CN111419724B - 一种聚酰胺-胺与氯己定的复合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种含聚酰胺‑胺的复合物及其制备方法和应用，具体涉及一种聚酰胺‑胺与氯己定的复合物及其制备方法和应用。一种聚酰胺‑胺与氯己定的复合物，包括聚酰胺‑胺树枝状聚合物和葡萄糖酸氯己定，葡萄糖酸氯己定附着在聚酰胺‑胺树枝状聚合物上。该复合物可以促进牙本质再矿化，从而封闭树脂和牙本质的粘接界面的微渗漏间隙，进而提高树脂和牙本质粘接长效性。聚酰胺‑胺树枝状聚合物和葡萄糖酸氯己定形成的复合物可以作为牙本质再矿化剂应用到医疗实践中。

Description

一种聚酰胺-胺与氯己定的复合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种聚酰胺-胺与氯己定的复合物及其制备方法和应用。

背景技术

人牙本质结构由于缺乏细胞成分，在受到损伤后，无法像骨组织一样实现自我修复。目前临床上最常见的治疗方法，是采用复合树脂材料对牙本质缺损部位进行粘接充填修复。但是大量临床和实验室结果都证实树脂牙本质粘接的长期效果并不尽如人意，复合树脂材料形成的修复体容易脱离牙本质，继发龋产生等问题。树脂和牙本质粘接界面是整个树脂修复牙本质技术的薄弱环节。随着时间的推移，在粘接界面上树脂和牙本质之间会形成微渗漏间隙。微渗漏间隙会使局部离子浓度高于在微渗漏间隙外部形成的离子浓度，并超过许多矿物形式(磷酸钙、氟化钙等)的溶解度积常数，从而导致微渗漏间隙中牙本质再矿化困难，微渗漏间隙难以封闭，最终导致复合树脂材料形成的修复体从牙本质上脱落。

聚酰胺-胺树枝状聚合物(Polyamide-amine dendrimer)是仿生矿化的研究热点，已有大量研究表明不同端基的聚酰胺-胺树枝状聚合物皆能作为良好的再矿化，剂诱导部分脱矿的牙本质再矿化，甚至能够在完全脱矿的牙本质表面作为矿化中心使胶原纤维重新矿化。但是单独使用聚酰胺-胺树枝状聚合物的促牙本质再矿化的效果并不理想，特别是在树脂和牙本质粘接界面上的微渗漏间隙中，聚酰胺-胺树枝状聚合物促进牙本质再矿化的能力尚不能满足修复和封闭微渗漏间隙的应用需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种聚酰胺-胺与氯己定的复合物，该复合物可以促进牙本质再矿化，从而封闭树脂和牙本质的粘接界面的微渗漏间隙，进而提高树脂和牙本质粘接长效性。

为解决上述技术问题，本发明技术方案如下：

一种聚酰胺-胺与氯己定的复合物，包括聚酰胺-胺树枝状聚合物和吸附在所述聚酰胺-胺树枝状聚合物上的葡萄糖酸氯己定。

采用上述技术方案，技术原理以及有益效果如下：聚酰胺-胺树枝状聚合物和葡萄糖酸氯己定联合使用能在树脂和牙本质之间的微渗漏间隙内诱导完全脱矿的牙本质的再矿化，在牙本质表面形成的类似牙本质羟基磷灰石的晶体矿化层，可完全封闭暴露的牙本质小管。该复合体在树脂和牙本质粘接界面，可发挥再矿化和抑制基质金属蛋白酶(MMPs)的双重作用，达到减少微渗漏间隙，保护牙本质胶原，提高树脂和牙本质粘接长效性。

树脂和牙本质粘接界面是整个树脂修复技术的薄弱环节，在此界面存在的两个关键问题：微渗漏间隙的形成和MMPs对胶原纤维的降解。聚酰胺-胺树枝状聚合物能作为良好的再矿化剂诱导部分脱矿的牙本质再矿化，甚至能够在完全脱矿的牙本质表面作为矿化中心使胶原纤维重新矿化。葡萄糖酸氯己定作为常见的蛋白酶抑制素对于基质金属蛋白酶(MMP-2，-8和-9)活性有明显抑制；与牙体组织亲和力强；抑菌作用强，能降低变异链球菌的耐酸性；减少环境PH降低的速率。发明人将两者联合使用，意在通过两个途径来改善牙本质和树脂结合界面的强度和抗疲劳性能(即持久度)。葡萄糖酸氯己定可抑制牙本质内MMPs活性，防止胶原纤维降解，从而增强界面粘接的长效性。聚酰胺-胺树枝状聚合物具有促进牙本质再矿化，可形成新的晶体来封闭或减小微渗漏间隙。发明人将该复合物应用于微环境模型(模拟微渗漏间隙)中，意外发现复合物可在微环境中有效促进牙本质有效再矿化。而单独用聚酰胺-胺树枝状聚合物和葡萄糖酸氯己定分别处理微环境模型，对模拟微渗漏间隙的修复封闭作用不如本发明的复合物。特别是葡萄糖酸氯己定单用，牙本质的再矿化速度非常慢，葡萄糖酸氯己定单用的微渗漏间隙的修复作用非常小。现有技术中，葡萄糖酸氯己定对于胶原纤维的保护作用在12-14个月后往往开始明显衰减，因此应当尽量提高脱矿牙本质的再矿化速率，在氯己定分子洗脱失效之前完成再矿化。使用本发明复合物处理微环境模型，扫描电镜下可见牙本质表面形成了一层致密的片状矿化,牙本质管被完全堵塞，矿化形成的晶体的微观结构、生长择向和内容成分均类似于牙本质磷灰石，且复合物对Ca、P离子也有较高的吸收强度。牙本质的有效再矿化可促进修复和封闭微渗漏间隙。由此可见，葡萄糖酸氯己定可以协同增强聚酰胺-胺树枝状聚合物对牙本质再矿化的诱导作用，提高牙本质再矿化完成速度，促进微渗漏间隙的封闭和修复。

进一步，所述聚酰胺-胺树枝状聚合物为G4-PAMAM-COOH。

采用上述技术方案，G4-PAMAM-COOH指的是第四代聚酰胺-胺大分子，分散在每个端基末端的基团为羧基。G4-PAMAM-COOH具有良好的促牙本质矿化的作用，并且可以作为葡萄糖酸氯己定的附着支架，对葡萄糖酸氯己定有良好的吸附作用。

进一步，所述G4-PAMAM-COOH的分子式为C₈₇₈H₁₅₀₄N₂₅₀O₃₁₆。

采用上述技术方案，C₈₇₈H₁₅₀₄N₂₅₀O₃₁₆的分子量为20615，该分子量的聚合物分子对葡萄糖酸氯己定有较好的吸附作用。G4-PAMAM-COOH的分子量过大(聚合度过大)会导致聚合物分子的溶解度差，不能够在水溶液环境中和葡萄糖酸氯己定发生充分吸附结合。G4-PAMAM-COOH的分子量过小(聚合度过小)，会导致该分子本身的促牙本质矿化的作用削弱。

进一步，一种聚酰胺-胺与氯己定的复合物的制备方法，包括以下步骤：将葡萄糖酸氯己定溶液和聚酰胺-胺树枝状聚合物溶液混合，获得混合溶液；将混合溶液静置后震荡处理，获得含有复合物的溶液。

采用上述技术方案，使得葡萄糖酸氯己定和聚酰胺-胺树枝状聚合物充分混合，葡萄糖酸氯己定可在聚酰胺-胺树枝状聚合物上形成稳定附着。

进一步，葡萄糖酸氯己定溶液中葡萄糖酸氯己定的质量分数为2％，聚酰胺-胺树枝状聚合物溶液中聚酰胺-胺树枝状聚合物的浓度为10mg/ml；葡萄糖酸氯己定溶液和聚酰胺-胺树枝状聚合物溶液的体积比为1:10-1:5。

采用上述技术方案，配制质量分数为2％葡萄糖酸氯己定溶液，以及浓度为10mg/ml的聚酰胺-胺树枝状聚合物溶液，两种物质可充分溶解，有助于后续混合时聚酰胺-胺树枝状聚合物充分吸附葡萄糖酸氯己定。并且前期实验证明，2％的葡萄糖酸氯己定溶液可抑制MMPs活性，且浓度为10mg/ml聚酰胺-胺树枝状聚合物溶液具有较好的促矿化能力。葡萄糖酸氯己定溶液和聚酰胺-胺树枝状聚合物溶液的体积比为1:10-1:5，可保证聚酰胺-胺树枝状聚合物上有充分的葡萄糖酸氯己定负载。体积比大于1:5，葡萄糖酸氯己定过量导致浪费；体积比小于1:10会导致聚酰胺-胺树枝状聚合物上负载的葡萄糖酸氯己定过少，葡萄糖酸氯己定对聚酰胺-胺树枝状聚合物在促矿化的协同作用不能充分发挥。

进一步，在37℃的环境中，将所述混合溶液静置1h，然后震荡所述混合溶液24h，获得含有复合物的溶液。

采用上述技术方案，在静置和震荡过程中，葡萄糖酸氯己定和聚酰胺-胺树枝状聚合物充分吸附，形成本方案的复合物，可以使得葡萄糖酸氯己定在聚酰胺-胺树枝状聚合物上均匀、充分且稳定地附着。

进一步，对含有复合物的溶液进行超滤处理，获得上清液。

采用上述技术方案，经过超滤除去杂质，避免杂质对复合物修复效果的影响。

进一步，使用截留分子量为3KD的超滤管对含有复合物的溶液进行超滤处理。

采用上述技术方案，截留分子量为3KD的超滤管可将形成的复合物同未发生吸附反应的葡萄糖酸氯己定单体和聚酰胺-胺树枝状聚合物单体分开。

进一步，所述超滤处理的时间为1h，转速为4000rpm。

采用上述技术方案，上述超滤条件可保证复合物同未发生吸附反应的葡萄糖酸氯己定单体和聚酰胺-胺树枝状聚合物单体充分分开，保证上清液中的复合物具有较高纯度。

进一步，一种聚酰胺-胺与氯己定的复合物作为牙本质再矿化剂的应用。

采用上述技术方案，聚酰胺-胺树枝状聚合物和氯己定类化合物形成的复合物具有促进牙本质表面的再矿化的作用，可以作为牙本质再矿化剂应用到医疗实践中。聚酰胺-胺树枝状聚合物存在内部空腔，并含有大量的反应性末端基团，这些结构使得聚酰胺-胺树枝状聚合物可以模拟天然有机基质在牙体组织表面进行仿生矿化，聚酰胺-胺树枝状聚合物作为有机模板调控矿物质成核以及晶体的生长，以此来建造比传统的异体材料更加理想的牙体修复材料。聚酰胺-胺树枝状聚合物在氯己定类化合物的协同作用下，具有更强的诱导完全脱矿的牙本质的再矿化的能力，在牙本质表面形成的类似牙本质羟基磷灰石的晶体矿化层，并可完全封闭暴露的牙本质小管。该复合体在树脂和牙本质粘接界面，可发挥再矿化和抑制基质金属蛋白酶的双重作用，达到减少微渗漏间隙，保护牙本质胶原，提高树脂和牙本质粘接长效性。

附图说明

图1为实施例1制备的靶向超声纳米泡的结构示意图；

图2为实施例2的微环境模型的正视图；

图3为实施例2的微环境模型的俯视图；

图4为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(去离子水组，放大3000倍)；

图5为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(去离子水组，放大20000倍)；

图6为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(PAMAM组，放大3000倍)；

图7为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(PAMAM组，放大20000倍)；

图8为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(CG组，放大3000倍，矿化区)；

图9为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(CG组，放大20000倍，矿化区)；

图10为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(CG组，放大3000倍，非矿化区)；

图11为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(CG组，放大20000倍，非矿化区)；

图12为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(图11的A部放大图)；

图13为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(PAMAM+CG组，放大3000倍)；

图14为实验例1的扫描电镜观察完全脱矿牙本质表面形貌的图像(PAMAM-COOH+CG组，放大20000倍)；

图15为实验例1的EDX能谱图(去离子水组)；

图16为实验例1的EDX能谱图(PAMAM-COOH组)；

图17为实验例1的EDX能谱图(CG组，矿化区)；

图18为实验例1的EDX能谱图(CG组，非矿化区)；

图19为实验例1的EDX能谱图(PAMAM-COOH+CG组)；

图20为实验例2的脱矿牙本质片经处理后的拉曼光谱结果(去离子水组)；

图21为实验例2的脱矿牙本质片经处理后的拉曼光谱结果(CG组)；

图22为实验例2的脱矿牙本质片经处理后的拉曼光谱结果(PAMAM组)；

图23为实验例2的脱矿牙本质片经处理后的拉曼光谱结果(PAMAM+CG组)；

图24为实验例3的脱矿牙本质片经处理后的XRD分析图谱。

具体实施方式

下面通过具体实施方式进一步详细说明：

说明书附图中的附图标记包括：Z350树脂板1、牙本质片样本2、固化树脂3、50μm间隙4。

实施例1：复合物的制备

在溶质质量分数为2％的葡萄糖酸氯己定(C₃₄H₅₄C1₂N₁₀O₁₄，索莱宝，北京，以下简称为CG)溶液中加入10mg/ml聚酰胺-胺树枝状聚合物(G4-PAMAM-COOH，威海晨源公司，山东，以下简称为PAMAM-COOH)溶液混合，获得混合溶液。其中，CG溶液与PAMAM-COOH溶液的体积比可在1:10-1:5之间，在本实施例中具体为1:5。然后将该混合溶液在37℃水浴箱中放置1h，然后37℃摇床震荡24h，将震荡处理后的混合溶液加入截留分子量为3KD的超滤管分离，然后以4000rpm的转速离心1h，取上清液，获得PAMAM+CG复合物(聚酰胺-胺树枝状聚合物和葡萄糖酸氯己定形成的复合物)，为了判断CG分子是否负载到PAMAM-COOH大分子上，利用FT-IR进行分析，用FT-IR光谱仪(傅里叶变换红外光谱仪，Nicolet，美国)进行表征，结果如图1所示，图中PAMAM-COOH代表聚酰胺-胺树枝状聚合物(蓝色曲线)，CG代表葡萄糖酸氯己定(黑色曲线)，PAMAM+CG代表聚酰胺-胺树枝状聚合物和葡萄糖酸氯己定形成的复合物(蓝色曲线)。可见对比于PAMAM-COOH，PAMAM+CG复合物不仅在1243cm^-1表现出PAMAM-COOH的特征峰，还在1581cm^-1和1492cm^-1等多处出现CG药物分子苯环骨架的振动吸收峰，说明CG分子已经成功负载到PAMAM-COOH大分子上。

实施例2：使用PAMAM+CG复合物处理的牙本质样片的制备

选择12颗新鲜无龋的第三磨牙制备实验样本(某医科大学附属医院提供)，要求牙齿无色斑、颜色均一、非四环素或氟斑牙、且拔牙前为活髓牙。患者年龄20-50岁。新鲜拔除的离体牙立即用刮器和蒸馏水去除血液、软组织和牙石等残留物。牙齿洗净后储存在4℃的0.02％麝香草酚中备用。用低速锯(硬组织切片机，EXAKT，德国)以垂直于牙体长轴方向在釉牙本质界上方1.5mm处切割出厚度为1mm的牙本质片。每颗牙制备1片牙本质片，共制备12片牙本质片。随后将牙本质片的观测面(牙本质片两面都为牙本质，任选一面作为观测面，将非观测面用黑色标记作为区分)先后用320目、600目的碳化硅砂纸湿打磨各30s。然后将观测面用35％的磷酸凝胶溶液酸蚀60s，去离子水冲洗60s，形成约5-8μm完全脱矿牙本质(是指牙本质观测面被酸蚀脱矿后形成的一层缺乏矿物质、胶原纤维裸露的完全脱矿牙本质，厚度为5-8μm)，经150W超声震荡15min后(为了清理酸蚀脱矿下来的牙本质羟基磷灰石以及一些杂质，得到完全脱矿的牙本质)，获得脱矿牙本质片。

将上述脱矿牙本质片随机平均分配到4个处理液组中(每组三个脱矿牙本质片)，分别是PAMAM组，CG组，PAMAM+CG组，去离子水组。各组脱矿牙本质片表面分别用10mg/mlG4-PAMAM-COOH(PAMAM组)、2％葡萄糖酸氯己定(CG组)、PAMAM+CG复合物(实施例1制备，即上清液)(PAMAM+CG组)、去离子水(去离子水组)浸泡1h后，用去离子水冲洗5s，空气干燥，获得牙本质片样本。

将Z350光固化复合树脂(3M，美国)置于两玻板之间，压制层约1mm厚度光固化复合树脂块,光照固化20S(Bluephase N MC光固化灯，列支敦士登)，光照输出强度为800mW/cm²。采用320目和600目砂纸分别打磨表面，酸蚀15s去除杂质，去离子水冲洗15s，空气干燥，获得Z350树脂板。

用50μm厚度的透明成型片置于上述制备完成的牙本质片样本的观测面与Z350树脂板之间，牙本质片样本两端通过固化的流动树脂(又称固化树脂，使用Z350光固化复合树脂光滑固定后制成)用自酸蚀粘接剂(ALL-BOND自酸蚀粘接剂，Bisco，美国)与Z350树脂板粘接固定，光照固化20S，随后抽出成型片，从而制成间隙宽度为50μm的Z350树脂板和牙本质片样本粘接的微环境模型。

微环境模型如图2和图3所示，牙本质片样本2通过固化树脂3固定在Z350树脂板1上(使用自酸蚀粘接剂作为粘接剂)。固化树脂3一端粘接牙本质片样本2，另一端粘接Z350树脂板1。Z350树脂板1和牙本质片样本2之间有50μm间隙4，牙本质片样本2的观测面朝向Z350树脂板1。人牙本质结构由于缺乏细胞成分，在受到损伤后，无法像骨组织一样实现自我修复。目前临床上最常见的治疗方法，是采用复合树脂材料对牙本质缺损部位进行粘接充填修复。树脂和牙本质粘接界面是整个树脂修复技术的薄弱环节，树脂牙本质粘接界面会形成纳米微渗漏。本实施例中使用50μm间隙4的微环境模拟了微渗漏环境，50μm间隙4的微环境可能会使局部离子浓度高于在外部或自由表面形成的离子浓度，并超过许多矿物形式(磷酸钙、氟化钙等)的溶解度积常数。将微环境模型保存在37℃的人工唾液(pH＝7.0，索莱宝，北京)中，每24h更换人工唾液，并于第14天取出检测分析。

实验例1：SEM和EDX检测

取实施例2中的在人工唾液中浸泡过的微环境模型，将Z350树脂板与牙本质片样本从粘接处(固定胶处)掰开后，取牙本质片样本进行乙醇梯度脱水，戊二醛固定后采用冷冻干燥，并喷金。使用场发射扫描电镜和能谱分析仪(Hitachi，日本)对牙本质片样本进行检测。扫描电镜(scanning electron microscope，SEM)在5kV条件下观察牙本质表面(牙本质片样本的观测面)的矿化情况，并使用能谱分析仪(energy dispersive X-ray，EDX)在20kV条件下分析牙本质测量面钙(Ca)、磷(P)、碳(C)、氧(O)元素成份，每个样本取4个测试点。

SEM观察结果如图4-14所示：与去离子水组(图4和图5)相比，PAMAM组(图6和图7)完全脱矿牙本质14d后单位面积的牙本质管稀疏，在管周围聚集了大量的粟米棒状晶体结构，只剩下少量的纤维间隙。且在牙本质管内观察到这种晶体沿胶原纤维放射状沉积，几乎完全堵塞牙本质小管。而去离子水组仅有少许沉积物附着在牙本质表面，牙本质小管仍然完全开放。CG组完全脱矿牙本质14d后，在部分区域发生肉眼可见的矿化，大量直径约为150-200nm的棒状晶体沿牙本质表面放射状生长，完全覆盖了牙本质管口(图8和图9)。其他区域在电镜下可见牙本质管稀疏，有球状晶体附着在脱矿胶原纤维表面，虽然在小管内仍可观察到胶原纤维的网状结构，但在管间区却变得不明显(图10、图11和图12)。PAMAM+CG组(图13和图14)完全脱矿牙本质14d后，牙本质块发生肉眼可见的矿化，大量致密的片状矿化结构沿管周胶原纤维方向排列，镜下可见牙本质小管被完全覆盖。

EDX结果(能谱图)如图15-19所示：PAMAM、CG、PAMAM+CG三组再矿化后，完全脱矿的牙本质表面新形成的矿物层均含有较丰富的Ca和P，且Ca和P的比值(Ca/P)分别为1.94、1.79、1.87，再矿化物比较接近天然羟基磷灰石(Ca/P为1.67)。而去离子水组Ca/P为2.04，且牙本质表面Ca和P含量较低。另外，对牙本质样本进行了EDX表面扫描(图片未展示)，表面扫结果显示PAMAM+CG组矿化后的牙本质表面Ca、P元素分布最为密集，且亮度最高，说明表面Ca、P含量高于其他实验组(PAMAM组、CG组)、对照组和去离子水组，也说明了PAMAM+CG组供试药物的脱矿牙本质再矿化的效果好。PAMAM+CG组中使用了本发明的复合物，该复合物较PAMAM-COOH单用或CG单用具有更好的促牙本质矿化效果，PAMAM+CG组表面Ca、P成分高于其他各组，且PAMAM组PAMAM+CG组表面C、O含量高于CG组和去离子水组。

实验例2：激光拉曼光谱

采用激光拉曼光谱(激光拉曼光谱仪，LabRAM HR，德国)检测4组脱矿牙本质在浸泡14d后的表面磷酸根PO₄ ^3-峰强度的变化。取实施例2中的在人工唾液中浸泡过的微环境模型，将Z350树脂板与牙本质片样本从粘接处(固定胶处)掰开后，取牙本质片样本进行检测。拉曼光谱波长设置范围为900-1700cm^–1，600-lines/mm，分辨率为4cm^–1。光谱数据用OMNIC8软件分析，去除背景、校正基线，比较各组磷酸根峰强度的变化情况。

实验结果如图20-23所示(图中PAMAM-COOH即为文中的PAMAM)，处于960cm^–1波长的磷酸根峰代表了羟基磷灰石，1030cm^–1波长的磷酸根峰代表了化学计量羟基磷灰石中的磷酸根峰(即最佳配比)，而1050-1430cm^–1波长范围内代表了酰胺III峰。在去除背景干扰的前提下，去离子水组主要在1330cm^–1处出现酰胺键-CO-NH-(Amide)特征峰，为III型胶原纤维的特征峰；其他三组实验组均出现了较强磷酸根特征峰，即牙本质(羟基磷灰石)特征峰，其中PAMAM+CG组的磷酸根特征峰最强，出现在1030cm^–1。实验结果说明了使用本发明的复合物，该复合物较PAMAM-COOH单用或CG单用具有更好的促牙本质矿化效果。PAMAM-COOH对牙本质吸附性强，不易洗脱，且本身能促进牙本质仿生矿化；CG分子主要对牙本质中的基质金属蛋白酶有抑制作用。单独的PAMAM-COOH对游离的基质金属蛋白酶(例如rhMMP-2)活性产生了促进作用，而本方案的复合物能有效的抑制基质金属蛋白酶活性。PAMAM-COOH与MMPs(rhMMP-2)相接触，由于其三维球状结构和其表面负电荷，两种相同种类的电荷互斥使MMP分子活性位点伸展，增加酶与底物的反应面积，进而促进MMP活性。当CG分子中的氯已定(CHX)通过静电作用吸附到PAMAM-COOH上后，改变PAMAM-COOH表面电荷，对MMP产生抑制作用。本方案的复合物对MMP显示出了较CG单用和PAMAM-COOH单用更强的抑制作用。

实验例3：XRD检测

采用XRD衍射仪(X射线衍射仪，岛津，日本)检测4组完全脱矿牙本质在浸泡14d后的表面形成晶体情况。取实施例2中的在人工唾液中浸泡过的微环境模型，将Z350树脂板与牙本质片样本从粘接处(固定胶处)掰开后，取牙本质片样本进行检测。XRD衍射仪检测参数如下：Cu-kα射线，电压40kV，电流40mA，Ni滤光片，扫描角度25°-65°，XRD数据通过MDI Jade9软件进行物相分析。将所得到的XRD图谱与标准衍射卡(joint committee on powerdiffraction，JCPDS)进行对照，根据(002)和(211)经索引的XRD峰分别计算沿着c和a轴的衍射峰强比和两个方向上的平均晶粒尺寸，使用Scherrer方程如下：

D＝Kλ/βcosθ(nm)；

D是以纳米为单位的晶粒尺寸，K是Scherrer常数(K＝0.9)，λ是以纳米为单位的X射线波长(λ＝0.154)，β是衍射峰的半最大强度，θ是衍射峰的衍射角。将各组得到的数据与未脱矿的健康牙本质进行对照，分析样本的物相组成和晶体结构。

实验组和去离子水组样本的XRD分析结果见图24。正常牙本质物相主要由羟基磷灰石构成(图24最上方曲线)。PAMAM+CG组(图24中的PAMAM-COOH+CG组)牙本质表面生成物的峰形尖锐清晰，在衍射角2θ为26°和31.8°时出现明显衍射峰，这些特征峰出现的位置与国际衍射数据中心(International Centre for Diffraction Data，ICDD)提供的羟基磷灰石衍射图的标准卡片(JCPDS卡)对应一致，且与健康牙本质的衍射峰基本一致。去离子水组在14d再矿化后衍射峰较弱。说明使用本发明的复合物处理脱矿牙本质后，脱矿牙本质可恢复至接近健康牙本质的状态，而单用PAMAM-COOH或CG处理脱矿牙本质，脱矿牙本质的羟基磷灰石衍射峰较PAMAM+CG组弱，说明PAMAM-COOH和CG具有协同增强脱矿牙本质再矿化的作用。

用c-axis(002)与(211)的峰强比代表衍射强度的比值(结果见表1)：各组峰强比值均比较接近与健康牙本质的，其中PAMAM组衍射强度比值略高。PAMAM+CG组在c轴方向的平均晶粒尺寸(是指晶粒(25.8)/nm)远大于其余各组包括健康牙本质，晶粒在c轴与a轴方向的纵横比大于PAMAM组、CG组和去离子水组，最接近于健康牙本质。代表了PAMAM+CG组诱导再矿化生成晶粒的基本形态与羟基磷灰石接近，且向c轴方向生长的趋势更强。c-axis(002)与(211)的峰强比分析结果同XRD分析结果，说明PAMAM-COOH和CG形成的复合物具有促进脱矿牙本质再矿化的作用。

表1:牙本质经不同处理14d后XRD衍射峰强与晶粒尺寸

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (8)

1.一种聚酰胺-胺与氯己定的复合物，其特征在于，包括聚酰胺-胺树枝状聚合物和吸附在所述聚酰胺-胺树枝状聚合物上的葡萄糖酸氯己定；所述聚酰胺-胺树枝状聚合物为G4-PAMAM-COOH，分子式为C₈₇₈H₁₅₀₄N₂₅₀O₃₁₆。

2.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺与氯己定的复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将葡萄糖酸氯己定溶液和聚酰胺-胺树枝状聚合物溶液混合，获得混合溶液；将混合溶液静置后震荡处理，获得含有复合物的溶液。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，葡萄糖酸氯己定溶液中葡萄糖酸氯己定的质量分数为2%，聚酰胺-胺树枝状聚合物溶液中聚酰胺-胺树枝状聚合物的浓度为10mg/ml；葡萄糖酸氯己定溶液和聚酰胺-胺树枝状聚合物溶液的体积比为1:10-1:5。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在37℃的环境中，将所述混合溶液静置1h，然后震荡所述混合溶液24h，获得含有复合物的溶液。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，对含有复合物的溶液进行超滤处理，获得上清液。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，使用截留分子量为3KD的超滤管对含有复合物的溶液进行超滤处理。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述超滤处理的时间为1h，转速为4000rpm。

8.根据权利要求1所述的一种聚酰胺-胺与氯己定的复合物在制备牙本质再矿化剂中的应用。

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