CN112063570B - 用于护坡的微生物菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

用于护坡的微生物菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提出一种用于护坡的微生物菌剂及其制备方法和应用，涉及生态修复技术领域，是通过解淀粉芽孢杆菌、哈茨木霉菌和从枝菌根真菌的混合物作为微生物菌剂，不仅可以改进根际微生物和土壤酶活性，抑制土壤中有害微生物的数量与活动，提高护坡植物的成活率；而且与秸秆板基质配合使用，可快速降解纤维素，同时促进土壤团粒结构的形成，进而提升护坡植物的成活率。

Description

用于护坡的微生物菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生态修复技术领域，尤其涉及用于护坡的微生物菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
中国的生态环境脆弱现象日益扩张，据统计，因风沙活动、次生盐渍化和草场超载过牧等原因，导致草场土质疏松、和山体滑坡现象频发，不仅使得河流的含沙量上升，且由于牲畜粪便直接进入河水，不仅影响到草场的环境发展，而且威胁到了草场周边水环境的生态平衡。植被护坡是首选的生态护坡技术。
但是坡体的土壤退化后，出现沙质化，蓄水能力减弱；而护坡植物在栽种初期，根系生长缓慢，退化后的土壤不利于植物种子着床和植物生根发芽，进而导致成活率降低，增加了护坡难度，削弱了护坡的生态效果。
如果通过大量施用复合肥提升护坡植物存活率，存在肥料养分淋失严重，进一步破坏草场周边水环境的问题；以农家肥为主的有机肥料虽能改善土壤理化性质，但其中的有机质性质良莠不齐、含有的病菌和病虫卵等易造成土壤污染，也不适用于土壤退化后的草场土体。
所以，亟需一种能够提高护坡植物成活率的微生物菌剂。
发明内容
鉴于上述问题，本发明提供一种用于护坡的微生物菌剂及其制备方法和应用，各菌株之间不拮抗，互相协同，其主要目的是有利于草种生长及秸秆降解。
为实现上述目的，一种用于护坡的微生物菌剂包括由解淀粉芽孢杆菌菌剂、哈茨木霉菌可湿性粉剂和摩西斗管囊霉菌剂组成的混合菌粉以及填充物。
进一步，优选的方法为，所述混合菌粉包括，解淀粉芽孢杆菌菌剂、哈茨木霉菌可湿性粉剂和摩西斗管囊霉菌剂按干基重量份比例为3~6：8~15:95~102。
进一步，优选的方法为，所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌FZB42菌株。
本发明还保护一种用于护坡的微生物菌剂的制备方法，将解淀粉芽孢杆菌接种在LB固体平板培养基上划线培养，进行菌种活化；将活化后的菌落，接种至LB液体培养基进行解淀粉芽孢杆菌一级种子液制备；将解淀粉芽孢杆菌一级种子液传代于LB液体培养基进行解淀粉芽孢杆菌二级种子液制备；将解淀粉芽孢杆菌二级种子液接种至发酵培养基培养后收集菌体，将菌体重悬浮于无菌双蒸馏水中，用无菌双蒸馏水调整菌悬液浓度为6.5×109cfu/mL，进行喷雾干燥，即制得解淀粉芽孢杆菌菌剂；
摩西斗管囊霉预先经玉米栽种繁殖，将摩西斗管囊霉的孢子、根外菌丝和被侵染玉米根段的根基土壤混合物作为摩西斗管囊霉菌剂，每克摩西斗管囊霉菌剂中含有25~35个孢子；
将所述解淀粉芽孢杆菌菌剂与所述摩西斗管囊霉菌剂和哈茨木霉菌可湿性粉剂混合，即得用于护坡的微生物菌剂。
进一步，优选的方法为，所述发酵培养基的成分包括：玉米粉25-38份、棉粕18-24份、麸皮18-24份、KH2PO4 3-5份、Na2HPO4 6-9份和无菌双蒸馏水1000份。
进一步，优选的方法为，所述发酵培养基的PH为7.0-7.2。
本发明还保护所述微生物菌剂在护坡中的应用。
所述应用包括以下步骤：
预先制备秸秆板和基质混合物；将所述秸秆板进行打孔，形成具有通孔的秸秆板；将本地土60-82份、腐殖酸25-35份、腐熟牛粪12-22份、保水剂6-8份、微生物菌剂15-35份和草种15-21份搅拌混合成基质混合物；
坡面整理；在坡顶及坡脚处均开挖沟槽；
固定所述秸秆板；将秸秆板的上端用铆钉锚定在坡顶沟槽中，用土填满沟槽并压实；将秸秆板的底端用铆钉锚定在坡脚沟槽中，并填土压实；
将基质混合物填充入所述秸秆板的通孔中；
覆土养护；在秸秆板的表面覆土，然后定期浇水，以湿透上层覆土和秸秆板为宜。
进一步，优选的，所述草种为中华结缕草种子40-60份、燕麦种子25-45份和苜蓿种子10-20份的混合物。
进一步，优选的，所述腐殖酸的获取方法包括：
将风化煤通过碱溶酸析法提取腐殖酸，之后经烘干造粒得到所述腐殖酸颗粒。
本发明具有益效果如下：
本发明所提供的用于护坡的微生物菌剂，是通过解淀粉芽孢杆菌、哈茨木霉菌和摩西斗管囊霉菌剂的混合物作为微生物菌剂，不仅可以改进根际微生物和土壤酶活性，抑制土壤中有害微生物的数量与活动，提高护坡植物的成活率；而且与秸秆板基质配合使用，可快速降解纤维素，同时促进土壤团粒结构的形成，进而提升护坡植物的成活率；
解淀粉芽孢杆菌菌剂、摩西斗管囊霉菌剂和哈茨木霉菌的混合物的植物促生要优于单独接种解淀粉芽孢杆菌或者从枝菌根真菌，因此证明护坡植物促生方面从枝菌根真菌真菌、哈茨木霉菌与解淀粉芽孢杆菌存在协同作用；具有较好的生态效益。
附图说明
图1示出了本发明的用于护坡的微生物菌剂的实施例中的不同基质混合物的土体黏聚力情况图；
图2示出了本发明的用于护坡的微生物菌剂的实施例中的不同处理下游离脯氨酸含量变化图。
具体实施方式
应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。实施例中未注明具体技术或者条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行，所用试剂或仪器未注明生产厂商，均可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
在现有技术中，丛枝菌根（arbuscular mycorrhiza, AM）真菌是能侵染陆地生态系统中绝大多数高等植物并形成“菌根”共生结构的有益土壤微生物，是生态系统的重要功能菌群之一。AM真菌、木霉以及植物根围促生细菌（plant growth-promotingrhizobacteria, PGPR）是典型的植物根系共生微生物。
其中，AM真菌可以具备促进作物氮磷利用的功能外，还可以分泌球囊霉素能提高土壤有机质含量、改善土壤排气和通水等条件，囊霉素会通过与土壤颗粒的结合能力来促进土壤团聚体的形成，保护土壤有机碳免受微生物分解；同时也可以作为土壤活性有机碳来源，为其它微生物补充碳源，刺激功能微生物定殖，从而促进作物氮磷利用；而摩西斗管囊霉菌（AMF）是丛枝菌根真菌的一种，会降低植物中丙二醛含量，有利于增强幼苗对干旱胁迫的抗耐性。
木霉对土壤中难溶性无机磷酸盐和难溶性钾具有溶解能力, 能促进多种植物种子萌发和幼苗生长；解淀粉芽孢杆菌具有促进植物生长，提高植物抵抗干旱和盐胁迫的能力。而且其产生的木质素过氧化氢酶等木质纤维素降解酶可以将秸秆的木质素发生降解。
而AM真菌、木霉以及解淀粉芽孢杆菌具有相互作用，可以提高幼苗的叶片可溶性糖含量，相对含水量和叶绿素含量，导致菌丝密度较大，同时护坡植物根系长度和分叉数增加，与真菌菌丝结合后加大了菌丝的覆盖面积，增强了水分和矿物质元素的吸收；促进植株的生长，尤其是促进根系的生长其中，3×108cfu/g哈茨木霉菌（Trichoderma）可湿性粉剂(以下简称哈茨木霉菌WP)，解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）菌株FZB42和摩西球囊霉(Glomus mosseae)均为市购。
制备例1
将解淀粉芽孢杆菌FZB42菌株接种在LB固体平板培养基上划线培养，进行菌种活化；其中，LB固体平板培养基为胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L用蒸馏水定容后，加入琼脂得到。
将活化后的菌落，接种至LB液体培养基，在30℃下培养15小时，获得解淀粉芽孢杆菌一级种子液制备；
将解淀粉芽孢杆菌一级种子液按照1：100传代于100mL的LB液体培养基进行解淀粉芽孢杆菌二级种子液制备；
将解淀粉芽孢杆菌二级种子液接种至发酵培养基、32℃下振荡培养48h，用无菌双蒸馏水洗涤后，在4℃、5000r/min条件下离心10min后收集菌体，将菌体重悬浮于无菌双蒸馏水中，用无菌双蒸馏水调整菌悬液浓度为6.5×109cfu/mL，进行喷雾干燥，即制得解淀粉芽孢杆菌菌剂；其中，发酵培养基的成分包括：玉米粉30份、棉粕20份、麸皮20份、KH2PO4 4份、Na2HPO4 8份和无菌双蒸馏水1000份，发酵培养基的PH为7.1。另外得到的解淀粉芽孢杆菌菌剂以棉粕和玉米粉分别作为碳源和氮源，不仅酶活力有显著提高，而且，两者来源广泛，价格低廉；而且，通过本发明的微生物菌剂制备方法，大大提高了菌剂的有效活菌数。
摩西斗管囊霉预先经玉米栽种繁殖，将摩西斗管囊霉的孢子、根外菌丝和被侵染玉米根段的根基土壤混合物作为摩西斗管囊霉菌剂，每克摩西斗管囊霉菌剂中含有25-35个孢子。具体地说，繁殖步骤包括：
以摩西斗管囊霉孢子、菌丝及被侵染植物根段的土样作为初始接种剂，以玉米或苏丹草为宿主植物。
以农田土壤与有机肥的混合物为扩繁基质，将农田土壤与有机肥分别风干并过2mm筛，过筛后，将农田土壤与有机肥按体积比2:1混合均匀，在农田土壤与有机肥混合前分别灭菌或混匀后灭菌，即制得扩繁基质。其中，扩繁基质的灭菌方法为121℃蒸汽灭菌，灭菌1-2小时后取出冷却至室温。
在扩繁基质中加水，水的加入量为扩繁基质与初始接种剂总质量的15％-20％；宿主植物播种后及生长过程中，对宿主植物进行常规管理以确保其正常生长，培养3-4个月，把宿主植物的地上部剪去，剪碎根段与基质混匀，含有宿主植物根段、摩西斗管囊霉孢子、根外菌丝的风干基质即为单一摩西斗管囊霉菌剂。
将所述解淀粉芽孢杆菌菌剂与所述摩西斗管囊霉菌剂和哈茨木霉菌可湿性粉剂按照质量比4:10:90混合形成混合菌粉，将混合菌粉与经滤硅藻土混合即得用于护坡的微生物菌剂一。
制备例2
将解淀粉芽孢杆菌FZB42菌株接种在LB固体平板培养基上划线培养，进行菌种活化；将活化后的菌落，接种至LB液体培养基进行解淀粉芽孢杆菌一级种子液制备；将解淀粉芽孢杆菌一级种子液传代于LB液体培养基进行解淀粉芽孢杆菌二级种子液制备；将解淀粉芽孢杆菌二级种子液接种至发酵培养基、32℃下振荡培养48h，用无菌双蒸馏水洗涤后，在4℃、5000r/min条件下离心10min后收集菌体，将菌体重悬浮于无菌双蒸馏水中，用无菌双蒸馏水调整菌悬液浓度为6.5×109cfu/mL，进行喷雾干燥，即制得解淀粉芽孢杆菌菌剂；其中，发酵培养基的成分包括：玉米粉25份、棉粕18份、麸皮18份、KH2PO4 3份、Na2HPO4 9份和无菌双蒸馏水1000份，发酵培养基的PH为7.2。
摩西斗管囊霉预先经玉米栽种繁殖，将摩西斗管囊霉的孢子、根外菌丝和被侵染玉米根段的根基土壤混合物作为摩西斗管囊霉菌剂，每克摩西斗管囊霉菌剂中含有25-35个孢子；
将所述解淀粉芽孢杆菌菌剂与所述摩西斗管囊霉菌剂和哈茨木霉菌可湿性粉剂按照质量比3:8:95混合获得混合菌粉，将混合菌粉与经滤硅藻土混合即得用于护坡的微生物菌剂二。
制备例3
将解淀粉芽孢杆菌FZB42菌株接种在LB固体平板培养基上划线培养，进行菌种活化；将活化后的菌落，接种至LB液体培养基进行解淀粉芽孢杆菌一级种子液制备；将解淀粉芽孢杆菌一级种子液传代于LB液体培养基进行解淀粉芽孢杆菌二级种子液制备；将解淀粉芽孢杆菌二级种子液接种至发酵培养基、32℃下振荡培养48h，用无菌双蒸馏水洗涤后，在4℃、5000r/min条件下离心10min后收集菌体，将菌体重悬浮于无菌双蒸馏水中，用无菌双蒸馏水调整菌悬液浓度为6.5×109cfu/mL，进行喷雾干燥，即制得解淀粉芽孢杆菌菌剂；其中，发酵培养基的成分包括：玉米粉38份、棉粕24份、麸皮24份、KH2PO 5份、Na2HPO4 6份和无菌双蒸馏水1000份，发酵培养基的PH为7.0。
摩西斗管囊霉预先经玉米栽种繁殖，将摩西斗管囊霉的孢子、根外菌丝和被侵染玉米根段的根基土壤混合物作为摩西斗管囊霉菌剂，每克摩西斗管囊霉菌剂中含有25-35个孢子；
将所述解淀粉芽孢杆菌菌剂与所述摩西斗管囊霉菌剂和哈茨木霉菌可湿性粉剂按照质量比3:8:95混合形成混合菌粉，将混合菌粉与经滤硅藻土混合即得用于护坡的微生物菌剂三。
效果例1
实验地点选在辽宁省鞍山市大洋河西北营子村，选取试验田4块A1-A4，将玉米秸秆收获后，将秸秆粉碎至3-5㎝后铺于4块实验田中；其中A1地块使用含有微生物菌剂一，A2地块使用含有微生物菌剂二，A3地块使用含有微生物菌剂三，A4地块不使用微生物菌剂；实验田按照每亩施用2.4kg实施制备例1-3制备的菌剂，对照组A4地块则不用微生物菌剂，然后灌水，观察秸秆腐熟，实验结果的变化情况见表1：
Figure 684596DEST_PATH_IMAGE001
结果表明，与未添加微生物菌剂的A4地块相比，加入了微生物菌剂的地块A1-A3能将秸秆降解腐熟时间提前到6-7天。
效果例2
选取玉米秸秆，将秸秆粉碎至3-5㎝后，将秸秆碎片置于85度的烘箱中进行烘干处理至含水量18%左右，获得干燥的秸秆碎片。
称取50g（N0）干燥的秸秆碎片放入尼龙网袋中，共40个，每10个尼龙袋作为一组，共形成B1-B4四组；其中，B1组的尼龙袋中放入微生物菌剂一并与秸秆碎片混合，B2组的尼龙袋中放入微生物菌剂二并与秸秆碎片混合，B3组的尼龙袋中放入微生物菌剂三并与秸秆碎片混合，B4组的尼龙袋中未放入微生物菌剂。并将40个尼龙袋的样品同时埋入10 cm土层, 10天后、20天后、30天后，每组中随机取出样品5袋, 且4℃冰箱存放, 在3天内完成烘干。样品烘干前, 用自来水进行冲洗, 直至滴下的水无色 (表明泥土等异物冲洗干净) ,然后将样品置85℃烘干6小时后, 准确称重并记录每袋的重量(NX) , 秸秆失重率 (WX) 的计算公式:WX=100 (N0-NX) /N0, 可算出某一腐解期间 (10、20、30天) 秸秆失重率。对B1-B4四组处理失重率进行对比分析，实验结果见表2。
Figure 883496DEST_PATH_IMAGE002
对表2中10、20、30天的4组实验处理的失重率可知，加入了微生物菌剂的秸秆碎片与未加入微生物菌剂的秸秆碎片腐熟度差异显著。以上表明，由解淀粉芽孢杆菌菌剂与摩西斗管囊霉菌剂和哈茨木霉菌可湿性粉剂组合成的用于护坡的微生物菌剂对木质纤维素表现出较强的降解作用。
实施例1
将本地土70份、腐殖酸30份、腐熟牛粪15份、保水剂7份、微生物菌剂一25份和草种17份搅拌混合成基质混合物一；
腐殖酸的获取方法包括：将风化煤通过碱溶酸析法提取腐殖酸，之后经烘干造粒得到所述腐殖酸颗粒。本发明的基质混合物中加入了腐植酸，腐植酸既具有速效作用又有缓效的作用；可以改变土壤结构，增加土壤透气性；可以改变土壤酸碱性，调节pH值；还可以刺激土壤中有益微生物的繁殖和生长。
其中，草种为中华结缕草种子60份、燕麦种子45份和苜蓿种子20份的混合物。在实际操作中，草种可以为中华结缕草、燕麦种子、苜蓿、狗牙草、苇状羊茅、野牛草等中的一种或者多种。其中中华结缕草的根系比狗牙草更加发达，而中华结缕草和苜蓿、燕麦的根系和土壤可以形成根-土复合体，从而使根系复合体对土壤起到加筋作用，提升土体的抗剪强度。因此，在本实验中为了适应北方环境，以及为了提升整体的护坡效果，选用中华结缕草、燕麦和苜蓿的混合种植。
实施例2
将本地土60份、腐殖酸25份、腐熟牛粪12份、保水剂6份、微生物菌剂二15份和草种15份搅拌混合成基质混合物二；
其中，草种为中华结缕草种子40份、燕麦种子25份和苜蓿种子10份的混合物。
实施例3
将本地土82份、腐殖酸35份、腐熟牛粪22份、保水剂8份、微生物菌剂三35份和草种21份搅拌混合成基质混合物三；
其中，草种为中华结缕草种子50份、燕麦种子35份和苜蓿种子15份的混合物。
实施例4
将本地土78份、腐殖酸33份、腐熟牛粪20份、保水剂7份和草种18份搅拌混合成基质混合物四；
其中，草种为中华结缕草种子50份、燕麦种子35份和苜蓿种子15份的混合物。
应用例1
在辽宁省鞍山市大洋河西北营子村段选取四块倾斜角度相同的坡地开展现场护坡试验；试验时间选择枯水期的4月份；所选坡地的倾斜角度为34°；在C1-C4四块坡地中均使用秸秆板结构护坡。
其中C1地块使用含有微生物菌剂一的基质混合物一，C2地块使用含有微生物菌剂二的基质混合物二，C3地块使用含有微生物菌剂三的基质混合物三，C4地块使用不含有微生物菌剂的基质混合物四，对于四块坡地而言，每平方坡地的基质混合物用量相同。
制备设置有通孔的秸秆板；其中，秸秆板的厚度为9cm，通孔的直径为9cm，孔间距为15㎝；秸秆板的密度为0.6g/cm3，秸秆板的邵氏硬度为61A。
在C1-C4地块进行秸秆板结构护坡施工，按照坡面整理、固定秸秆板、填充含有草种的基质混合物和覆土养护流程进行施工，具体地在坡顶及坡脚处均开挖沟槽；将秸秆板的上端用铆钉锚定在坡顶沟槽中，用土填满沟槽并压实；将秸秆板的底端用铆钉锚定在坡脚沟槽中，并填土压实；将含有草种的基质混合物填入秸秆板的孔洞中；在秸秆板的表面覆土，尤其是将秸秆板的凹槽中填满土，然后定期浇水，以湿透上层覆土和秸秆板为宜。
在试验期间，坡面经历了多次强度不一的降雨，降雨结束后，秸秆板下的坡面基本保持干燥，由此可见，在降雨过程中，坡面的植被在一定程度上减少了雨滴对坡面土壤的冲刷，证实了该方法对坡面的保护作用。
10月份，通过采用美国Iowa钻孔剪切试验仪对现场土体强度进行检测。
首先，采用大型取土器将表层土壤取土至50厘米以上的深度，在洞口安装剪切试验仪，并将剪切头下放至试验高度，加载初始固结压力并保持15min，剩余各级压力各保持5min，固结结束后，测定土体在每级法向压力作用下的抗剪强度，并根据各级强度绘制曲线，以获得土体黏聚力。土体黏聚力随土体深度的变化图如图1；图1示出了不同基质混合物的土体黏聚力情况。
从图1可以看出，采用本发明的用于护坡的微生物菌剂的C1-C3地块与未采用微生物菌剂的C4地块相比，在相同的深度下，C1-C3地块的土体黏聚力大于C4地块。因此，使用了本发明的微生物菌剂的植被不仅成活率较高，而且在土体中形成了细密的网状根，对坡体土体的加筋效果较好，因此，C1-C3地块的坡体整体稳定性较好，没有出现土体滑脱现象具有很好的防风护坡效果。
分别在6月份、8月份和10月份对C1-C4地块的中华结缕草的根部的游离脯氨酸含量进行测量，测量结果见图2；图2示出了不同处理下游离脯氨酸含量变化。
由图2可以看出，使用微生物菌剂的C1-C3地块中的中华结缕草草根中游离脯氨酸含量大幅增加，而未使用微生物菌剂的C4地块中的中华结缕草草根种游离脯氨酸的含量并不存在较大变化。而游离脯氨酸含量与根系新生根存在正相关关系，因此，微生物菌剂有利于促进护坡植物的根系生长。
综上，本发明的用于护坡的微生物菌剂及其制备方法和应用，通过应用包含解淀粉芽孢杆菌菌剂、摩西斗管囊霉菌剂和哈茨木霉菌菌剂的混合菌剂，能够提高受损土壤中的护坡植物的脯氨酸含量，提升了被破坏的坡体的土壤结构、营养元素循环、植物抗旱性、植物个体养分吸收，进而提升了护坡的生态效益；而且用于护坡的微生物菌剂具有较好的秸秆降解效果。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式以及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改和改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种微生物菌剂在护坡中的应用，其特征在于，
所述微生物菌剂包括，由解淀粉芽孢杆菌菌剂、哈茨木霉菌可湿性粉剂和摩西斗管囊霉菌剂组成的混合菌粉以及作为填充物的经滤硅藻土；其中，解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌FZB42菌株。
2.根据权利要求1所述的微生物菌剂在护坡中的应用，其特征在于，解淀粉芽孢杆菌菌剂、哈茨木霉菌可湿性粉剂和摩西斗管囊霉菌剂按干基重量份比例为3~6：8~15:95~102。
3.根据权利要求1所述的微生物菌剂在护坡中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
预先制备秸秆板和基质混合物；将所述秸秆板进行打孔，形成具有通孔的秸秆板；将本地土60-82份、腐殖酸25-35份、腐熟牛粪12-22份、保水剂6-8份、所述的微生物菌剂15-35份和草种15-21份搅拌混合成基质混合物；
坡面整理；在坡顶及坡脚处均开挖沟槽；
固定所述秸秆板；将秸秆板的上端用铆钉锚定在坡顶沟槽中，用土填满沟槽并压实；将秸秆板的底端用铆钉锚定在坡脚沟槽中，并填土压实；
将基质混合物填充入所述秸秆板的通孔中；
覆土养护；在秸秆板的表面覆土，然后定期浇水。
4.根据权利要求3所述的微生物菌剂在护坡中的应用，其特征在于，所述草种为中华结缕草种子40-60份、燕麦种子25-45份和苜蓿种子10-20份的混合物。
5.根据权利要求3所述的微生物菌剂在护坡中的应用，其特征在于，
所述腐殖酸的获取方法包括：
将风化煤通过碱溶酸析法提取腐殖酸，之后经烘干造粒得到腐殖酸颗粒。
6.根据权利要求1所述的微生物菌剂在护坡中的应用，其特征在于，所述微生物菌剂的制备方法包括：
将解淀粉芽孢杆菌接种在LB固体平板培养基上划线培养，进行菌种活化；将活化后的菌落，接种至LB液体培养基进行解淀粉芽孢杆菌一级种子液制备；将解淀粉芽孢杆菌一级种子液传代于LB液体培养基进行解淀粉芽孢杆菌二级种子液制备；将解淀粉芽孢杆菌二级种子液接种至发酵培养基培养后收集菌体，将菌体重悬浮于无菌双蒸馏水中，用无菌双蒸馏水调整菌悬液浓度为6.5×109cfu/mL，进行喷雾干燥，即制得解淀粉芽孢杆菌菌剂；
摩西斗管囊霉预先经玉米栽种繁殖，将摩西斗管囊霉的孢子、根外菌丝和被侵染玉米根段的根基土壤混合物作为摩西斗管囊霉菌剂，每克摩西斗管囊霉菌剂中含有25~35个孢子；
将所述解淀粉芽孢杆菌菌剂与所述摩西斗管囊霉菌剂和哈茨木霉菌可湿性粉剂混合，即得用于护坡的微生物菌剂。
7.根据权利要求6所述的微生物菌剂在护坡中的应用，其特征在于，所述发酵培养基的成分包括：玉米粉25-38份、棉粕18-24份、麸皮18-24份、KH2PO4 3-5份、Na2HPO4 6-9份和无菌双蒸馏水1000份。
8.根据权利要求6所述的微生物菌剂在护坡中的应用，其特征在于，所述发酵培养基的PH为7.0-7.2。
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