他核酸序列。具体地，本发明的多核苷酸可以编码融合蛋白，其中融合蛋白的一个伴侣是由上述核酸序列编码的免疫原性多肽。这些融合蛋白可以包含用于监测表达的多肽(例如，绿色、黄色、蓝色或红色荧光蛋白、碱性磷酸酶等)作为附加部分，所谓的“标签”可以用作可检测的标志物或作为用于纯化目的的辅助措施和/或支架多肽，例如硫氧还蛋白，如上文所述。用于不同目的的标签是本领域众所周知的，并且在本文其他地方进行了描述。
本发明的多核苷酸应优选以分离的多核苷酸(即由其天然环境分离)或遗传修饰的形式提供。多核苷酸优选为DNA，包括cDNA，或者为RNA。术语涵盖单链和双链多核苷酸。此外，优选还包括化学修饰的多核苷酸，包括天然存在的经修饰的多核苷酸，例如糖基化或甲基化的多核苷酸，或人工修饰的多核苷酸，例如生物素化的多核苷酸。
此外，本发明涉及包含根据本发明的多核苷酸的载体。
术语“载体”优选涵盖噬菌体、质粒、病毒或逆转录病毒载体以及人工染色体，例如细菌或酵母人工染色体。此外，术语还涉及靶向构建体，其允许将靶向构建体随机或定点整合到基因组DNA中。这些靶向构建体优选地包含足够长度的DNA以用于同源或异源重组，如下文详细描述的。包含本发明的多核苷酸的载体优选还包含用于在宿主中增殖和/或选择的可选择标志物。可以通过本领域众所周知的各种技术将载体引入宿主细胞中。例如，可以将质粒载体引入沉淀物中，例如磷酸钙沉淀物或氯化铷沉淀物中，或引入带电荷的脂质的复合物中，或引入基于碳的簇，例如富勒烯中。或者，可以通过热休克或电穿孔技术将质粒载体引入。如果载体是病毒，则可以在应用于宿主细胞之前使用适当的包装细胞系对其进行体外包装。逆转录病毒载体可以具有复制能力或复制缺陷。在后一种情况下，病毒增殖通常只会在互补的宿主/细胞中发生。在优选的实施方案中，载体是细菌载体，其优选具有p15A复制起点和/或携带卡那霉素抗性基因。
更优选地，在本发明的载体中，多核苷酸可操作地连接至表达控制序列，从而允许在原核细胞或真核细胞或其分离的部分中表达。所述多核苷酸的表达包括多核苷酸的转录，优选转录为可翻译的mRNA。确保在真核细胞，优选哺乳动物细胞中表达的调节元件是本领域众所周知的。它们优选地包含确保转录起始的调节序列，以及任选确保转录终止和转录物稳定的多聚A信号。其他调节元件可包括转录增强子和翻译增强子。允许在原核宿主细胞中表达的可能的调节元件包括，例如大肠杆菌中的lac、trp或tac启动子，允许在真核宿主细胞中表达的调节元件的实例是酵母中的AOX1或GAL1启动子或CMV启动子、SV40启动子、RSV启动子(劳斯肉瘤病毒)、CMV增强子、SV40增强子或哺乳动物和其他动物细胞中的球蛋白内含子。此外，可诱导的表达控制序列可用于本发明涵盖的表达载体中。这些可诱导的载体可包含tet或lac操纵子序列或可被热休克或其他环境因素诱导的序列。合适的表达控制序列是本领域众所周知的。除了负责转录起始的元件之外，这些调控元件还可在多核苷酸下游包含转录终止信号，例如SV40-多聚A位点或tk-多聚A位点。在这方面，合适的表达载体是本领域已知的，例如Okayama-Berg cDNA表达载体pcDV1(Pharmacia)、pBluescript(Stratagene)、pCDM8、pRc/CMV、pcDNA1、pcDNA3(InVitrogene)或pSPORT1(GIBCO BRL)。优选地，所述载体是表达载体和基因转移或靶向载体。衍生自病毒例如逆转录病毒、牛痘病毒、腺相关病毒、疱疹病毒或牛乳头状瘤病毒的表达载体可用于将本发明的多核苷酸或载体递送至靶细胞群体中。本领域技术人员众所周知的方法可用于构建重组病毒载体；参见例如Sambrook，Molecular Cloning A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory(1989)N.Y.和Ausubel，Current Protocols in Molecular Biology，GreenPublishing Associates and Wiley Interscience，N.Y.(1994)中描述的技术。在优选的实施方案中，载体是细菌表达载体，其携带在可诱导的启动子，优选tac启动子的控制下编码免疫原性多肽的核酸序列；还优选地，所述载体还携带编码可表达基因的基因，所述可表达基因编码功能性lac抑制剂。因此，在优选的实施方案中，载体是细菌表达载体，其优选具有p15A复制起点，携带卡那霉素抗性基因、编码可编码基因的基因和在tac启动子的控制下编码免疫原性多肽的基因，所述可编码基因编码功能性lac抑制剂。
本发明还涉及包含根据本发明的多核苷酸和/或根据本发明的载体的宿主细胞。
如本文所使用的，术语“宿主细胞”指能够接收并优选维持本发明的多核苷酸和/或载体的任何细胞。更优选地，宿主细胞能够表达在所述多核苷酸和/或载体上编码的本发明的免疫原性多肽。优选地，细胞是细菌细胞，更优选本领域已知的普通实验室细菌菌株的细胞，最优选大肠埃希菌菌株，特别是大肠杆菌菌株。还优选地，宿主细胞是真核细胞，优选酵母细胞，例如面包酵母菌株的细胞，或者是动物细胞。更优选地，宿主细胞是昆虫细胞或哺乳动物细胞，特别是小鼠或大鼠细胞。最优选地，宿主细胞是哺乳动物细胞。
本发明还涉及药物组合物，其包含根据本发明的免疫原性多肽、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体和/或根据本发明的宿主细胞；和药学上可接受的载体。
如本文所使用的，术语“药物组合物”涉及包含一种或多种药学上可接受形式的本发明的化合物和药学上可接受的载体的组合物。本发明的化合物可以配制成药学上可接受的盐。可接受的盐包括乙酸盐、甲酯、HCl盐、硫酸盐、氯化物等。药物组合物优选局部或全身施用。通常用于药物施用的合适的施用途径是口服施用、静脉内施用或肠胃外施用以及吸入。优选地，本发明的药物组合物通过肠胃外途径施用，优选皮下施用、肌肉内施用或腹膜内施用。在对象是人的情况下，优选通过肌肉内施用。然而，多核苷酸化合物也可以通过使用病毒载体、病毒或脂质体以基因疗法的方式来施用，并且也可以局部施用，例如作为药膏。此外，化合物可以与其他药物组合在普通药物组合物中或作为分离的药物组合物施用，其中所述分离的药物组合物可以以成套试剂盒的形式提供。特别地，如本文其他地方所指定的，预期了佐剂的共同施用。优选地，以冻干形式提供免疫原性多肽、多核苷酸和药物组合物。
化合物优选以常规剂型施用，所述常规剂型是根据常规方法通过将药物与标准药物载体结合而制备的。这些方法可以包括将成分混合、制粒、压制或溶解，以适合所需制剂。应当理解，药学上可接受的载体或稀释剂的形式和特性由与其结合的活性成分的量、施用途径和其他众所周知的变量所决定。
在与制剂的其他成分相容并且对接受者无害的意义上，载体必须是可接受的。所使用的药物载体可以是例如固体、凝胶或液体。固体载体的实例是乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。液体载体的实例是磷酸盐缓冲盐溶液、糖浆、油，例如花生油和橄榄油、水、乳液、各种类型的润湿剂、无菌溶液等。类似地，载体或稀释剂可包括本领域众所周知的延迟材料，例如单独或与蜡一起的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。所述合适的载体包括上面提到的那些和本领域众所周知的其他载体，参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania。
优选选择稀释剂以不影响免疫原性多肽、多核苷酸、载体或宿主细胞以及潜在的其他药学活性成分的生物学活性。这样的稀释剂的实例是蒸馏水、生理盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液和汉克溶液。另外，药物组合物或制剂还可包含其他载体、佐剂或无毒、无治疗、无免疫原性的稳定剂等。
治疗有效剂量是指本发明的药物组合物中用于预防、改善或治疗本文所指病症的化合物的量。化合物的治疗功效和毒性可通过细胞培养或实验动物中的标准制药过程确定，例如通过确定ED50(在50％的群体中有治疗作用的剂量)和/或LD50(致死50％的群体的剂量)。治疗效果和毒性作用之间的剂量比为治疗指数，并且可以表示为LD50/ED50的比。
剂量方案将由主治医生确定，优选考虑相关的临床因素，并且优选根据本文其他地方描述的任何一种方法确定。如医学领域众所周知的，任何一名患者的剂量可能取决于许多因素，包括患者的身材、体表面积、年龄、待施用的特定化合物、性别、施用时间和途径、总体健康状况和其他同时施用的药物。可以通过定期评估来监控进度。典型的剂量可以例如为1μg至10000μg；然而，可以预期低于或高于该示例性范围的剂量，特别是考虑到上述因素。通常，方案包括施用1μg至10mg的抗原作为初次免疫，然后加强施用相同抗原一次或多于一次，优选以相同剂量。然而，取决于对象和施用方式、物质的施用量可以在很宽的范围内变化，优选以每kg体重约0.01mg至每kg体重约1mg提供。为了治疗或预防本说明书中所述的疾病或病症，本文所指的药物组合物和制剂至少施用一次。但是，所述药物组合物可以施用多于一次，例如优选1次至4次，更优选2次至3次。
特定药物组合物以药学领域众所周知的方式制备，并且至少包含免疫原性多肽、多核苷酸、载体或宿主细胞作为活性化合物与药学上可接受的载体或稀释剂混合或以其他方式结合。为了制备那些特定的药物组合物，通常将活性化合物与载体或稀释剂混合，或封闭或封装在胶囊、小袋、扁囊剂、纸或其他合适的容器或载剂中。所得制剂应适合于施用方式，即以片剂、胶囊剂、栓剂、溶液剂、混悬剂等形式。剂量建议应在开药者或用户说明中指出，以根据所考虑的接受者进行剂量调整。
本发明还涉及试剂盒，其在壳体中包含根据本发明的免疫原性多肽、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体和/或根据本发明的宿主细胞。
如本文所使用的，术语“试剂盒”指可以包装或可以不包装在一起的本发明的前述化合物、装置或试剂的集合。试剂盒的组分可以包含在分开的小瓶(即作为分开的部分的试剂盒)中或在单个小瓶中提供。此外，应当理解，优选地，本发明的试剂盒将用于实施本文上面提到的方法。优选地，预期以现成的方式提供所有组分以实践上述方法。此外，试剂盒优选包含用于实施所述方法的说明书。这些说明书可以通过用户手册以纸质或电子形式提供。另外，手册可包括使用本发明的试剂盒进行上述方法的施用说明和/或剂量说明。从上面可以理解，经适当修改，包含多核苷酸的试剂盒的描述优选涉及包含相应载体的试剂盒。
优选地，试剂盒包含根据本发明的免疫原性多肽和佐剂。术语“佐剂”在本文中以其在本领域中的通常含义使用。优选地，佐剂包含(i)明矾和toll样受体4(TLR4)激动剂，优选合成的单磷酰脂质A(MPLA)，和/或(ii)基于角鲨烯的水包油纳米乳液，优选AddaVaxTM。还优选地，试剂盒包含稀释剂和/或施用装置。上文描述了合适的稀释剂。实施装置是适合于向对象施用免疫原性多肽、多核苷酸、载体和/或宿主细胞的所有装置。施用装置可包括用于施用化合物或组合物的递送单元和用于储存所述化合物或组合物直至施用的存储单元。然而，还可以预期的是，在这样的实施方案中，本发明的装置可以表现为独立的装置，并且优选在所述试剂盒中包装在一起。优选的施用装置是无需专门技术人员的特殊知识即可使用的那些装置。在优选的实施方案中，用于施用的装置是注射器，更优选带有针头的注射器，其包含本发明的化合物或组合物。在另一个优选的实施方案中，施用装置是包含化合物或组合物的静脉输注(IV)设备。在另一个优选的实施方案中，施用装置是包含本发明化合物的吸入器，其中更优选所述化合物被配制作为气雾剂施用。
本发明还涉及包含根据本发明的免疫原性多肽、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体和/或根据本发明的宿主细胞的药物组合物用于医药用途和用于治疗和/或预防细胞的不适当增殖和/或被感染原感染，优选HPV感染。
本发明还涉及一种治疗和/或预防细胞的不适当增殖和/或被感染原感染，优选HPV感染的方法，所述方法包括使对象与根据本发明的免疫原性多肽、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体和/或根据本发明的药物组合物接触，从而治疗和/或预防HPV感染。
本发明的治疗和/或预防方法优选为体内方法。此外，除了上面明确提到的那些步骤之外，其还可以包括其他步骤。例如，其他步骤可以涉及例如在接触步骤和/或其他治疗步骤，例如外科手术、放射和/或其他药理学治疗之前诊断细胞的不适当增殖和/或被感染原感染。此外，所述步骤中的一个或多于一个可以由自动化设备执行。
优选地，被施用方法的对象患有至少一种PV相关的病变。还优选地，所述对象是有处于被PV感染的风险的对象，更优选地，所述对象是年龄为至多16岁，甚至更优选至多15岁，还更优选至多14岁，还更优选至多13岁，最优选至多12岁的人。然而，还预期将该方法施用于PV感染状态未知的对象。
本发明还涉及包含通过使对象与根据本发明的免疫原性多肽、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体和/或根据本发明的药物组合物接触而产生或可产生的抗PV抗体和/或抗PV T细胞的组合物，优选其中所述对象是非人类。
本发明的制备方法优选为体内方法。此外，除了上面明确提到的那些步骤之外，其还可以包括其他步骤。此外，所述步骤中的一个或多于一个可以由自动化设备执行。优选地，适合用于制备方法的对象是实验动物，优选小鼠、大鼠、豚鼠、兔、绵羊、山羊、美洲驼、驴或马。在一个实施方案中，对象是人。
鉴于上述内容，优选以下实施方案：
1.一种包含(i)B细胞表位、(ii)T细胞表位和(iii)支架多肽的免疫原性多肽，其中所述支架多肽是硫氧还蛋白多肽。
2.根据实施方案1的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位和所述T细胞表位中的至少一个是感染原抗原和/或肿瘤抗原的表位，更优选其中B细胞表位和T细胞表位均为肿瘤抗原和/或感染原抗原的表位。
3.根据实施方案1或2的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位和所述T细胞表位中的至少一个是病毒多肽的表位，优选其中B细胞表位和T细胞表位均为病毒多肽的表位。
4.根据实施方案1至3中任一项的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位和所述T细胞表位中的至少一个是乳头状瘤病毒(PV)多肽的表位，优选其中B细胞表位和T细胞表位均为PV多肽的表位。
5.根据实施方案1至4中任一项的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位和所述T细胞表位衍生自不同的多肽，更优选衍生自非同源的多肽。
6.根据实施方案1至5中任一项的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽中包含的所有B细胞表位均衍生自同源多肽，和/或其中所述免疫原性多肽中包含的所有T细胞表位均衍生自同源多肽。
7.根据实施方案1至6中任一项的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位和/或所述T细胞表位衍生自人PV(HPV)，优选高风险HPV基因型，更优选高风险黏膜HPV基因型。
8.根据实施方案1至7中任一项的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位和/或所述T细胞表位衍生自至少一种选自HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 6、HPV 51和HPV 59的HPV基因型。
9.根据实施方案1至8中任一项的免疫原性多肽，其中所述T细胞表位是衍生自PV早期基因的肽。
10.根据实施方案1至9中任一项的免疫原性多肽，其中所述T细胞表位是衍生自E6或E7多肽，优选衍生自E7多肽的肽。
11.根据实施方案1至10中任一项的免疫原性多肽，其中所述T细胞表位的氨基酸序列对应于HPV16 E7的第49位至57位氨基酸的氨基酸序列的。
12.根据实施方案1至11中任一项的免疫原性多肽，其中所述T细胞表位具有RAHYNIVTF(SEQ ID NO：9)的氨基酸序列。
13.根据实施方案1至12中任一项的免疫原性多肽，其中所述T细胞表位在N端和/或C端侧接至少3个，优选至少4个，更优选至少5个氨基酸。
14.根据实施方案13的免疫原性多肽，其中N端侧接序列的氨基酸序列是QAEPD(SEQ ID NO：10)和/或C端侧接序列的氨基酸序列是CCKCD(SEQ ID NO：11)。
15.根据实施方案13或14的免疫原性多肽，其中N端和C端侧接的T细胞表位的氨基酸序列是QAEPDRAHYNIVTFCCKCD(SEQ ID NO：12)。
16.根据实施方案1至15中任一项的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位是衍生自晚期PV多肽，优选衍生自L1或L2的肽。
17.根据实施方案1至16中任一项的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位是对应于HPV16的L2多肽的第15位至50位氨基酸的PV L2 N端肽。
18.根据实施方案1至17中任一项的免疫原性多肽，其中所述PV L2 N端肽是对应于HPV16的L2多肽的第20位至38位氨基酸的肽。
19.根据实施方案1至18中任一项的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽含有多个对应于HPV16的L2多肽的第15位至50位氨基酸的PV L2 N端肽。
20.根据实施方案1至19中任一项的免疫原性多肽，其中所述多个是5个至20个，优选6个至19个，最优选6个至16个PV L2 N端肽。
21.根据实施方案1至20中任一项的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽包含至少两种，优选至少四种，更优选至少六种，最优选所有选自HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 6、HPV 51和HPV 59的HPV基因型的PV L2 N端肽。
22.根据实施方案1至21中任一项的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽包含每个所述PV L2 N端肽的三个拷贝，更优选两个拷贝，最优选一个拷贝。
23.根据实施方案1至22中任一项的免疫原性多肽，其中所述硫氧还蛋白是人硫氧还蛋白、细菌硫氧还蛋白或古细菌硫氧还蛋白。
24.根据实施方案1至23中任一项的免疫原性多肽，其中所述硫氧还蛋白是嗜热古细菌，优选激烈火球菌的硫氧还蛋白，优选具有SEQ ID NO：19的序列。
25.实施方案1至24中任一项的免疫原性多肽，其中所述T细胞表位和/或所述B细胞表位包含在所述硫氧还蛋白的显示位点中。
26.根据实施方案1至25中任一项的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽还包含寡聚结构域。
27.根据实施方案26的免疫原性多肽，其中所述寡聚结构域是以下至少一种：
(i)两种不同的鸡C4结合蛋白的杂交多肽，优选IMX313T多肽；
(ii)胶囊蛋白多肽，优选来自嗜热古细菌的胶囊蛋白多肽，更优选激烈火球菌的胶囊蛋白多肽；
(iii)铁蛋白多肽，优选来自嗜热古细菌的铁蛋白多肽，更优选激烈火球菌的铁蛋白多肽；和
(iv)C4结合蛋白的寡聚结构域，优选哺乳动物C4结合蛋白的寡聚结构域，更优选人或小鼠C4结合蛋白的寡聚结构域，最优选小鼠C4结合蛋白的寡聚结构域。
28.根据实施方案26或27的免疫原性多肽，其中所述寡聚结构域包含SEQ ID NO：29，优选组成为SEQ ID NO：29。
29.根据实施方案1至28中任一项的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽包含含有多个PV L2 N端肽的肽，其中所述含有多个PV L2 N端肽的肽具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列或与SEQ ID NO：1具有至少80％同一性的序列。
30.根据实施方案1至29中任一项的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列或与所述序列具有至少80％同一性的序列，以及SEQ ID NO：2的氨基酸序列或与所述序列具有至少80％同一性的序列。
31.根据实施方案1至30中任一项的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或与所述序列具有至少80％同一性的序列。
32.根据实施方案1至31中任一项的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或与所述序列具有至少80％同一性的序列。
33.根据实施方案1至32中任一项的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽包含
(i)SEQ ID NO：5的氨基酸序列；
(ii)与SEQ ID NO：5的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列；
(iii)由SEQ ID NO：34编码的多肽序列；和/或
(iv)由与SEQ ID NO：34的序列具有至少70％同一性的多核苷酸序列编码的多肽。
34.根据实施方案1至33中任一项的免疫原性多肽用于医学。
35.根据实施方案1至33中任一项的免疫原性多肽用于治疗和/或预防细胞的不适当增殖和/或被感染原感染，优选HPV感染。
36.根据实施方案35使用的免疫原性多肽用于治疗和预防HPV感染。
37.一种多核苷酸，其编码根据实施方案1至33中任一项的免疫原性多肽，优选包含SEQ ID NO：33的序列或与其具有至少80％同一性的序列，更优选包含SEQ ID NO：34的序列或与其具有至少80％同一性的序列。
38.一种载体，其包含根据实施方案37的多核苷酸。
39.一种宿主细胞，其包含根据实施方案1至33中任一项的免疫原性多肽、根据实施方案37的多核苷酸和/或根据实施方案38的载体。
40.一种药物组合物，其包含根据实施方案1至33中任一项的免疫原性多肽、根据实施方案37的多核苷酸和/或根据实施方案38的载体。
41.一种试剂盒，其在壳体中包含根据实施方案1至33中任一项的免疫原性多肽、根据实施方案37的多核苷酸、根据实施方案39的宿主细胞和/或根据实施方案38的载体。
42.根据实施方案1至33中任一项的免疫原性多肽、根据实施方案37的多核苷酸、根据实施方案38的载体、根据实施方案39的宿主细胞和/或根据实施方案40的药物组合物用于医学。
43.根据实施方案1至33中任一项的多肽、根据实施方案37的多核苷酸、根据实施方案38的载体、根据实施方案39的宿主细胞和/或根据实施方案40的药物组合物用于治疗和/或预防细胞的不适当增殖和/或被感染原感染，优选HPV感染。
44.一种治疗和/或预防细胞的不适当增殖和/或被感染原感染，优选HPV感染的方法，其包括使对象与根据实施方案1至33中任一项的免疫原性多肽、根据实施方案37的多核苷酸、根据实施方案38的载体、根据实施方案39的宿主细胞和/或根据实施方案40的药物组合物接触，从而治疗和/或预防HPV感染。
45.根据实施方案44的方法，其中所述对象患有至少一种PV相关的病变。
46.根据实施方案44或45的方法，其中所述对象是有被PV感染的风险的对象。
47.根据实施方案44至46中任一项的方法，其中所述对象是至多16岁，优选至多15岁，更优选至多14岁，甚至更优选至多13岁，最优选至多12岁的人。
48.一种组合物，其包含通过使对象与根据实施方案1至33中任一项的免疫原性多肽、根据实施方案37的多核苷酸、根据实施方案38的载体、根据实施方案39的宿主细胞和/或根据实施方案40的药物组合物接触而产生或可产生的抗PV抗体和/或抗PV T细胞，其中优选所述对象是非人类。
关于本说明书中引用的所有参考文献，其全部公开内容和本说明书中具体提及的公开内容通过引用并入本文。
附图说明
图1：根据本发明的免疫原性多肽的优选实施方案的示意图。
图2：实施例1的T细胞活化试验中斑点形成单位/百万细胞的数目。A：用PfTrx-(OVA257-264)3X-OVX313免疫的小鼠，B：用PfTrx-L2(20-38)8聚体-(OVA257-264)3X-OVX313免疫的小鼠，C：用PfTrx-L2(20-38)8聚体-OVX313免疫的小鼠。
图3：根据实施例2免疫的小鼠的抗HPV16中和滴度。抗原为A：PfTrx-L2(20-38)8聚体-OVX313；B：PfTrx-L2(20-38)8聚体-(OVA257-264)3X-OVX313)。
图4：根据实施例3免疫的小鼠的抗HPV18中和滴度。抗原为A：PfTrx-L2(20-38)8聚体-OVX313；B：PfIrx-L2(20-38)8聚体-(OVA257-264)3X-OVX313)。
图5：与图3相同，但是结果来自实施例4，即B组是用PfTrx-L2(20-38)8聚体-(侧接E7(49-57))3X-OVX313)免疫的。
图6：与图4相同，但是结果来自实施例4，即B组是用PfTrx-L2(20-38)8聚体-(侧接E7(49-57))3X-OVX313)免疫的。
图7：实施例6的疫苗接种(A)和非疫苗接种(B)的小鼠中肿瘤随时间的生长。M1至M9表示小鼠的数量。
图8：实施例7的疫苗接种(A)和非疫苗接种(B)的小鼠中肿瘤随时间的生长。M1至M12表示小鼠的数量。
以下实施例将仅说明本发明。它们均不应被解释为限制本发明的范围。
实施例1
用20μg PfTrx-(OVA257-264)3X-OVX313；PfTrx-L2(20-38)8聚体-(OVA257-264)3X-OVX313；或PfTrx-L2(20-38)8聚体-OVX313(加上Addavax50体积/体积％)在尾巴的根部皮下免疫6周龄至8周龄的C57BL/6N雌性小鼠(每组6只或3只)。7天后，获得脾细胞，然后用OVA257-264肽在体外刺激下进行IFN-γ酶联免疫斑点试验。OVA257-264肽是来自卵清蛋白的对应于氨基酸257至264的T细胞表位。OVX313是IMX313寡聚结构域，PfTrx是激烈火球菌的硫氧还蛋白，L2(20-38)8聚体是具有SEQ ID NO：1氨基酸序列的肽，所有这些均在本文其他地方描述。如图2所示，与仅B细胞表位相比，包含B细胞表位和T细胞表位的抗原刺激增加的抗OVAT细胞应答。
实施例2
将6周龄至8周龄的BALB/c雌性小鼠(每组10只)以2周的免疫间隔肌内免疫4次。使用20μg量的不同抗原(PfTrx-L2(20-38)8聚体-OVX313或PfTrx-L2(20-38)8聚体-(OVA257-264)3X-OVX313)和Addavax 50体积/体积％作为免疫辅助剂。在最后一次免疫后一个月从小鼠中收集血清，并使用L1-PBNA(基于假病毒颗粒的中和测定法)针对HPV 16假病毒颗粒进行分析。如图3所示，与仅具有B细胞表位的抗原相比，包含B细胞表位和T细胞表位的抗原产生相当的抗HPV16中和抗体滴度。
实施例3
将6周龄至8周龄的BALB/c雌性小鼠(每组10只)以2周的免疫间隔肌内免疫4次。使用20μg量的不同抗原(PfTrx-L2(20-38)8聚体-OVX313或PfTrx-L2(20-38)8聚体-(OVA257-264)3X-OVX313)和Addavax 50体积/体积％。在最后一次免疫后一个月从小鼠中收集血清，并使用L1-PBNA(基于假病毒颗粒的中和测定法)针对HPV 18假病毒颗粒进行分析。如图4所示，与仅具有B细胞表位的抗原相比，包含B细胞表位和卵白蛋白-T细胞表位的抗原产生相当的抗HPV18中和抗体滴度。
实施例4
将6周龄至8周龄的BALB/c雌性小鼠(每组10只)以2周的免疫间隔肌内免疫4次。使用20μg量的不同抗原(PfTrx-L2(20-38)8聚体-OVX313或PfTrx-L2(20-38)8聚体-(侧接E749-57)3X-OVX313)和Addavax 50体积/体积％。在最后一次免疫后一个月从小鼠中收集血清，并使用L1-PBNA(基于假病毒颗粒的中和测定法)针对HPV 16假病毒颗粒进行分析。如图5所示，与仅具有B细胞表位的抗原相比，包含B细胞表位和E7-T细胞表位的抗原产生相当的抗HPV16中和抗体滴度。
实施例5
将6周龄至8周龄的BALB/c雌性小鼠(每组10只)以2周的免疫间隔肌内免疫4次。使用20μg量的不同抗原(A.PfTrx-L2(20-38)8聚体-OVX313；B.PfTrx-L2(20-38)8聚体-(侧接E749-57)3X-OVX313)和Addavax 50体积/体积％。在最后一次免疫后一个月从小鼠中收集血清，并使用L1-PBNA(基于假病毒颗粒的中和测定法)针对HPV 18假病毒颗粒进行分析。如图6所示，与仅具有B细胞表位的抗原相比，包含B细胞表位和E7-T细胞表位的抗原产生相当的抗HPV18中和抗体滴度。
实施例6
向18只C57BL/6N小鼠的右胁腹中皮下注射0.2X106的TC-1肿瘤细胞(即衍生自C57BL/6小鼠的肺上皮的细胞，并用HPV E6、E7和c-Ha ras转化)。在第23天、27天和31天，用20μg抗原PfTrx-L2(20-38)8聚体-侧接E7(49-57))3X-OVX313(加上Addavax 50体积/体积％)在尾巴的根部皮下免疫一半的肿瘤小鼠(18只小鼠中的9只)。其他9只肿瘤小鼠未接种疫苗。每3天或4天用卡尺测量肿瘤大小。当肿瘤体积超过1cm3或肿瘤直径超过1.5cm时处死小鼠。如图7所示，与未接种疫苗的对照(B)相比，接种疫苗的小鼠(A)显示出被强烈阻碍的肿瘤生长。
实施例7
向24只C57BL/6N小鼠皮下注射0.2X106的TC-1肿瘤细胞到右胁腹中。在第7天和12天，用20μg抗原PfTrx-L2(20-38)8聚体-侧接E7(49-57))3X-OVX313(加上Addavax 50体积/体积％()在尾巴的根部皮下免疫一半的肿瘤小鼠(24只小鼠中的12只)。其他12只肿瘤小鼠未接种疫苗。每3天或4天用卡尺测量肿瘤大小。当肿瘤体积超过1cm3或肿瘤直径超过1.5cm时处死小鼠。如图8所示，与未接种疫苗的对照(B)相比，接种疫苗的小鼠(A)显示出被强烈阻碍的肿瘤生长，表明两次免疫接种足以诱导强烈的抗肿瘤反应。
Claims (21)
1.一种包含(i)B细胞表位、(ii)T细胞表位和(iii)支架多肽的免疫原性多肽，其中所述支架多肽是硫氧还蛋白多肽。
2.根据权利要求1所述的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位和所述T细胞表位中的至少一个是感染原抗原和/或肿瘤抗原的表位。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的免疫原性多肽，其中B细胞表位和T细胞表位均为乳头状瘤病毒(PV)多肽的表位。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位和所述T细胞表位衍生自不同的多肽，更优选衍生自非同源的多肽。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的免疫原性多肽，其中所述T细胞表位是衍生自E6或E7多肽，优选衍生自E7多肽的肽。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的免疫原性多肽，其中所述B细胞表位是对应于HPV16的L2多肽的第20位至38位氨基酸的肽。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽包含至少两种，优选至少四种，更优选至少六种，最优选所有选自HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 6、HPV 51和HPV 59的HPV基因型的PV L2 N端肽。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的免疫原性多肽，其中所述硫氧还蛋白是嗜热古细菌的硫氧还蛋白。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽还包含寡聚结构域。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽包含SEQID NO：3的氨基酸序列或与所述序列具有至少80％同一性的序列。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的免疫原性多肽，其中所述免疫原性多肽包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的免疫原性多肽用于医学。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的免疫原性多肽用于治疗和/或预防细胞的不适当增殖和/或被感染原感染，优选HPV感染。
14.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1至11中任一项所述的免疫原性多肽，优选包含SEQ ID NO：33的序列或与其具有至少80％同一性的序列，更优选包含SEQ ID NO：34的序列或与其具有至少80％同一性的序列。
15.一种载体，其包含根据权利要求14所述的多核苷酸。
16.一种宿主细胞，其包含根据权利要求1至13中任一项所述的免疫原性多肽、根据权利要求14所述的多核苷酸和/或根据权利要求15所述的载体。
17.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至13中任一项所述的免疫原性多肽、根据权利要求14所述的多核苷酸和/或根据权利要求15所述的载体。
18.一种试剂盒，其在壳体中包含根据权利要求1至13中任一项所述的免疫原性多肽、根据权利要求14所述的多核苷酸和/或根据权利要求15所述的载体。
19.根据权利要求1至13中任一项所述的免疫原性多肽、根据权利要求14所述的多核苷酸、根据权利要求15所述的载体、根据权利要求16所述的宿主细胞和/或根据权利要求17所述的药物组合物用于医学。
20.根据权利要求1至13中任一项所述的免疫原性多肽、根据权利要求14所述的多核苷酸、根据权利要求15所述的载体、根据权利要求16所述的宿主细胞和/或根据权利要求17所述的药物组合物用于治疗和/或预防细胞的不适当增殖和/或被感染原感染，优选HPV感染。
21.一种组合物，其包含通过使对象与根据权利要求1至13中任一项所述的免疫原性多肽、根据权利要求14所述的多核苷酸、根据权利要求15所述的载体、根据权利要求16所述的宿主细胞和/或根据权利要求17所述的药物组合物接触而产生或可产生的抗PV抗体和/或抗PV T细胞，优选其中所述对象是非人类。
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