CN111389474B - 一种用于样本分散的微流控芯片及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于样本分散的微流控芯片及其制备方法与应用。本发明微流控芯片包括多个分散单元;所述分散单元包括液体流道和分散腔室,所述液体流道包括主流道和分散管道;所述主流道与所述分散腔室之间通过柱体结构分割,使所述分散腔室内形成所述分散管道;所述分散管道的两端分别为入口和出口,所述入口和所述出口上分别设有阀门1和阀门3;于所述阀门1和所述阀门3之间的所述主流道上设有阀门2;设置上述阀门处的所述液体流道的横截面积的关系为所述阀门1>所述阀门2>所述阀门3。本发明芯片结构,利用注射驱动的方式,能实现100%的样本分散率和利用,具有易于集成、稳定、全封闭、价格低廉、样本分散率高、样本用率高的特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于样本分散的微流控芯片及其制备方法与应用,属于样本分散技术领域。
背景技术
目前在医学、生物、化学等多个领域,样品的分散技术主要包括人工移液和微流控技术。人工移液进行样品分离的方式广泛应用在实验室中。实验者通过移液枪多次吸取一定量的体积的样品,再打入到96孔板的不同反应槽或是不同小离心管内。随后,在这些等量的样本内分别进行不同的生物化学反应。这种分离方式原理简单,不需特别的仪器。然而,其操作复杂,且为了减小蒸发带来的影响,一个反应体系的体积不能太小,造成了样品的浪费。
主流的样品分离方式采取的是微流控技术。微流控技术通过在微观尺度下对流体进行精准控制,在微观尺度下实现并行、自动化及高通量反应。由于微流控设备采用与电子芯片制作相同的光刻技术实现,且大小又与之相当,故又被称作微流控芯片。微流控芯片尺寸小,可以有效利用样本。这一点对于一些难以获取的生物样本的检测十分必要。此外,微流控芯片具有易于集成的特点,操作可实现部分或全部自动化,大大减轻实验者的工作负担。
当前,基于微流控的样品分散技术主要分为如下几类:1)注射式;2)离心式;3)刮涂式;以及4)其他方式;下面是这些方式的举例及优缺点。1)注射驱动的微流控:注射驱动的微流控芯片由液体流道及反应腔构成。在注射泵的驱动下,样本进入流道。样本在流道中流动的过程中自动地进入排布在流道周围的反应腔中,达到样品分离的目的。要实现这样的功能,需要对腔室的结构及尺寸进行精细的设计,如交错式腔室芯片对芯片的尺寸及腔室的排布进行了计算及优化,使得在进样的过程减少了气泡生成,而该种设计并不能完全保证样本的完全分离,有些分隔腔室仍有气泡存在,气泡的存在会大大影响一些生物化学反应,尤其是一些涉及到加热的反应。2)离心驱动的微流控:离心力是驱动液体在微流控芯片中流动的一种重要的动力来源。典型的利用离心力驱动的微流控设备为碟式芯片。碟式芯片形如光碟,也被称作离心式芯片。样品通过进样口首先进入到液体流道中,然后,将碟式芯片置于专用的离心设备上,经过离心,样品便进入到了分布于芯片外围的反应槽中。碟式芯片在其出现的数十年来已被大量地进行研究,已经有不少研究者对碟式芯片上的“元件”,如阀门、管道,以及流体的控制给出了定量的研究。尽管人们可以据此十分方便地设计出碟式芯片,但它的使用仍需要借助离心机的帮助。这大大增加了使用成本。同时,碟式芯片的反应腔室尺度较大,这造成了样品以及反应试剂的浪费。相比于注射式的自分散芯片,碟式芯片的通量也相对较小,这限制了它的功能进一步推广。3)刮涂驱动的微流控:刮涂式芯片在商业领域已经得到了应用。Thermo Fisher Quantstudio3D的核心是一块雕刻着20000个60um为对角线长度的六边形通孔的硅片。这些通孔的内部均进行了亲水处理。专用刮涂设备在芯片表面涂抹样本,样品通过毛细力进入通孔。随后,使用者在芯片表面滴油以防止串扰和蒸发,并利用设备盖膜,便完成了样品的加载。虽然刮涂式芯片无论在学术上和商业上都取得了较好的效果,然而,它仍旧存在着一定问题。如芯片的进样过程中,样品暴露于空气中,极易造成污染,且对环境的要求较高。同时,这样的进样方式难以和样品处理环节相连起来,也即难于集成。而其相关的微流控芯片的制作成本也较高,难以得到推广。4)其他方式:负压驱动的微流控。利用负压驱动的微流控样品分离芯片是将整个芯片置于负压环境中,使得样品能够自动地进入并分配到腔室中。为了使得芯片内部形成负压,这种芯片的材料需要弹性好,故此,这种芯片的材料局限为PDMS。这种气压驱动的芯片需要对整个设备进行,操作较为复杂。同时,由于这样的芯片使用软质的PDMS制作,稳定性差,在进行一些生物化学反应时,例如:PCR扩增反应,容易造成腔室内的液体挥发以及酶等生物分子的吸附。此外,该芯片的加样过程难以实现自动化。
目前已有的样本分散技术,注射驱动的微流控芯片较其他方式的样品分散技术有易于集成、稳定、全封闭、价格低廉的优点,但其依赖于芯片的结构,目前的技术手段还不能保证样品的完全稳定的分散。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于样本分散的微流控芯片及其制备方法与应用,本发明芯片结构,利用注射驱动的方式,能实现100%的样本分散率,且样本利用也可达100%,具有易于集成、稳定、全封闭、价格低廉、样本分散率高、样本用率高等优点,从而易于推广于各个领域。
本发明提供的一种用于样本分散的微流控芯片,包括多个分散单元;
所述分散单元包括液体流道和分散腔室,所述液体流道包括主流道和分散管道;所述主流道与所述分散腔室之间通过柱体结构分割,使所述分散腔室内形成所述分散管道;
所述分散管道的两端分别为入口和出口,所述入口和所述出口上分别设有阀门1和阀门3;于所述阀门1和所述阀门3之间的所述主流道上设有阀门2;设置上述阀门处的所述液体流道的横截面积的关系为所述阀门1>所述阀门2>所述阀门3。
本发明中,所述用于样本分散的微流控芯片的芯片本体为本领域中公知的芯片基底,在所述本体上包括多个分散单元,并进行上述设置。
上述的微流控芯片中,沿分散样本流经方向,所述出口处所述柱体结构的侧面形状包括直线形、锯齿形或折线形;当为锯齿形或折线形时,以进一步增大阀门3的阻力。
上述的微流控芯片中,沿分散样本流经方向,所述分散腔室的外壁形状呈U形,使其内无死角,可以大大降低顶部存在气泡的可能性;
所述柱体结构于所述分散腔室内且不对应的所述入口和所述出口的侧面,其沿分散样本流经方向的形状为直线形、弧形或向所述分散腔室内凸起的折线形;当设为弧形或向所述分散腔室内凸起的折线形时,为了更好的使得样品在分散过程中充满整个所述分散腔室而不留气泡。
上述的微流控芯片中,所述分散腔室的体积为1μL~999fL。
上述的微流控芯片中,所述阀门1、所述阀门2、所述阀门3处的所述液体流道的横截面积比可为7~12:3~5:1,具体可为10:4:1。
上述的微流控芯片中,多个所述分散腔室的连接方式为串联和/或并联。
本发明中,所述分散腔室的数目在所述样本分散芯片的x方向和y方向上增加,即在x方向上串联的数量可增加,在y方向上并联的数量可增加,y方向上以2的n次方形式增加。
本发明还提供了上述用于样本分散的微流控芯片分散样本的方法,包括如下步骤:将样本注入所述微流控芯片的入口;然后将密封的油注入所述的微流控芯片的入口;所述样本分散到多个所述分散腔室中,所述样本分散结束;
所述样本在每个所述分散腔室中分散的过程如下:一部分所述样本的分散液体突破所述阀门1,进入所述分散腔室,所述分散液体遇到所述阀门3时,不能突破所述阀门3,但同时流经所述主流道的另一部分所述分散液体突破所述阀门2,所述样本分散后所述密封的油流经所述主流道,封堵所述分散腔室内分散的所述样本。
本发明中,所述分散样品分散过程原理如下:
S1.分散液体流经腔室的入口时,遇到阀门1和阀门2的阻碍;
S2.阀门2阻力>阀门1阻力,分散液体突破阀门1阻力,进入分散腔室;
S3.分散液体遇到阀门3,阀门3阻力>阀门2阻力,分散液体突破阀门2阻力;
S4.在分散腔室的出口处,存留一段空气柱,空气柱的存在使得分散腔室内的样本稳定分隔;
S5.用于分隔样品的油通入,油可将之前保存的空气柱赶出,并实现不同分隔腔室之间的隔离。
本发明所述用于样本分散的微流控芯片在生物样品扩增、数字Elisa和/或单细胞捕获中的应用。
上述的应用中,所述生物样品扩增包括核酸扩增、蛋白扩增和细胞扩增中至少一种。
本发明中,上述应用不包括用于疾病诊断方面的应用。
本发明中,当应用于核酸扩增时,注入的是用于扩增的样本,所述样本分散结束后,将所述的微流控芯片封口扩增即可。
本发明具有以下优点:
本发明能实现样品的100%分散,且样品利用率几乎为100%,其在分散的过程中,不借助其他仪器,利用微流控芯片的结构即可完成自动分散过程;具有易于集成、稳定、全封闭、价格低廉、样本分散率高、样本用率高的优点,从而易于推广于各个领域。
附图说明
图1是本发明用于样本分散的微流控芯片的样本分散基本单元结构图;
图2是本发明芯片中样本分散基本单元中三个关键的阀门;
图3是本发明样芯片中本分散基本单元的样本分散过程以及样本分散过程中三个阀门作用原理;
图4是本发明芯片中针对阀门3的不同设计;
图5是本发明芯片中腔室形状图;
图6是本发明芯片中腔室体积的拓展图;
图7是本发明芯片中腔室连接方式的拓展图;
图8是本发明芯片中腔室数目的拓展图。
图9是本发明具体的一个用于样本分散的微流控芯片使用的效果图。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
该样本分散芯片有多个基本的分散单元组成,基本单元的结构形状如图1所示,分散单元包括液体流道和分散腔室,液体流道包括主流道和分散管道;主流道与分散腔室之间通过柱体结构分割,使分散腔室内形成分散管道;分散管道的两端分别为入口和出口,入口和出口上分别设有阀门1和阀门3;于阀门1和阀门3之间的主流道上设有阀门2;设置上述阀门处的液体流道的横截面积的关系为阀门1>阀门2>阀门3。如图2所示,其中阀门1对应基本分散单元中分散腔室的入口处,阀门3对应基本分散单元中分散腔室的出口处,阀门2处于主通道处,介于阀门1和阀门3中间。入口用于将液体流道内的液体引入到腔室内,而出口主要用于在进样的过程中排除腔室内空气。出口远细于入口,即阀门3阻力远大于阀门1,阀门阻力的关系为:阀门3>阀门2>阀门1。阀门的阻力主要来源于分散管道粗细所带来的液体表面张力的变化,其主要思想是管道越细,其液体前进液面所受的阻力越大。具体地,阀门1、阀门2、阀门3处的液体流道的横截面积比可为7~12:3~5:1;更具体地,阀门1:阀门2:阀门3处的液体流道的横截面积比为10:4:1。
进一步地,在以上样品分散过程中,沿分散样本流经方向,出口处柱体结构的侧面形状为直线形,为了进一步增大阀门3的阻力,可以改变出口的形状,比如锯齿形或折线形,如图4所示。
进一步地,为了使得样品在分散过程中充满整个腔室而不留气泡,沿分散样本流经方向,所述分散腔室的外壁形状呈U形;分散样品的腔室也可以设计为其它形状,如图5所示,柱体结构于分散腔室内且不对应的入口和出口的侧面,其沿分散样本流经方向的形状为直线形、弧形或向分散腔室内凸起的折线形。
如图3所示,分散样品分散过程如下:
S1.分散液体流经腔室的入口时,遇到阀门1和阀门2的阻碍。
S2.阀门2阻力>阀门1阻力,分散液体突破阀门1阻力,进入分散腔室。
S3.分散液体遇到阀门3,阀门3阻力>阀门2阻力,分散液体突破阀门2阻力。
S4.在分散腔室的出口处,存留一段空气柱,空气柱的存在使得分散腔室内的样本稳定分隔。
S5.用于分隔样品的油通入,油可将之前保存的空气柱赶出,并实现不同分隔腔室之间的隔离。
该样品分散技术可以实现样品的100%分散,且样品利用率几乎为100%,其在分散的过程中,不借助其他仪器,利用微流控芯片的结构即可完成自动分散过程,而且,该技术在现有的结构下可以在各个方面进行拓展。进一步地,针对腔室体积,可以从微升到纳升的拓展(具体可为1μL~999fL),甚至可以达到皮升(1μL~999nL)、飞升(1μL~999pL)级别,如图6所示。进一步地,针对腔室的连接方式有串联和并联的不同方式,如图7所示。进一步地,针对腔室的数目,在x方向和y方向都可以实现拓展,y方向上以2的n次方形式增加,如图8所示。
具体的一个例子中,用于样本分散的微流控芯片的结构及流程如图9所示。
分散样本的步骤如下:
A、将用于扩增的样本和密封的油准备好
B、将样本注入该设计微流控芯片
C、将密封的油注入该微流控芯片
D、进样结束,将芯片封口扩增。
Claims (8)
1.一种用于样本分散的微流控芯片,包括多个分散单元;
所述分散单元包括液体流道和分散腔室,所述液体流道包括主流道和分散管道;所述主流道与所述分散腔室之间通过柱体结构分割,使所述分散腔室内形成所述分散管道;
所述分散管道的两端分别为入口和出口,所述入口和所述出口上分别设有阀门1和阀门3;于所述阀门1和所述阀门3之间的所述主流道上设有阀门2;设置上述阀门处的所述液体流道的横截面积的关系为所述阀门1>所述阀门2>所述阀门3;
所述阀门1、所述阀门2、所述阀门3处的所述液体流道的横截面积比为7~12:3~5:1。
2.根据权利要求1所述的微流控芯片,其特征在于:沿分散样本流经方向,所述出口处所述柱体结构的侧面形状包括直线形、锯齿形或折线形。
3.根据权利要求1或2所述的微流控芯片,其特征在于:沿分散样本流经方向,所述分散腔室的外壁形状呈U形;
所述柱体结构于所述分散腔室内且不对应的所述入口和所述出口的侧面,其沿分散样本流经方向的形状为直线形、弧形或向所述分散腔室内凸起的折线形。
4.根据权利要求1或2所述的微流控芯片,其特征在于:所述分散腔室的体积为1μL~999fL。
5.根据权利要求1或2所述的微流控芯片,其特征在于:多个所述分散腔室的连接方式为串联和/或并联。
6.采用权利要求1-5中任一项所述用于样本分散的微流控芯片分散样本的方法,包括如下步骤:将样本注入所述微流控芯片的入口;然后将密封的油注入所述的微流控芯片的入口;所述样本分散到多个所述分散腔室中,所述样本分散结束;
所述样本在每个所述分散腔室中分散的过程如下:一部分所述样本的分散液体突破所述阀门1,进入所述分散腔室,所述分散液体遇到所述阀门3时,不能突破所述阀门3,但同时流经所述主流道的另一部分所述分散液体突破所述阀门2,所述样本分散后所述密封的油流经所述主流道,封堵所述分散腔室内分散的所述样本。
7.权利要求1-5中任一项所述用于样本分散的微流控芯片在生物样品扩增、数字Elisa和/或单细胞捕获中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于:所述生物样品扩增包括核酸扩增、蛋白扩增和细胞扩增中至少一种。
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