CN111596059A - Gankyrin蛋白作为新型分子标志物在前列腺癌预后评估中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，具体涉及Gankyrin蛋白本身及Gankyrin蛋白联合肿瘤相关巨噬细胞标志物CD68作为新型分子标记物在前列腺癌病理标本中的预后评价方法。本发明验证Gankyrin在前列腺癌中作为预后分型分子标志物的能力，并通过对于病人前列腺穿刺活检病理标本进行Gankyrin及CD68免疫组化染色，经过免疫组化评分后依照对应截断值区分Gankyrin及CD68的高表达与低表达，将患者分为划分为发生抗雄激素治疗耐药及转移风险高危(Gankyrin高表达且CD68高表达)、中危(Gankyrin高表达或CD68高表达)、低危(Gankyrin低表达且CD68低表达)三组。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地说，是Gankyrin蛋白本身及Gankyrin蛋白联合肿瘤相关巨噬细胞标志物CD68作为新型分子标志物在前列腺癌预后评估中的应用。
背景技术
前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)，是发达国家男性发病率第一的肿瘤，近年来国内男性前列腺癌发病率也逐年升高。虽然早期前列腺癌治疗效果较好，但是一旦出现转移及抗雄激素治疗耐药患者生存率将显著下降。如果我们能够在确诊初期，利用患者初次确诊时进行的前列腺穿刺识别出具有转移及抗雄激素治疗耐药可能的患者并且进行个性化干预，就可以从源头上改善晚期前列腺癌患者的预后。
研究表明，肿瘤微环境，特别是其中的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)，与前列腺癌的耐药和进展关系密切。肿瘤细胞通过炎症因子、细胞因子及肿瘤相关抗原等招募并滞留单核巨噬细胞，并促进其由具有抗肿瘤效应的M1型向具有促进肿瘤效应的M2型转化,导致肿瘤微环境中M2型肿瘤相关巨噬细胞占优势地位而为肿瘤生长营造适宜微环境。前列腺癌微环境中M2型肿瘤相关巨噬细胞数量多的患者，其生化复发及包膜侵犯概率更高，患者预后更差。细胞膜表面标志物CD68是肿瘤相关巨噬细胞的重要标志物，可以作为提示病理标本中肿瘤相关巨噬细胞浸润程度的标志
Gankyrin(又名p28GANK、p28或PSMD10)是26S蛋白酶体中的一个调控原件，是一种调控细胞增殖的原癌基因，在进化中高度保守。Gankyrin可直接结合RB1并导致高度磷酸化或泛素化，也能经MDM2途径增加P53泛素化，最终通过泛素蛋白酶体途径降解P53、RB1等抑癌基因，促进多种肿瘤出现恶性进展。目前为止，Gankyrin与前列腺癌进展及抗雄激素治疗耐药的关系，以及Gankyrin与前列腺癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞的关系目前还无相关研究，同时，Gankyrin和CD68联合作为前列腺癌分子分型标志物并评估治疗预后及指导个性化治疗未见文献报道。
发明内容
本发明的目的在于提供Gankyrin作为前列腺癌预后分型分子标志物的用途，本发明的另一目的在于提供Gankyrin蛋白联合肿瘤相关巨噬细胞标志物CD68作为新型分子标志物在前列腺癌预后评估中的应用。
本发明所采用的技术方案是，验证Gankyrin在前列腺癌中作为预后分型分子标志物的能力，并通过对于病人前列腺穿刺活检病理标本进行Gankyrin及CD68免疫组化染色，经过免疫组化评分后依照对应截断值区分Gankyrin及CD68的高表达与低表达，而后根据Gankyrin表达将患者划分为发生抗雄激素治疗耐药及转移风险高危与低危两组。并进一步结合CD68表达情况，将患者分为划分为发生抗雄激素治疗耐药及转移风险高危、中危、与低危三组。
本发明的第一方面，提供Gankyrin作为前列腺癌预后分型分子标志物的用途。
本发明的第二方面，提供Gankyrin制备前列腺癌预后分型试剂盒中的应用。
进一步的，所述的试剂盒根据Gankyrin免疫组化评分高低，将前列腺癌患者分为抗雄激素治疗耐药及转移风险高危型(Gankyrin高表达)与低危型(Gankyrin低表达)。
本发明的第三方面，提供Gankyrin在制备前列腺癌患者预后评价试剂盒中的应用。
进一步的，所述的试剂盒将Gankyrin免疫组化评分高低，作为前列腺癌患者出现前列腺癌转移、生化复发(BCR)、无疾病生存期(DFS)的评价指标。
本发明通过大样本(234例)表达水平结合生化复发时间，利用ROC曲线及约登指数计算出Gankyrin截断值为135.5，将Gankyrin组化评分高于135.5的划分为高表达，将Gankyrin组化评分低于135.5的划分为低表达。
本发明的第四方面，提供Gankyrin联合肿瘤相关巨噬细胞标志物CD68在制备前列腺癌患者预后分型试剂盒中的应用。
进一步的，所述的试剂盒根据Gankyrin和免疫组化评分高低，将前列腺癌患者分为发生抗雄激素治疗耐药及转移风险高危、中危、低危三组。
根据Gankyrin组化评分截断值：135.5，及CD68组化评分截断值：132.5，将Gankyrin组化评分高于135.5的划分为高表达，将Gankyrin组化评分低于135.5的划分为低表达，同时将CD68组化评分高于132.5的患者划分为CD68高表达，将CD68组化评分低于132.5的患者划分CD68低表达。
依据该标准进一步将患者分为三组即：发生抗雄激素治疗耐药及转移风险高危(Gankyrin高表达且CD68高表达)、中危(Gankyrin高表达或CD68高表达)、低危(Gankyrin低表达且CD68低表达)。
本发明的第五方面，提供Gankyrin在促进M1型肿瘤相关巨噬细胞细胞CD68向M2型极化中的应用。
本发明优点在于：
1、Gankyrin和CD68联合作为前列腺癌分子分型标志物可有效判定前列腺癌亚型及恶性程度；
2、Gankyrin和CD68联合诊断试剂盒及相应评分系统可有效预测前列腺癌患者治疗预后，目前尚无类似联合诊断试剂盒应用于临床；
3、Gankyrin和CD68联合诊断试剂盒及相应评分系统可为前列腺癌患者选择治疗方式、药物及调整用药方案提供重要参考。
附图说明
图1：GEO数据库(GSE44602)中Gankyrin在前列腺癌(PCa)及正常前列腺组织中的表达。
图2：Oncomine数据库(Vanaja数据库)中Gankyrin在前列腺癌(PCa)及正常前列腺组织中的表达。
图3：Gankyrin在良性前列腺增生症(BPH)，抗雄治疗前后PCa或CRPC(CastrationResistant Prostate Cancer，去势抵抗性前列腺癌)患者组织中的表达组化图(左图，标尺＝50μm)及统计图(右图)。***表示P<0.001。
图4：Gankyrin在不同格里森(GS)评分的PCa术后组织中的表达组化图(标尺＝50μm)。
图5：Gankyrin在不同格里森(GS)评分的PCa穿刺组织中的表达组化图(标尺＝50μm)。
图6：Gankyrin在同一个PCa患者抗雄治疗(ADT)前后标本中的表达组化图(左图，标尺＝50μm)及统计图(右图)**为P<0.01。
图7：Gankyrin在抗雄治疗(ADT)的C4-2B前列腺原位移植瘤小鼠模型中的表达组化图(左图，标尺＝50μm)及统计图(右图)。**为P<0.01。
图8：恩杂鲁胺处理的PCa细胞系中Gankyrin的表达水平。
图9：RT-PCR检测Gankyrin过表达(GankyrinOE)前列腺癌细胞及对照细胞中Gankyrin表达水平，***表示P<0.001。
图10：Gankyrin过表达(GankyrinOE)的C4-2B和C4-2细胞的迁移及侵袭代表图(左图，标尺＝100μm)。
图11：Gankyrin敲低(shGankyrin)的C4-2B和C4-2细胞的迁移及侵袭代表图(F，标尺＝100μm)及统计图，***表示P<0.001。
图12：恩杂鲁胺处理(ENZ)的Gankyrin过表达(GankyrinOE)C4-2B和C4-2细胞及对照细胞的凋亡代表图(左图)及统计图(右图)，***表示P<0.001。
图13：恩杂鲁胺处理(ENZ)的Gankyrin过表达(GankyrinOE)C4-2B和C4-2细胞及对照细胞的增殖代表图。
图14：恩杂鲁胺处理(ENZ)的Gankyrin敲低(shGankyrin)的C4-2B和C4-2及对照细胞的凋亡代表图(左图)及统计图(右图)，**为P<0.01,***表示P<0.001。
图15：恩杂鲁胺处理(ENZ)的Gankyrin敲低(shGankyrin)的C4-2B和C4-2细胞及对照细胞的增殖代表图。
图16：Gankyrin过表达(GankyrinOE)C4-2B细胞皮下成瘤实体瘤代表图(左图)及肿瘤增殖曲线(右图)。
图17：Gankyrin敲低(shGankyrin)的C4-2B细胞皮下成瘤实体瘤代表图(左图)及肿瘤增殖曲线(右图)。
图18：Gankyrin、HMGB1及CD68在PCa患者抗雄治疗(ADT)前后标本中的表达组化图(标尺＝50μm，左图)及统计图(右图)，***表示P<0.001。
图19：前列腺癌标本中不同H评分(H-score)的CD68的组化示意图(标尺＝50μm)。
图20：相关性分析Gankyrin及CD68在234例前列腺癌患者中表达的相关性。
图21：迁移实验检测U937(单核巨噬细胞系)与相应处理的C4-2B和C4-2细胞共陪养后迁移能力的改变(标尺＝100μm，左图)及相应统计图(右图)，***表示P<0.001。
图22：RT-PCR检测U937(单核巨噬细胞系)与相应处理的C4-2B细胞共陪养后M1型及M2型标志物水平的改变，*指P<0.05,**为P<0.01,***表示P<0.001。
图23：增殖实验检测不同处理(包括恩杂鲁胺处理)的PCa细胞与U937细胞共培养前后增殖能力的改变，*指P<0.05,**为P<0.01。
图24：前列腺癌标本中不同H评分(H-score)的Gankyrin组化示意图(标尺＝50μm)。
图25：时间依赖性ROC曲线分析队列1中Gankyrin高表达(Gankyrinhigh)及低表达(Gankyrinlow)的最佳截断(cut-off)值。
图26：经Kaplan-Meier生存分析来判断队列1(患者数＝117)中Gankyrin高表达(Gankyrinhigh)组患者及低表达(Gankyrinlow)组患者的生化复发(BCR)时间和无疾病生存期(DFS)的差异。
图27：经Kaplan-Meier生存分析来判断队列2(患者数＝117)中Gankyrinhigh组患者及Gankyrinlow组患者的生化复发(BCR)时间和无疾病生存期(DFS)的差异。
图28：时间依赖性ROC曲线分析队列1(患者数＝117)中CD68高表达(CD68high)及低表达(CD68low)的最佳截断(cut-off)值。
图29：将队列1(患者数＝117)中患者按Gankyrin及CD68表达水平将患者分为三组(当Gankyrin高表达且CD68高表达时，认定为抗雄激素治疗耐药及转移风险高危；当Gankyrin高表达或CD68高表达时，认定为抗雄激素治疗耐药及转移风险中危；当Gankyrin低表达且CD68低表达时，认定为抗雄激素治疗耐药及转移风险低危)，经Kaplan-Meier生存分析队列1各组患者的生化复发(BCR)时间和无疾病生存期(DFS)的差异。
图30：将队列2(患者数＝117)中患者按Gankyrin及CD68表达水平将患者分为三组(当Gankyrin高表达且CD68高表达时，认定为抗雄激素治疗耐药及转移风险高危；当Gankyrin高表达或CD68高表达时，认定为抗雄激素治疗耐药及转移风险中危；当Gankyrin低表达且CD68低表达时，认定为抗雄激素治疗耐药及转移风险低危)，经Kaplan-Meier生存分析队列2各组患者的生化复发(BCR)时间和无疾病生存期(DFS)的差异。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1：
新型分子标记物前列腺癌预后评估模型的应用，包括以下技术步骤：
1、前列腺癌穿刺样品的获取免疫组化染色
A、石蜡切片65℃烘片1小时后，进行脱蜡及水化：浸二甲苯三次，8分钟/次，浸100％-75％梯度酒精四次，8分钟/次，最后置于磷酸盐缓冲液(PBS)中。
B、利用高温进行相应抗原修复，室温自然冷却，免疫组化笔圈出组织范围，3％双氧水覆盖20分钟后，PBS洗3次每次5分钟，山羊血清室温封闭1小时。
C、PBS洗1次，添加Gankyrin或CD68一抗，4℃过夜。
D、次日，PBS洗3次，孵育二抗(鼠兔通用，生物素标记)室温1小时。PBS洗3次。链霉素抗生物素试剂孵育，室温15min。PBS洗3次。
E、利用DAB试剂盒显色，苏木素染液复染，自来水冲洗(勿对着组织冲)。盐酸酒精分化2秒，自来水冲洗后自来水慢速漂洗1小时返蓝。
2、标本免疫组化评分及分组预测恶性进展及抗雄激素治疗耐药
显微镜镜检，并进行组化打分(3名实验人员独立打分)。样本根据阳性细胞染色强度，半定量综合评估将染色分为强阳性(3)，阳性(2)，弱阳性(1)，阴性(0)，然后乘以阳性细胞所占百分比(1-100)，得到组化评分(H-score)区间为0-300分。
根据Gankyrin组化评分截断值：135.5，及CD68组化评分截断值：132.5，将Gankyrin组化评分高于135.5的划分为高表达，将Gankyrin组化评分低于135.5的划分为低表达，同时将CD68组化评分高于132.5的患者划分为CD68高表达，将CD68组化评分低于132.5的患者划分CD68低表达。
依据该标准进一步将患者分为三组即：发生抗雄激素治疗耐药及转移风险高危(Gankyrin高表达且CD68高表达)、中危(Gankyrin高表达或CD68高表达)、低危(Gankyrin低表达且CD68低表达)。
实验结果：
本发明验证Gankyrin在前列腺癌中作为预后分型分子标志物的能力，并通过对于病人前列腺穿刺活检病理标本进行Gankyrin及CD68免疫组化染色，经过免疫组化评分后依照对应截断值区分Gankyrin及CD68的高表达与低表达，而后根据Gankyrin表达并进一步结合CD68表达情况，将患者分为划分发生抗雄激素治疗耐药及转移风险高危(Gankyrin高表达且CD68高表达)、中危(Gankyrin高表达或CD68高表达)、低危(Gankyrin低表达且CD68低表达)三组。
一、Gankyrin在前列腺癌中作为预后分型分子标志物的能力
通过分析GEO数据库我们发现，Gankyrin在前列腺癌组织中表达高于正常前列腺组织(图1)。同样，经Oncomine数据库分析表明，Gankyrin基因表达在局限性前列腺癌中高于正常前列腺癌组织(图2)。为验证上述趋势，经免疫组化检测，与良性前列腺增生症(BPH)患者相比，Gankyrin在局限性前列腺癌或CRPC患者组织中表达升高(图3)。Gleason评分(GS)是评价前列腺癌恶性程度的另一重要指标。Gankyrin表达在GS>7的病例中要显著高于GS<7的病例，且存在统计学差异(图4)。即使在同一前列腺癌患者的标本中，Gankyrin在局部低分化区域的表达也高于局部高分化区域(图5)。由于与局限性前列腺癌或良性前列腺增生症相比，Gankyrin在CRPC患者组织中表达最高，因此我们猜测Gankyrin表达是否与前列腺癌抗雄激素治疗抵抗相关。免疫组化染色提示，接受过抗雄激素治疗(ADT)的前列腺癌患者和未接受ADT(naive)的患者相比，前列腺标本中Gankyrin表达升高(图3)。即使在同一病人接受ADT治疗之前与接受ADT之后的标本中，Gankyrin在治疗后标本中也高表达，且存在统计学差异(图6)。提示前列腺癌抗雄激素治疗可诱导Gankyrin表达。同时，在我们之前构建的小鼠前列腺原位异体移植物模型中，免疫组化染色检测接受了抗雄激素治疗的样品中Gankyrin表达高于未处理组(图7)。根据以上结果推断，Gankyrin与前列腺癌患者肿瘤进展及抗雄激素治疗耐药正相关。
在恩杂鲁胺处理的前列腺癌细胞系C4-2及C4-2B中，Gankyrin水平比其对照细胞明显升高(图8)，这与临床标本中抗雄激素治疗后前列腺癌患者组织中Gankyrin表达增加的趋势一致。其次，我们还在C4-2及C4-2B中稳定过表达(Gankyrin OE)了Gankyrin(图9)。Gankyrin过表达的C4-2B及C4-2细胞系迁移及侵袭能力明显增强(图10)。敲低Gankyrin可以减弱C4-2B及C4-2细胞的上述恶性表型(图11)，表明Gankyrin可促进前列腺癌恶性进展。另一方面，细胞凋亡是观察肿瘤对药物敏感性的可靠指标。在恩杂鲁胺处理后，过表达Gankyrin的C4-2B-Gankyrin OE及C4-2-Gankyrin OE，较对照细胞凋亡明细减少(图12)，且增殖能力几乎不受影响(图13)，表明过表达Gankyrin的前列腺癌细胞对恩杂鲁胺敏感性降低，Gankyrin是导致前列腺癌恩杂鲁胺耐药的潜在原因。反之，敲减Gankyrin的C4-2B-shGankyrin细胞及C4-2-shGankyrin细胞与对照细胞比，恩杂鲁胺作用后凋亡更加明显(图14)，同时Gankyrin敲减的细胞增殖速度也减慢(图15)，说明Gankyrin敲减后的前列腺癌细胞对抗雄激素治疗更敏感。因此，高表达Gankyrin是前列腺癌细胞抗雄激素治疗耐药的必要条件。此外，动物成瘤实验是评价促肿瘤进展及增殖的可靠依据。过表达Gankyrin的C4-2B-GankyrinOE细胞与对照细胞比，可促进肿瘤形成，肿瘤增殖快(图16)。反之，敲减Gankyrin的C4-2B-shGankyrin细胞较对照细胞成瘤率低，肿瘤增殖快减缓(图17)，表明高表达Gankyrin可促进前列腺癌细胞的生长及增殖。综上，Gankyrin高表达与前列腺癌恶性进展及抗雄激素治疗耐药密切相关，干扰Gankyrin表达可恢复前列腺癌对抗雄激素治疗的敏感性。
二、肿瘤相关巨噬细胞标志物CD68对于Gankyrin作为分型标志物的辅助作用
首先，与未接受ADT的患者标本相比，ADT后的患者标本中肿瘤相关巨噬细胞标志物CD68表达升高，这和Gankyrin在抗雄激素治疗患者标本中的表达趋势一致(图18)。其次，利用H-score对肿瘤相关巨噬细胞标志物CD68与Gankyrin在前列腺癌组织中表达量分别进行打分后(图19)，利用Spearman相关系数分析，发现肿瘤相关巨噬细胞标志物CD68与Gankyrin在前列腺癌中表达存在正相关(图20)。
首先，我们利用前列腺癌细胞与肿瘤相关巨噬细胞的共培养模型模拟前列腺癌与肿瘤微环境的相互作用，过表达Gankyrin的前列腺癌细胞系与对照细胞相比，其与U937(单核巨噬细胞系)可以的更加明显的促进U937的迁移(图21)。
此外，肿瘤相关巨噬细胞总体上分为抑制肿瘤的M1型与促进肿瘤的M2型，根据肿瘤微环境中不同的病原及细胞因子刺激可以转化为不同的功能状态(即在M1型和M2型间转换)，也称肿瘤相关巨噬细胞极化。我们发现，在肿瘤相关巨噬细胞细胞与过表达Gankyrin的前列腺癌细胞进行共培养后，M1型肿瘤相关巨噬细胞细胞开始向M2型极化(图22)。
当前列腺癌细胞系C4-2B与U937进行共培养后，恩杂鲁胺对前列腺癌细胞增殖抑制作用减弱。而U937与过表达Gankyrin的C4-2B共培养之后，过表达Gankyrin的前列腺癌细胞对于恩杂鲁胺抵抗能力进一步加强，说明过表达Gankyrin的前列腺癌细胞募集和活化的U937细胞可反馈性的增强前列腺癌细胞抗雄激素治疗抵抗能力。(图23)
三、利用前列腺癌病人前列腺穿刺样品进行免疫组化实验，评估Gankyrin与CD68表达，根据Gankyrin与CD68表达评分进行风险组划分，验证不同风险组患者预后差异
通过纳入长海医院152例前列腺癌患者标本及82例长征医院前列腺癌患者标本，随机分为队列1(corhort1，n＝117)作为训练数集(training set)以及队列1(corhort1，n＝117)作为验证数集(validation set)，来比较不同Gankyrin表达水平患者临床指标差异。其中，Gankyrin表达水平由免疫组化H-score进行评定(图24)。临床上，抗雄激素治疗耐药表现为接受ADT的患者基线水平PSA值连续反弹，即出现生化复发(BCR)。通过BCR的时间依赖性ROC曲线分析，计算出H-score＝135.5是区分病人Gankyrin高表达(Gankyrinhigh)及低表达(Gankyrinlow)的最佳截断(cut-off)值。此时，在队列1中以生化复发时间作为终点，能取得最大曲线下面积(AUC)为0.724(图25)。分析表明，队列1中Gankyrin高表达组患者PSA水平较Gankyrin低表达组更高，Gleason评分(GS)及肿瘤分期也更高(表1)。Kaplan-Meier生存分析提示，队列1中Gankyrin高表达组患者生化复发率高于Gankyrin低表达组(p<0.001)，无疾病生存期(DFS)也显著短于Gankyrin低表达组(p<0.001)(图26)。在另一个作为验证数集(validation set)的队列2中，Gankyrin高表达组患者较Gankyrin低表达组PSA水平、GS评分及肿瘤分期均更高(表2)。经Kaplan-Meier生存分析发现，队列2中Gankyrinhigh组患者生化复发率显著高于Gankyrin低表达组(p<0.001)，其无疾病生存期(DFS)也显著短于Gankyrinlow组(p＝0.0073)(图27)。两个患者队列结果均表明，Gankyrin的表达可作为判断前列腺癌患者预后(BCR和DFS)的可靠评价指标。
同时，为评估CD68与Gankyrin联合应用是否提高对前列腺癌不良预后的预测效能。我们通过时间依赖性ROC分析确定CD68组化评分的最佳截断值为132.5(H score)时，在队列1(n＝117)中以BCR作为终点时取得最大曲线下面积为0.702(图28)。作为验证数集(validation set)的队列2(n＝117)也采用相同截断值。据此截断值可将所有患者划分为CD68高表达(CD68high)与CD68低表达(CD68low)组，结合之前的Gankyrin的H score评分将两个队列中的250例患者标本区分为四组。经生存分析发现，在队列1(图29)和队列2(图30)中，CD68与Gankyrin高表达均与前列腺癌患者不良预后相关，在四组亚分类患者中，CD68及Gankyrin均高表达的患者生化复发早，无病生存期短，预后最差，而低表达CD68及Gankyrin的患者预后最好，说明CD68与Gankyrin的联合评价系统可以作为前列腺癌患者不良预后的有效评价手段。
表1：队列1中低表达Gankyrin及高表达Gankyrin的前列腺癌患者临床信息表
表2：队列2中高表达及低表达Gankyrin的前列腺癌患者临床信息表
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
Claims (8)
1.Gankyrin制备前列腺癌预后分型试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒根据Gankyrin免疫组化评分高低，将前列腺癌患者分为抗雄激素治疗耐药及转移风险高危型与低危型。
3.Gankyrin在制备前列腺癌患者预后评价试剂盒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒将Gankyrin免疫组化评分高低，作为前列腺癌患者出现前列腺癌转移、生化复发、无疾病生存期的评价指标。
5.Gankyrin联合肿瘤相关巨噬细胞标志物CD68在制备前列腺癌患者预后分型试剂盒中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒根据Gankyrin和CD68的免疫组化评分高低，将前列腺癌患者分为抗雄激素治疗耐药及转移风险高危、中危、低危三组。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，当Gankyrin高表达且CD68高表达时，认定为抗雄激素治疗耐药及转移风险高危；当Gankyrin高表达或CD68高表达时，认定为抗雄激素治疗耐药及转移风险中危；当Gankyrin低表达且CD68低表达时，认定为抗雄激素治疗耐药及转移风险低危。
8.Gankyrin在促进M1型肿瘤相关巨噬细胞细胞CD68向M2型极化中的应用。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200828 |
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