CN111759880A - 淫羊藿药材提取物及其在预防或治疗冠状病毒中的应用 - Google Patents

淫羊藿药材提取物及其在预防或治疗冠状病毒中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111759880A
CN111759880A CN202010519527.0A CN202010519527A CN111759880A CN 111759880 A CN111759880 A CN 111759880A CN 202010519527 A CN202010519527 A CN 202010519527A CN 111759880 A CN111759880 A CN 111759880A
Authority
CN
China
Prior art keywords
epimedin
coronavirus
icariside
virus
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010519527.0A
Other languages
English (en)
Inventor
叶德晓
卢宇靖
周金林
林丽薇
林育成
李慧灵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Golden Health Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Golden Health Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Golden Health Biotechnology Co ltd filed Critical Golden Health Biotechnology Co ltd
Priority to CN202010519527.0A priority Critical patent/CN111759880A/zh
Publication of CN111759880A publication Critical patent/CN111759880A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/29Berberidaceae (Barberry family), e.g. barberry, cohosh or mayapple
    • A61K36/296Epimedium
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/02Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/04Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom
    • A01N43/14Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings
    • A01N43/16Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings with oxygen as the ring hetero atom
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/125Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/335Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/04Immunostimulants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明公开了一种淫羊藿药材提取物,包括朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷‑Ⅱ、淫羊藿次苷‑Ⅰ、淫羊藿素中的任意一种或多种;所述淫羊藿药材提取物用于结合冠状病毒的S蛋白受体结合区域或人受体蛋白ACE2,能有效抑制冠状病毒进入细胞内导致的感染,也能抑制病毒核酸的复制,阻止已感染病毒的扩增;淫羊藿药材提取物对人体无毒副作用,可用于日常或医用提高身体免疫力、预防或治疗冠状病毒感染。本发明还公开了一种淫羊藿药材提取物在制备预防或治疗冠状病毒产品中的应用,可实现冠状病毒、特别是新型冠状病毒的早期预防,也可用于治疗已感染冠状病毒带来的病症,减少病毒感染带来的危害,具有较好的应用前景。

Description

淫羊藿药材提取物及其在预防或治疗冠状病毒中的应用
技术领域
本发明涉及中药材的应用领域,尤其涉及一种淫羊藿药材提取物及其在预防或治疗冠状病毒中的应用。
背景技术
病毒是多种流行性疾病的主要发病因素,在人类历史上已经引发了多次大流行性的疾病,例如西班牙大流感、疯牛病、非典型性肺炎、主要在家禽之间传播的禽流感、中东呼吸综合征以及在全球爆发的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。其中,COVID-19目前尚无特效药,西医抗新冠病毒药物的安全性和有效性均在考察和试验中。
中医药具有五千多年的历史,通过几千年与疫病的斗争,已经积累了丰富的经验。新型冠状病毒肺炎爆发当前,实施临床救治和基础研究同步,药物和疫苗并重,中医西医协作,优势互补;全疗程、全方位发挥中医药作用是极佳的医疗方案。目前中国多地用中医药治疗新型冠状病毒感染获得了较高的临床治愈率,治疗经济性较好。“上工治未病,中工治欲病,下工治已病”,用中医药进行疾病的预防更是应高度重视的研究领域。
冠状病毒呈球形,表面有突起,基因组为单链RNA,其基因组编码棘突蛋白(Spikeprotein,S)、包膜蛋白(Envelope protein,E)、膜蛋白(Membrane protein,M)和核蛋白(Nuceloprotein,N)。其中,S蛋白是冠状病毒非常重要的表面蛋白,与病毒的传染能力密切相关,包含两个亚基,S1和S2。S1包含受体结合域(RBD),负责细胞识别受体,S2包含膜融合过程中的必需元件。N蛋白在冠状病毒中含量丰富,是一种高度免疫原性蛋白,参与基因组复制和细胞信号通路调节,常被作为冠状病毒诊断的检测工具。ACE2全称为血管紧张素转化酶2,是人体内一种参与血压调节的蛋白,同时与冠状病毒侵染人体细胞有关,在肺、心脏、肾脏和肠道广泛存在。NL63-CoV、SARS-CoV、SARS-CoV-2等病毒通过S蛋白中的RBD区域与细胞表面受体ACE2结合附着于宿主细胞,然后被酸依赖的蛋白酶进行两次切割,随后融合肽插入宿主细胞膜并与之融合,将核酸分子释放进入胞内,完成侵染过程。因此,S蛋白与受体蛋白相互作用的强弱是决定冠状病毒感染宿主能力强弱的主要因素。
本发明将中医药技术与现代精准医学技术相结合,针对新冠病毒特点,研发出新的用于防治冠状病毒、特别是新型冠状病毒的中药产品,加快对中药方剂对新冠病毒及其它病毒的疗效评价,对疾病的早期预防、减少病毒感染危害、保障人民身体健康具有重要意义。
发明内容
为了克服现有技术的不足,本发明的目的之一在于提供一种淫羊藿药材提取物,用于结合冠状病毒的S蛋白受体结合区域或人受体蛋白ACE2,有效抑制病毒进入细胞内导致的感染,抑制病毒核酸的复制,阻止已感染病毒的扩增;对人体无毒副作用,可用于日常或医用提高身体免疫力、防治冠状病毒。
本发明的目的之二在于提供一种淫羊藿药材提取物在制备预防或治疗冠状病毒产品中的应用。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现:
一种淫羊藿药材提取物,包括朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅱ、淫羊藿次苷-Ⅰ、淫羊藿素中的任意一种或多种;
所述淫羊藿药材提取物用于结合冠状病毒的S蛋白受体结合区域或人受体蛋白ACE2。
优选地,所述淫羊藿药材提取物,包括朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅱ、淫羊藿次苷-Ⅰ、淫羊藿素的组合。
进一步地,所述的淫羊藿药材提取物,包括按重量比计的如下组分:朝藿定A 0.3-0.8份、朝藿定B 0.3-0.8份、朝藿定C 0.3-0.8份、淫羊藿苷2.3-2.8份、淫羊藿次苷-Ⅱ1.5-2.5份、淫羊藿次苷-Ⅰ1.5-2.5份、淫羊藿素1.5-2.5份。
优选地,所述淫羊藿药材提取物,包括按重量比计的如下组分:朝藿定A 0.5份、朝藿定B 0.5份、朝藿定C 0.5份、淫羊藿苷2.5份、淫羊藿次苷-Ⅱ2份、淫羊藿次苷-Ⅰ2份、淫羊藿素2份。
实现本发明的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到:
一种淫羊藿药材提取物在制备预防或治疗冠状病毒产品中的应用。
进一步地,所述产品包括保健食品、消杀产品、中药复方制剂。
所述产品的剂型为口服剂型或非肠道给药剂型。
所述口服剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液、袋泡剂中的任一种。
进一步地,所述冠状病毒包括NL63-CoV、MERS、SARS-CoV、SARS-CoV-2。
相比现有技术,本发明的有益效果在于:
1、本发明淫羊藿药材的提取物具有与冠状病毒S蛋白或人受体蛋白ACE2结合的性能,可以抑制冠状病毒S蛋白受体结合区域(RBD)(以下检测S-RBD蛋白)与人受体蛋白ACE2结合,有效抑制病毒进入细胞内导致的感染,达到预防冠状病毒感染的目的。同时,淫羊藿药材提取物也能抑制病毒核酸的复制,阻止已感染病毒的扩增,对已感染病毒的细胞也起到较好的抗病毒作用。本发明研究了淫羊藿药材的主要药效物质与冠状病毒的作用机理,为中药材在抗病毒领域中的应用提供了理论基础,为目前流行的COVID-19优化临床方案和选择用药提供科学依据,并为开展中药方剂高效活性物质研究,以及药物筛选、临床用药乃至新药研发提供技术理论支撑。
2、本申请的淫羊藿药材提取物中的每一种成分提纯后单独作用即具有较好的防治冠状病毒感染的功效,将各成分进行组合后还具有协同增效的作用,防治效果更明显,疗效确切、机理明确。因此,可将本发明淫羊藿药材提取物的各组分提纯后单独使用,或按照本发明配方组合后使用,也可将含有本发明组分的中药材淫羊藿药材经炮制等处理后直接使用,用于日常或医用提高身体免疫力,预防或治疗冠状病毒感染及感染带来的其他症状,实现冠状病毒的早期预防,减少病毒感染带来的危害,具有较好的应用前景。
附图说明
图1为朝藿定A与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白结合的传感图;
图2为朝藿定B与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白结合的传感图;
图3为朝藿定C与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白结合的传感图;
图4为淫羊藿苷与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白结合的传感图;
图5为淫羊藿次苷-Ⅱ与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白结合的传感图;
图6为淫羊藿次苷-Ⅰ与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白结合的传感图;
图7为淫羊藿素与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白结合的传感图;
图8为朝藿定A与人受体蛋白ACE2结合的传感图;
图9为朝藿定B与人受体蛋白ACE2结合的传感图;
图10为朝藿定C与人受体蛋白ACE2结合的传感图;
图11为淫羊藿苷与人受体蛋白ACE2结合的传感图;
图12为淫羊藿次苷-Ⅱ与人受体蛋白ACE2结合的传感图;
图13为淫羊藿次苷-Ⅰ与人受体蛋白ACE2结合的传感图;
图14为淫羊藿素与人受体蛋白ACE2结合的传感图;
图15为实施例3淫羊藿药材提取物和人受体蛋白ACE2竞争性结合SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白的传感图。
具体实施方式
下面,结合附图以及具体实施方式,对本发明做进一步描述,需要说明的是,在不相冲突的前提下,以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
一种淫羊藿药材提取物,包括朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅱ、淫羊藿次苷-Ⅰ、淫羊藿素中的任意一种或多种;
淫羊藿药材提取物的上述成分均可用于结合冠状病毒的S蛋白受体结合区域或人受体蛋白ACE2。
作为进一步地优选方案,淫羊藿药材提取物包括朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅱ、淫羊藿次苷-Ⅰ、淫羊藿素的组合。进一步地,包括按重量比计的如下组分:朝藿定A 0.3-0.8份、朝藿定B 0.3-0.8份、朝藿定C 0.3-0.8份、淫羊藿苷2.3-2.8份、淫羊藿次苷-Ⅱ1.5-2.5份、淫羊藿次苷-Ⅰ1.5-2.5份、淫羊藿素1.5-2.5份。
一种淫羊藿药材提取物在制备预防或治疗冠状病毒产品中的应用。产品对人体无毒副作用,可以达到冠状病毒感染的日常或医用防治目的,在医药和食品领域均具有良好的应用前景。这里的冠状病毒包括NL63-CoV、MERS、SARS-CoV、SARS-CoV-2。
产品包括保健食品、消杀产品、中药复方制剂,按药剂学方法,可以将本发明的产品中加入常规辅料按照常规方法制备成多种临床剂型,包括口服剂型或非肠道给药的剂型,其中口服剂型可以为胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液或袋泡剂中的任意一种。
也可向本发明的药食两用中药制剂中加入常规的保健食品赋形剂,如溶剂、崩解剂、矫昧剂、防腐剂、着色剂等。
本发明淫羊藿药材提取物成分是通过表面等离子共振技术(SPR)筛选出来的。通过快速制备病毒S-RBD蛋白和ACE2两种蛋白,模拟冠状病毒入侵人体呼吸道细胞的分子机理过程,实现高效筛选具有冠状病毒防治功效的中药方剂和中药中的稀有活性成分。然后通过运用可靠的评价方式,以SARS-CoV-2病毒感染Vero E6细胞株作为实验模型,证实淫羊藿药材提取物的成分在体外细胞模型中存在一定的抑制病毒进入细胞内部及病毒的核酸复制的能力,进而为得到疗效确切、机理明确的防治SARS-CoV-2病毒感染导致的疾病的中药方剂或药物提供基础。
以下描述的各实施例所用的淫羊藿药材提取物、朝藿定A溶液、朝藿定B溶液、朝藿定C溶液、淫羊藿苷溶液、淫羊藿次苷-Ⅱ溶液、淫羊藿次苷-Ⅰ溶液、淫羊藿素溶液,可以通过经本领域常规方法从淫羊藿药材中提取、纯化得到的成分配制而成,也可以通过市售的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅱ、淫羊藿次苷-Ⅰ、淫羊藿素的标准品配制而成。
实施例1
淫羊藿药材提取物的组分与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白的作用分析
(1)SPR芯片表面预处理
利用共价结合将SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白偶联在酯化的芯片表面。选择氨基共价偶联,具体包括以下步骤:
第一步,芯片活化:pH 4.5-5条件下使用交联剂EDC/NHS使芯片表面酯化;
第二步,配体偶联:将蛋白纯度在90%以上的SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白偶联到芯片表面;
第三步,封闭:用1M pH 8.5乙醇胺盐酸盐封闭芯片上多余的有活性的羧基。
对照表面的设计:SPR芯片分1、2、3、4四个Flow Cell通道,一般1、2通道配对使用(1通道作为参比),3、4通道配对使用(3通道作为参比),参比通道对照表面可设计成空白表面、活化-封闭无配体固定的表面或偶联了伪装配体的表面。本实施例的参比通道对照表面选择活化-封闭无配体固定的方式来做削减对照,当对进样过程进行分析时,对照表面的削减可用来消除因样品溶解缓冲液与仪器运行缓冲液成分不同所造成的容积差及一些非特异性结合信号。
(2)进样
用运行缓冲液(50mM磷酸盐,100mM氯化钠,0.01%Tween-20,pH 7.4)分别稀释朝藿定A溶液、朝藿定B溶液、朝藿定C溶液、淫羊藿苷溶液、淫羊藿次苷-Ⅱ溶液、淫羊藿次苷-Ⅰ溶液、淫羊藿素溶液,至浓度分别为50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM、1.5625μM、0.78125μM,然后进行进样。进样时间为1.5min,进样流速30μl/min,蛋白解离时间为1min。
(3)芯片再生
将芯片上的残留蛋白用再生缓冲液(10mM HEPES,150mM NaCl,0.01%Tween 20,pH 7.4))洗脱下来,时间为60s,流速设为30μl/min。
(4)数据分析
采用Biacore T200评价软件(Version 3.1)分析生成传感图,如图1-7所示。
图1-7依次为朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅱ、淫羊藿次苷-Ⅰ、淫羊藿素与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白结合的传感图,图1-7中,曲线对应的样本浓度自上至下依次为50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM、1.5625μM、0.78125μM。
通过全局拟合,即采用相同的动力学参数对不同分析物浓度产生的SPR响应曲线进行同步拟合,可以获得更加准确的拟合结果。将数据用分析软件进行拟合处理,计算出淫羊藿药材提取物中的上述七种成分与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白相互作用的亲和力常数KD。其中,朝藿定A与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白作用的KD值为2.69×10-6mol/L;朝藿定B与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白作用的KD值为2.036×10-6mol/L;朝藿定C与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白作用的KD值为2.874×10-6mol/L;淫羊藿苷与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白作用的KD值为1.157×10-6mol/L;淫羊藿次苷-Ⅱ与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白作用的KD值为2.553×10-6mol/L;淫羊藿次苷-Ⅰ与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白作用的KD值为2.31×10-5mol/L;淫羊藿素与SARS-CoV-2病毒S蛋白作用的KD值为1.055×10-6mol/L。上述七种成分与SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白作用的亲和力自大至小依次是淫羊藿素、淫羊藿苷、朝藿定B、淫羊藿次苷-Ⅱ、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿次苷-Ⅰ。
根据SPR技术得到的传感图和KD值,本发明中药材淫羊藿药材提取物中的七种成分单独作用时,具有和SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白结合的能力,因而具有防治冠状病毒感染的作用,能用来制备抗病毒产品、消杀产品或者保健食品,在医药和食品领域均具有良好的应用前景。
实施例2
淫羊藿药材提取物的组分与人受体蛋白ACE2的作用分析
除SPR芯片表面预处理步骤外,其余步骤与实施例1相同,此处不再赘述。
本实施例的SPR芯片表面预处理包括:
利用共价结合将人受体蛋白ACE2偶联在酯化的芯片表面。选择氨基共价偶联,具体包括以下步骤:
第一步,芯片活化:pH 4.5-5条件下使用交联剂EDC/NHS使芯片表面酯化;
第二步,配体偶联:将蛋白纯度在90%以上的人受体蛋白ACE2偶联到芯片表面;
第三步,封闭:用1M pH 8.5乙醇胺盐酸盐封闭芯片上多余的有活性的羧基。
对照表面的设计方法与实施例1相同,此处不再赘述。
本实施例经Biacore T200评价软件(Version 3.1)分析生成的传感图如图8-14所示。图8-14依次为朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅱ、淫羊藿次苷-Ⅰ、淫羊藿素与人受体蛋白ACE2结合的传感图,其中,图中曲线对应的样本浓度自上至下依次为50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM、1.5625μM、0.78125μM。
通过全局拟合,即采用相同的动力学参数对不同分析物浓度产生的SPR响应曲线进行同步拟合,可以获得更加准确的拟合结果。将数据用分析软件进行拟合处理,计算出六种中药材成分与人受体蛋白ACE2相互作用的亲和力常数KD:朝藿定A与人受体蛋白ACE2作用的KD值为1.17×10-6mol/L;朝藿定B与人受体蛋白ACE2作用的KD值为4.783×10-6mol/L;朝藿定C与人受体蛋白ACE2作用的KD值为2.484×10-6mol/L;淫羊藿苷与人受体蛋白ACE2作用的KD值为1.08×10-5mol/L;淫羊藿次苷-Ⅱ与人受体蛋白ACE2作用的KD值为1.563×10- 4mol/L;淫羊藿次苷-Ⅰ与人受体蛋白ACE2作用的KD值为8.27×10-5mol/L;淫羊藿素与人受体蛋白ACE2作用的KD值为3.746×10-6mol/L。即:上述七种成分与人受体蛋白ACE2作用的亲和力自大至小依次是朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿素、朝藿定B、淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅰ、淫羊藿次苷-Ⅱ。
根据SPR技术得到的传感图和KD值,本发明中药材淫羊藿药材提取物中的七种成分单独作用时,具有和人受体蛋白ACE2结合的能力,因而具有防治冠状病毒感染的作用,能用来制备抗病毒产品、消杀产品或者保健食品。
实施例3
淫羊藿药材提取物、人受体ACE2蛋白竞争性结合SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白的作用分析
(1)SPR芯片表面预处理,与实施例1相同,此处不再赘述。
(2)进样
一种淫羊藿药材提取物,包括按重量比计的如下组分:朝藿定A0.5份、朝藿定B0.5份、朝藿定C 0.5份、淫羊藿苷2.5份、淫羊藿次苷-Ⅱ2份、淫羊藿次苷-Ⅰ2份、淫羊藿素2份。并用本领域常规方法检测提取物中上述组分的总浓度。
用运行缓冲液(50mM磷酸盐,100mM氯化钠,0.01%Tween-20,pH 7.4)稀释本实施例的淫羊藿药材提取物至上述组分的总浓度分别为50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM、1.5625μM、0.78125μM,将稀释后的淫羊藿药材提取物与终浓度为4.75μg/ml的ACE2蛋白混合,得到进样样本;同时,设置仅含有终浓度4.75μg/ml的ACE2蛋白溶液作为对照样本。然后进行进样,设置进样时间为200s,进样流速30μl/min,蛋白解离时间为3min。
(3)芯片再生
将芯片上的残留蛋白用再生缓冲液(10mM HEPES,150mM NaCl,0.01%Tween 20,pH 7.4))洗脱下来,时间为100s,流速设为30μl/min。
(4)数据分析
采用Biacore T200评价软件(Version 3.1)分析生成传感图,如图15所示,图中,曲线自上至下依次对应的为对照样本、25μM进样样本、50μM进样样本。
通过全局拟合,即采用相同的动力学参数对不同分析物浓度产生的SPR响应曲线进行同步拟合,可以获得更加准确的拟合结果。本实施例的中药材淫羊藿药材提取物具有抑制人受体ACE2蛋白和SARS-CoV-2病毒S-RBD蛋白结合的作用,经计算淫羊藿药材提取物中上述组分的总浓度为50μM时,对上述S-RBD蛋白与ACE2结合的抑制率达66.01%。
实施例4
淫羊藿药材提取物对SARS-CoV-2病毒的抑制作用分析
(1)淫羊藿药材提取物,分为A-H共8组,分别为:
A组:朝藿定A溶液;
B组:朝藿定B溶液;
C组:朝藿定C溶液;
D组:淫羊藿苷溶液;
E组:淫羊藿次苷-Ⅱ溶液;
F组:淫羊藿次苷-Ⅰ溶液;
G组:淫羊藿素溶液;
H组:组合物溶液,包括按重量比计的朝藿定A0.5份、朝藿定B 0.5份、朝藿定C 0.5份、淫羊藿苷2.5份、淫羊藿次苷-Ⅱ2份、淫羊藿次苷-Ⅰ2份、淫羊藿素2份。
将A-H共8组的提取液中药效成分的浓度稀释至50ppm-500ppm。
(2)将Vero E6细胞按每孔2×105种植于96孔细胞培养板,待细胞贴壁生长均匀后,换成2%FBS细胞培养基。
(3)向步骤(1)配制的不同浓度的A-H组溶液中分别加入SARS-CoV-2病毒孵育2h,然后加入到步骤(2)得到的Vero E6细胞中进行感染、培养;
对照组为:向Vero E6细胞液中加入SARS-CoV-2病毒进行感染、培养。
(4)48h后,收集细胞培养上清液,检测上清液的抗原量,以对照组的抗原量为100%,计算各组清除病毒量50%(EC50)所需的提取物浓度,结果如表1所示。
实施例5
淫羊藿药材提取物提升细胞免疫SARS-CoV-2病毒能力的作用分析
(1)淫羊藿药材提取物,分为A-H共8组,与实施例4相同。
(2)将Vero E6细胞按每孔2×105种植于96孔细胞培养板,待细胞贴壁生长均匀后,换成2%FBS细胞培养基。
(3)分别向细胞培养液中加入400ppm的A-H组溶液,预处理细胞2h后,再加入SARS-CoV-2病毒进行感染、培养;
对照组为:向细胞培养液中直接加入SARS-CoV-2病毒进行感染、培养,不进行预处理。
(4)48h后,收集细胞培养上清,检测上清液抗原量,以对照组的抗原量为100%,计算经不同组溶液处理后的细胞上清液中的抗原量,得到抑制率。如表1所示。
实施例6
淫羊藿药材提取物对已感染SARS-CoV-2病毒的细胞的作用
(1)淫羊藿药材提取物,分为A-H共8组,与实施例4相同。
(2)将Vero E6细胞按每孔2×105种植于96孔细胞培养板,待细胞贴壁生长均匀后,换成2%FBS细胞培养基。
(3)向细胞培养液中加入SARS-CoV-2病毒,孵育1h后,移除培养基上清,得到感染SARS-CoV-2病毒的细胞;向感染SARS-CoV-2病毒的细胞中分别加入400ppm的A-J组提取液,进行孵育;
对照组为:感染SARS-CoV-2病毒的细胞培养液,不加入任何提取液,孵育。
(4)48h后,收集细胞培养上清,检测上清液抗原量,以对照组的抗原量为100%,计算经不同组溶液处理后的细胞上清液中的抗原量,得到抑制率。如表1所示。
表1淫羊藿药材提取物抗SARS-CoV-2病毒的实验结果
Figure BDA0002531452740000131
由表1可以看出,本发明淫羊藿药材提取物的组分单独作用时均具有较好的抗SARS-CoV-2的效果,各组分单独作用时之间的抑制效果差异不大,但将各组分按照特定比例进行组合后,各组分协同增效,抑制率明显提高,所需浓度也对应下降。因此,本发明的淫羊藿药材提取物能在一定程度上保护细胞免受新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的感染,并对已感染新型冠状病毒的细胞具有一定的抗病毒作用,起到辅助抗病毒及缓解症状的协同作用,是一种理想的新型冠状病毒抑制剂。
上述实施方式仅为本发明专利的优选实施方式,不能以此来限定本发明专利保护的范围,本领域的技术人员在本发明专利的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明专利所要求保护的范围。

Claims (9)

1.一种淫羊藿药材提取物,其特征在于,包括朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅱ、淫羊藿次苷-Ⅰ、淫羊藿素中的任意一种或多种;
所述淫羊藿药材提取物用于结合冠状病毒的S蛋白受体结合区域或人受体蛋白ACE2。
2.根据权利要求1所述的淫羊藿药材提取物,其特征在于,包括朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷-Ⅱ、淫羊藿次苷-Ⅰ、淫羊藿素的组合。
3.根据权利要求2所述的淫羊藿药材提取物,其特征在于,包括按重量比计的如下组分:朝藿定A 0.3-0.8份、朝藿定B 0.3-0.8份、朝藿定C 0.3-0.8份、淫羊藿苷2.3-2.8份、淫羊藿次苷-Ⅱ 1.5-2.5份、淫羊藿次苷-Ⅰ 1.5-2.5份、淫羊藿素1.5-2.5份。
4.根据权利要求3所述的淫羊藿药材提取物,其特征在于,包括按重量比计的如下组分:朝藿定A 0.5份、朝藿定B 0.5份、朝藿定C 0.5份、淫羊藿苷2.5份、淫羊藿次苷-Ⅱ 2份、淫羊藿次苷-Ⅰ 2份、淫羊藿素2份。
5.如权利要求1-4任一项所述的淫羊藿药材提取物在制备预防或治疗冠状病毒产品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述产品包括保健食品、消杀产品、中药复方制剂。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述产品的剂型为口服剂型或非肠道给药剂型。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述口服剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液、袋泡剂中的任一种。
9.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述冠状病毒包括NL63-CoV、MERS、SARS-CoV、SARS-CoV-2。
CN202010519527.0A 2020-06-09 2020-06-09 淫羊藿药材提取物及其在预防或治疗冠状病毒中的应用 Pending CN111759880A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010519527.0A CN111759880A (zh) 2020-06-09 2020-06-09 淫羊藿药材提取物及其在预防或治疗冠状病毒中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010519527.0A CN111759880A (zh) 2020-06-09 2020-06-09 淫羊藿药材提取物及其在预防或治疗冠状病毒中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111759880A true CN111759880A (zh) 2020-10-13

Family

ID=72720406

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010519527.0A Pending CN111759880A (zh) 2020-06-09 2020-06-09 淫羊藿药材提取物及其在预防或治疗冠状病毒中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111759880A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112834746A (zh) * 2021-02-19 2021-05-25 南京大学深圳研究院 一种评价抗病毒粘附的方法及应用
CN113456660A (zh) * 2021-08-02 2021-10-01 陕西师范大学 朝藿定c防治急性酒精中毒的应用
CN115894585A (zh) * 2022-12-23 2023-04-04 中国药科大学 一种淫羊藿提取物的制备方法及其淫羊藿提取物和应用

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1522754A (zh) * 2003-09-09 2004-08-25 孙群卫 抗病毒增免疫治疗性功能障碍物的萃取及制剂
CN1969870A (zh) * 2005-11-24 2007-05-30 北京奇源益德药物研究所 抗病毒复方制剂及其制备方法、质控方法和应用
CN1969871A (zh) * 2005-11-24 2007-05-30 北京奇源益德药物研究所 抗病毒复方制剂及其制备方法、质控方法和应用
CN1969952A (zh) * 2005-11-24 2007-05-30 北京奇源益德药物研究所 抗病毒中药制剂及其制备方法、质控方法和应用
CN101015590A (zh) * 2007-02-13 2007-08-15 天津生机集团有限公司 治疗鸡肾型传染性支气管炎的加味扶正解毒散及制备方法
CN101088533A (zh) * 2006-06-15 2007-12-19 北京奇源益德药物研究所 抗病毒中药制剂及其制备方法、质控方法和应用
CN101641112A (zh) * 2007-01-23 2010-02-03 同济堂药业 用于预防类固醇性骨坏死的得自淫羊藿的类黄酮馏分的新型组合
CN102008533A (zh) * 2010-12-06 2011-04-13 吉林修正药业新药开发有限公司 一种淫羊藿提取物的药用用途及制备方法
CN103181941A (zh) * 2011-12-31 2013-07-03 北京东方百奥医药开发有限公司 淫羊藿苷或淫羊藿次苷ⅱ在制备防治糖尿病视网膜病变的药物中的用途
CN106563117A (zh) * 2016-11-15 2017-04-19 傅天锡 用于治疗病毒性肺炎的药物及其方法和装置
KR20190092776A (ko) * 2018-01-31 2019-08-08 국민대학교산학협력단 메르스 코로나바이러스 헬리케이즈 nsP13의 활성을 억제하는 화합물 및 이의 용도
CN110343731A (zh) * 2019-07-25 2019-10-18 中国药科大学 一种从淫羊藿提取制备淫羊藿低糖苷组分的方法
CN110672747A (zh) * 2019-10-23 2020-01-10 劲牌生物医药有限公司 淫羊藿成分的检测方法和鉴别淫羊藿品种的方法及应用

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1522754A (zh) * 2003-09-09 2004-08-25 孙群卫 抗病毒增免疫治疗性功能障碍物的萃取及制剂
CN1969870A (zh) * 2005-11-24 2007-05-30 北京奇源益德药物研究所 抗病毒复方制剂及其制备方法、质控方法和应用
CN1969871A (zh) * 2005-11-24 2007-05-30 北京奇源益德药物研究所 抗病毒复方制剂及其制备方法、质控方法和应用
CN1969952A (zh) * 2005-11-24 2007-05-30 北京奇源益德药物研究所 抗病毒中药制剂及其制备方法、质控方法和应用
CN101088533A (zh) * 2006-06-15 2007-12-19 北京奇源益德药物研究所 抗病毒中药制剂及其制备方法、质控方法和应用
CN101641112A (zh) * 2007-01-23 2010-02-03 同济堂药业 用于预防类固醇性骨坏死的得自淫羊藿的类黄酮馏分的新型组合
CN101015590A (zh) * 2007-02-13 2007-08-15 天津生机集团有限公司 治疗鸡肾型传染性支气管炎的加味扶正解毒散及制备方法
CN102008533A (zh) * 2010-12-06 2011-04-13 吉林修正药业新药开发有限公司 一种淫羊藿提取物的药用用途及制备方法
CN103181941A (zh) * 2011-12-31 2013-07-03 北京东方百奥医药开发有限公司 淫羊藿苷或淫羊藿次苷ⅱ在制备防治糖尿病视网膜病变的药物中的用途
CN106563117A (zh) * 2016-11-15 2017-04-19 傅天锡 用于治疗病毒性肺炎的药物及其方法和装置
KR20190092776A (ko) * 2018-01-31 2019-08-08 국민대학교산학협력단 메르스 코로나바이러스 헬리케이즈 nsP13의 활성을 억제하는 화합물 및 이의 용도
CN110343731A (zh) * 2019-07-25 2019-10-18 中国药科大学 一种从淫羊藿提取制备淫羊藿低糖苷组分的方法
CN110672747A (zh) * 2019-10-23 2020-01-10 劲牌生物医药有限公司 淫羊藿成分的检测方法和鉴别淫羊藿品种的方法及应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIM: "这些中药具有直接抑制新型冠状病毒的潜在作用", 《HTTPS://WWW.GLHOSPITAL.COM/NEWS/CONTENT/ID/668/PID/43285》 *
JOSÉ ADÃO CARVALHO NASCIMENTO JUNIOR等: "SARS,MERS and SARS-CoV-2(COVID-19)treatment:a patent review", 《EXPERT OPINION ON THERAPEUTIC PATENTS》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112834746A (zh) * 2021-02-19 2021-05-25 南京大学深圳研究院 一种评价抗病毒粘附的方法及应用
CN113456660A (zh) * 2021-08-02 2021-10-01 陕西师范大学 朝藿定c防治急性酒精中毒的应用
CN115894585A (zh) * 2022-12-23 2023-04-04 中国药科大学 一种淫羊藿提取物的制备方法及其淫羊藿提取物和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wu et al. Analysis of therapeutic targets for SARS-CoV-2 and discovery of potential drugs by computational methods
Tufan et al. COVID-19, immune system response, hyperinflammation and repurposingantirheumatic drugs
Pooladanda et al. The current understanding and potential therapeutic options to combat COVID-19
Fung et al. Similarities and dissimilarities of COVID-19 and other coronavirus diseases
CN111773282A (zh) 一种药食两用的中药制剂及其应用
Torequl Islam et al. A perspective on emerging therapeutic interventions for COVID-19
Al-Horani et al. Potential anti-COVID-19 therapeutics that block the early stage of the viral life cycle: structures, mechanisms, and clinical trials
US11510896B2 (en) Antiviral compositions for the treatment of infections linked to coronaviruses
CN111759880A (zh) 淫羊藿药材提取物及其在预防或治疗冠状病毒中的应用
Cinatl Jr et al. Development of antiviral therapy for severe acute respiratory syndrome
CN116236580B (zh) 金诺芬等老药及其组合物在抗单正链rna病毒中的应用
Zhang et al. Valinomycin as a potential antiviral agent against coronaviruses: A review
Vlachakis et al. Molecular mechanisms of the novel coronavirus SARS-CoV-2 and potential anti-COVID19 pharmacological targets since the outbreak of the pandemic
CN111402968B (zh) 基于分子模拟发现山柰酚在covid-19病毒中的新用途
Gupta et al. Therapeutic approaches for SARS-CoV-2 infection
CN104244947A (zh) 用于治疗hcv的方法和组合物
Han et al. Advances and challenges in the prevention and treatment of COVID-19
Hashimoto et al. A CD4 mimic as an HIV entry inhibitor: Pharmacokinetics
Thakur et al. Exploring the magic bullets to identify Achilles’ heel in SARS-CoV-2: Delving deeper into the sea of possible therapeutic options in Covid-19 disease: An update
Rajaiah et al. Evaluation of mechanisms of action of re-purposed drugs for treatment of COVID-19
Wen et al. In silico structure-based discovery of a SARS-CoV-2 main protease inhibitor
Bazotte et al. 4-Aminoquinoline compounds from the Spanish flu to COVID-19
Kangarshahi et al. THE PROTEINS OF SARS-CoV-2 AND THEIR FUNCTIONS.
Dong et al. Development of SARS-CoV-2 entry antivirals
Ishida Zinc (Ⅱ) Immune Virucidal Activities for 2019-nCoV Prevention and COVID-19 Respiratory Ailment and Pneumonia

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20201013

RJ01 Rejection of invention patent application after publication