CN111821055A - 一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法，属于节肢动物解剖学技术领域。本解剖过程均在体视显微镜下进行，采用从背部开始解剖的方法，首先拔去步足，保留鳌肢，获得连有鳌肢的部分毒腺，再切开鳌肢，将鳌肢剔除，最后获得完整的毒腺。此方法可以快速判定找到毒腺的位置，同时最大程度保持了毒腺的完整性，且整个过程仅需约5分钟，大幅度地缩短了解剖所用时间，可减少实验材料的耗费，有效避免了长时间处理样本带来的不必要的污染及降解，为后续毒腺理化性质及致毒机理研究所需实验材料提供了良好的技术支撑。
Description
技术领域
本发明属于节肢动物解剖学技术领域，具体涉及一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法。
背景技术
蜘蛛属节肢动物门(Arthropoda)蛛形纲(Arachnida)蜘蛛目(Araneae或Araneida)。蜘蛛身体分为头胸部和腹部，两者之间有腹柄分隔。鳌肢分为两节，基部一节短粗，末端的节具爪，称为鳌爪。鳌肢内部存在毒腺，毒腺的前端通过一段导管与鳌爪相连。蜘蛛毒腺是球状器官，毒腺外被螺旋状的横纹肌包围，当横纹肌收缩时释放毒液。蜘蛛在捕食猎物时鳌爪刺破猎物的体壁，毒腺分泌毒液，可麻痹猎物或致其死亡。同时蜘蛛对其注入一种产生于中肠的液体消化酶，使猎物肢体和内脏化为液体，蜘蛛在特化的吸胃协助下将猎物吸入体内。
蜘蛛是各种生态系统中害虫的关键捕食性天敌类群之一，是物种丰富度和群落健康程度的重要指示类群。随着转基因作物的研究与推广，相应农田害虫的种类和数量也开始增加，蜘蛛作为捕食性天敌，与害虫的生物防治密切相关。近年来分子水平上研究蜘蛛，将蜘蛛毒素的毒理活性应用于转基因植物抗虫育种、医药研究等方面，已成为蜘蛛研究的一个热点。快速并准确地获得完整的毒腺样本，是研究蜘蛛毒腺的生理功能的前提，可为研究蜘蛛的毒性、捕食猎物的机制作铺垫，并在进一步研究蜘蛛毒素的成分及其生理药理功能多样性方面提供了基础。
蜘蛛解剖是研究蜘蛛内部结构的重要技术。由于常见蜘蛛个体相对较小，螯肢细短，活体采毒较为困难，常规的毒腺解剖方法通常将捕捉后的蜘蛛置于75％乙醇溶液中保存或取活体蜘蛛直接进行解剖，但经过多次试验发现，用乙醇溶液保存蜘蛛时间过长时蜘蛛体液会肌肉化，并不能良好观察其形态，也无法进行后续毒素的提取；取活体蜘蛛无法控制蜘蛛的活动，导致解剖结果并不理想。以上常见方法耗时长，且难以获得完整的毒腺。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法。本发明采用改良优化的毒腺解剖法，在获得完整毒腺样本的同时减少了常规解剖方法所用的时间，能将整个解剖过程控制在五分钟，因此能尽量避免因长时间处理样本带来的不必要的污染及降解，也可减少实验材料的耗费。同时为研究蜘蛛毒害、捕食猎物的机制作出铺垫，并在进一步研究蜘蛛毒腺毒素的成分及其生理药理功能多样性方面作出了形态解剖方面的基础。
本发明提供一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法，采用从背部开始解剖的方法，首先拔去步足，保留鳌肢，获得连有鳌肢的部分毒腺，再切开鳌肢，将鳌肢剔除，最后获得完整的毒腺。
作为优选，包括以下步骤：
(1)将冻死的蜘蛛取出置于超净操作台上，并用75％-80％酒精擦拭蜘蛛体表；
(2)再将蜘蛛置于无菌培养皿中，加入质量分数为0.067％NaCl，淹没蜘蛛；把蜘蛛的背面朝上，腹面朝下，去除所有步足，保留鳌肢；
(3)用粗头镊子夹住蜘蛛头胸部，用尖头镊子夹住蜘蛛鳌肢将鳌肢外部的毒腺部分迅速且尽量轻柔地拽出；
(4)拽出后用尖头镊子夹住鳌肢末端，用解剖刀从鳌肢末端开始按“T”字型或者“丨”字型剖开鳌肢，将鳌肢内部的毒腺部分小心剥离出来，立即置于装有质量分数为0.067％的NaCl溶液的培养皿中；
(5)去除多余的相连组织，得到干净且完整的蜘蛛毒腺。
作为优选，步骤(4)中，若蜘蛛的鳌肢末端粗大，向尖端逐渐变细，则采用“T”字型剖开鳌肢：先在鳌肢末端切“一”，再由鳌肢末端向尖端切“丨”，然后一手用镊子夹住鳌肢末端，一手用解剖刀从鳌肢尖端的“丨”开始剖开鳌肢，将鳌肢内部的毒腺部分小心剥离出来。
作为优选，步骤(4)中，若蜘蛛的鳌肢末端粗化程度不明显，则采用“丨”字型剖开鳌肢：由鳌肢末端向尖端切“丨”，直接将鳌肢内部的毒腺部分小心剥离出来。
作为优选，步骤(1)中，所述酒精的浓度为75％。
作为优选，所述的蜘蛛的种类选自如下的任一种：狼蛛科、蟹蛛科或园蛛科。
本发明的方法适用于以下蜘蛛种类的任意一种：狼蛛科(Lycosidae)的星豹蛛(Pardosa astrigera)、蟹蛛科(Thomisidae)的三突花蛛(Misumenops tricuspidatus)、园蛛科(Araneidae)的大腹园蛛(Araneus ventricosus)。
本发明以质量分数为0.067％的NaCl溶液作为操作液，使用乙醇溶液操作时间过长时蜘蛛体液会肌肉化，不利于进一步利用材料进行理化性质的研究，同时按“T”字型剖开鳌肢，避免由于鳌肢内毒腺小管与毒腺相连而难以剥离；本发明方法可以快速判定找到毒腺的位置，同时最大程度保持了毒腺的完整性，整个解剖过程只需约5分钟，大幅度地缩短了解剖所用时间，可减少实验材料的耗费，有效避免了长时间处理样本带来的不必要的污染及降解，为后续毒腺理化性质的研究和害虫的生物防治等方面的研究提供了良好的实验材料基础。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为采用本方法得到的三突花蛛完整毒腺的图片。
图2为采用本方法得到的星豹蛛完整毒腺的图片。
图3为采用本方法得到的大腹园蛛完整毒腺的图片。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均购自常规生化试剂公司。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例1
本实施例采用的蜘蛛为蟹蛛科(Thomisidae)的三突花蛛(Misumenopstricuspidatus)。
本发明的一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法步骤如下：
1.材料和试剂：无菌培养皿，75％酒精，质量分数为0.067％NaCl溶液。
2.仪器和工具：体视显微镜，粗头镊子，尖头镊子，解剖刀。
3.操作步骤：
(1)将置于-80℃冰箱冻死的蜘蛛置于超净操作台上，保持其完整性，用灭菌的脱脂棉蘸取75％酒精后擦拭蜘蛛体表，重复3-5次，来避免异源污染；
(2)再将蜘蛛置于无菌培养皿中，倒入质量分数为0.067％NaCl操作液，淹没蜘蛛；在体视显微镜下把蜘蛛的背面朝上，腹面朝下，去除所有步足，保留鳌肢；
(3)用粗头镊子夹住蜘蛛头胸部，用另一只尖头镊子夹住其鳌肢将鳌肢外部的毒腺部分迅速且尽量轻柔地拽出；
(4)三突花蛛体壁绿色呈透明状，鳌肢比较短小且体壁较星豹蛛和大腹园蛛柔软。拽出后用尖头镊子夹住鳌肢末端，由于鳌肢末端粗化程度不明显，在末端用解剖刀划开“一”的意义不大，所以用解剖刀从鳌肢末端开始按“丨”字型剖开鳌肢：根据毒腺在鳌肢内的形态变化是由毒腺末端向鳌肢内侧逐渐变细，所以由鳌肢末端向尖端切“丨”，因三突花蛛体壁较软，所以可直接将鳌肢内部的毒腺部分小心剥离出来，然后立即置于装有质量分数为0.067％NaCl溶液的培养皿中；
(5)在体视显微镜下去除多余的相连组织，得到干净且完整的蜘蛛毒腺。整个解剖过程平均仅需5分钟。
实施例2
本实施例采用的蜘蛛为狼蛛科(Lycosidae)的星豹蛛(Pardosa astrigera)。
本发明的一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法步骤如下：
1.材料和试剂：无菌培养皿，75％酒精，质量分数为0.067％NaCl溶液。
2.仪器和工具：体视显微镜，粗头镊子，尖头镊子，解剖刀。
3.操作步骤：
(1)将于-80℃冰箱冻死的蜘蛛置于超净操作台上，保持其完整性，用灭菌的脱脂棉蘸取75％酒精后擦拭蜘蛛体表，重复3-5次，来避免异源污染；
(2)再将蜘蛛置于无菌培养皿中，倒入质量分数为0.067％NaCl操作液，淹没蜘蛛；在体视显微镜下把蜘蛛的背面朝上，腹面朝下，去除所有步足，保留鳌肢；
(3)用粗头镊子夹住蜘蛛头胸部，用另一只尖头镊子夹住其鳌肢将鳌肢外部的毒腺部分迅速且尽量轻柔地拽出；
(4)拽出后用尖头镊子夹住鳌肢末端，用解剖刀从鳌肢末端开始按“T”字型剖开鳌肢：由于星豹蛛鳌肢末端粗大，向尖端逐渐变细，在末端用解剖刀划“一”有利于更容易地取出毒腺。鳌肢末端开始时，根据毒腺在鳌肢内的形态变化是由毒腺末端向鳌肢内侧逐渐变细，因此先在鳌肢末端切“一”，再由鳌肢末端向尖端切“丨”，然后一手用镊子夹住鳌肢末端，一手用解剖刀从鳌肢尖端的“丨”开始剖开鳌肢，将鳌肢内部的毒腺部分小心剥离出来。然后立即置于装有质量分数为0.067％NaCl溶液的培养皿中，采用“T”字型剖开鳌肢能够避免由于鳌肢内毒腺小管与毒腺相连难以剥离；
(5)在体视显微镜下去除多余的相连组织，得到干净且完整的蜘蛛毒腺。整个解剖过程平均仅需5分钟。
实施例3
本实施例采用的蜘蛛为园蛛科(Araneidae)的大腹园蛛(Araneus ventricosus)。
本发明的一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法步骤如下：
1.材料和试剂：无菌培养皿，75％酒精，质量分数为0.067％NaCl溶液。
2.仪器和工具：体视显微镜，粗头镊子，尖头镊子，解剖刀。
3.操作步骤：
(1)将于-80℃冰箱冻死的蜘蛛置于超净操作台上，保持其完整性，用灭菌的脱脂棉蘸取75％酒精后擦拭蜘蛛体表，重复3-5次，来避免异源污染；
(2)再将蜘蛛置于无菌培养皿中，倒入质量分数为0.067％NaCl操作液，淹没蜘蛛；在体视显微镜下把蜘蛛的背面朝上，腹面朝下，去除所有步足，保留鳌肢；
(3)用粗头镊子夹住蜘蛛头胸部，用另一只尖头镊子夹住其鳌肢将鳌肢外部的毒腺部分迅速且尽量轻柔地拽出；
(4)大腹园蛛个体偏大，鳌肢较粗且体壁较星豹蛛和三突花蛛稍坚韧。同三突花蛛，大腹园蛛鳌肢末端较细，所以也采用“丨”字型法。拽出后用尖头镊子夹住鳌肢末端，用解剖刀从鳌肢末端开始按“丨”字型剖开鳌肢：根据毒腺在鳌肢内的形态变化是由毒腺末端向鳌肢内侧逐渐变细，由鳌肢末端向尖端切“丨”，用解剖刀将毒腺剥离出来，然后立即置于装有质量分数为0.067％NaCl溶液的培养皿中；
(5)在体视显微镜下去除多余的相连组织，得到干净且完整的蜘蛛毒腺。整个解剖过程平均仅需5分钟。
对比例1
本对比例采用的蜘蛛为星豹蛛。
1.材料和试剂：无菌培养皿，75％酒精。
2.仪器和工具：体视显微镜，尖头镊子。
3.操作步骤：
(1)将于75％酒精中保存的已死亡蜘蛛置于超净操作台上，保持其完整性，用灭菌的脱脂棉蘸取75％酒精后擦拭蜘蛛体表，重复3-5次，来避免异源污染；
(2)再将蜘蛛置于无菌培养皿中，倒入质量分数为0.067％NaCl操作液，淹没蜘蛛；在体视显微镜下把蜘蛛的背面朝上，腹面朝下，去除所有步足，保留鳌肢；
(3)用粗头镊子夹住蜘蛛头胸部，用另一只尖头镊子夹住其鳌肢将鳌肢外部的毒腺部分迅速且尽量轻柔地拽出；
(4)可观察到鳌肢末端连有部分肌肉组织，鳌肢色泽暗淡变脆易于剥离，用尖头镊子一点点将外骨骼剥离，露出由肌肉组织所包围的毒腺，肌肉组织呈淡黄色，且将毒腺包裹得十分严密，难以完整地剥离出毒腺。这个过程虽然不需要对鳌肢进行再解剖，但由于经酒精浸泡，蜘蛛体液全部肌肉化，且紧密包裹毒腺，使得毒腺分离难以继续进行下去。
对比例2
本对比例采用的蜘蛛为星豹蛛。
1.材料和试剂：无菌培养皿，75％酒精，质量分数为0.067％NaCl溶液。
2.仪器和工具：体视显微镜，粗头镊子，尖头镊子，解剖刀。
3.操作步骤：
(1)将于-80℃冰箱冻死的蜘蛛置于超净操作台上，保持其完整性，用灭菌的脱脂棉蘸取75％酒精后擦拭蜘蛛体表，重复3-5次，来避免异源污染；
(2)再将蜘蛛置于无菌培养皿中，倒入质量分数为0.067％NaCl操作液，淹没蜘蛛；在体视显微镜下把蜘蛛的背面朝上，腹面朝下，去除所有步足，保留鳌肢；
(3)用粗头镊子夹住蜘蛛头胸部，用另一只尖头镊子夹住其鳌肢将鳌肢外部的毒腺部分迅速且尽量轻柔地拽出；
(4)一手用尖头镊子夹住鳌肢中部处，一手用解剖刀将包裹毒腺的外骨骼从鳌肢末端小心拨离开，露出毒腺组织，稍一用力，毒腺也会被解剖针挑破，有毒液渗出。本方法采用直接剥除外骨骼的方法，但由于外骨骼和毒腺距离过近，剥离时很容易将毒腺挑破，不能保证毒腺的完整性。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法，其特征在于：采用从背部开始解剖的方法，首先拔去步足，保留鳌肢，获得连有鳌肢的部分毒腺，再切开鳌肢，将鳌肢剔除，最后获得完整的毒腺。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将冻死的蜘蛛取出置于超净操作台上，并用75％-80％酒精擦拭蜘蛛体表；
(2)再将蜘蛛置于无菌培养皿中，加入质量分数为0.067％NaCl，淹没蜘蛛；把蜘蛛的背面朝上，腹面朝下，去除所有步足，保留鳌肢；
(3)用粗头镊子夹住蜘蛛头胸部，用尖头镊子夹住蜘蛛鳌肢将鳌肢外部的毒腺部分迅速且尽量轻柔地拽出；
(4)拽出后用尖头镊子夹住鳌肢末端，用解剖刀从鳌肢末端开始按“T”字型或者“丨”字型剖开鳌肢，将鳌肢内部的毒腺部分小心剥离出来，立即置于装有质量分数为0.067％的NaCl溶液的培养皿中；
(5)去除多余的相连组织，得到干净且完整的蜘蛛毒腺。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，若蜘蛛的鳌肢末端粗大，向尖端逐渐变细，则采用“T”字型剖开鳌肢：先在鳌肢末端切“一”，再由鳌肢末端向尖端切“丨”，然后一手用镊子夹住鳌肢末端，一手用解剖刀从鳌肢尖端的“丨”开始剖开鳌肢，将鳌肢内部的毒腺部分小心剥离出来。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，若蜘蛛的鳌肢末端粗化程度不明显，则采用“丨”字型剖开鳌肢：由鳌肢末端向尖端切“丨”，直接将鳌肢内部的毒腺部分小心剥离出来。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述酒精的浓度为75％。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于：所述的蜘蛛的种类选自如下的任一种：狼蛛科、蟹蛛科或园蛛科。
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| CN202010802016.XA CN111821055A (zh) | 2020-08-11 | 2020-08-11 | 一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法 |
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| CN111821055A true CN111821055A (zh) | 2020-10-27 |
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| CN202010802016.XA Pending CN111821055A (zh) | 2020-08-11 | 2020-08-11 | 一种快速准确解剖蜘蛛毒腺的方法 |
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| CN (1) | CN111821055A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1265828A (zh) * | 1999-03-08 | 2000-09-13 | 段汉锦 | 毒蜘蛛活体的取毒方法 |
| US20060242734A1 (en) * | 2004-11-04 | 2006-10-26 | King Glenn F | Insecticidal polypeptides and methods of use thereof |
| CN107822670A (zh) * | 2017-09-22 | 2018-03-23 | 湖北大学 | 一种快速准确的蜘蛛肠道解剖方法 |
| CN109820612A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-05-31 | 河南农业大学 | 一种针对冷冻致死且脑未损伤的鳞翅目昆虫蛹脑解剖方法 |
| CN110074893A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-08-02 | 安徽农业大学 | 一种快速分离小菜蛾幼虫完整肠道的方法 |
-
2020
- 2020-08-11 CN CN202010802016.XA patent/CN111821055A/zh active Pending
Patent Citations (5)
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| 罗育发等: "蜘蛛毒腺形态解剖的初步研究", 《激光生物学报》 * |
| 罗育发等: "蜘蛛毒腺形态解剖的初步研究", 《激光生物学报》, vol. 12, no. 02, 25 April 2003 (2003-04-25), pages 132 - 136 * |
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