CN111875046A - 一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌用的培养基和驯化方法 - Google Patents

一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌用的培养基和驯化方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌用的培养基和驯化方法。所述培养基包括:0.1~1.0g·L‑1硫酸铵、0.01~0.1g·L‑1磷酸二氢钠、0.1~1.3g·L‑1氯化钙、0.1~0.6g·L‑1七水硫酸镁、0.3~2ml·L‑1微量元素、碳酸氢钠、硝酸钠、以及醋酸钠;其中,添加所述硝酸钠和所述醋酸钠,以使所述培养基的COD/NO3 ‑N处于1.5‑2.5的范围内;添加所述碳酸氢钠,以使所述培养基的初始pH处于8.5‑9.0的范围内。根据本发明提供的培养基和驯化方法,可以快速、定向富集亚硝氮积累型反硝化菌。

Description

一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌用的培养 基和驯化方法
技术领域
本发明属于污物处理领域,具体涉及一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌用的培养基和驯化方法。
背景技术
近年来含氮化合物的过量排放,造成了水体富营养化等一系列严重危害。水中氮素常以氨氮的形式存在,实现氨氮废水的高效低耗处理一直是环境工程领域的难题。
传统的活性污泥系统是当下城市污水厂主要的污染物去除途径,但能量及化学药剂的大量投入使得污水厂难以顺应我国可持续发展政策。近年来,厌氧氨氧化工艺因其无需外加有机碳源、脱氮负荷高、运行费用低、占地空间小等优点成为目前最经济的生物脱氮工艺之一。但是,如何在城市污水主流条件下为厌氧氨氧化工艺提供亚硝氮基质目前仍是一个关键性的工程难题。亚硝氮积累型反硝化菌可以以较低的碳源需求,实现稳定的亚硝氮供给。但是,如何从活性污泥中快速富集出亚硝氮积累型反硝化菌目前缺乏有效的方法。
针对这些问题,提供一种从活性污泥中快速、定向地富集亚硝氮积累型反硝化菌的方法十分重要。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点,本发明的目的在于提供一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌用的培养基和驯化方法,可以从活性污泥中快速、定向地富集亚硝氮积累型反硝化菌。
为实现上述目的及其他相关目的,本发明提供一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌用的培养基,所述培养基包括: 0.1~1.0g·L-1硫酸铵、0.01~0.1g·L-1磷酸二氢钠、0.1~1.3g·L-1氯化钙、 0.1~0.6g·L-1七水硫酸镁、0.3~2ml·L-1微量元素、碳酸氢钠、硝酸钠、以及醋酸钠;其中,添加所述硝酸钠和所述醋酸钠,以使所述培养基的COD/NO3 --N处于1.5-2.5的范围内;添加所述碳酸氢钠,以使所述培养基的初始pH处于8.5-9.0的范围内。
在本发明公开的一具体实施例中,基于所述微量元素的含量为 0.3~2ml·L-1计,所述微量元素包括:6~16.0g·L-1乙二胺四乙酸二钠、 0.7~2.3g·L-1六水氯化铁、0.1~0.4g·L-1七水硫酸锌、0.1~0.45g·L-1六水氯化钴、0.1~0.3g·L-1四水氯化锰、0.01~0.07g·L-1五水硫酸铜、 0.01~0.1g·L-1二水钼酸钠、0.1~0.4g·L-1碘化钾、0.1~0.40g·L-1硼酸。
本发明还提供了一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法,所述驯化方法包括:S1:提供一培养基,将所述活性污泥接种至发酵罐中,并加入所述培养基;S2:密闭所述发酵罐,缺氧搅拌;S3:测定所述发酵罐中硝氮和亚硝氮浓度,计算亚硝氮积累率;S4:判断所述亚硝氮积累率是否大于80%;S5:如果否,排泥并更换所述培养基,再次返回步骤S2;S6:如果是,取出所述活性污泥进行宏基因组测序,鉴定出所述反硝化菌;其中,所述亚硝氮积累率为所述亚硝氮的积累浓度与所述硝氮消耗浓度的百分之比;所述培养基包括:0.1~1.0g·L-1硫酸铵、0.01~0.1g·L-1磷酸二氢钠、 0.1~1.3g·L-1氯化钙、0.1~0.6g·L-1七水硫酸镁、0.3~2ml·L-1微量元素、碳酸氢钠、硝酸钠、以及醋酸钠;其中,添加所述硝酸钠和所述醋酸钠,以使所述培养基的COD/NO3 --N处于1.5-2.5的范围内;添加所述碳酸氢钠,以使所述培养基的初始pH处于8.5-9.0的范围内。
在本发明公开的一具体实施例中,所述步骤S1中,所述活性污泥选自城市污水厂的污泥。
在本发明公开的一具体实施例中,所述步骤S1中,所述培养基的添加量大于所述发酵罐体积的4/5,且所述培养基使所述活性污泥的浓度处于2.5-3.5gVSS L-1的范围内。
在本发明公开的一具体实施例中,所述步骤S2中,所述缺氧搅拌的速度为80-150rpm,且所述缺氧搅拌的终止时间点为在所述亚硝氮浓度达到峰值之后,和所述硝氮浓度低于2.5mg L-1之前。
在本发明公开的一具体实施例中,所述步骤S4中,所述亚硝氮积累率在10~15天内所述亚硝氮积累率的标准偏差小于5%。
在本发明公开的一具体实施例中,所述步骤S5中,所述排泥的过程包括:每天的总排泥量为所述发酵罐反应液总体积与污泥龄的比值,所述污泥龄为15-20天。
在本发明公开的一具体实施例中,所述步骤S5中,所述培养基更换比为所述发酵罐反应液总体积的40-60%。
在本发明公开的一具体实施例中,所述步骤S5中,所述宏基因组测序深度大于6Gb/样品,所述反硝化菌为以Thaueraaminoaromatica,Thaueraphenylacetica,Thaueraterpenica, Thauerasp.DNT-1,Thauerasp.MZ1T为代表的亚硝氮积累型反硝化菌。
如上所述,本发明提供了一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌用的培养基和驯化方法,其利用特定的培养基和驯化方法,可以从活性污泥中快速、定向富集出Thaueraaminoaromatica, Thaueraphenylacetica,Thaueraterpenica, Thauerasp.DNT-1,Thauerasp.MZ1T为代表的亚硝氮积累型反硝化菌。其他特征、益处和优势将通过本文详述的包括说明书和权利要求在内的本公开而显而易见。
附图说明
图1示出了本发明提供的一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法的流程示意图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实施例说明本发明的实施方式,本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用,本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用,在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需说明的是,在不冲突的情况下,以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。还应当理解,本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案,而不是为了限制本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法,通常按照常规条件,或者按照各制造商所建议的条件。
当实施例给出数值范围时,应理解,除非本发明另有说明,每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义,本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载,还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
请参阅图1,本发明提供了一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法,所述驯化方法包括但不限于以下步骤 S1~S6:
S1:提供一培养基,将所述活性污泥接种至发酵罐中,并加入所述培养基;
S2:密闭所述发酵罐,缺氧搅拌;
S3:测定所述发酵罐中硝氮和亚硝氮浓度,计算亚硝氮积累率;
S4:判断所述亚硝氮积累率是否大于80%;
S5:如果否,排泥并更换所述培养基,再次返回步骤S2;
S6:如果是,取出所述活性污泥进行宏基因组测序,鉴定出所述反硝化菌;
如图1所示,在所述步骤S1中,所述活性污泥例如可以取自城市污水厂的污泥,当然并不限于此,当然还可以取自工业工厂,例如化工厂、电子厂、药厂等污染地。
如图1所示,在所述步骤S1中,所述培养基用于培养所述活性污泥中的亚硝氮积累型反硝化菌,所述培养基的添加量大于发酵罐体积的4/5,所述发酵罐体积例如6L,所述培养基的添加量可以为5.0L、 5.2L、5.8L。添加所述培养基之后,所述发酵罐内的活性污泥形成一初始浓度,基于快速、定向富集该亚硝氮积累型反硝化菌的观点,所述初始浓度处于2.5-3.5gVSS L-1范围内,例如2.5gVSSL-1、 3.0gVSSL-1、3.5gVSSL-1
如图1所示,在所述步骤S1中,所述培养基包括:0.1~1.0g·L-1硫酸铵(NH4SO4),例如0.2g·L-1、0.3g·L-1、0.5g·L-1、1.0g·L-1; 0.01~0.1g·L-1磷酸二氢钠(NaH2PO4),例如0.02g·L-1、0.04g·L-1、 0.05g·L-1、0.09g·L-1;0.1~1.3g·L-1氯化钙(CaCl2),例如0.2g·L-1、 0.4g·L-1、0.8g·L-1、1.2g·L-1;0.1~0.6g·L-1七水硫酸镁(MgSO4·7H2O),例如0.1g·L-1、0.2g·L-1、0.35g·L-1、0.6g·L-1;0.3~2ml·L-1微量元素,例如0.3ml·L-1、0.5ml·L-1、1.0ml·L-1、1.5ml·L-1、2ml·L-1,碳酸氢钠(NaHCO3)、硝酸钠(NaNO3)、以及醋酸钠(CH3COONa)。添加所述硝酸钠和所述醋酸钠,以使所述培养基的COD/NO3 --N,即,所述化学需氧量和硝氮浓度的比值,处于1.5-2.5,例如1.5、2.0、 2.5的范围内;添加所述碳酸氢钠,以使所述培养基的初始pH处于 8.5-9.0,例如8.5、8.7、9.0的范围内。
在所述培养基中,基于所述微量元素的含量为0.3~2ml·L-1计,所述微量元素包括:6~16.0g·L-1乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na),例如8g·L-1、9g·L-1、10g·L-1、13g·L-1;0.7~2.3g·L-1六水氯化铁 (FeCl3·6H2O),例如1.0g·L-1、1.5g·L-1、1.7g·L-1、2.1g·L-1;0.1~0.4g·L-1七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O),例如0.12g·L-1、0.18g·L-1、0.24g·L-1、0.37g·L-1;0.1~0.45g·L-1六水氯化钴(CoCl2·6H2O),例如0.15g·L-1、0.22g·L-1、0.31g·L-1、0.35g·L-1;0.1~0.3g·L-1四水氯化锰(MnCl2·4H2O),例如0.12g·L-1、0.18g·L-1、0.24g·L-1、0.28g·L-1;0.01~0.07g·L-1五水硫酸铜(CuSO4·5H2O),例如0.01g·L-1、0.03g·L-1、0.05g·L-1、0.06g·L-1; 0.01~0.1g·L-1二水钼酸钠(NaMoO4·2H2O),例如0.02g·L-1、0.06g·L-1、 0.07g·L-1、0.08g·L-1;0.1~0.4g·L-1碘化钾(KI),例如0.13g·L-1、0.18 g·L-1、0.21g·L-1、0.33g·L-1;0.1~0.40g·L-1硼酸(H3BO4),例如0.15g·L-1、 0.18g·L-1、0.23g·L-1、0.35g·L-1。在上述范围的培养基,所述亚硝氮积累型反硝化菌的生长环境良好,利于富集。
如图1所示,在所述步骤S2中,对所述发酵罐中的活性污泥和所述培养基进行缺氧搅拌,以消耗所述硝氮,还原形成亚硝氮,所述缺氧搅拌的速度为80-150rpm,例如80rpm、120rpm、150rpm,该搅拌的终止时间点应控制在亚硝氮浓度(NO2 --N)达到峰值之后,且硝氮浓度(NO3 --N)低于2.5mg L-1之前,进一步地,低于1.5mg L-1
如图1所示,在所述步骤S3中,测定所述发酵罐中硝氮和亚硝氮浓度,计算亚硝氮积累率,即所述亚硝氮的积累浓度与所述硝氮消耗浓度的百分之比,从而监测反应过程。
如图1所示,在所述步骤S4中,判断步骤S3中所计算的亚硝氮积累率是否大于80%,例如82%、85%、91%、99%:如果否,进行步骤S5;如果是,则进行步骤S6。所述步骤S4中,基于稳定地判断所述反应进行的程度的观点,应当在例如10天,进一步地在15天之内,该亚硝氮积累率的标准偏差小于5%,例如4%、3%、0%。
如图1所示,在所述步骤S5中,所述亚硝氮积累率小于80%,此时,反应并不完全,可以排泥并更换所述培养基,即排出所述发酵罐中的泥渣,每天的总排泥量为发酵罐反应液总体积与污泥龄的比值,污泥龄为15-20天,例如15天、18天、20天。更换所述培养基,即,停止搅拌,静置,排出上清液,加入新鲜培养基,所述培养基更换比应为发酵罐反应液总体积的40-60%,例如40%、50%、60%。
如图1所示,在所述步骤S6中,所述亚硝氮积累率大于80%,此时,反应完全,取出该反应后的活性污泥进行宏基因组测序,鉴定出所述反硝化菌,所述宏基因组测序深度大于6Gb/样品,根据本发明的驯化方法定向富集出该反硝化菌,即主导菌种为以Thaueraaminoaromatica,Thaueraphenylacetica,Thaueraterpenica, Thauera sp.DNT-1,Thauera sp.MZ1T为代表的亚硝氮积累型反硝化菌。
以下将通过具体的实施例对本发明进行更为详细的阐述。
在一实施例中,提供一培养基,所述培养基的具体组成包括:0.2 g L-1NH4SO4,0.02g L-1NaH2PO4,0.4g L-1CaCl2,0.1g L-1 MgSO4·7H2O,以及NaH2CO3,NaNO3,CH3COONa和微量元素。微量元素的添加量为1.0ml L-1,具体组成为:10.0g·L-1EDTA,1.50 g·L-1FeCl3·6H2O,0.12g·L-1ZnSO4·7H2O,0.15g·L-1CoCl2·6H2O,0.12 g·L-1MnCl2·4H2O,0.03g·L- 1CuSO4·5H2O,0.06g·L-1NaMoO4·2H2O, 0.18g·L-1KI,0.15g·L-1H3BO4。NaNO3浓度为30mgNL-1,CH3COONa 的浓度为45mgCOD L-1,COD/NO3--N为1.5。通过添加500mg L-1NaHCO3,将培养基的初始pH控制在8.5左右。
将取自上海市曲阳污水厂的活性污泥接种至有效体积为6.0L的发酵罐中,加入5.2L培养基,初始污泥浓度为3.0gVSS L-1。密闭发酵罐,以100rpm的速度搅拌150min。停止搅拌,静置,排出上清液2.6L,然后加入2.6L新鲜培养基,每天重复8个循环。污泥龄控制在20天,即每天从发酵罐中排出泥水260ml。驯化30天后,亚硝氮积累率超过80%,且在后续的10天中标准偏差小于5%,亚硝氮积累率趋于稳定。取污泥样品进行宏基因组测序,深度为6Gb/样品,其中主导菌种是Thaueraaminoaromatica,Thaueraphenylacetica,Thauerasp.MZ1T。因此,亚硝氮积累型反硝化菌富集成功。
在另一实施例中,提供一培养基,所述培养基的具体组成包括: 0.2g L-1NH4SO4,0.02g L-1NaH2PO4,0.4g L-1CaCl2,0.1g L-1 MgSO4·7H2O,以及NaH2CO3,NaNO3,CH3COONa和微量元素。微量元素的添加量为1.0ml L-1,具体组成为:10.0g·L-1EDTA,1.50 g·L-1FeCl3·6H2O,0.12g·L-1ZnSO4·7H2O,0.15g·L-1CoCl2·6H2O,0.12 g·L-1MnCl2·4H2O,0.03g·L- 1CuSO4·5H2O,0.06g·L-1NaMoO4·2H2O, 0.18g·L-1KI,0.15g·L-1H3BO4。NaNO3浓度为60mgNL-1,CH3COONa 的浓度为150mgCOD L-1,COD/NO3--N为2.5。通过添加500mg L-1NaHCO3,将培养基的初始pH控制在8.5左右。
将取自上海市曲阳污水厂的活性污泥接种至有效体积为6.0L的发酵罐中,加入5.2L培养基,初始污泥浓度为2.5gVSS L-1。密闭发酵罐,以150rpm的速度搅拌100min。停止搅拌,静置,排出上清液2.6L,然后加入2.6L新鲜培养基,每天重复12个循环。污泥龄控制在15天,即每天从发酵罐中排出泥水350ml。驯化25天后,亚硝氮积累率超过80%,且在后续的10天中标准偏差小于5%,亚硝氮积累率趋于稳定。取污泥样品进行宏基因组测序,深度为10Gb/ 样品,其中主导菌种是Thauerasp.MZ1T,Thaueraaminoaromatica,Thaueraphenylacetica。因此,亚硝氮积累型反硝化菌富集成功。
综上所述,本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效,而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下,对上述实施例进行修饰或改变。因此,举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变,仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌用的培养基,其特征在于,所述培养基包括:
0.1~1.0g·L-1硫酸铵、0.01~0.1g·L-1磷酸二氢钠、0.1~1.3g·L-1氯化钙、0.1~0.6g·L-1七水硫酸镁、0.3~2ml·L-1微量元素、碳酸氢钠、硝酸钠、以及醋酸钠;
其中,添加所述硝酸钠和所述醋酸钠,以使所述培养基的COD/NO3 --N处于1.5-2.5的范围内;
添加所述碳酸氢钠,以使所述培养基的初始pH处于8.5-9.0的范围内。
2.根据权利要求1所述的从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌用的培养基,其特征在于,基于所述微量元素的含量为0.3~2ml·L-1计,所述微量元素包括:
6~16.0g·L-1乙二胺四乙酸二钠、0.7~2.3g·L-1六水氯化铁、0.1~0.4g·L-1七水硫酸锌、0.1~0.45g·L-1六水氯化钴、0.1~0.3g·L-1四水氯化锰、0.01~0.07g·L-1五水硫酸铜、0.01~0.1g·L-1二水钼酸钠、0.1~0.4g·L-1碘化钾、0.1~0.40g·L-1硼酸。
3.一种从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法,其特征在于,所述驯化方法包括:
S1:提供一培养基,将所述活性污泥接种至发酵罐中,并加入所述培养基;
S2:密闭所述发酵罐,缺氧搅拌;
S3:测定所述发酵罐中硝氮和亚硝氮浓度,计算亚硝氮积累率;
S4:判断所述亚硝氮积累率是否大于80%;
S5:如果否,排泥并更换所述培养基,再次返回步骤S2;
S6:如果是,取出所述活性污泥进行宏基因组测序,鉴定出所述反硝化菌;
其中,所述亚硝氮积累率为所述亚硝氮的积累浓度与所述硝氮消耗浓度的百分之比;
所述培养基包括:
0.1~1.0g·L-1硫酸铵、0.01~0.1g·L-1磷酸二氢钠、0.1~1.3g·L-1氯化钙、0.1~0.6g·L-1七水硫酸镁、0.3~2ml·L-1微量元素、碳酸氢钠、硝酸钠、以及醋酸钠;
其中,添加所述硝酸钠和所述醋酸钠,以使所述培养基的COD/NO3 --N处于1.5-2.5的范围内;
添加所述碳酸氢钠,以使所述培养基的初始pH处于8.5-9.0的范围内。
4.根据权利要求3所述的从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法,其特征在于,所述步骤S1中,所述活性污泥选自城市污水厂的污泥。
5.根据权利要求3或4所述的从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法,其特征在于,所述步骤S1中,所述培养基的添加量大于所述发酵罐体积的4/5,且所述培养基使所述活性污泥的浓度处于2.5-3.5gVSS L-1的范围内。
6.根据权利要求3所述的从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法,其特征在于,所述步骤S2中,所述缺氧搅拌的速度为80-150rpm,且所述缺氧搅拌的终止时间点为在所述亚硝氮浓度达到峰值之后,和所述硝氮浓度低于2.5mg L-1之前。
7.根据权利要求3所述的从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法,其特征在于,所述步骤S4中,所述亚硝氮积累率在10~15天内所述亚硝氮积累率的标准偏差小于5%。
8.根据权利要求3所述的从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法,其特征在于,所述步骤S5中,所述排泥的过程包括:每天的总排泥量为所述发酵罐反应液总体积与污泥龄的比值,所述污泥龄为15-20天。
9.根据权利要求3或8所述的从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法,其特征在于:所述步骤S5中,所述培养基更换比为所述发酵罐反应液总体积的40-60%。
10.根据权利要求3所述的从活性污泥中定向富集亚硝氮积累型反硝化菌的驯化方法,其特征在于:所述步骤S5中,所述宏基因组测序深度大于6Gb/样品,所述反硝化菌为以Thaueraaminoaromatica,Thaueraphenylacetica,Thaueraterpenica,Thauerasp.DNT-1,Thauerasp.MZ1T为代表的亚硝氮积累型反硝化菌。
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