CN111944907B - 粪杆菌作为急性髓性白血病诊断、预后或治疗标志物的应用 - Google Patents

粪杆菌作为急性髓性白血病诊断、预后或治疗标志物的应用 Download PDF

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Abstract

本发明具体涉及粪杆菌作为急性髓性白血病诊断、预后或治疗标志物的应用。本发明针对肠道菌群与急性髓性白血病的关系进行了研究，依据本发明研究结果表明，肠道菌群中，粪杆菌(Faecalibacterium)与健康状况呈正相关，有望作为急性髓性白血病诊断或预后标志物。采用粪杆菌(Faecalibacterium)、丁酸衍生物进行治疗能够有效的缓解AML症状，延长生存期限，有望应用于抗AML的药物开发。另外，本发明研究还表明，肠道微生物通过LPS促进AML的发展，抑制LPS的表达能够有效的减缓AML发展，为肠道菌群与AML之间的关系明确了相关机制。

Description

粪杆菌作为急性髓性白血病诊断、预后或治疗标志物的应用
技术领域
本发明属于抗急性髓性白血病技术领域，具体涉及粪杆菌(Faecalibacterium)作为急性髓性白血病的诊断或预后标志物的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
急性骨髓性白血病(Acute myeloid leukemia,AML)，是髓系造血干/祖细胞恶性疾病。以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征，临床表现为贫血、出血、感染和发热、脏器浸润、代谢异常等，多数病例病情急重，预后凶险，如不及时治疗常可危及生命。该病占小儿白血病的30％。在分子生物学改变及化疗反应方面儿童AML与成人(<50岁)相似。婴幼儿的AML比成人易发生髓外白血病。
目前本领域对AML的确切发病原因尚不明确，认为与地域环境因素、电离辐射、化学接触、酗酒与吸烟，以及与机体对某些病毒感染所致的特殊反应有关。此外，近年来通过基因突变频率和一些易患生物标记研究发现，它可能是遗传学和环境因素共同作用的结果。
肠道菌群是寄生于人体胃肠道部分微生物的总称，是人体微生态群落中最复杂的生物区，其动态平衡对于维持宿主的机体健康具有重要的意义。生理情况下，肠道正常菌群与完整的肠黏膜结构、黏膜表面的粘蛋白、分泌型免疫球蛋白A(slgA)、及肠壁免疫细胞共同构成了肠道的黏膜屏障系统，阻止了肠道细菌及细菌产生的内毒素向肠外移位。但在各种病理状态下，维持菌群平衡的宿主条件受到破坏，引起菌群失衡，包括菌群比例失调与细菌移位两大类。
本领域相关研究表明，系统性的细菌感染会引发异常的骨髓增生，甚至某些条件下，肠道菌群可能会诱发白血病。在大多数血液病病例中，急性髓系白血病(AML)是一个多步骤的过程，包括基因组改变和形态学改变。此外，越来越多的证据表明，人类肠道微生物群与癌症的发展有关。
发明内容
基于上述背景技术的记载可以得知，细菌的信号对于疾病的驱动具有重要的作用，然而，肠道微生物群在急性髓系白血病中的作用尚不清楚。本发明对60例急性髓系白血病患者的肠道微生物区系和代谢物进行了16S rRNA测序和代谢组学研究。在急性髓系白血病患者和对照组中，微生物组和代谢组发生了明显的改变，出现了两种截然不同的微生物群落高度模式。首先，急性髓系白血病患者粪杆菌、蔷薇酸菌和优生菌的相对丰度持续下降。单链脂肪酸代谢组学分析显示，急性髓系白血病患者丁酸、丙酸明显降低。上述代谢组学数据表明，微生物组和代谢组的改变与AML的进展密切相关，这可能具有病因学和诊断的重要性。
基于上述研究结果，本发明提供以下技术方案：
本发明第一方面，提供粪杆菌(Faecalibacterium)作为急性髓性白血病的诊断或预后标志物的应用。
依据本发明研究表明，健康人群与急性髓性白血病患者的肠道菌群存在差异，患者的肠道菌群多样性显著降低，其中，粪杆菌(Faecalibacterium)的数量与健康状况存在具有统计学意义的正相关关系。
基于该研究结论，单独检测粪杆菌(Faecalibacterium)的含量，有助于对患者的健康情况进行评价，当上述菌株数量增多时，证明健康状况具有好转。依据常规研究思路，粪杆菌(Faecalibacterium)有望作为判断检测个体健康情况的标志物，或对急性髓性白血病患者预后情况进行判断的标志物。
进一步的，本发明研究还发现，将粪杆菌移植至患病小鼠中，能够缓解AML小鼠肝脾重大的程度，并且能够降低外周血中GFP+细胞比例，减轻脾脏白血病细胞浸润情况，对于急性髓性白血病具有缓解作用。
因此，本发明第二方面，提供粪杆菌(Faecalibacterium)在制备抗急性髓性白血病药剂中的应用。
上述菌株、菌株的提取物及培养物均可以作为抗AML活性用于相关药剂的添加。
本发明第三方面，提供丁酸及其衍生物在制备抗急性髓性白血病药剂中的应用。
本发明针对AML患者与正常人粪便中短链脂肪酸的成分进行了探究，其中，丁酸及丙酸的含量与对照组存在差异。给AML小鼠施于丁酸盐一段时间后，小鼠脾脏白血病细胞浸润情况显著减轻，并且丁酸盐用药组的小鼠寿命显著延长。基于该结论，本领域技术人员可以依据常规研究思路将丁酸盐应用于抗AML药剂的研发，或与其他具有抗AML治疗活性的物质联合应用。
本发明第四方面，提供LPS(脂多糖，Lipopolysaccharide)抑制剂作为抗急性髓性白血病药剂中的应用。
本发明研究中还发现，采用粪杆菌移植治疗及丁酸盐治疗后的小鼠体内LPS浓度也随之降低，而用LPS处理的小鼠，肝和脾都出现了更严重的肿大。该实验结果表明，LPS的表达有利于AML的进一步发展，而抑制LPS的分泌能够对AML起到缓解作用。因此，将LPS抑制剂同样有望应用于抗AML药剂的研发。
以上一个或多个技术方案的有益效果是：
根据测序的结果，本发明进行了一系列的功能实验，证实了细菌移植和代谢产物的给药对急性髓系白血病的进展有重要影响。本发明研究结果表明，丁酸能显着延缓小鼠急性髓系白血病的发展，降低急性髓系白血病的负荷。此外，本发明还发现与肠道菌群有关的LPS浓度对AML的进展也有显著影响。综上所述，所有这些证据表明，肠道微生物群以LPS依赖的方式促进AML的进展，靶向肠道微生物群可能为AML提供一种新的治疗选择。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为实施例中所述急性髓系白血病患者肠道菌群与对照组检测结果；
其中，图1A为急性髓系白血病患者与对照组肠道菌群物种丰富度与多样性；
图1B为急性髓系白血病患者与对照组中OTU水平。
图2为实施例中对照组与AML小鼠脾脏白血病细胞浸润情况；
其中，图2A为移植正常人粪便后白血病小鼠脾脏HE切片；
图2B为移植白血病人粪便后白血病小鼠脾脏HE切片；
图2C为移植正常人粪便后白血病小鼠脾脏免疫组化ki67切片；
图2D为移植白血病人粪便后白血病小鼠脾脏免疫组化ki67切片。
图3为实施例中急性髓系白血病小鼠病理样本中SCFA代谢情况；
其中，图3A为外周血中短链脂肪酸代谢情况；
图3B为骨髓中短链脂肪酸代谢情况；
图3C为粪便中短链脂肪酸代谢情况。
图4为急性髓系白血病小鼠肠道微生物与LPS的关系结果图；
其中，图4A为对照组与AML患者血清中LPS含量图；
图4B为对照组与粪便杆菌组中LPS表达情况；
图4C为对照组与丁酸盐组LPS表达情况；
图4D为对照组与LPS组小鼠脾脏照片及重量分布图；
图4E为LPS处理的AML小鼠外周血、脾脏和骨髓中GFP+细胞的表达含量图；
图4F为给予丁酸盐的急性髓细胞白血病小鼠比对照急性髓细胞白血病小鼠存活天数图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
正如背景技术所介绍的，为了解决如上的技术问题，本发明提供了粪杆菌(Faecalibacterium)作为急性髓性白血病的诊断或预后标志物的应用。
本发明第一方面，提供粪杆菌(Faecalibacterium)作为急性髓性白血病的诊断或预后标志物的应用。
优选的，所述应用方式包括检测机体肠道菌群中粪杆菌(Faecalibacterium)的数量。进一步优选的，所述检测方式包括检测个体的离体样本中所述菌的数量。
在更为具体的实施方式中，所述离体样本包括但不限于粪便。
本发明第二方面，提供粪杆菌(Faecalibacterium)在制备抗急性髓性白血病药剂中的应用。
优选的，所述粪杆菌(Faecalibacterium)包括菌、所述菌的提取物、菌的培养物，或其中任意两种或三种的组合形式。
优选的，所述药剂中包括所述粪杆菌，还包括药学上所必需的辅料。
进一步优选的，所述药物中，包括所述粪杆菌，还包括其他具有抗急性髓性白血病的活性成分。
优选的，所述药剂为口服制剂或注射制剂；进一步优选的，所述口服制剂优选为液体制剂。
在上述优选的技术方案的一些具体实施方式中，所述液体制剂为包括但不限于混悬剂、糖浆剂、合剂、酊剂中的一种。
本发明第三方面，提供丁酸及其衍生物在制备抗急性髓性白血病药剂中的应用。
优选的，所述丁酸衍生物包括但不限于丁酸盐、丁酸酯或其他含有丁酸结构的化合物。
进一步优选的，所述丁酸盐为丁酸钠。
优选的，所述丁酸为组蛋白乙酰化激动剂。
本发明第四方面，提供LPS(Lipopolysaccharide)抑制剂作为抗急性髓性白血病药剂中的应用。
优选的，所述LPS抑制剂为直接抑制LPS产生的活性物质，或通过调节LPS分泌通路从而实现减少LPS产量的物质。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
实施例1
一、材料与方法
1.患者和标本
这项研究中包括的粪便，血清和骨髓抽吸物来自30名新近诊断(ND)的AML患者和32名在过去一个月内未服用抗生素的健康对照。这些标本采集于山东大学齐鲁医院。用Ficoll-Hypaque(郝阳生物技术公司，天津，中国)通过密度梯度离心分离骨髓单个核细胞(BM-MNC)。如果来自BM-MNC的红细胞污染超过30％，则进行红细胞裂解。总共2×106BM-MNC在TRIZOL中稳定，并储存在-80℃下用于RNA提取。从具有高骨髓母细胞计数的ND AML患者(分别为20例>70％的患者，8例BM母细胞的60％至70％的患者)获得的BM-MNC立即用作原代白血病细胞进行细胞培养实验。将粪便和血清保存在-80℃下进行后续实验。所有研究均在试验开始时征得患者的书面知情同意书，并得到山东大学齐鲁医院医学伦理委员会的批准。
2.老鼠
雌性C57BL/6J(H-2b；CD45.2+)小鼠购自山东大学实验动物中心。用于实验的小鼠年龄在8到12周之间。分析了并发症(脾脏，肝脏和骨骼的侵袭)，并确定了脂多糖相关分子的表达。在SPF环境中饲养所有小鼠。还观察到另一组AML小鼠的存活。根据大学实验动物医学指南，按照山东大学齐鲁医院动物使用和护理大学委员会审查和批准的规定对所有动物进行护理。
3.粪便水合液的制备
收集来自AML患者或正常对照组的粪便样本，并在含有20％胎牛血清(FBS)的预热PBS中混合。旋转样品，孵育(37℃，10分钟)并离心(14000rpm，30分钟)。将上清液过滤并通过0.2μm过滤器灭菌，过滤后的液体为粪便水合液。收集新鲜的粪便后，用生理盐水称重并稀释，调节生理盐水的体积，使粪便悬浮液的浓度约为120mg/ml，然后用过滤器过滤粪便悬浮液以除去大颗粒，收集滤液以添加甘油，将甘油的浓度调节至20％，并在-80℃下保存。
4.FMT
将先前储存的粪便溶解在生理盐水中，最终浓度为120mg/ml。c57小鼠提前一周接受抗生素治疗后，每只小鼠(6至8周)在胃内注入200ul粪便水合液。
5.细胞增殖测定
经过不同的处理后，将细胞与10uL CCK8(Beyotime，中国)一起孵育4小时。在450和630nm处测量吸光度。每个样品重复三次。
6.凋亡测定
使用膜联蛋白V/PI凋亡检测试剂盒(BestBio，中国上海)根据制造商的方案进行凋亡。在不同处理之后收集细胞，并用PBS洗涤两次。然后将细胞重悬于400μL结合缓冲液中，并在10°L Annexin V中10℃，10μLPI在黑暗中于4℃染色5分钟。立即通过Galios流式细胞仪(Beckman Coulter，CA，美国)分析凋亡细胞的百分比。
7.定量逆转录酶PCR(qRT-PCR)
使用TRIZOL(Invitrogen，USA)从AML原发性白血病细胞中提取总RNA。总RNA浓度和纯度通过分光光度计(Eppendorf，GER)定量。使用Prime Script RT试剂盒Perfect RealTime(Takara Bio Inc，Japan)在37℃下进行15分钟的逆转录，然后在85℃下进行10秒。定量PCR在装有SYBR Green Real-time PCR Master Mix试剂盒(日本Toyobo)的LightCycler 480II实时PCR系统(瑞士罗氏)上进行两次操作。PCR包含3.2μLddH2O，5μL2×SYBRGreen实时PCR预混液，0.4μL正向和反向引物以及1μLcDNA，最终体积为10μL。PCR条件如下：95℃10分钟，然后进行40个循环(95℃20秒和60℃1分钟)。为了确定PCR反应的特异性，常规分析了解链曲线。所有实验均按照手册的说明进行。相对基因表达相对于内源性对照GAPDH表达，并使用2-ΔCT方法进行计算。
8.16S深度测序
间隔一定时间，收集小鼠粪便颗粒并储存在-80℃。裂解后，提取DNA并用苯酚-氯仿纯化。如所述进行测序和分析。简而言之，使用Ilumina MiSeq技术对16S rRNA基因的V4区进行了测序。修剪测序仪并使用Mothur分析。将来自17个菌株混合物中每个菌株的16SrRNA基因序列添加到Ribosomal Database Project的版本9序列集序列中。通过与描述的训练集进行比较，对结果序列进行分类，并要求置信度得分为100％。
9.双重荧光素酶活性测定
用50μng的psiCHECK2对照载体转染MLL-AF9细胞。转染后24小时，萤火虫和海肾萤光素酶活性均按照制造商的说明，使用双重萤光素酶报告基因分析仪(美国Promega)进行了测量。为了监测体内肿瘤的进展和转移，用萤火虫荧光素酶报道基因转导了MLL-AF9细胞。生物发光成像在注射的7、11、15天进行，并用于确认体内肿瘤细胞负荷的动态过程。
10.属和种网络分析
属和种网络分析。Spearman的相关系数是使用每个阶段(MP，S0，SI/II和SIII/IV)的属和种的相对丰度分布来计算的。属相关网络是用与拟声藻属相关系数为0.05或更高或-0.05或更低的物种构建的。使用yEd Graph Editor(版本3.18.11)进行网络构建。
11.代谢组分析
如前所述，通过CETOFMS对带电代谢产物进行了定量分析。粪便中的代谢物用含有20μM甲硫氨酸砜和d-樟脑-10-磺酸的内标物进行剧烈振摇来提取。所有CETOFMS实验均使用安捷伦CE系统进行。获得了1317种化合物的CE-TOFMS代谢组数据。为了进行分析，将低于检出限的浓度替换为零，并排除所有样品中低于检出限的代谢物。
12.统计分析
GraphPad Prism 5.0已应用于示意图中。使用SPSS 20.0软件对原始数据进行统计分析。Shapiro-Wilk检验用于正态性检验。正态分布的数据通过学生的t检验或配对t检验进行了分析。否则，使用Mann-Whitney U检验(非配对数据)和Wilcoxon带符号秩检验(配对数据)进行组间比较。除非另有说明，否则结果中的数据表示为平均值±s.e.m。为了表示肠道菌群相关免疫分子之间复杂的相关结构，得分基于贝叶斯网络的得分算法进行计算。*P<.05，**P<.01和***P<.0001被认为具有统计学意义。
二、结果
1.急性髓系白血病患者肠道菌群与对照组比较有显著性差异。
在所有样品中总共鉴定出2606个OTU。本实施例检测了所有62名AML患者粪便样本中的Shannon，Simpson和Sobs的α-多样性指数。AML患者和健康对照者之间的Shannon多样性指数存在统计学上的显着差异。(P＝0.0417)，表明AML患者粪便的多样性明显低于健康对照组。尽管在Ace，Chao，Simpson和Sobs指数之间未观察到统计学上的显着差异，这可能归因于每组的低统计功效或变异性，但与健康对照组相比，AML患者的物种丰富度和多样性程度较低(图1A)。AML组与健康对照组之间的加权UniFrac距离统计量(定性，ADONIS P<0.001)在β多样性中检测到显着差异，表明AML患者组中与粘膜相关的微生物结构与正常人之间存在显着差异。OTUs存在的健康对照组(图1B)。为了确定AML样本中微生物群的特定变化，本实施例检测了AML和健康对照组中这些类群的相对丰度。在属水平上，检测到大约6个细菌分类群，它们在AML和健康对照之间显示出不同程度的丰度。正常对照组富集了费氏杆菌(Faecalibacterium)，玫瑰菌(Roseburia)。相反，癌组织中的拟杆菌(Bacteroides)和肠球菌(Enterococcus)明显增加。此外，使用Spearman相关检验来评估不同膀胱癌相关属之间的关系。分析基于AML和健康对照组的10种不同菌群。使用计数数据进行相关性分析。本实施例观察到以下菌属与健康状况具有的显着正相关：粪杆菌(Faecalibacterium)(R＝.9410)。通常，以AML组为主的属与对照组中丰富的属负相关，从而表明有害细菌和有益细菌之间存在拮抗作用。
2.微生物多样性的降低与AML的进展密切相关
接下来，本实施例针对肠道微生物多样性对AML小鼠模型生存时间和肿瘤负荷的影响。本实施例发现，给予抗生素后，小鼠肠道微生物多样性受到明显破坏。此外，显微镜下观察发现，与对照组AML小鼠相比，抗生素损毁组小鼠脾脏中白血病细胞浸润有减轻的趋势，本实施例发现与Ctrl-GFP小鼠相比，抗生素损毁组AML小鼠出现了更严重的肝脾肿大。结果表明，急性髓系白血病小鼠脾脏和骨髓中GFP+细胞的百分率均低于抗生素损伤组。此外，抗生素的破坏导致急性髓细胞白血病小鼠的寿命[中位数17(15-19)天]比对照小鼠短[中位数22(20-24)天]。这些数据表明，在AML小鼠模型中，抗生素的使用增加了白血病的负荷，并促进了疾病的发展。
3.3.粪便移植可延缓急性髓系白血病的发展
为进一步研究肠道微生物在体内对急性髓系白血病的作用，本实施例从以往测序结果中筛选出有显著差异的细菌，并探讨其对急性髓系白血病小鼠的影响。本实施例向小鼠抑制细菌方式如下：先使用抗生素给予小鼠灌胃2周，清除其原有的肠道菌，又以每天1*1010/ml的浓度给与小鼠灌胃200ul，连续灌胃2周即移植完成。
在成功移植AML病人粪便小鼠和正常人粪便的对照小鼠后，本实施例发现移植正常人粪便处理的AML小鼠与移植AML病人粪便AML小鼠相比，肝脾肿大的减轻程度更明显，而且外周血、脾脏和骨髓中GFP+细胞的百分率也低于对照AML小鼠。显微镜下，移植正常人粪便的AML小鼠脾脏白血病细胞浸润较移植AML病人粪便的AML小鼠有减轻趋势(图2)。此外，给予急性髓细胞白血病杆菌治疗的小鼠寿命比对照急性髓细胞白血病小鼠有统计学意义的延长，中位数17(15-19)天比中位数22(20-24)天。
4.急性髓系白血病患者与正常人大便SCFA代谢有显著性差异。
肠道微生物区系与代谢物的关系越来越密切，因此本实施例对样品中的短链脂肪酸进行了定量检测。基因组分析表明，急性髓系白血病粪便与正常人类粪便中，丁酸和丙酸的含量与对照组有显著差异。有趣的是，本实施例的血清和骨髓样本中的短链脂肪酸没有明显的差异。图3A-B)。粪便细菌与SCFA水平的相关分析表明，粪便杆菌与丁酸、丙酸呈正相关(图3C)。这些数据表明，在健康对照者的肠道微生物区系中，粪便杆菌的表达显著上调，进而影响了这些宿主体内丁酸和丙酸的代谢。
5.提高小鼠模型丁酸钠含量具有抗白血病作用。
丁酸盐是微生物发酵的副产物。因此，本实施例接下来测试了这样的假设，即改变宿主中SCFA的组成将减轻AML。本实施例从建立AML模型前7天开始每隔一天给小鼠灌胃丁酸盐，并在AML后持续给药14天。本实施例通过质谱测序表征了从接受丁酸盐给药的动物收集的粪便中的SCFA。在接受丁酸的动物中，质谱测序分析显示粪便中有一个重要的生物学意义上的变化，表明丁酸的含量明显增加。接下来，本实施例测量了丁酸盐对急性髓系白血病小鼠模型中白血病负荷和存活时间的影响。本实施例发现，与对照组相比，给予丁酸的AML小鼠出现了更多的肝和脾肿大的减轻。此外，实验结果还表明，给予丁酸的AML小鼠外周血、脾脏和骨髓中GFP+细胞的百分率均低于对照组。显微镜下，给予丁酸的急性髓系白血病小鼠脾脏白血病细胞浸润与对照组相比有减轻的趋势，同时，给予丁酸的急性髓细胞白血病小鼠的寿命显著长于对照组[中位数16(14～18)d vs中位数19。此外，双荧光素酶活性测定显示，丁酸干预组的双荧光素酶活性明显低于对照组(P＜0.01)，而丁酸干预组的双荧光素酶活性明显低于对照组。因此，在本实施例的研究中，丁酸盐在AML小鼠模型中被证实具有治疗作用。
6.肠道微生物及其代谢产物影响肠道屏障完整性。
鉴于急性髓系白血病中丁酸仅在肠道组织中降低，接下来本实施例分析了还原丁酸在IECS中的潜在功能影响。本实施例确定丁酸是否会影响急性髓系白血病的IECS功能。除了利用转运蛋白，丁酸在高浓度存在时也可以通过粘膜屏障扩散到IECS。因此，本实施例假设局部给予高剂量的丁酸可以在体内恢复IECS的组蛋白乙酰化。结果表明，AML(未给予丁酸治疗)小鼠结肠粘膜ZO-1、claudin-1和claudin-2表达明显下调，提示AML(未给予丁酸治疗)小鼠结肠粘膜存在肠屏障破坏。这些结果提示丁酸缺乏可能导致肠屏障的破坏。
7.肠道微生物区系通过LPS促进白血病小鼠模型AML的发生。
众所周知，人体血清中与免疫密切相关的LPS大部分来自肠道微生物，肠道屏障是LPS通过的唯一途径。因此，本实施例进一步验证了粪便杆菌的主要产物丁酸可以通过影响肠道屏障功能来调节LPS进入血液的浓度的假说。首先，本实施例检测了粪便杆菌组和对照组的LPS浓度的差异。不出所料，粪便杆菌组的LPS浓度明显低于对照组，丁酸盐组和PBS组也有相同的趋势(图4B-C)。同时，本实施例发现AML患者的LPS浓度明显高于健康对照组(图4A)。提示LPS刺激可促进白血病细胞增殖。
为探讨LPS对急性髓系白血病(AML)小鼠可能的促进作用，采用小鼠静脉注射LPS的方法。本实施例的结果表明，与对照AML小鼠相比，LPS处理的AML小鼠出现了更严重的肝和脾肿大(图4D)。显微镜下观察，给予丁酸的LPS组小鼠脾脏白血病细胞浸润较对照AML组小鼠有减轻的趋势(图4D)。另一方面，结果表明，LPS染毒的AML小鼠外周血、脾脏和骨髓中GFP+细胞的百分率均高于对照组(图4E)，表明LPS处理的AML小鼠外周血、脾脏和骨髓中GFP+细胞的百分率均高于对照组(图4E)。类似地，给予丁酸盐的急性髓细胞白血病小鼠比对照急性髓细胞白血病小鼠的寿命在统计学上更长[中位数14(13-16)天比中位数18(16-20)天(P＝0.0479)](图4F)。值得注意的是，急性髓系白血病患者的LPS丰度显著增加。这一发现提示，调节肠道微生物区系、SCFA和LPS对AML的治疗有重要价值。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.粪杆菌Faecalibacterium在制备抗急性髓性白血病药剂中的应用。
2.如权利要求1所述粪杆菌Faecalibacterium在制备抗急性髓性白血病药剂中的应用，其特征在于，所述药剂为所述粪杆菌和药学上所必需的辅料。
3.如权利要求1所述粪杆菌Faecalibacterium在制备抗急性髓性白血病药剂中的应用，其特征在于，所述药剂为口服制剂。
4.如权利要求3所述粪杆菌Faecalibacterium在制备抗急性髓性白血病药剂中的应用，其特征在于，所述口服制剂为液体制剂。
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