CN112098488A - 一种同时检测dna中四种碱基的电化学传感器及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属电化学电极材料制备技术领域,提供一种同时检测DNA中四种碱基的电化学传感器及其制备方法和应用,检测腺嘌呤A,胸腺嘧啶T,胞嘧啶C和鸟嘌呤G的电化学传感器,同时检测A,T,C和G。所述电化学传感器为基于金@钯/聚吡咯‑石墨烯即Au@Pd/PPy‑GR的纳米复合材料,将Au@Pd/PPy‑GR的纳米复合材料修饰玻碳电极,制备成电化学传感器。其表现出高的灵敏度和选择性,电极修饰过程更加简便,有良好的稳定性和重现性。提高了电极的灵敏度且使电极修饰过程更简单。电化学传感器用于构建同时检测小牛胸腺DNA中鸟嘌呤,腺嘌呤,胸腺嘧啶和胞嘧啶的传感体系,显著提高电极的选择性。
Description
技术领域
本发明属于电化学电极材料制备技术领域,具体涉及一种同时检测DNA中四种碱基的电化学传感器及其制备方法和应用,四种碱基为腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T),胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G);该电化学传感器基于金@钯/聚吡咯-石墨烯的电化学传感器,该传感器用于同时检测人体血清小牛胸腺DNA中的四种碱基。
背景技术
脱氧核糖核酸(DNA)是生物体发育和正常运作必不可少的生物大分子。DNA的双螺旋通过在两条链上存在的含氮碱基之间建立的氢键来稳定。DNA通过两对互补碱基对(腺嘌呤(A)和胸腺嘧啶(T),胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G))来进行遗传信息的复制和转录。它们对抑制神经递质释放,冠状动脉和脑循环,维持心律和控制血流有重要作用。生理液体中A,T,C和G的存在可能是由于组织降解或饮食摄取导致的核酸代谢或其他代谢机制中的酶功能失调造成的。
然而,碱基对的异常变化或者错误表达都有可能诱导引发基因突变,免疫力降低和多种疾病,如HIV感染、癫痫和癌症等。此外,其浓度水平可为癌症、艾滋病、心肌细胞能量状态、疾病进展和治疗反应的诊断提供依据。作为早期检测的重要措施,已经进行了相对应单核苷酸多态性(SNP)的多种研究,以提供有关碱基错配的详细信息。因此,A,T,C和G的单独和同时检测分析对生物科学和临床诊断具有重要意义。然而,对于多种碱基同时检测还未取得重大突破。
在过去的十几年中,已经提出了多种检测和定量碱基的方法,包括液相色谱法、量热法、毛细管区带电泳法和质谱法。尽管这些方法展现出一定的优点,但一般会涉及样品预处理复杂,耗时长,繁琐的操作,消耗大量有机试剂以及设备昂贵等缺点。这些缺点极大地限制了它们的进一步应用。
电化学方法由于其成本低,灵敏度高,选择性好以及小体积样品易于小型化而被广泛使用。然而,由于C和T的氧化电位较高,电化学响应较弱,现有的电化学传感器难以实现对A,T,C和G的同时灵敏分析和稳定检测。
发明内容
本发明目的在于提供一种同时检测DNA中四种碱基的电化学传感器及其制备方法和应用,检测腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T),胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)的电化学传感器,该电化学传感器是基于金@钯/聚吡咯-石墨烯的电化学传感器,该电化学传感器同时检测A,T,C和G。
该电化学传感器是基于金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)纳米复合材料,并用其修饰玻碳电极表面制备而成,具有高的灵敏度和选择性,电极修饰过程更加简便,且具有良好的稳定性和重现性。
本发明由如下技术方案实现的:一种同时检测DNA中四种碱基的电化学传感器,所述电化学传感器为基于金@钯/聚吡咯-石墨烯即Au@Pd/PPy-GR的纳米复合材料,将Au@Pd/PPy-GR的纳米复合材料修饰玻碳电极,制备成电化学传感器。
制备所述电化学传感器的方法,具体步骤如下:
(1)聚吡咯制备:按照吡咯单体与H2O的体积比为0.5%的比例将吡咯单体注入H2O中,5℃下搅拌至吡咯单体均匀分散到H2O中,加入0.05 M~0.2 M的FeCl3溶液,继续反应5h;然后将产物离心,沉淀物用乙醇和水反复洗涤,50℃下真空干燥过夜;
(2)金@钯/聚吡咯-石墨烯制备:在水中加入2.0 mg/mL~5.0 mg/mL石墨烯和3 mg/mL~5 mg/mL聚吡咯,40KHz超声15 min~30 min使其形成均匀分散液;将2 mL、15.0 mM的HAuCl4和2 mL、15.0 mM的PdCl2添加到分散液中,搅拌30 min~50 min;将10 mL、0.05M的NaBH4缓慢转移至上述混合物中,搅拌1 h~2 h;最后将冷却的混合溶液7000 rpm离心30min,分离出未吸附的悬浮金属纳米颗粒;离心后沉淀50℃下真空干燥,得到金@钯/聚吡咯-石墨烯即Au@Pd/PPy-GR纳米复合材料;
(3)电极的制备:将Au@Pd/PPy-GR纳米复合材料分散于二次水中,在40 KHz频率下超声15 min~25 min,制成浓度为2.0 mg/mL的分散液;将分散液滴涂到玻碳电极上,滴涂量为5.0μL~8.0μL;在红外灯下干燥10 min~20 min,最后用二次水冲洗除去松散吸附的复合材料,得到Au@Pd/PPy-GR修饰电极。
步骤(1)中FeCl3溶液的浓度为0.1 M;FeCl3与吡咯的摩尔比为2.5:1。
步骤(2)中石墨烯的浓度为3.0 mg/mL;聚吡咯的浓度为5.0 mg/mL;超声时间为20min;将HAuCl4和PdCl2添加到溶液中后搅拌50 min;将NaBH4缓慢转移至混合物中后搅拌2h。
步骤(3)中超声时间为20 min;分散液滴涂到玻碳电极表面的量8.0μL;在红外灯下干燥15 min。
所述的同时检测DNA中四种碱基的电化学传感器同时检测DNA中四种碱基的应用,具体步骤如下:
(1)配置缓冲液:先配制pH值为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0,浓度为0.01和0.1 M的磷酸盐缓冲溶液,进而配制含有G,A,T和C的磷酸缓冲液;含有G,A,T和C的磷酸缓冲液中:G浓度为 50.0μM、A浓度为50.0μM、T浓度为300.0μM,C浓度为300.0μM,PBS 缓冲液浓度为 0.01 M、pH=7.0;
(2)检测碱基:采用三电极体系,以Au@Pd/PPy-GR修饰电极为工作电极,氯化银电极为参比电极,铂丝为对电极,通过电化学工作站,检测对G,A,T和C浓度的电流响应。
磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.0,浓度为0.01 M。
具有丰富的边缘缺陷位点的高电导率和显着的电子传输能力的石墨烯,在改善电化学生物传感器的性能方面引起了广泛关注。大表面积,优异的电学性能,高电子迁移率以及高电催化活性都突出了石墨烯的多功能性。此外,石墨烯为非共价官能化提供了丰富的结合位点以及生物传感应用中增强的生物相容性和灵敏度。石墨烯(GR),聚吡咯(PPy)与金@钯(Au@Pd)的结合发挥了协同作用,有助于传感器的导电性以及电子转移能力,改善了对四种碱基的电催化作用。
与现有技术相比,本发明的优点在于:基于金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)纳米复合材料修饰在玻碳电极表面,提高了电极的灵敏度且使电极修饰过程简单。制得的电化学传感器,将其用于构建同时检测小牛胸腺DNA中G,A,T和C的传感体系,可以显著提高电极的选择性。
本发明制备得到的电化学传感器可同时检测鸟嘌呤(G),腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)。制得的电化学传感器,具有良好的稳定性和重现性,是金@钯(Au@Pd)独特性质的开发和应用,也为未来鸟嘌呤(G),腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)的检测提供了新的思路。
附图说明
图1为本发明制备电化学传感器的修饰过程;
图2为本发明制备电化学传感器用扫描电镜表征聚吡咯;
图3为本发明制备电化学传感器用扫描电镜表征金@钯-聚吡咯;
图4为本发明制备电化学传感器金@钯/聚吡咯-石墨烯扫描电镜表征图像;
图5为本发明制备电化学传感器用循环伏安法表征电极修饰过程;
图6为本发明制备电化学传感器与裸电极同时检测鸟嘌呤(G),腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)的差分脉冲伏安图;
图7为本发明制备电化学传感器在鸟嘌呤(G)随浓度变化的差分脉冲伏安图;
图8为本发明制备电化学传感器在腺嘌呤(A)随浓度变化的差分脉冲伏安图;
图9为本发明制备电化学传感器在胸腺嘧啶(T)随浓度变化的差分脉冲伏安图;
图10为本发明制备电化学传感器在胞嘧啶(C)随浓度变化的差分脉冲伏安图;
图11为本发明制备电化学传感器同时在鸟嘌呤(G),腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)随浓度变化的差分脉冲伏安图;
图12为本发明制备电化学传感器鸟嘌呤(G),腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)与峰电流的线性关系。
具体实施方式
本发明是基于金@钯/聚吡咯-石墨烯纳米复合材料,并用以修饰玻碳电极表面,制备一种电化学传感器,并用于同时检测小牛胸腺DNA中鸟嘌呤(G),腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)。下面通过实施例结合附图对本发明作进一步说明。
实施例1:一种同时检测鸟嘌呤(G),腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)的电化学传感器,基于金@钯/聚吡咯-石墨烯纳米复合材料,所述电化学传感器的制备方法为:
(1)聚吡咯制备:将0.25 mL吡咯单体注入50 mL H2O中,在5℃下搅拌15分钟,以使吡咯单体均匀地分散到H2O中。缓慢加入1.0 mL 0.1 M FeCl3溶液后,反应继续进行5 h。 随后将产物离心并用乙醇和水洗涤几次,并在50℃下真空干燥过夜。
(2)金@钯/聚吡咯-石墨烯制备:在水中加入3.0 mg/mL石墨烯和5 mg/mL聚吡咯,40 KHz超声20 min使其形成均匀分散液。随后,将2 mL的15.0 mM HAuCl4和2 mL的15.0 mMPdCl2添加到溶液中,并搅拌50 min。 使用移液管将10 mL 0.05 M NaBH4缓慢转移至上述混合物中,并搅拌2 h。最后将冷却的分散溶液在7000 rpm下离心30 min,分离出未吸附的悬浮金属纳米颗粒;在50℃下真空干燥,得到金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)纳米复合材料。
(3)电极的制备:将4.0 mg金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)纳米复合材料分散于2 mL二次水中,在40 KHz频率下超声20 min,制成浓度为2.0 mg/mL的分散液;将分散液滴涂到玻碳电极上,滴涂量为8.0μL;在红外灯下干燥15 min,最后用二次水冲洗除去松散吸附的复合材料,得到金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)修饰电极。制备的电化学传感器修饰过程示意图见图1。
对所制备的聚吡咯(PPy)使用扫描电镜进行观察。如图2所示,扫描电镜图片中,可以清楚地看到聚吡咯是多个球型结构聚集而成。
对实施例1制备的金@钯-聚吡咯(Au@Pd-PPy)修饰电极表面进行扫描电镜表征。如图3所示,从图中可以看到,金@钯还原负载在聚吡咯表面,可以使传感器的灵敏度有很大的提高。
对实施例1制备的金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)修饰电极表面进行扫描电镜表征。如图4所示,从图中可以看到,金@钯-聚吡咯与石墨烯相结合,可以放大传感器的电化学信号。说明本发明制备的金@钯/聚吡咯-石墨烯修饰电极成功。
实施例2:所制备的电化学传感器修饰过程表征
取实施例1制备的修饰电极,在0.01 M pH=7.0的磷酸缓冲(PBS)溶液中以5.0 mM [Fe(CN)6]3-/4-作为探针利用循环伏安法表征电极的修饰过程。如图4所示:修饰了聚吡咯(PPy)后电极产生的峰电流略微上升,这是因其具有良好导电性。在修饰了石墨烯(GR)之后,由于放大了电流信号,使得峰电流有所提高。在修饰了金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)之后,由于峰电流进一步明显提高。图5说明了实施例1中制备的电极修饰过程都是成功的。
实施例3:实施例1制备的电化学传感器与裸电极同时进行鸟嘌呤(G),腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)的差分脉冲伏安检测
取实施例1制备的金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)修饰电极与裸电极,对待测定的四种碱基混合溶液进行电化学检测,得到鸟嘌呤(G),腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)的差分脉冲伏安图。如图6所示,在金@钯/聚吡咯-石墨烯修饰电极后,电流信号明显增强,传感器的灵敏度有很大的提高。图6说明了实施例1中制备的电极修饰过程都是成功的,而且可以同时检测鸟嘌呤(G),腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)。
实施例4:实施例1制备的电化学传感器单独检测鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)的检测范围
对待测定的鸟嘌呤(G)采用实施例1制备的金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)修饰电极进行电化学检测,得到鸟嘌呤随浓度变化的差分脉冲伏安图。然后分别以碱基浓度为横坐标,以电化学检测的电流信号为纵坐标,建立鸟嘌呤(G)电化学信号变化规律图。所述的鸟嘌呤(G)溶液由浓度为 0.20~400.0μM 的鸟嘌呤和 pH=7.0、浓度为 0.01 M 的 PBS缓冲液混合后制成。此外,本发明制备的电化学传感器的电流变化与鸟嘌呤浓度呈良好的线性关系,如图7插图所示,在浓度为0.20~400.0μM范围内,最低检出限为0.067μM,线性方程为I p(μA)=0.01433C+2.263,R2=0.9976和I p(μA)=0.7124C+1.479,R2=0.9964。
对待测定的腺嘌呤(A)采用实施例1制备的金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)修饰电极进行电化学检测,得到腺嘌呤随浓度变化的差分脉冲伏安图。然后分别以碱基浓度为横坐标,以电化学检测的电流信号为纵坐标,建立腺嘌呤(A)电化学信号变化规律图(图8)。所述的腺嘌呤(A)溶液由浓度为 1.0~500.0μM 的腺嘌呤和 pH=7.0、浓度为 0.01M 的 PBS 缓冲液混合后制成。此外,本发明制备的电化学传感器的电流变化与腺嘌呤浓度呈良好的线性关系,如图8插图所示,在浓度为1.0~500.0μM范围内,最低检出限为0.33μM,线性方程为I p(μA)=0.01631C+9.494,R2=0.9927和I p(μA)=0.08278C+2.992,R2=0.9912。
对待测定的胸腺嘧啶(T)采用实施例1制备的金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)修饰电极进行电化学检测,得到胸腺嘧啶随浓度变化的差分脉冲伏安图。然后分别以碱基浓度为横坐标,以电化学检测的电流信号为纵坐标,建立胸腺嘧啶(T)电化学信号变化规律图(图9)。所述的胸腺嘧啶(T)溶液由浓度为 20.0~1000.0μM 的胸腺嘧啶和 pH=7.0、浓度为 0.01 M 的 PBS 缓冲液混合后制成。此外,本发明制备的电化学传感器的电流变化与胸腺嘧啶浓度呈良好的线性关系,如图9的插图所示,在浓度为20.0~1000.0μM范围内,最低检出限为6.67μM,线性方程为I p(μA)=0.01142C+3.7,R2=0.9916。
对待测定的胞嘧啶(C)采用实施例1制备的金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)修饰电极进行电化学检测,得到胞嘧啶随浓度变化的差分脉冲伏安图。然后分别以碱基浓度为横坐标,以电化学检测的电流信号为纵坐标,建立胞嘧啶(C)电化学信号变化规律图(图10)。所述的胞嘧啶(C)溶液由浓度为 10.0~800.0μM 的胸腺嘧啶和 pH=7.0、浓度为0.01 M 的 PBS 缓冲液混合后制成。此外,本发明制备的电化学传感器的电流变化与胞嘧啶浓度呈良好的线性关系,如图10的插图所示,在浓度为10.0~800.0μM范围内,最低检出限为3.33μM,线性方程为I p(μA)=0.02471C+7.191,R2=0.9973。
实施例5:实施例1制备的电化学传感器同时检测鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)
对待测定的四种碱基混合液采用实施例1制备的金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)修饰电极进行电化学检测,得到鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)随浓度变化的差分脉冲伏安图。然后分别以碱基浓度为横坐标,以电化学检测的电流信号为纵坐标,建立四种 DNA 碱基电化学信号变化规律图(图11)。可同时观察到鸟嘌呤(0.704 V)、腺嘌呤(0.976 V)、胸腺嘧啶(1.164 V)和胞嘧啶(1.348 V)四个电化学信号的变化,实现对四种DVA碱基的定量检测。所述的四种碱基混合溶液由浓度为 50.0~180.0μM 的鸟嘌呤、浓度为 30.0~100.0μM 的腺嘌呤、200.0~450.0μM 的胸腺嘧啶、50.0~250.0μM 的胞嘧啶和 pH=7.0、浓度为 0.01 M 的 PBS 缓冲液混合后制成。此外,本发明制备的电化学传感器的电流变化与鸟嘌呤、腺嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶浓度呈良好的线性关系。如图12所示,在浓度为50.0~180.0μM范围内,线性方程为I p(μA)=0.01652C+2.186,R2=0.9902。在浓度为30.0~100.0μM范围内,线性方程为I p(μA)=0.02755C+4.163,R2=0.9927。在浓度为200.0~450.0μM范围内,线性方程为I p(μA)=0.01087C+4.140,R2=0.9930。在浓度为50.0~250.0μM范围内,线性方程为I p(μA)=0.02424C+7.742,R2=0.9918。最低检出限分别为1.67μM,1.0μM,6.67μM,1.32μM。
实施例6:一种同时检测鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)的电化学传感器,基于金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)的纳米复合材料,所述电化学传感器的制备方法为:步骤(1)中FeCl3溶液的浓度为0.05 M。步骤(2)中石墨烯的浓度为2.0 mg/mL。步骤(2)中聚吡咯的浓度为3.0 mg/mL。步骤(2)中超声时间为15 min;搅拌时间为30min,搅拌时间为1 h。步骤(3)中超声时间为15 min;分散液滴涂到玻碳电极表面的量5.0μL;在红外灯下干燥10 min。
实施例7:一种同时检测鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)的电化学传感器,基于金@钯/聚吡咯-石墨烯(Au@Pd/PPy-GR)的纳米复合材料,所述电化学传感器的制备方法为:步骤(1)中FeCl3溶液的浓度为0.2 M。步骤(2)中石墨烯的浓度为5.0 mg/mL。步骤(2)中聚吡咯的浓度为4.0 mg/mL。步骤(2)中超声时间为30 min;搅拌时间为40min,搅拌时间为1.5 h。步骤(3)中超声时间为25 min;分散液滴涂到玻碳电极表面的量7.0μL;在红外灯下干燥20 min。
实施例8:实施例1制备的电化学传感器在小牛胸腺DNA中鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)检测应用的实验。小牛胸腺DNA按如下方法处理以量化G、A、T和C。简单地说,3.0 mg小牛胸腺DNA用稀释的盐酸(1.0 mL,1.0 M)在封闭管中用沸水浴分解1h。随后,将分解产物用1M过氧化氢调节至中性。冷却至室温后,用pH值为7.0的磷酸盐缓冲液稀释至10mL。采用标准加入法用于实施例1制备的电化学传感器在小牛胸腺DNA中鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)检测应用的实验。如表1所示,将鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)标准溶液加入到预处理的小牛胸腺DNA中,用传感器进行定量检测,回收率为90%-110%,说明实施例1制备的电化学传感器可以用于小牛胸腺DNA中鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)的测定。
表1为本发明制备的电化学传感器用于小牛胸腺DNA中鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)的检测
Claims (7)
1.一种同时检测DNA中四种碱基的电化学传感器,其特征在于:所述电化学传感器为基于金@钯/聚吡咯-石墨烯即Au@Pd/PPy-GR的纳米复合材料,将Au@Pd/PPy-GR的纳米复合材料修饰玻碳电极,制备成电化学传感器。
2.制备权利要求1所述电化学传感器的方法,其特征在于:具体步骤如下:
(1)聚吡咯制备:按照吡咯单体与H2O的体积比为0.5%的比例将吡咯单体注入H2O中,5℃下搅拌至吡咯单体均匀分散到H2O中,加入0.05 M~0.2 M的FeCl3溶液,继续反应5h;然后将产物离心,沉淀物用乙醇和水反复洗涤,50℃下真空干燥过夜;
(2)金@钯/聚吡咯-石墨烯制备:在水中加入2.0 mg/mL~5.0 mg/mL石墨烯和3 mg/mL~5 mg/mL聚吡咯,40KHz超声15 min~30 min使其形成均匀分散液;将2 mL、15.0 mM的HAuCl4和2 mL、15.0 mM的PdCl2添加到分散液中,搅拌30 min~50 min;将10 mL、0.05M的NaBH4缓慢转移至上述混合物中,搅拌1 h~2 h;最后将冷却的混合溶液7000 rpm离心30min,分离出未吸附的悬浮金属纳米颗粒;离心后沉淀50℃下真空干燥,得到金@钯/聚吡咯-石墨烯即Au@Pd/PPy-GR纳米复合材料;
(3)电极的制备:将Au@Pd/PPy-GR纳米复合材料分散于二次水中,在40 KHz频率下超声15 min~25 min,制成浓度为2.0 mg/mL的分散液;将分散液滴涂到玻碳电极上,滴涂量为5.0μL~8.0μL;在红外灯下干燥10 min~20 min,最后用二次水冲洗除去松散吸附的复合材料,得到Au@Pd/PPy-GR修饰电极。
3.根据权利要求2所述的制备电化学传感器的方法,其特征在于:步骤(1)中FeCl3溶液的浓度为0.1 M; FeCl3与吡咯的摩尔比为2.5:1。
4.根据权利要求2所述的制备电化学传感器的方法,其特征在于:步骤(2)中石墨烯的浓度为3.0 mg/mL;聚吡咯的浓度为5.0 mg/mL;超声时间为20 min;将HAuCl4和PdCl2添加到溶液中后搅拌50 min;将NaBH4缓慢转移至混合物中后搅拌2 h。
5.根据权利要求2所述的制备电化学传感器的方法,其特征在于:步骤(3)中超声时间为20 min;分散液滴涂到玻碳电极表面的量8.0μL;在红外灯下干燥15 min。
6.权利要求1所述的同时检测DNA中四种碱基的电化学传感器同时检测DNA中四种碱基的应用,其特征在于:具体步骤如下:
(1)配置缓冲液:先配制pH值为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0,浓度为0.01和0.1 M的磷酸盐缓冲溶液,进而配制含有G,A,T和C的磷酸缓冲液;含有G,A,T和C的磷酸缓冲液中:G浓度为 50.0μM、A浓度为50.0μM、T浓度为300.0μM,C浓度为300.0μM,PBS 缓冲液浓度为 0.01 M、pH=7.0;
(2)检测碱基:采用三电极体系,以Au@Pd/PPy-GR修饰电极为工作电极,氯化银电极为参比电极,铂丝为对电极,通过电化学工作站,检测对G,A,T和C浓度的电流响应。
7.根据权利要求6所述的同时检测DNA中四种碱基的电化学传感器同时检测DNA中四种碱基的应用,其特征在于:磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.0,浓度为0.01 M。
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