CN111394253A - 一种微拟球藻高密度连续培养方法 - Google Patents

一种微拟球藻高密度连续培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种微拟球藻高密度连续培养方法，包括以下步骤：在封闭的光反应器中配置培养基，然后使用紫外灯进行消毒30min，将生长至指数生长期的微拟球藻接种到上述培养基中，所述微拟球藻培养液接种量为5～20%；采用人工LED光源培养，培养温度为20～30℃，采用单色白光照射3～5天，白光光照强度为500～2000lx，当培养第五天时，放出一半培养液，流加一半新鲜培养基继续发酵，以后每隔2天释放一半体积，作为微拟球藻发酵液，连续流加10批次。该微拟球藻高密度连续培养方法，能够持续为微拟球藻的培养持续提供光源，从而能够使微拟球藻进行高密度培养，也能够使微拟球藻的培养工作持续进行，从而完成微拟球藻的连续培养工作。

Description

一种微拟球藻高密度连续培养方法
技术领域
本发明涉及微拟球藻培养技术领域，具体为一种微拟球藻高密度连续培养方法。
背景技术
微藻，即微体藻类，大小从几微米到几百微米不等，能高效生产脂类、蛋白质、多糖等有机物，其中脂质可通过酯交换反应转化为生物柴油，而微拟球藻的脂质比例高达68%，微拟球藻作为一种单细胞藻类，除了脂质含量高外，还具有环境适应能力强、个体小、繁殖速度快等优点，跻身生产生物柴油的优良藻种行列。
目前对于微拟球藻的需求比较大，但是微拟球藻的一些培养方法存在一定的问题，例如大部分的微拟球藻养殖方法都是通过培养基对微拟球藻种进行培养，控制好温度条件后进行培养几天便可以得到微拟球藻，但是这样的培方式只能够进行一次微拟球藻培养工作，需要下次培养微拟球藻时，便需要重新准备培养工作，从而无法进行持续性的培养过程。
所以我们提出了一种微拟球藻高密度连续培养方法，以便于解决上述中提出的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种微拟球藻高密度连续培养方法，以解决上述背景技术提出的目前大多数的微拟球藻养殖方法无法进行持续性的培养工作的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种微拟球藻高密度连续培养方法，包括以下步骤：
A．接种步骤：在封闭的光反应器中配置培养基，然后使用紫外灯进行消毒30min，将生长至指数生长期的微拟球藻接种到上述培养基中，所述微拟球藻培养液接种量为5～20%；
B．培养方法：采用人工LED光源培养，该培养步骤依次分为两个过程。起始过程：培养温度为20～30℃，采用单色白光照射3～5天，白光光照强度为500～2000lx。连续培育过程：当培养第五天时，放出一半培养液，流加一半新鲜培养基继续发酵，以后每隔2天释放一半体积，作为微拟球藻发酵液，连续流加10批次。
优选的，所述每升培养基中含有：尿素0.5～3克，硝酸钠0.3～1克，磷酸二氢钾0.02～0.1克，硫酸镁0.05～0.2克，氯化钙0.03～0.2克，硫酸亚铁0.01～0.1克，NA-EDTA0.01～0.1克，微量元素母液1毫升，维生素母液1毫升，所述培养基的pH值为6～8.5。
优选的，所述使用紫外灯管进行消毒10～30min，紫外灯波长为180～254nm，1立方米的水体配备紫外灯的功率范围为30～360W。
优选的，所述每升微量元素母液含有：0.01～0.03克的五水硫酸铜，0.01～0.05克的七水硫酸锌，0.01～0.02克的六水氯化钴，0.1～0.3克的四水氯化锰，0.01～0.1克的二水钼酸钠。
优选的，所述每升维生素母液含有：维生素B1为0.1～1克，维生素B6为0.1～1克，维生素B12为0.1～1克，生物素0.1～1克。
优选的，所述步骤B中，培养条件为：培养温度为20～30℃，采用单色白光照射3～5天，白光光照强度为500～2000lx。
优选的，所述步骤B中，通过释放30～50%体积的发酵液，再补充等额的体积的营养液进行连续培育。
优选的，所述步骤B中，在连续培育过程中，培育周期为两天。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该微拟球藻高密度连续培养方法，采用人工LED光源培养，能够持续为微拟球藻的培养持续提供光源，从而能够使微拟球藻进行高密度培养，保证了微拟球藻进的培养效率，同时采用该培养方法时，在后续培养工作过程中，放出一半培养液，流加一半新鲜培养基继续发酵，以后每隔2天释放一半体积，作为微拟球藻发酵液，这样才能够使微拟球藻的培养工作持续进行，从而完成微拟球藻的连续培养工作，以突显该微拟球藻培养方法的使用价值。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
本发明提供一种技术方案：一种微拟球藻高密度连续培养方法，包括以下步骤：
A．接种步骤：在封闭的光反应器中配置培养基，然后使用紫外灯进行消毒30min，将生长至指数生长期的微拟球藻接种到上述培养基中，所述微拟球藻培养液接种量为5～20%；
B．培养方法：采用人工LED光源培养，该培养步骤依次分为两个过程。起始过程：培养温度为20～30℃，采用单色白光照射3～5天，白光光照强度为500～2000lx。连续培育过程：当培养第五天时，放出一半培养液，流加一半新鲜培养基继续发酵，以后每隔2天释放一半体积，作为微拟球藻发酵液，连续流加10批次。
每升培养基中含有：尿素0.5～3克，硝酸钠0.3～1克，磷酸二氢钾0.02～0.1克，硫酸镁0.05～0.2克，氯化钙0.03～0.2克，硫酸亚铁0.01～0.1克，NA-EDTA0.01～0.1克，微量元素母液1毫升，维生素母液1毫升，所述培养基的pH值为6～8.5。
使用紫外灯管进行消毒10～30min，紫外灯波长为180～254nm，1立方米的水体配备紫外灯的功率范围为30～360W。
每升微量元素母液含有：0.01～0.03克的五水硫酸铜，0.01～0.05克的七水硫酸锌，0.01～0.02克的六水氯化钴，0.1～0.3克的四水氯化锰，0.01～0.1克的二水钼酸钠。
每升维生素母液含有：维生素B1为0.1～1克，维生素B6为0.1～1克，维生素B12为0.1～1克，生物素0.1～1克。
步骤B中，培养条件为：培养温度为20～30℃，采用单色白光照射3～5天，白光光照强度为500～2000lx。
步骤B中，通过释放30～50%体积的发酵液，再补充等额的体积的营养液进行连续培育。
步骤B中，在连续培育过程中，培育周期为两天。
实施例二
一种微拟球藻高密度连续培养方法，包括以下步骤：
A．接种步骤：在封闭的光反应器中配置培养基，每升培养基中含有：尿素0.5～3克，硝酸钠0.3～1克，磷酸二氢钾0.02～0.1克，硫酸镁0.05～0.2克，氯化钙0.03～0.2克，硫酸亚铁0.01～0.1克，NA-EDTA0.01～0.1克，微量元素母液1毫升，每升微量元素母液含有：0.01～0.03克的五水硫酸铜，0.01～0.05克的七水硫酸锌，0.01～0.02克的六水氯化钴，0.1～0.3克的四水氯化锰，0.01～0.1克的二水钼酸钠，维生素母液1毫升，每升维生素母液含有：维生素B1为0.1～1克，维生素B6为0.1～1克，维生素B12为0.1～1克，生物素0.1～1克，所述培养基的pH值为6～8.5，然后使用紫外灯进行消毒30min，使用紫外灯管进行消毒10～30min，紫外灯波长为180～254nm，1立方米的水体配备紫外灯的功率范围为30～360W，将生长至指数生长期的微拟球藻接种到上述培养基中，所述微拟球藻培养液接种量为5～20%；
B．培养方法：采用人工LED光源培养，该培养步骤依次分为两个过程。起始过程：培养温度为20～30℃，采用单色白光照射3～5天，白光光照强度为500～2000lx。连续培育过程：当培养第五天时，放出一半培养液，流加一半新鲜培养基继续发酵，以后每隔2天释放一半体积，作为微拟球藻发酵液，连续流加10批次。
实施例三
一种微拟球藻高密度连续培养方法，包括以下步骤：
A．接种步骤：在封闭的光反应器中配置培养基，每升培养基中含有：尿素0.5克，硝酸钠0.3克，磷酸二氢钾0.02克，硫酸镁0.05克，氯化钙0.03克，硫酸亚铁0.01克，NA-EDTA0.01克，微量元素母液1毫升，每升微量元素母液含有：0.01克的五水硫酸铜，0.01克的七水硫酸锌，0.01克的六水氯化钴，0.1克的四水氯化锰，0.01克的二水钼酸钠，维生素母液1毫升，每升维生素母液含有：维生素B1为0.1克，维生素B6为0.1克，维生素B12为0.1克，生物素0.1克，所述培养基的pH值为6，然后使用紫外灯管进行消毒10min，紫外灯波长为180nm，1立方米的水体配备紫外灯的功率范围为30W，将生长至指数生长期的微拟球藻接种到上述培养基中，所述微拟球藻培养液接种量为5%；
B．培养方法：采用人工LED光源培养，该培养步骤依次分为两个过程。起始过程：培养温度为20℃，采用单色白光照射3天，白光光照强度为500lx。连续培育过程：当培养第三天时，放出一半培养液，流加一半新鲜培养基继续发酵，以后每隔2天释放一半体积，作为微拟球藻发酵液，连续流加10批次。
实施例四
一种微拟球藻高密度连续培养方法，包括以下步骤：
A．接种步骤：在封闭的光反应器中配置培养基，每升培养基中含有：尿素3克，硝酸钠1克，磷酸二氢钾0.1克，硫酸镁0.2克，氯化钙0.2克，硫酸亚铁0.1克，NA-EDTA0.1克，微量元素母液1毫升，每升微量元素母液含有：0.03克的五水硫酸铜，0.05克的七水硫酸锌，0.02克的六水氯化钴，0.3克的四水氯化锰，0.1克的二水钼酸钠，维生素母液1毫升，每升维生素母液含有：维生素B1为1克，维生素B6为1克，维生素B12为1克，生物素1克，所述培养基的pH值为8.5，然后使用紫外灯进行消毒30min，紫外灯波长为254nm，1立方米的水体配备紫外灯的功率范围为360W，将生长至指数生长期的微拟球藻接种到上述培养基中，所述微拟球藻培养液接种量为20%；
B．培养方法：采用人工LED光源培养，该培养步骤依次分为两个过程。起始过程：培养温度为30℃，采用单色白光照射5天，白光光照强度为2000lx。连续培育过程：当培养第五天时，放出一半培养液，流加一半新鲜培养基继续发酵，以后每隔2天释放一半体积，作为微拟球藻发酵液，连续流加10批次
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种微拟球藻高密度连续培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
A．接种步骤：在封闭的光反应器中配置培养基，然后使用紫外灯进行消毒30min，将生长至指数生长期的微拟球藻接种到上述培养基中，所述微拟球藻培养液接种量为5～20%；
B．培养方法：采用人工LED光源培养，该培养步骤依次分为两个过程：
起始过程：培养温度为20～30℃，采用单色白光照射3～5天，白光光照强度为500～2000lx；
连续培育过程：当培养第五天时，放出一半培养液，流加一半新鲜培养基继续发酵，以后每隔2天释放一半体积，作为微拟球藻发酵液，连续流加10批次。
2.根据权利要求1所述的一种微拟球藻高密度连续培养方法，其特征在于：所述每升培养基中含有：尿素0.5～3克，硝酸钠0.3～1克，磷酸二氢钾0.02～0.1克，硫酸镁0.05～0.2克，氯化钙0.03～0.2克，硫酸亚铁0.01～0.1克，NA-EDTA0.01～0.1克，微量元素母液1毫升，维生素母液1毫升，所述培养基的pH值为6～8.5。
3.根据权利要求1所述的一种微拟球藻高密度连续培养方法，其特征在于：所述使用紫外灯管进行消毒10～30min，紫外灯波长为180～254nm，1立方米的水体配备紫外灯的功率范围为30～360W。
4.根据权利要求2所述的一种微拟球藻高密度连续培养方法，其特征在于：所述每升微量元素母液含有：0.01～0.03克的五水硫酸铜，0.01～0.05克的七水硫酸锌，0.01～0.02克的六水氯化钴，0.1～0.3克的四水氯化锰，0.01～0.1克的二水钼酸钠。
5.根据权利要求2所述的一种微拟球藻高密度连续培养方法，其特征在于：所述每升维生素母液含有：维生素B1为0.1～1克，维生素B6为0.1～1克，维生素B12为0.1～1克，生物素0.1～1克。
6.根据权利要求1所述的一种微拟球藻高密度连续培养方法，其特征在于：所述步骤B中，培养条件为：培养温度为20～30℃，采用单色白光照射3～5天，白光光照强度为500～2000lx。
7.根据权利要求1所述的一种微拟球藻高密度连续培养方法，其特征在于：所述步骤B中，通过释放30～50%体积的发酵液，再补充等额的体积的营养液进行连续培育。
8.根据权利要求1所述的一种微拟球藻高密度连续培养方法，其特征在于：所述步骤B中，在连续培育过程中，培育周期为两天。
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