CN111435138A - 胰腺癌蛋白生物标记物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种胰腺癌蛋白生物标记物及其应用，具体涉及65种外泌体蛋白中的一项或多项用于制备或筛选胰腺癌检测试剂的用途。所述胰腺癌组织外泌体是一种新型生物标志物，该类生物标志物不仅稳定，而且既能够保留原位组织的特征，又可以提供细胞间、组织细胞与胞外基质的信息，可以提供更为靶向的、更为全面的原位组织的特质，有利于研究对癌细胞之间以及癌细胞与细胞质基质的了解，推动癌症的治疗。本发明所述的制备方法可高效分离和提纯所述外泌体，本发明所有利于胰腺癌早期诊断，同时更进一步了解外泌体在胰腺癌中扮演角色，有助于发展利用外泌体来治疗胰腺癌的治疗策略。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种胰腺癌蛋白生物标记物及其应用。
背景技术
截止到2012年，胰腺癌是世界上发病率排名12、死亡率为7的癌症。同时，2015年，全球因胰腺癌死亡人数为411,600人。在胰腺癌早期阶段，其症状并不明显并且常常误诊为胰腺炎、溃疡等其他疾病。而确诊为胰腺癌的病人大多数都处于晚期，同时确诊之后胰腺癌病人的平均生存期仅为6-9个月，五年生存率为8％。手术切除是现在唯一能够彻底治愈的治疗手段，然而，只有一部分病人可以进行手术切除，并且这些病人大部分会发生癌症的转移和复发。也正是胰腺癌早期诊断，预后极差以及发生发展快的这些原因，因此胰腺癌也被称为“癌症之王”。根据病理学特征，胰腺癌可分为胰腺管腺癌、腺泡胰腺癌、导管内乳头状黏液性肿瘤、粘液性囊性肿瘤、胰腺神经内分泌瘤、浆液性囊性肿瘤和胰腺实体假乳头状肿瘤。而大约90％的胰腺癌病人为胰腺导管腺癌。
在对胰腺癌的治疗中，对胰腺癌早期的诊断是现在的难题之一。当胰腺癌发病早期，其症状不明显并且常常诊断为胰腺炎和溃疡等疾病，同时到目前为止，缺乏有效、灵敏的诊断技术。
发明内容
为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种胰腺癌蛋白生物标记物及其应用，用于解决现有技术中的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个蛋白联合用于制备或筛选胰腺癌检测试剂的用途。所述多个是指2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个或63个。
在一种实施方式中，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS中的任意一个或多个蛋白联合用于制备或筛选胰腺癌检测试剂的用途。所述多个是指2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或21个。
进一步的，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个联合作为生物标志物。所述多个是指2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个或63个。
在一种实施方式中，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS中的任意一个或多个联合作为生物标志物。所述多个是指2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或21个。
进一步的，所述胰腺癌检测试剂用于胰腺癌的判断、诊断。
需要说明的是，所述胰腺癌检测试剂并不限定为必须为液体形式。
进一步的，所述蛋白为胰腺癌组织外泌体。
在一种实施方式中，所述胰腺癌检测试剂包括以下之任一项或多项：(1)特异性识别S100P的试剂、(2)特异性识别EGFR的试剂、(3)特异性识别PSMB3的试剂、(4)特异性识别ACTN1的试剂、(5)特异性识别TPT1的试剂、(6)特异性识别TJP2的试剂、(7)特异性识别GPI的试剂、(8)特异性识别MTPN的试剂、(9)特异性识别TAOK3的试剂、(10)特异性识别PAK2的试剂、(11)特异性识别GSS的试剂、(12)特异性识别KLC1的试剂、(13)特异性识别KRT18的试剂、(14)特异性识别LDHA的试剂、(15)特异性识别PEPD的试剂、(16)特异性识别SPTBN1的试剂、(17)特异性识别CAPG的试剂、(18)特异性识别ATP1B3的试剂、(19)特异性识别RSPO1的试剂、(20)特异性识别EPHX1的试剂、(21)特异性识别GMDS的试剂、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂、(23)特异性识别SKP1的试剂、(24)特异性识别DCTN1的试剂、(25)特异性识别GSTP1的试剂、(26)特异性识别HBB的试剂、(27)特异性识别LGALS4的试剂、(28)特异性识别LYN的试剂、(29)特异性识别ARPC2的试剂、(30)特异性识别TAGLN2的试剂、(31)特异性识别ADH5的试剂、(32)特异性识别ARF6的试剂、(33)特异性识别CLDN18的试剂、(34)特异性识别GLO1的试剂、(35)特异性识别SEPT2的试剂、(36)特异性识别WASL的试剂、(37)特异性识别AKR1C3的试剂、(38)特异性识别SNRPN的试剂、(39)特异性识别OCLN的试剂、(40)特异性识别H2AFV的试剂、(41)特异性识别PFDN6的试剂、(42)特异性识别MUC13的试剂、(43)特异性识别OSTF1的试剂、(44)特异性识别CHMP6的试剂、(45)特异性识别PRKACA的试剂、(46)特异性识别BAG5的试剂、(47)特异性识别ERH的试剂、(48)特异性识别STAMBP的试剂、(49)特异性识别DPP4的试剂、(50)特异性识别SH3BGRL的试剂、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂、(52)特异性识别PRPF38B的试剂、(53)特异性识别COL4A2的试剂、(54)特异性识别PDLIM5的试剂、(55)特异性识别YA61的试剂、(56)特异性识别SYNGR2的试剂、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂、(58)特异性识别RPE的试剂、(59)特异性识别HSD17B13的试剂、(60)特异性识别GCT-A5的试剂、(61)特异性识别LARP1的试剂、(62)特异性识别NSFL1C的试剂、(63)特异性识别RAI14的试剂。所述多项是指2项、3项、4项、5项、6项、7项、8项、9项、10项、11项、12项、13项、14项、15项、16项、17项、18项、19项、20项、21项、22项、23项、24项、25项、26项、27项、28项、29项、30项、31项、32项、33项、34项、35项、36项、37项、38项、39项、40项、41项、42项、43项、44项、45项、46项、47项、48项、49项、50项、51项、52项、53项、54项、55项、56项、57项、58项、59项、60项、61项、62项或63项。
进一步的，所述胰腺癌检测试剂包括以下之任一项或多项：(1)特异性识别S100P的试剂选自S100P的抗体、(2)特异性识别EGFR的试剂选自EGFR的抗体、(3)特异性识别PSMB3的试剂选自PSMB3的抗体、(4)特异性识别ACTN1的试剂选自ACTN1的抗体、(5)特异性识别TPT1的试剂选自TPT1的抗体、(6)特异性识别TJP2的试剂选自TJP2的抗体、(7)特异性识别GPI的试剂选自GPI的抗体、(8)特异性识别MTPN的试剂选自MTPN的抗体、(9)特异性识别TAOK3的试剂选自TAOK3的抗体、(10)特异性识别PAK2的试剂选自PAK2的抗体、(11)特异性识别GSS的试剂选自GSS的抗体、(12)特异性识别KLC1的试剂选自KLC1的抗体、(13)特异性识别KRT18的试剂选自KRT18的抗体、(14)特异性识别LDHA的试剂选自LDHA的抗体、(15)特异性识别PEPD的试剂选自PEPD的抗体、(16)特异性识别SPTBN1的试剂选自SPTBN1的抗体、(17)特异性识别CAPG的试剂选自CAPG的抗体、(18)特异性识别ATP1B3的试剂选自ATP1B3的抗体、(19)特异性识别RSPO1的试剂选自RSPO1的抗体、(20)特异性识别EPHX1的试剂选自EPHX1的抗体、(21)特异性识别GMDS的试剂选自GMDS的抗体、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂选自ERBB2IP的抗体、(23)特异性识别SKP1的试剂选自SKP1的抗体、(24)特异性识别DCTN1的试剂选自DCTN1的抗体、(25)特异性识别GSTP1的试剂选自GSTP1的抗体、(26)特异性识别HBB的试剂选自HBB的抗体、(27)特异性识别LGALS4的试剂选自LGALS4的抗体、(28)特异性识别LYN的试剂选自LYN的抗体、(29)特异性识别ARPC2的试剂选自ARPC2的抗体、(30)特异性识别TAGLN2的试剂选自TAGLN2的抗体、(31)特异性识别ADH5的试剂选自ADH5的抗体、(32)特异性识别ARF6的试剂选自ARF6的抗体、(33)特异性识别CLDN18的试剂选自CLDN18的抗体、(34)特异性识别GLO1的试剂选自GLO1的抗体、(35)特异性识别SEPT2的试剂选自SEPT2的抗体、(36)特异性识别WASL的试剂选自WASL的抗体、(37)特异性识别AKR1C3的试剂选自AKR1C3的抗体、(38)特异性识别SNRPN的试剂选自SNRPN的抗体、(39)特异性识别OCLN的试剂选自OCLN的抗体、(40)特异性识别H2AFV的试剂选自H2AFV的抗体、(41)特异性识别PFDN6的试剂选自PFDN6的抗体、(42)特异性识别MUC13的试剂选自MUC13的抗体、(43)特异性识别OSTF1的试剂选自OSTF1的抗体、(44)特异性识别CHMP6的试剂选自CHMP6的抗体、(45)特异性识别PRKACA的试剂选自PRKACA的抗体、(46)特异性识别BAG5的试剂选自BAG5的抗体、(47)特异性识别ERH的试剂选自ERH的抗体、(48)特异性识别STAMBP的试剂选自STAMBP的抗体、(49)特异性识别DPP4的试剂选自DPP4的抗体、(50)特异性识别SH3BGRL的的试剂选自SH3BGRL的的抗体、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂选自CSNK1G3的抗体、(52)特异性识别PRPF38B的试剂选自PRPF38B的抗体、(53)特异性识别COL4A2的试剂选自COL4A2的抗体、(54)特异性识别PDLIM5的试剂选自PDLIM5的抗体、(55)特异性识别YA61的试剂选自YA61的抗体、(56)特异性识别SYNGR2的试剂选自SYNGR2的抗体、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂选自HLA.DRB1的抗体、(58)特异性识别RPE的试剂选自RPE的抗体、(59)特异性识别HSD17B13的试剂选自HSD17B13的抗体、(60)特异性识别GCT-A5的试剂选自GCT-A5的抗体、(61)特异性识别LARP1的试剂选自LARP1的抗体、(62)特异性识别NSFL1C的试剂选自NSFL1C的抗体、(63)特异性识别RAI14的试剂选自RAI14的抗体。所述多项是指2项、3项、4项、5项、6项、7项、8项、9项、10项、11项、12项、13项、14项、15项、16项、17项、18项、19项、20项、21项、22项、23项、24项、25项、26项、27项、28项、29项、30项、31项、32项、33项、34项、35项、36项、37项、38项、39项、40项、41项、42项、43项、44项、45项、46项、47项、48项、49项、50项、51项、52项、53项、54项、55项、56项、57项、58项、59项、60项、61项、62项或63项。
进一步的，所述蛋白的编码基因的UniProt序列号为：其中，以A_B的形式表示，A为所述蛋白的编码基因的UniProt序列号，B为所述蛋白名称：P25815_S100P、Q504U8_EGFR、A0A087WUL2_PSMB3、A0A024R694_ACTN1、A0A0P1J1R0_TPT1、A0A024R233_TJP2、P06744_GPI、Q69YG1_MTPN、Q9H2K8_TAOK3、A8K5M4_PAK2、P48637_GSS、Q07866_KLC1、F8VZY9_KRT18、V9HWB9_LDHA、J3K000_PEPD、D6W5C0_SPTBN1、P40121_CAPG、D3DNF9_ATP1B3、Q2MKA7_RSPO1、R4SBI6_EPHX1、O60547_GMDS、B4DIP2_ERBB2IP、E5RJR5_SKP1、Q14203_DCTN1、V9HWE9_GSTP1、D9YZU5_HBB、Q6FHZ4_LGALS4、P07948_LYN、Q53R19_ARPC2、P37802_TAGLN2、P11766_ADH5、Q6FH17_ARF6、P56856_CLDN18、X5DNM4_GLO1、B5MCX3_SEPT2、A4D0Y1_WASL、A0A0A0MSS8_AKR1C3、J3QLE5_SNRPN、A8K3T2_OCLN、Q71UI9_H2AFV、Q5STK2_PFDN6、Q9H3R2_MUC13、Q92882_OSTF1、Q96FZ7_CHMP6、A0A024R7J0_PRKACA、A0A024R6M6_BAG5、A0A024R6D4_ERH、A0A140VK54_STAMBP、P27487_DPP4、V9HW48_SH3BGRL、Q9Y6M4_CSNK1G3、Q5VTL8_PRPF38B、P08572_COL4A2、B7Z8X5_PDLIM5、Q9NZ23_YA61、A0A024R8T9_SYNGR2、U3PXU4_HLA.DRB1、Q96AT9_RPE、Q7Z5P4_HSD17B13、A0A125QYY6_GCT-A5、E5RH50_LARP1、Q9UNZ2_NSFL1C、Q9P0K7_RAI14。
本发明第二方面提供(1)特异性识别S100P的试剂、(2)特异性识别EGFR的试剂、(3)特异性识别PSMB3的试剂、(4)特异性识别ACTN1的试剂、(5)特异性识别TPT1的试剂、(6)特异性识别TJP2的试剂、(7)特异性识别GPI的试剂、(8)特异性识别MTPN的试剂、(9)特异性识别TAOK3的试剂、(10)特异性识别PAK2的试剂、(11)特异性识别GSS的试剂、(12)特异性识别KLC1的试剂、(13)特异性识别KRT18的试剂、(14)特异性识别LDHA的试剂、(15)特异性识别PEPD的试剂、(16)特异性识别SPTBN1的试剂、(17)特异性识别CAPG的试剂、(18)特异性识别ATP1B3的试剂、(19)特异性识别RSPO1的试剂、(20)特异性识别EPHX1的试剂、(21)特异性识别GMDS的试剂、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂、(23)特异性识别SKP1的试剂、(24)特异性识别DCTN1的试剂、(25)特异性识别GSTP1的试剂、(26)特异性识别HBB的试剂、(27)特异性识别LGALS4的试剂、(28)特异性识别LYN的试剂、(29)特异性识别ARPC2的试剂、(30)特异性识别TAGLN2的试剂、(31)特异性识别ADH5的试剂、(32)特异性识别ARF6的试剂、(33)特异性识别CLDN18的试剂、(34)特异性识别GLO1的试剂、(35)特异性识别SEPT2的试剂、(36)特异性识别WASL的试剂、(37)特异性识别AKR1C3的试剂、(38)特异性识别SNRPN的试剂、(39)特异性识别OCLN的试剂、(40)特异性识别H2AFV的试剂、(41)特异性识别PFDN6的试剂、(42)特异性识别MUC13的试剂、(43)特异性识别OSTF1的试剂、(44)特异性识别CHMP6的试剂、(45)特异性识别PRKACA的试剂、(46)特异性识别BAG5的试剂、(47)特异性识别ERH的试剂、(48)特异性识别STAMBP的试剂、(49)特异性识别DPP4的试剂、(50)特异性识别SH3BGRL的试剂、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂、(52)特异性识别PRPF38B的试剂、(53)特异性识别COL4A2的试剂、(54)特异性识别PDLIM5的试剂、(55)特异性识别YA61的试剂、(56)特异性识别SYNGR2的试剂、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂、(58)特异性识别RPE的试剂、(59)特异性识别HSD17B13的试剂、(60)特异性识别GCT-A5的试剂、(61)特异性识别LARP1的试剂、(62)特异性识别NSFL1C的试剂、(63)特异性识别RAI14的试剂中的任一项或多项联合用于制备胰腺癌检测试剂盒中的用途。所述多项是指2项、3项、4项、5项、6项、7项、8项、9项、10项、11项、12项、13项、14项、15项、16项、17项、18项、19项、20项、21项、22项、23项、24项、25项、26项、27项、28项、29项、30项、31项、32项、33项、34项、35项、36项、37项、38项、39项、40项、41项、42项、43项、44项、45项、46项、47项、48项、49项、50项、51项、52项、53项、54项、55项、56项、57项、58项、59项、60项、61项、62项或63项。
在一种实施方式中，为(1)特异性识别S100P的试剂、(2)特异性识别EGFR的试剂、(3)特异性识别PSMB3的试剂、(4)特异性识别ACTN1的试剂、(5)特异性识别TPT1的试剂、(6)特异性识别TJP2的试剂、(7)特异性识别GPI的试剂、(8)特异性识别MTPN的试剂、(9)特异性识别TAOK3的试剂、(10)特异性识别PAK2的试剂、(11)特异性识别GSS的试剂、(12)特异性识别KLC1的试剂、(13)特异性识别KRT18的试剂、(14)特异性识别LDHA的试剂、(15)特异性识别PEPD的试剂、(16)特异性识别SPTBN1的试剂、(17)特异性识别CAPG的试剂、(18)特异性识别ATP1B3的试剂、(19)特异性识别RSPO1的试剂、(20)特异性识别EPHX1的试剂、(21)特异性识别GMDS的试剂中的任一项或多项联合用于制备胰腺癌检测试剂盒中的用途。所述多项是指2项、3项、4项、5项、6项、7项、8项、9项、10项、11项、12项、13项、14项、15项、16项、17项、18项、19项、20项或21项。
进一步的，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个联合作为生物标志物。所述多个是指2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个或63个。
在一种实施方式中，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS中的任意一个或多个联合作为生物标志物。所述多个是指2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或21个。
进一步的，所述胰腺癌检测试剂用于胰腺癌的判断、诊断。
需要说明的是，所述胰腺癌检测试剂并不限定为必须为液体形式。
进一步的，所述蛋白为胰腺癌组织外泌体。
在一种实施方式中，所述胰腺癌检测试剂包括以下之任一项或多项：(1)特异性识别S100P的试剂选自S100P的抗体、(2)特异性识别EGFR的试剂选自EGFR的抗体、(3)特异性识别PSMB3的试剂选自PSMB3的抗体、(4)特异性识别ACTN1的试剂选自ACTN1的抗体、(5)特异性识别TPT1的试剂选自TPT1的抗体、(6)特异性识别TJP2的试剂选自TJP2的抗体、(7)特异性识别GPI的试剂选自GPI的抗体、(8)特异性识别MTPN的试剂选自MTPN的抗体、(9)特异性识别TAOK3的试剂选自TAOK3的抗体、(10)特异性识别PAK2的试剂选自PAK2的抗体、(11)特异性识别GSS的试剂选自GSS的抗体、(12)特异性识别KLC1的试剂选自KLC1的抗体、(13)特异性识别KRT18的试剂选自KRT18的抗体、(14)特异性识别LDHA的试剂选自LDHA的抗体、(15)特异性识别PEPD的试剂选自PEPD的抗体、(16)特异性识别SPTBN1的试剂选自SPTBN1的抗体、(17)特异性识别CAPG的试剂选自CAPG的抗体、(18)特异性识别ATP1B3的试剂选自ATP1B3的抗体、(19)特异性识别RSPO1的试剂选自RSPO1的抗体、(20)特异性识别EPHX1的试剂选自EPHX1的抗体、(21)特异性识别GMDS的试剂选自GMDS的抗体、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂选自ERBB2IP的抗体、(23)特异性识别SKP1的试剂选自SKP1的抗体、(24)特异性识别DCTN1的试剂选自DCTN1的抗体、(25)特异性识别GSTP1的试剂选自GSTP1的抗体、(26)特异性识别HBB的试剂选自HBB的抗体、(27)特异性识别LGALS4的试剂选自LGALS4的抗体、(28)特异性识别LYN的试剂选自LYN的抗体、(29)特异性识别ARPC2的试剂选自ARPC2的抗体、(30)特异性识别TAGLN2的试剂选自TAGLN2的抗体、(31)特异性识别ADH5的试剂选自ADH5的抗体、(32)特异性识别ARF6的试剂选自ARF6的抗体、(33)特异性识别CLDN18的试剂选自CLDN18的抗体、(34)特异性识别GLO1的试剂选自GLO1的抗体、(35)特异性识别SEPT2的试剂选自SEPT2的抗体、(36)特异性识别WASL的试剂选自WASL的抗体、(37)特异性识别AKR1C3的试剂选自AKR1C3的抗体、(38)特异性识别SNRPN的试剂选自SNRPN的抗体、(39)特异性识别OCLN的试剂选自OCLN的抗体、(40)特异性识别H2AFV的试剂选自H2AFV的抗体、(41)特异性识别PFDN6的试剂选自PFDN6的抗体、(42)特异性识别MUC13的试剂选自MUC13的抗体、(43)特异性识别OSTF1的试剂选自OSTF1的抗体、(44)特异性识别CHMP6的试剂选自CHMP6的抗体、(45)特异性识别PRKACA的试剂选自PRKACA的抗体、(46)特异性识别BAG5的试剂选自BAG5的抗体、(47)特异性识别ERH的试剂选自ERH的抗体、(48)特异性识别STAMBP的试剂选自STAMBP的抗体、(49)特异性识别DPP4的试剂选自DPP4的抗体、(50)特异性识别SH3BGRL的的试剂选自SH3BGRL的的抗体、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂选自CSNK1G3的抗体、(52)特异性识别PRPF38B的试剂选自PRPF38B的抗体、(53)特异性识别COL4A2的试剂选自COL4A2的抗体、(54)特异性识别PDLIM5的试剂选自PDLIM5的抗体、(55)特异性识别YA61的试剂选自YA61的抗体、(56)特异性识别SYNGR2的试剂选自SYNGR2的抗体、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂选自HLA.DRB1的抗体、(58)特异性识别RPE的试剂选自RPE的抗体、(59)特异性识别HSD17B13的试剂选自HSD17B13的抗体、(60)特异性识别GCT-A5的试剂选自GCT-A5的抗体、(61)特异性识别LARP1的试剂选自LARP1的抗体、(62)特异性识别NSFL1C的试剂选自NSFL1C的抗体、(63)特异性识别RAI14的试剂选自RAI14的抗体。所述多项是指2项、3项、4项、5项、6项、7项、8项、9项、10项、11项、12项、13项、14项、15项、16项、17项、18项、19项、20项、21项、22项、23项、24项、25项、26项、27项、28项、29项、30项、31项、32项、33项、34项、35项、36项、37项、38项、39项、40项、41项、42项、43项、44项、45项、46项、47项、48项、49项、50项、51项、52项、53项、54项、55项、56项、57项、58项、59项、60项、61项、62项或63项。
本发明第三方面，提供一种胰腺癌检测试剂盒，所述试剂盒中包括以下之任一项或多项：(1)特异性识别S100P的试剂、(2)特异性识别EGFR的试剂、(3)特异性识别PSMB3的试剂、(4)特异性识别ACTN1的试剂、(5)特异性识别TPT1的试剂、(6)特异性识别TJP2的试剂、(7)特异性识别GPI的试剂、(8)特异性识别MTPN的试剂、(9)特异性识别TAOK3的试剂、(10)特异性识别PAK2的试剂、(11)特异性识别GSS的试剂、(12)特异性识别KLC1的试剂、(13)特异性识别KRT18的试剂、(14)特异性识别LDHA的试剂、(15)特异性识别PEPD的试剂、(16)特异性识别SPTBN1的试剂、(17)特异性识别CAPG的试剂、(18)特异性识别ATP1B3的试剂、(19)特异性识别RSPO1的试剂、(20)特异性识别EPHX1的试剂、(21)特异性识别GMDS的试剂、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂、(23)特异性识别SKP1的试剂、(24)特异性识别DCTN1的试剂、(25)特异性识别GSTP1的试剂、(26)特异性识别HBB的试剂、(27)特异性识别LGALS4的试剂、(28)特异性识别LYN的试剂、(29)特异性识别ARPC2的试剂、(30)特异性识别TAGLN2的试剂、(31)特异性识别ADH5的试剂、(32)特异性识别ARF6的试剂、(33)特异性识别CLDN18的试剂、(34)特异性识别GLO1的试剂、(35)特异性识别SEPT2的试剂、(36)特异性识别WASL的试剂、(37)特异性识别AKR1C3的试剂、(38)特异性识别SNRPN的试剂、(39)特异性识别OCLN的试剂、(40)特异性识别H2AFV的试剂、(41)特异性识别PFDN6的试剂、(42)特异性识别MUC13的试剂、(43)特异性识别OSTF1的试剂、(44)特异性识别CHMP6的试剂、(45)特异性识别PRKACA的试剂、(46)特异性识别BAG5的试剂、(47)特异性识别ERH的试剂、(48)特异性识别STAMBP的试剂、(49)特异性识别DPP4的试剂、(50)特异性识别SH3BGRL的试剂、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂、(52)特异性识别PRPF38B的试剂、(53)特异性识别COL4A2的试剂、(54)特异性识别PDLIM5的试剂、(55)特异性识别YA61的试剂、(56)特异性识别SYNGR2的试剂、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂、(58)特异性识别RPE的试剂、(59)特异性识别HSD17B13的试剂、(60)特异性识别GCT-A5的试剂、(61)特异性识别LARP1的试剂、(62)特异性识别NSFL1C的试剂、(63)特异性识别RAI14的试剂。所述多项是指2项、3项、4项、5项、6项、7项、8项、9项、10项、11项、12项、13项、14项、15项、16项、17项、18项、19项、20项、21项、22项、23项、24项、25项、26项、27项、28项、29项、30项、31项、32项、33项、34项、35项、36项、37项、38项、39项、40项、41项、42项、43项、44项、45项、46项、47项、48项、49项、50项、51项、52项、53项、54项、55项、56项、57项、58项、59项、60项、61项、62项或63项。
在一种实施方式中，所述试剂盒中包括以下之任一项或多项：(1)特异性识别S100P的试剂、(2)特异性识别EGFR的试剂、(3)特异性识别PSMB3的试剂、(4)特异性识别ACTN1的试剂、(5)特异性识别TPT1的试剂、(6)特异性识别TJP2的试剂、(7)特异性识别GPI的试剂、(8)特异性识别MTPN的试剂、(9)特异性识别TAOK3的试剂、(10)特异性识别PAK2的试剂、(11)特异性识别GSS的试剂、(12)特异性识别KLC1的试剂、(13)特异性识别KRT18的试剂、(14)特异性识别LDHA的试剂、(15)特异性识别PEPD的试剂、(16)特异性识别SPTBN1的试剂、(17)特异性识别CAPG的试剂、(18)特异性识别ATP1B3的试剂、(19)特异性识别RSPO1的试剂、(20)特异性识别EPHX1的试剂、(21)特异性识别GMDS的试剂。所述多项是指2项、3项、4项、5项、6项、7项、8项、9项、10项、11项、12项、13项、14项、15项、16项、17项、18项、19项、20项或21项。
进一步的，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个联合作为生物标志物。所述多个是指2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个或63个。
在一种实施方式中，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS中的任意一个或多个联合作为生物标志物。所述多个是指2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或21个。
在一种实施方式中，所述胰腺癌检测试剂盒用于胰腺癌的判断、诊断。
在一种实施方式中，所述胰腺癌检测试剂盒包括以下之任一项或多项：(1)特异性识别S100P的试剂选自S100P的抗体、(2)特异性识别EGFR的试剂选自EGFR的抗体、(3)特异性识别PSMB3的试剂选自PSMB3的抗体、(4)特异性识别ACTN1的试剂选自ACTN1的抗体、(5)特异性识别TPT1的试剂选自TPT1的抗体、(6)特异性识别TJP2的试剂选自TJP2的抗体、(7)特异性识别GPI的试剂选自GPI的抗体、(8)特异性识别MTPN的试剂选自MTPN的抗体、(9)特异性识别TAOK3的试剂选自TAOK3的抗体、(10)特异性识别PAK2的试剂选自PAK2的抗体、(11)特异性识别GSS的试剂选自GSS的抗体、(12)特异性识别KLC1的试剂选自KLC1的抗体、(13)特异性识别KRT18的试剂选自KRT18的抗体、(14)特异性识别LDHA的试剂选自LDHA的抗体、(15)特异性识别PEPD的试剂选自PEPD的抗体、(16)特异性识别SPTBN1的试剂选自SPTBN1的抗体、(17)特异性识别CAPG的试剂选自CAPG的抗体、(18)特异性识别ATP1B3的试剂选自ATP1B3的抗体、(19)特异性识别RSPO1的试剂选自RSPO1的抗体、(20)特异性识别EPHX1的试剂选自EPHX1的抗体、(21)特异性识别GMDS的试剂选自GMDS的抗体、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂选自ERBB2IP的抗体、(23)特异性识别SKP1的试剂选自SKP1的抗体、(24)特异性识别DCTN1的试剂选自DCTN1的抗体、(25)特异性识别GSTP1的试剂选自GSTP1的抗体、(26)特异性识别HBB的试剂选自HBB的抗体、(27)特异性识别LGALS4的试剂选自LGALS4的抗体、(28)特异性识别LYN的试剂选自LYN的抗体、(29)特异性识别ARPC2的试剂选自ARPC2的抗体、(30)特异性识别TAGLN2的试剂选自TAGLN2的抗体、(31)特异性识别ADH5的试剂选自ADH5的抗体、(32)特异性识别ARF6的试剂选自ARF6的抗体、(33)特异性识别CLDN18的试剂选自CLDN18的抗体、(34)特异性识别GLO1的试剂选自GLO1的抗体、(35)特异性识别SEPT2的试剂选自SEPT2的抗体、(36)特异性识别WASL的试剂选自WASL的抗体、(37)特异性识别AKR1C3的试剂选自AKR1C3的抗体、(38)特异性识别SNRPN的试剂选自SNRPN的抗体、(39)特异性识别OCLN的试剂选自OCLN的抗体、(40)特异性识别H2AFV的试剂选自H2AFV的抗体、(41)特异性识别PFDN6的试剂选自PFDN6的抗体、(42)特异性识别MUC13的试剂选自MUC13的抗体、(43)特异性识别OSTF1的试剂选自OSTF1的抗体、(44)特异性识别CHMP6的试剂选自CHMP6的抗体、(45)特异性识别PRKACA的试剂选自PRKACA的抗体、(46)特异性识别BAG5的试剂选自BAG5的抗体、(47)特异性识别ERH的试剂选自ERH的抗体、(48)特异性识别STAMBP的试剂选自STAMBP的抗体、(49)特异性识别DPP4的试剂选自DPP4的抗体、(50)特异性识别SH3BGRL的的试剂选自SH3BGRL的的抗体、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂选自CSNK1G3的抗体、(52)特异性识别PRPF38B的试剂选自PRPF38B的抗体、(53)特异性识别COL4A2的试剂选自COL4A2的抗体、(54)特异性识别PDLIM5的试剂选自PDLIM5的抗体、(55)特异性识别YA61的试剂选自YA61的抗体、(56)特异性识别SYNGR2的试剂选自SYNGR2的抗体、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂选自HLA.DRB1的抗体、(58)特异性识别RPE的试剂选自RPE的抗体、(59)特异性识别HSD17B13的试剂选自HSD17B13的抗体、(60)特异性识别GCT-A5的试剂选自GCT-A5的抗体、(61)特异性识别LARP1的试剂选自LARP1的抗体、(62)特异性识别NSFL1C的试剂选自NSFL1C的抗体、(63)特异性识别RAI14的试剂选自RAI14的抗体。所述多项是指2项、3项、4项、5项、6项、7项、8项、9项、10项、11项、12项、13项、14项、15项、16项、17项、18项、19项、20项、21项、22项、23项、24项、25项、26项、27项、28项、29项、30项、31项、32项、33项、34项、35项、36项、37项、38项、39项、40项、41项、42项、43项、44项、45项、46项、47项、48项、49项、50项、51项、52项、53项、54项、55项、56项、57项、58项、59项、60项、61项、62项或63项。
本发明第四方面，提供S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个蛋白联合CD82和/或CD9用于制备或筛选胰腺癌检测试剂的用途。
进一步的，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个联合CD82和/或CD9作为生物标志物。
进一步的，所述胰腺癌检测试剂用于胰腺癌的判断、诊断。
需要说明的是，所述胰腺癌检测试剂并不限定为必须为液体形式。
进一步的，所述蛋白为胰腺癌组织外泌体。
本发明的有益效果为：
本发明所述胰腺癌组织外泌体是一种新型生物标志物，该类生物标志物不仅稳定，而且既能够保留原位组织的特征，又可以提供细胞间、组织细胞与胞外基质的信息，可以提供更为靶向的、更为全面的原位组织的特质，有利于研究对癌细胞之间以及癌细胞与细胞质基质的了解，推动癌症的治疗。本发明所述的制备方法可高效分离和提纯所述外泌体，本发明所有利于胰腺癌早期诊断，同时更进一步了解外泌体在胰腺癌中扮演角色，有助于发展利用外泌体来治疗胰腺癌的治疗策略。
附图说明
图1：差数离心流程(左)以及蛋白免疫印迹检测图(右)(其中，pellet1是指沉淀1即去除掉的活细胞，pellet2是指沉淀2即去除掉的死细胞，pellet3是指沉淀3即去除掉的细胞碎片，exsome是指外泌体，BSA是指阴性对照牛血清白蛋白，Alix是指外泌体特异性蛋白质标志物，tublin是指微管蛋白作为细胞蛋白质的标志物。)
图2：外泌体电镜检测图；
图3：ROC曲线图。(举例说明：已知的两个胰腺癌外泌体标准物分子的AUC值为0.822，而AUC值排名前23位的23个标志物分子联用的AUC值为1，显著得(p<0.05)优于已知标志物分子。)
具体实施方式
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的药剂学，药物分析学，药物化学，分析化学，分子生物学、生物化学及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明。
实施例1外泌体的制备
类器官培养上清由合作医院长海医院提供，收集到足够的培养基后。处理步骤如下：
1)将清澈的培养基转移到15mL离心管中。4度离心，500g，10分钟。将上清转移到新的15mL离心管中，保留沉淀；
2)离心4度，2,000g，20分钟，保留沉淀，将上清转移到超速离心管中；
3)离心4度，10000g，30分钟，保留沉淀，将上清转移到超速离心管中；
4)超高速离心，4度，100000g，2小时；
5)移除上清，200μL PBS重悬，重悬后加入PBS补足。超高速离心，4度，100000g，2小时。
6)去除上清，若培养基体积为30mL，100μL PBS重悬，洗两次。若为10mL，用35μLPBS洗两次。-80度保存。
实施例2透射电镜检测
1)取25μL外泌体样品滴在铜网上，常温孵育1分钟，然后用滤纸沿铜网边缘将溶液吸干；
2)随后再滴加25μL 2％的醋酸双氧铀染色液，常温孵育1分钟，滤纸沿铜网边缘将溶液吸干；
3)置于灯下烘烤10分钟，待铜网表面烤干后，透射电镜观察，分别记录放大1700倍、21000倍、67000倍下视野。
实施例3蛋白质免疫印迹检测外泌体
将差速离心所得各个沉淀冻干，加入20μL SDS裂解液(4％SDS，100mM Tris，0.1MDTT，pH 7.6)。同时配置阴性对照，向20μg BSA加入20μL SDS裂解液。加入5μL 5×上样缓冲液(0.25M Tris，10％SDS，50％甘油，0.5％溴酚蓝)，沸水中10分钟后离心准备好样品。随后按照以下步骤进行：
1)配置6％上层胶和12％下层胶，15mA恒定电流，2.5小时；
2)转膜，将蛋白质湿转入硝酸纤维素膜(PVDF)上，100恒定电压，1.5分钟；
3)将膜放入封闭液(5％BSA，H2O)中，常温，1小时；
4)孵育一抗，4度孵育过夜；
5)孵育完一抗后，用TBST溶液(150mM NaCl，20mM Tris，0.05％Tween-20，pH7.5)洗膜5次，每次5分钟；
6)孵育二抗，常温，2小时；7)TBST溶液洗膜5次，每次5分钟；8)将膜上覆盖ECL超敏显影液(GE Heathcare)后，用显影仪LAS-4000(FUJIFLIM)显影，记录数据。
实施例4外泌体检测
4.1溶液内酶解
将收集得到的外泌体样品冻干后，按照以下步骤进行溶液内酶解。
1)加入100μL裂解液(8M Urea，20mM Tris，50mM DTT，pH8.0)，震荡混匀，反复冻融三次，每次10分钟；
2)37度孵育2.5小时；
3)随后加入12μL 0.6M IAA溶液，暗处避光，孵育40分钟；
4)加入12μL 1M硫脲，震荡混匀，室温孵育5分钟；
5)加入500μL 50mM碳酸氢铵溶液，震荡混匀，静止3分钟。
6)加入3μg胰蛋白酶，37度摇床，20小时。7)加入35μL 10％TFA溶液后，震荡混匀，放入-80度保存。
4.2肽段StageTip脱盐
用C18Disk填料填入200μL低吸附枪头(Eppendorf)制成StageTip，按照以下步骤进行脱盐。
1)活化：向枪头中加入200μL甲醇，800g，5分钟将液体离心流穿C18填料；
2)清洗：加入200μL 0.2％TFA，70％ACN溶液，1500g，4分钟。
3)平衡：加入200μL 0.2％TFA，H2O溶液，1500g，4分钟。重复4次；
4)装载：每个柱子加入300μL溶液内酶解后样品。1000g，8分钟。
5)清洗：加入200μL 0.2％TFA，H2O溶液，1500g，4分钟。重复4次；
6)洗脱：加入100μL 0.2％TFA，90％ACN溶液，800g，5分钟，重复2次；
7)混合相同样品，取出四分之一溶液用于定量，四分之三用于质谱检测，分别冻干。
4.3蛋白质或肽段荧光定量
配置色氨酸标准曲线后，检测出样品中色氨酸的浓度，再根据编码子规则，蛋白质中色氨酸含量为1.3％，将样品中色氨酸浓度除以1.3％得到样品中蛋白质或者肽段的浓度。定量时，将色氨酸配成0、2.5、5、7.5、10、15、20、30、50、70、100ng/μL的标准品。标准品取3μL加入1mL Dilution buffer(8M urea，20mM Tris-HCl，pH 7.6)中。而样品脱盐冻干后直接加入1mL Dilution buffer。震荡混匀，离心。随后用荧光分光光度计测量，记录数据。
4.4质谱分析
脱盐过后的肽段由EASY-nLC 1000色谱(Thermo Fisher Scientific)分离后，进入Q ExactiveTMHF-X质谱(Thermo Fisher Scientific)检测。在色谱系统中，流动相A液为0.1％FA，H2O溶液，B液为0.1％FA，ACN溶液。自制C18反相色谱柱，75μm×150mm，填料为3μmC18。色谱梯度为：2min，4％B；58min，30％B，66min，45％B；69min，90％B；75min，90％B。流速0.3μL/min，时间75min。
在质谱系统中，一级和二级图谱均由Orbitrap检测器检测，其中一级为全扫，检测范围为300-1500m/z，分辨率为120,000@m/z 200，AGC target为3×106，最大离子注入时间(maximum IT)为50ms。二级为数据依赖型采集模式(DDA，top25)，HCD碎裂模式，检测范围为200-2000m/z，分辨率为15,000@m/z 200，AGC target为1×105，最大离子注入时间为35ms，isolation window为1Da，28％NCE，dynamic exclusion为30s，minimum AGC target为1×104，intensit threshold为2.9×105，排除带电荷未知或大于7离子。数据全由Xcalibur软件(Thermo Fisher Scientific)采集。
4.5数据库搜索
所有质谱产生的Raw文件通过MaxQuant 1.5.2.8软件进行检索。实验分为内源肽和重标肽搜索。其中内源肽搜索时，数据库为2018年07月14日下载的Swiss-Prot人类数据库。半胱氨酸烷基化(Carbamidomethyl)设置为固定修饰，甲硫氨酸氧化、N端乙酰化设置为可变修饰。酶设置为修饰胰蛋白酶。初步搜索和主要搜索的质量偏差容忍度分别为20ppm和4.5ppm。肽段谱图、肽段和蛋白质的假阳性率(False discovery rate，FDR)设为0.01。勾选match between runs。而重标肽搜索时，另外勾选Arg10和Lys8重同位素标记选项。
实施例5数据分析与结果
5.1统计分析
统计分析由R和Excel软件完成，删除鉴定为污染和反库的蛋白质，然后将蛋白质定量信息导入R软件。在非配对样品中，对定量结果进行标准化(均值矫正)后，筛选保留在任意一组中大于50％样品具有定量信息的蛋白质。对缺失值进行同源填充或者最小值填充。随后，对两组样本中每个蛋白质的定量信息，根据其分布对其进行t.test或Wilcox.test得到p值。然后，将每个蛋白质在正常胰腺类器官外泌体中表达量的均值除以胰腺癌类器官外泌体均值得到倍数变化(Fold Change)。最后，根据p值和Fold Change筛选出差异表达蛋白质，对全部蛋白质和筛选后差异表达蛋白质进行主成分分析(principalcomponents analysis，PCA)和系统聚类分析(hierarchical clustering analysis，HCA)以及做相关系数图。其中主成分分析以R软件中prcomp函数为基础完成，其主要作用是将数据的变量转换成不相关的变量，用更少变量显示数据主要差异而实现降维的作用。系统聚类分析以R中pheatmap包为基础完成，其根据样本之间蛋白质的表达水平评估距离，然后将距离较近的样品聚为一类。在配对样品中，除了筛选保留在任意一组中大于75％样品具有定量信息的蛋白质以及统计检验方法使用配对t检验外，其它步骤均一致。
5.2生物信息学分析
用David网(https://david.ncifcrf.gov/)工具集做KEGG代谢通路富集分析和GO富集分析。背景为默认人类全蛋白质数据库。选择p值小于0.05的GO term或KEGG pathway为富集到的功能集注。用string网站(https://string-db.org/cgi/input.pl)画蛋白质相互作用图。设置最小interaction score为0.4。
5.3实验结果
5.3.1外泌体的分离与鉴定
本发明所用样品均从合作单位长海医院获得，包括26例胰腺癌类器官培养基，13例正常胰腺类器官培养基和4例空白培养基，共43例样品，体积为10mL或12mL或30mL。样品信息可见表1。全部样品均通过透射电镜检测形态结构，除exosome12用于蛋白质免疫印迹实验外，其余样品用于对外泌体蛋白质检测的方法进行探索、验证的预实验，或者用于对胰腺癌类器官外泌体和正常胰腺类器官外泌体的蛋白质组差异分析的正式实验。
表1类器官外泌体样品信息
实验一开始，对收集得到培养基进行差速离心，然后裂解各个离心速度所得沉淀，并且和阴性对照牛血清白蛋白(BSA)一起通过蛋白质免疫印迹检测微管蛋白和外泌体特异性标志物Alix蛋白。结果显示，300g沉淀、2000g沉淀、10,000g沉淀和阴性对照BSA均未检测到Alix蛋白，在100,000g沉淀处检测到Alix蛋白，但是条带比较微弱，这说明差速离心能够分离得到外泌体，但是量比较少(见图1)。同时，各个泳道均未检测微管蛋白，这说明获取培养基前，已经去除了大部分细胞。
随后对100,000g沉淀组分进行透射电镜检测，具有代表性的空白组、胰腺癌组织类器官外泌体组和胰腺正常组织类器官外泌体组的电镜图谱颜色深浅及分布如图2所示。在1650倍镜下，未见明显膜状结构，说明细胞或细胞残余膜结构已经清除，外泌体纯度较好。放大之后显示，占大多数浅黑色斑点为外泌体，而颜色较深的点部分是外泌体，部分为染色液杂质。在67,000倍镜下，可见外泌体典型帽状结构，直径约为30-150nm。另外，空白培养基中外泌体明显比其他两类样品少，其结果符合预期。因为空白培养基中外泌体全部来源于培养基配方中占10％的293T细胞培养基上清，而其他两类不仅含有最初空白培养基中外泌体，还具有相应类器官所分泌的外泌体。这些结果显示，通过差速离心，本发明能够分离得到少量较为纯净的外泌体。
5.3.2外泌体蛋白质组检测
由蛋白质免疫印迹和透射电镜结果可知，差速离心能够分离得到少量较为纯净的外泌体。考虑到这些因素，本发明首先对4例来自10mL胰腺癌类器官培养基的外泌体样品和4例来自12mL空白培养基的外泌体样品进行溶液内酶解，将其蛋白质酶解成肽段。随后对肽段进行脱盐，四分之一用于荧光定量检测其肽段质量，四分之三用于质谱检测其肽段。荧光定量结果显示肽段总量在1μg左右并且有负值出现，这表示肽段量很低并且难以准确测量。因此本发明在LTQ Orbitrap velos(Thermo Fisher Scientific)上，采用非标记定量策略对外泌体蛋白质组进行定量。质谱数据经搜库后，结果表明胰腺癌类器官外泌体样品鉴定400～600个有定量信息蛋白质，而空白样品鉴定700-900个有定量信息蛋白质。
实施例6
本发明按照三种分组分析方式：(1)、非配对胰腺癌和正常胰腺类器官的20个外泌体样本，(2)、配对胰腺癌和正常胰腺类器官的共8个外泌体样本的蛋白质组数据，(3)、所有胰腺癌和正常胰腺类器官的共28个外泌体样本的蛋白质组数据，分别运用wilcox p值小于0.05进行差异蛋白质的选择。经严格统计筛选出的胰岛管腺癌PDAC组和正常组的类器官培养基外泌体的65个差异表达蛋白质。
65个差异表达蛋白质各自进行ROC检验，并求对于两组(胰岛管腺癌PDAC组和正常组)区分的AUC值(AUC～1：最理想的检查指标，AUC>0.9：具有良好的诊断潜力，0.7<AUC<0.9：实验准确性较高)
表2 65个差异表达蛋白质的AUC值
由本发明可知，经严格统计筛选出的胰岛管腺癌PDAC组和正常组的类器官培养基外泌体的65个差异表达蛋白质中，包括了两个已知的PDAC外泌体标志物分子(CD82：AUC＝0.8，CD9：AUC＝0.783)，以已知CD9的AUC值为筛选阈值，共有23个差异表达蛋白质的AUC值在>＝阈值，我们的数据显示，组合使用这23个潜在或已知PDAC外泌体标志物分子，比组合使用2个已知PDAC外泌体标志物分子，在PDAC组和正常组的分组判断上具有更好的效果(p<0.05)。
进一步的，本发明采用枚举法计算了AUC值排名为前1～23位的23个差异蛋白质，随机组合2个～23个对两组样品分类的AUC值。共8388584种组合方式，前10行的数据举例说明如下：
第一列为随机组合的编号(1～8388584)，除第一行外的每一行代表一种随机组合方式；第2～24列为按AUC值从大到小排名的AUC_Top1～Top23,其中V18和V21是两个已知的PDAC外泌体标志物分子(CD82：AUC＝0.8，CD9：AUC＝0.783)，其中的0表示未参与组合，1表示参与组合；第25列为该组合对应的AUC值，指示对PDAC组和正常组的分组判断效果。
对于枚举法中所涉及的共8388584种组合进行了AUC值评估，统计结果如下表所示：
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (16)
1.S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个蛋白联合用于制备或筛选胰腺癌检测试剂的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个联合作为生物标志物。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述胰腺癌检测试剂用于胰腺癌的判断、诊断。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述蛋白为胰腺癌组织外泌体。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述胰腺癌检测试剂包括以下之任一项或多项：
(1)特异性识别S100P的试剂、(2)特异性识别EGFR的试剂、(3)特异性识别PSMB3的试剂、(4)特异性识别ACTN1的试剂、(5)特异性识别TPT1的试剂、(6)特异性识别TJP2的试剂、(7)特异性识别GPI的试剂、(8)特异性识别MTPN的试剂、(9)特异性识别TAOK3的试剂、(10)特异性识别PAK2的试剂、(11)特异性识别GSS的试剂、(12)特异性识别KLC1的试剂、(13)特异性识别KRT18的试剂、(14)特异性识别LDHA的试剂、(15)特异性识别PEPD的试剂、(16)特异性识别SPTBN1的试剂、(17)特异性识别CAPG的试剂、(18)特异性识别ATP1B3的试剂、(19)特异性识别RSPO1的试剂、(20)特异性识别EPHX1的试剂、(21)特异性识别GMDS的试剂、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂、(23)特异性识别SKP1的试剂、(24)特异性识别DCTN1的试剂、(25)特异性识别GSTP1的试剂、(26)特异性识别HBB的试剂、(27)特异性识别LGALS4的试剂、(28)特异性识别LYN的试剂、(29)特异性识别ARPC2的试剂、(30)特异性识别TAGLN2的试剂、(31)特异性识别ADH5的试剂、(32)特异性识别ARF6的试剂、(33)特异性识别CLDN18的试剂、(34)特异性识别GLO1的试剂、(35)特异性识别SEPT2的试剂、(36)特异性识别WASL的试剂、(37)特异性识别AKR1C3的试剂、(38)特异性识别SNRPN的试剂、(39)特异性识别OCLN的试剂、(40)特异性识别H2AFV的试剂、(41)特异性识别PFDN6的试剂、(42)特异性识别MUC13的试剂、(43)特异性识别OSTF1的试剂、(44)特异性识别CHMP6的试剂、(45)特异性识别PRKACA的试剂、(46)特异性识别BAG5的试剂、(47)特异性识别ERH的试剂、(48)特异性识别STAMBP的试剂、(49)特异性识别DPP4的试剂、(50)特异性识别SH3BGRL的试剂、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂、(52)特异性识别PRPF38B的试剂、(53)特异性识别COL4A2的试剂、(54)特异性识别PDLIM5的试剂、(55)特异性识别YA61的试剂、(56)特异性识别SYNGR2的试剂、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂、(58)特异性识别RPE的试剂、(59)特异性识别HSD17B13的试剂、(60)特异性识别GCT-A5的试剂、(61)特异性识别LARP1的试剂、(62)特异性识别NSFL1C的试剂、(63)特异性识别RAI14的试剂。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述胰腺癌检测试剂包括以下之任一项或多项：
(1)特异性识别S100P的试剂选自S100P的抗体、(2)特异性识别EGFR的试剂选自EGFR的抗体、(3)特异性识别PSMB3的试剂选自PSMB3的抗体、(4)特异性识别ACTN1的试剂选自ACTN1的抗体、(5)特异性识别TPT1的试剂选自TPT1的抗体、(6)特异性识别TJP2的试剂选自TJP2的抗体、(7)特异性识别GPI的试剂选自GPI的抗体、(8)特异性识别MTPN的试剂选自MTPN的抗体、(9)特异性识别TAOK3的试剂选自TAOK3的抗体、(10)特异性识别PAK2的试剂选自PAK2的抗体、(11)特异性识别GSS的试剂选自GSS的抗体、(12)特异性识别KLC1的试剂选自KLC1的抗体、(13)特异性识别KRT18的试剂选自KRT18的抗体、(14)特异性识别LDHA的试剂选自LDHA的抗体、(15)特异性识别PEPD的试剂选自PEPD的抗体、(16)特异性识别SPTBN1的试剂选自SPTBN1的抗体、(17)特异性识别CAPG的试剂选自CAPG的抗体、(18)特异性识别ATP1B3的试剂选自ATP1B3的抗体、(19)特异性识别RSPO1的试剂选自RSPO1的抗体、(20)特异性识别EPHX1的试剂选自EPHX1的抗体、(21)特异性识别GMDS的试剂选自GMDS的抗体、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂选自ERBB2IP的抗体、(23)特异性识别SKP1的试剂选自SKP1的抗体、(24)特异性识别DCTN1的试剂选自DCTN1的抗体、(25)特异性识别GSTP1的试剂选自GSTP1的抗体、(26)特异性识别HBB的试剂选自HBB的抗体、(27)特异性识别LGALS4的试剂选自LGALS4的抗体、(28)特异性识别LYN的试剂选自LYN的抗体、(29)特异性识别ARPC2的试剂选自ARPC2的抗体、(30)特异性识别TAGLN2的试剂选自TAGLN2的抗体、(31)特异性识别ADH5的试剂选自ADH5的抗体、(32)特异性识别ARF6的试剂选自ARF6的抗体、(33)特异性识别CLDN18的试剂选自CLDN18的抗体、(34)特异性识别GLO1的试剂选自GLO1的抗体、(35)特异性识别SEPT2的试剂选自SEPT2的抗体、(36)特异性识别WASL的试剂选自WASL的抗体、(37)特异性识别AKR1C3的试剂选自AKR1C3的抗体、(38)特异性识别SNRPN的试剂选自SNRPN的抗体、(39)特异性识别OCLN的试剂选自OCLN的抗体、(40)特异性识别H2AFV的试剂选自H2AFV的抗体、(41)特异性识别PFDN6的试剂选自PFDN6的抗体、(42)特异性识别MUC13的试剂选自MUC13的抗体、(43)特异性识别OSTF1的试剂选自OSTF1的抗体、(44)特异性识别CHMP6的试剂选自CHMP6的抗体、(45)特异性识别PRKACA的试剂选自PRKACA的抗体、(46)特异性识别BAG5的试剂选自BAG5的抗体、(47)特异性识别ERH的试剂选自ERH的抗体、(48)特异性识别STAMBP的试剂选自STAMBP的抗体、(49)特异性识别DPP4的试剂选自DPP4的抗体、(50)特异性识别SH3BGRL的的试剂选自SH3BGRL的的抗体、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂选自CSNK1G3的抗体、(52)特异性识别PRPF38B的试剂选自PRPF38B的抗体、(53)特异性识别COL4A2的试剂选自COL4A2的抗体、(54)特异性识别PDLIM5的试剂选自PDLIM5的抗体、(55)特异性识别YA61的试剂选自YA61的抗体、(56)特异性识别SYNGR2的试剂选自SYNGR2的抗体、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂选自HLA.DRB1的抗体、(58)特异性识别RPE的试剂选自RPE的抗体、(59)特异性识别HSD17B13的试剂选自HSD17B13的抗体、(60)特异性识别GCT-A5的试剂选自GCT-A5的抗体、(61)特异性识别LARP1的试剂选自LARP1的抗体、(62)特异性识别NSFL1C的试剂选自NSFL1C的抗体、(63)特异性识别RAI14的试剂选自RAI14的抗体。
7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述蛋白的编码基因的UniProt序列号为：其中，以A_B的形式表示，A为所述蛋白的编码基因的UniProt序列号，B为所述蛋白名称：P25815_S100P、Q504U8_EGFR、A0A087WUL2_PSMB3、A0A024R694_ACTN1、A0A0P1J1R0_TPT1、A0A024R233_TJP2、P06744_GPI、Q69YG1_MTPN、Q9H2K8_TAOK3、A8K5M4_PAK2、P48637_GSS、Q07866_KLC1、F8VZY9_KRT18、V9HWB9_LDHA、J3K000_PEPD、D6W5C0_SPTBN1、P40121_CAPG、D3DNF9_ATP1B3、Q2MKA7_RSPO1、R4SBI6_EPHX1、O60547_GMDS、B4DIP2_ERBB2IP、E5RJR5_SKP1、Q14203_DCTN1、V9HWE9_GSTP1、D9YZU5_HBB、Q6FHZ4_LGALS4、P07948_LYN、Q53R19_ARPC2、P37802_TAGLN2、P11766_ADH5、Q6FH17_ARF6、P56856_CLDN18、X5DNM4_GLO1、B5MCX3_SEPT2、A4D0Y1_WASL、A0A0A0MSS8_AKR1C3、J3QLE5_SNRPN、A8K3T2_OCLN、Q71UI9_H2AFV、Q5STK2_PFDN6、Q9H3R2_MUC13、Q92882_OSTF1、Q96FZ7_CHMP6、A0A024R7J0_PRKACA、A0A024R6M6_BAG5、A0A024R6D4_ERH、A0A140VK54_STAMBP、P27487_DPP4、V9HW48_SH3BGRL、Q9Y6M4_CSNK1G3、Q5VTL8_PRPF38B、P08572_COL4A2、B7Z8X5_PDLIM5、Q9NZ23_YA61、A0A024R8T9_SYNGR2、U3PXU4_HLA.DRB1、Q96AT9_RPE、Q7Z5P4_HSD17B13、A0A125QYY6_GCT-A5、E5RH50_LARP1、Q9UNZ2_NSFL1C、Q9P0K7_RAI14。
8.(1)特异性识别S100P的试剂、(2)特异性识别EGFR的试剂、(3)特异性识别PSMB3的试剂、(4)特异性识别ACTN1的试剂、(5)特异性识别TPT1的试剂、(6)特异性识别TJP2的试剂、(7)特异性识别GPI的试剂、(8)特异性识别MTPN的试剂、(9)特异性识别TAOK3的试剂、(10)特异性识别PAK2的试剂、(11)特异性识别GSS的试剂、(12)特异性识别KLC1的试剂、(13)特异性识别KRT18的试剂、(14)特异性识别LDHA的试剂、(15)特异性识别PEPD的试剂、(16)特异性识别SPTBN1的试剂、(17)特异性识别CAPG的试剂、(18)特异性识别ATP1B3的试剂、(19)特异性识别RSPO1的试剂、(20)特异性识别EPHX1的试剂、(21)特异性识别GMDS的试剂、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂、(23)特异性识别SKP1的试剂、(24)特异性识别DCTN1的试剂、(25)特异性识别GSTP1的试剂、(26)特异性识别HBB的试剂、(27)特异性识别LGALS4的试剂、(28)特异性识别LYN的试剂、(29)特异性识别ARPC2的试剂、(30)特异性识别TAGLN2的试剂、(31)特异性识别ADH5的试剂、(32)特异性识别ARF6的试剂、(33)特异性识别CLDN18的试剂、(34)特异性识别GLO1的试剂、(35)特异性识别SEPT2的试剂、(36)特异性识别WASL的试剂、(37)特异性识别AKR1C3的试剂、(38)特异性识别SNRPN的试剂、(39)特异性识别OCLN的试剂、(40)特异性识别H2AFV的试剂、(41)特异性识别PFDN6的试剂、(42)特异性识别MUC13的试剂、(43)特异性识别OSTF1的试剂、(44)特异性识别CHMP6的试剂、(45)特异性识别PRKACA的试剂、(46)特异性识别BAG5的试剂、(47)特异性识别ERH的试剂、(48)特异性识别STAMBP的试剂、(49)特异性识别DPP4的试剂、(50)特异性识别SH3BGRL的试剂、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂、(52)特异性识别PRPF38B的试剂、(53)特异性识别COL4A2的试剂、(54)特异性识别PDLIM5的试剂、(55)特异性识别YA61的试剂、(56)特异性识别SYNGR2的试剂、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂、(58)特异性识别RPE的试剂、(59)特异性识别HSD17B13的试剂、(60)特异性识别GCT-A5的试剂、(61)特异性识别LARP1的试剂、(62)特异性识别NSFL1C的试剂、(63)特异性识别RAI14的试剂中的任一项或多项联合用于制备胰腺癌检测试剂盒中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个联合作为生物标志物。
10.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述胰腺癌检测试剂盒用于胰腺癌的判断、诊断。
11.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述胰腺癌检测试剂包括以下之任一项或多项：
(1)特异性识别S100P的试剂选自S100P的抗体、(2)特异性识别EGFR的试剂选自EGFR的抗体、(3)特异性识别PSMB3的试剂选自PSMB3的抗体、(4)特异性识别ACTN1的试剂选自ACTN1的抗体、(5)特异性识别TPT1的试剂选自TPT1的抗体、(6)特异性识别TJP2的试剂选自TJP2的抗体、(7)特异性识别GPI的试剂选自GPI的抗体、(8)特异性识别MTPN的试剂选自MTPN的抗体、(9)特异性识别TAOK3的试剂选自TAOK3的抗体、(10)特异性识别PAK2的试剂选自PAK2的抗体、(11)特异性识别GSS的试剂选自GSS的抗体、(12)特异性识别KLC1的试剂选自KLC1的抗体、(13)特异性识别KRT18的试剂选自KRT18的抗体、(14)特异性识别LDHA的试剂选自LDHA的抗体、(15)特异性识别PEPD的试剂选自PEPD的抗体、(16)特异性识别SPTBN1的试剂选自SPTBN1的抗体、(17)特异性识别CAPG的试剂选自CAPG的抗体、(18)特异性识别ATP1B3的试剂选自ATP1B3的抗体、(19)特异性识别RSPO1的试剂选自RSPO1的抗体、(20)特异性识别EPHX1的试剂选自EPHX1的抗体、(21)特异性识别GMDS的试剂选自GMDS的抗体、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂选自ERBB2IP的抗体、(23)特异性识别SKP1的试剂选自SKP1的抗体、(24)特异性识别DCTN1的试剂选自DCTN1的抗体、(25)特异性识别GSTP1的试剂选自GSTP1的抗体、(26)特异性识别HBB的试剂选自HBB的抗体、(27)特异性识别LGALS4的试剂选自LGALS4的抗体、(28)特异性识别LYN的试剂选自LYN的抗体、(29)特异性识别ARPC2的试剂选自ARPC2的抗体、(30)特异性识别TAGLN2的试剂选自TAGLN2的抗体、(31)特异性识别ADH5的试剂选自ADH5的抗体、(32)特异性识别ARF6的试剂选自ARF6的抗体、(33)特异性识别CLDN18的试剂选自CLDN18的抗体、(34)特异性识别GLO1的试剂选自GLO1的抗体、(35)特异性识别SEPT2的试剂选自SEPT2的抗体、(36)特异性识别WASL的试剂选自WASL的抗体、(37)特异性识别AKR1C3的试剂选自AKR1C3的抗体、(38)特异性识别SNRPN的试剂选自SNRPN的抗体、(39)特异性识别OCLN的试剂选自OCLN的抗体、(40)特异性识别H2AFV的试剂选自H2AFV的抗体、(41)特异性识别PFDN6的试剂选自PFDN6的抗体、(42)特异性识别MUC13的试剂选自MUC13的抗体、(43)特异性识别OSTF1的试剂选自OSTF1的抗体、(44)特异性识别CHMP6的试剂选自CHMP6的抗体、(45)特异性识别PRKACA的试剂选自PRKACA的抗体、(46)特异性识别BAG5的试剂选自BAG5的抗体、(47)特异性识别ERH的试剂选自ERH的抗体、(48)特异性识别STAMBP的试剂选自STAMBP的抗体、(49)特异性识别DPP4的试剂选自DPP4的抗体、(50)特异性识别SH3BGRL的的试剂选自SH3BGRL的的抗体、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂选自CSNK1G3的抗体、(52)特异性识别PRPF38B的试剂选自PRPF38B的抗体、(53)特异性识别COL4A2的试剂选自COL4A2的抗体、(54)特异性识别PDLIM5的试剂选自PDLIM5的抗体、(55)特异性识别YA61的试剂选自YA61的抗体、(56)特异性识别SYNGR2的试剂选自SYNGR2的抗体、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂选自HLA.DRB1的抗体、(58)特异性识别RPE的试剂选自RPE的抗体、(59)特异性识别HSD17B13的试剂选自HSD17B13的抗体、(60)特异性识别GCT-A5的试剂选自GCT-A5的抗体、(61)特异性识别LARP1的试剂选自LARP1的抗体、(62)特异性识别NSFL1C的试剂选自NSFL1C的抗体、(63)特异性识别RAI14的试剂选自RAI14的抗体。
12.一种胰腺癌检测试剂盒，所述试剂盒中包括以下之任一项或多项：(1)特异性识别S100P的试剂、(2)特异性识别EGFR的试剂、(3)特异性识别PSMB3的试剂、(4)特异性识别ACTN1的试剂、(5)特异性识别TPT1的试剂、(6)特异性识别TJP2的试剂、(7)特异性识别GPI的试剂、(8)特异性识别MTPN的试剂、(9)特异性识别TAOK3的试剂、(10)特异性识别PAK2的试剂、(11)特异性识别GSS的试剂、(12)特异性识别KLC1的试剂、(13)特异性识别KRT18的试剂、(14)特异性识别LDHA的试剂、(15)特异性识别PEPD的试剂、(16)特异性识别SPTBN1的试剂、(17)特异性识别CAPG的试剂、(18)特异性识别ATP1B3的试剂、(19)特异性识别RSPO1的试剂、(20)特异性识别EPHX1的试剂、(21)特异性识别GMDS的试剂、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂、(23)特异性识别SKP1的试剂、(24)特异性识别DCTN1的试剂、(25)特异性识别GSTP1的试剂、(26)特异性识别HBB的试剂、(27)特异性识别LGALS4的试剂、(28)特异性识别LYN的试剂、(29)特异性识别ARPC2的试剂、(30)特异性识别TAGLN2的试剂、(31)特异性识别ADH5的试剂、(32)特异性识别ARF6的试剂、(33)特异性识别CLDN18的试剂、(34)特异性识别GLO1的试剂、(35)特异性识别SEPT2的试剂、(36)特异性识别WASL的试剂、(37)特异性识别AKR1C3的试剂、(38)特异性识别SNRPN的试剂、(39)特异性识别OCLN的试剂、(40)特异性识别H2AFV的试剂、(41)特异性识别PFDN6的试剂、(42)特异性识别MUC13的试剂、(43)特异性识别OSTF1的试剂、(44)特异性识别CHMP6的试剂、(45)特异性识别PRKACA的试剂、(46)特异性识别BAG5的试剂、(47)特异性识别ERH的试剂、(48)特异性识别STAMBP的试剂、(49)特异性识别DPP4的试剂、(50)特异性识别SH3BGRL的试剂、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂、(52)特异性识别PRPF38B的试剂、(53)特异性识别COL4A2的试剂、(54)特异性识别PDLIM5的试剂、(55)特异性识别YA61的试剂、(56)特异性识别SYNGR2的试剂、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂、(58)特异性识别RPE的试剂、(59)特异性识别HSD17B13的试剂、(60)特异性识别GCT-A5的试剂、(61)特异性识别LARP1的试剂、(62)特异性识别NSFL1C的试剂、(63)特异性识别RAI14的试剂。
13.如权利要求12所述的胰腺癌检测试剂盒，其特征在于，所述胰腺癌检测试剂盒用于胰腺癌的判断、诊断。
14.如权利要求12所述的胰腺癌检测试剂盒，其特征在于，所述胰腺癌检测试剂盒包括以下之任一项或多项：
(1)特异性识别S100P的试剂选自S100P的抗体、(2)特异性识别EGFR的试剂选自EGFR的抗体、(3)特异性识别PSMB3的试剂选自PSMB3的抗体、(4)特异性识别ACTN1的试剂选自ACTN1的抗体、(5)特异性识别TPT1的试剂选自TPT1的抗体、(6)特异性识别TJP2的试剂选自TJP2的抗体、(7)特异性识别GPI的试剂选自GPI的抗体、(8)特异性识别MTPN的试剂选自MTPN的抗体、(9)特异性识别TAOK3的试剂选自TAOK3的抗体、(10)特异性识别PAK2的试剂选自PAK2的抗体、(11)特异性识别GSS的试剂选自GSS的抗体、(12)特异性识别KLC1的试剂选自KLC1的抗体、(13)特异性识别KRT18的试剂选自KRT18的抗体、(14)特异性识别LDHA的试剂选自LDHA的抗体、(15)特异性识别PEPD的试剂选自PEPD的抗体、(16)特异性识别SPTBN1的试剂选自SPTBN1的抗体、(17)特异性识别CAPG的试剂选自CAPG的抗体、(18)特异性识别ATP1B3的试剂选自ATP1B3的抗体、(19)特异性识别RSPO1的试剂选自RSPO1的抗体、(20)特异性识别EPHX1的试剂选自EPHX1的抗体、(21)特异性识别GMDS的试剂选自GMDS的抗体、(22)特异性识别ERBB2IP的试剂选自ERBB2IP的抗体、(23)特异性识别SKP1的试剂选自SKP1的抗体、(24)特异性识别DCTN1的试剂选自DCTN1的抗体、(25)特异性识别GSTP1的试剂选自GSTP1的抗体、(26)特异性识别HBB的试剂选自HBB的抗体、(27)特异性识别LGALS4的试剂选自LGALS4的抗体、(28)特异性识别LYN的试剂选自LYN的抗体、(29)特异性识别ARPC2的试剂选自ARPC2的抗体、(30)特异性识别TAGLN2的试剂选自TAGLN2的抗体、(31)特异性识别ADH5的试剂选自ADH5的抗体、(32)特异性识别ARF6的试剂选自ARF6的抗体、(33)特异性识别CLDN18的试剂选自CLDN18的抗体、(34)特异性识别GLO1的试剂选自GLO1的抗体、(35)特异性识别SEPT2的试剂选自SEPT2的抗体、(36)特异性识别WASL的试剂选自WASL的抗体、(37)特异性识别AKR1C3的试剂选自AKR1C3的抗体、(38)特异性识别SNRPN的试剂选自SNRPN的抗体、(39)特异性识别OCLN的试剂选自OCLN的抗体、(40)特异性识别H2AFV的试剂选自H2AFV的抗体、(41)特异性识别PFDN6的试剂选自PFDN6的抗体、(42)特异性识别MUC13的试剂选自MUC13的抗体、(43)特异性识别OSTF1的试剂选自OSTF1的抗体、(44)特异性识别CHMP6的试剂选自CHMP6的抗体、(45)特异性识别PRKACA的试剂选自PRKACA的抗体、(46)特异性识别BAG5的试剂选自BAG5的抗体、(47)特异性识别ERH的试剂选自ERH的抗体、(48)特异性识别STAMBP的试剂选自STAMBP的抗体、(49)特异性识别DPP4的试剂选自DPP4的抗体、(50)特异性识别SH3BGRL的的试剂选自SH3BGRL的的抗体、(51)特异性识别CSNK1G3的试剂选自CSNK1G3的抗体、(52)特异性识别PRPF38B的试剂选自PRPF38B的抗体、(53)特异性识别COL4A2的试剂选自COL4A2的抗体、(54)特异性识别PDLIM5的试剂选自PDLIM5的抗体、(55)特异性识别YA61的试剂选自YA61的抗体、(56)特异性识别SYNGR2的试剂选自SYNGR2的抗体、(57)特异性识别HLA.DRB1的试剂选自HLA.DRB1的抗体、(58)特异性识别RPE的试剂选自RPE的抗体、(59)特异性识别HSD17B13的试剂选自HSD17B13的抗体、(60)特异性识别GCT-A5的试剂选自GCT-A5的抗体、(61)特异性识别LARP1的试剂选自LARP1的抗体、(62)特异性识别NSFL1C的试剂选自NSFL1C的抗体、(63)特异性识别RAI14的试剂选自RAI14的抗体。
15.S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个蛋白联合CD82和/或CD9用于制备或筛选胰腺癌检测试剂的用途。
16.如权利要求15所述的用途，其特征在于，S100P、EGFR、PSMB3、ACTN1、TPT1、TJP2、GPI、MTPN、TAOK3、PAK2、GSS、KLC1、KRT18、LDHA、PEPD、SPTBN1、CAPG、ATP1B3、RSPO1、EPHX1、GMDS、ERBB2IP、SKP1、DCTN1、GSTP1、HBB、LGALS4、LYN、ARPC2、TAGLN2、ADH5、ARF6、CLDN18、GLO1、SEPT2、WASL、AKR1C3、SNRPN、OCLN、H2AFV、PFDN6、MUC13、OSTF1、CHMP6、PRKACA、BAG5、ERH、STAMBP、DPP4、SH3BGRL、CSNK1G3、PRPF38B、COL4A2、PDLIM5、YA61、SYNGR2、HLA.DRB1、RPE、HSD17B13、GCT-A5、LARP1、NSFL1C、RAI14中的任意一个或多个联合CD82和/或CD9作为生物标志物。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20200721 |
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |