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Abstract

本发明提供了可容纳大片段的多核苷酸如基因的新的真核表达载体。本发明的载体在真核细胞，尤其是哺乳类，以及更尤其是人类细胞中能作为额外染色体元件可以稳定地保存及自主复制，可用于体细胞基因治疗。本发明的另一个目的，是提供可用作新的表达载体源的细胞系。本发明还有一个目的，是提供用含有所需基因的新的表达载体治疗由基因缺失或缺陷引起的疾病或失调的方法。

Description

用于基因治疗的新的载体
基因治疗是用于治疗孟德尔遗传病最有前途的方法之一。在将基因传递到缺乏个别蛋白质的细胞中，以达到治疗由缺失或缺陷基因引起的疾病的最终目的方面，已经成功地完成了许多试验。这些蛋白质有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(累-纳氏综合症)、腺苷脱氨基酶(严重的联合免疫缺陷)、嘌呤核苷磷酸化酶(严重的联合免疫缺陷)、葡糖脑苷脂酶(高歇氏病)、α-1-抗胰蛋白酶(肺气肿)、生长激素(侏儒)、低密度脂蛋白受体(家族性血胆甾醇过多)、苯丙氨酸羟化酶(pydroxylase)(pehylketonuria)、精氨基琥珀酸合成酶(瓜氨酸血)、β-球蛋白(地中海贫血症)、(凝血)因子IX(血友病)等。
尽管基因治疗有着巨大的潜力，然而，不幸地是，从已在全世界范围内进行的涉及大约567个病人的大约106个临床试验中，尚得不出足够的证据来证明基因治疗的临床功效。国家人类基因组研究中心(NCHGR)主任Francis Collins将这种情况总结为“现有的技术都不能在临床上用于系统的基因转移，即能够提供永久治疗的基因治疗”(Marshall E.The truble with vectors.Science 269：1052-1055(1995))。
迄今临床基因转移已应用了病毒载体，不是逆转录病毒载体(大约72％的冶疗方案)，就是腺病毒载体。使用重组病毒有几个缺点，例如这些重组病毒只能容纳几个千碱基的DNA，以及难于控制和难于确保表达。与这些病毒载体有关的其它问题还有传递不稳定、整合频率低及免疫原性和随机插入突变。
由于高等生物许多基因的DNA片段都大，因此片段大小的限制及逆转录病毒载体的限制是致命弱点。例如，人类血友病中缺失的编码凝血因子的因子VIII基因的全长至少为190kb(Gitschier，et al.，Nature(London)，312：326，1984)。假肥大性肌营养障碍有缺陷的基因估计包括超过一百万个碱基对(1000kb)，这个基因的显著特点是蛋白编码部分能够由小至15kb的DNA来编码(Monaco，et al.，Nature(London)，302：575，1983)。因此，为了用于基因治疗强烈需要新的载体，以允许加入很大片段的多核苷酸，如一个基因。因此，本发明的一个目的是提供可克服现有基因治疗方式的许多缺点的、用于基因治疗的新的真核表达载体。本发明的载体得自于人类随体小染色体并能够容纳大于50个千碱基对的多核苷酸。
本发明的另一个目的是用本发明载体构建用传统载体不能构建的、含有大片段DNA序列的基因文库。
本发明提供了能容纳大片段多核苷酸，诸如编码基因的多核苷酸的新的真核表达载体。本发明的载体在真核细胞，尤其是哺乳类、更尤其是人类细胞中作为额外染色体元件可以稳定地保持与自主复制，可用于体细胞基因治疗。
本发明的另一个目的是提供能够用作新的表达载体源的细胞系。
本发明还有一个目的是提供一种用含有所需基因的新的表达载体来治疗由基因缺失或基因缺陷引起的疾病或失调的方法。
对于本发明的目的，术语“表达载体”或“基因治疗载体”指的是用于体细胞治疗的能在选定的哺乳类、尤其是人类宿主细胞中进行复制的，并表达所需蛋白质的DNA载体。
随体小染色体是一种超过人类正常数目46条染色体的额外微染色体，它存在于携带者的所有细胞中，核型为47，XX/XY+随体小染色体。随体小染色体没有有害的遗传效应，而且在减数分裂中以稳定的方式传递。文献中大量报导了带有或不带有随体的额外小染色体。在这一类有一由无害的、家族例外的双随体小染色体组成的亚组。在这些家族中，额外随体小染色体通常是被偶然发现的，一般在携带者中不产生有害效应。一般请参阅：Journal of Heredity，P.N.Howard-Peebles，70(5)：347-8(1979)；Human Genetics，C.Ramos et al.，49：7-10(1979)；Clinical Genetics，D.R.Romain，16：183-190(1979)；South African Medical Journal，A.H.Barnard and R.D.Smart，58(12)：485-8(1980)；New England Medical Journal，D.R.Romain，96(689)：90-91(1981)；和Steinbach P.et al.，Hum.Genet.1983；65：155-164(1983)。
中华人民共和国的夏家辉(Jiahui Xia)教授在细胞遗传学研究中鉴定出两个带有随体小染色体、表型正常的家族。一个家族有三个正常表型的携带者，先证者为一30岁男性，其姐为35岁，其父65岁。另一家族有两个正常表型的携带者，先证者为一28岁男性，其女2岁。从每个家族的先证者身上收集血样及皮肤样品用于染色体分析。其结果表明，两者的外周血淋巴细胞及皮肤细胞都含有这种随体小染色体。该随体小染色体对人体无害，并且能通过配子到体细胞一代代稳定地传递下去。该随体小染色体含有端粒及着丝粒。这些特征符合用于基因治疗的载体的需要。因此，此申请的目的是提供用于基因治疗的分离的随体小染色体。此申请的另一个目的是提供一种将这种随体小染色体作为新的载体，通过基因治疗来治疗由缺失基因或缺陷基因引起的疾病的方法。
收集来自两个先证者的外周血淋巴细胞，用EB病毒转化淋巴细胞系(中国国家医学遗传学实验室突变细胞库的目录号为B5537LC，B5538LC)。还收集了来自两个先证者的皮肤样品，用来构建两个成纤维细胞系(中国国家医学遗传学实验室突变细胞库的目录号为B5537SKIN，B5538SKIN)。这四个含有随体小染色体的细胞系贮藏在中华人民共和国武汉大学中国典型培养物保藏中心[CCTCC]，保藏号为[CCTCC C96001至C96004]。此项保藏是以专利申请步骤为目的、按照布达佩斯条约关于国际微生物保藏的国际确认的条款进行的。随体小染色体的特征
染色体G带和N带分析表明，随体小染色体由双随体和着丝粒组成。
利用由微操作构建的随体小染色体特异性探针库，用PCR作为探针与携带者的中期外周淋巴细胞做荧光原位杂交(FISH)，证明随体小染色体起源于D组染色体(染色体13至15)和G组染色体(染色体21，22)的短臂部分(H-X Deng，et al.，Chromosome-band specific paintingchromosome in situ suppression hybridization using PCR products from amicrodissected chromosome band as a probe pool.Hum Genet.1992；89：13-17(1992))。随体小染色体的形成起因子配子减数分裂期间的错误分裂。
分子遗传学方面的研究证实，人类D组和G组染色体的短臂是核仁组织区域(NOR)和编码人类核糖体RNA(rRNA)的区域。此区域含有大约300个拷贝的人类核糖体基因。NOR的DNA参与细胞核中核仁的形成，其转录产物——rRNA是蛋白质合成场所核糖体的基本组分(J.E.Sylvester et al.，The human ribosomal RNA genes structure andorganization of the complete repeating unit，Hum.Genet.73：193-198(1986))。不同人中的rRNA基因拷贝数是不同的，甚至同一个人的不同组织细胞中或同一细胞的不同代谢周期，rRNA基因的表达量也是不同的，但这对人体功能没有影响。所以，D组和G组染色体短臂的变化没有有害的遗传效应。
尽管对于本领域的技术人员来说，上文介绍的方法学已经含有足够的细节来实路本发明，但市场上买得到的一本题为MOLECULARCLONING(Maniatis，et al.，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold SpringHarbor，New York)的技术手册能提供某些额外细节，有助于实施本发明的某些方面。因此，将这本手册引入本文作为参考。
简而言之，第一步，从保藏的细胞系中分离出随体小染色体。用于纯化染色的技术包括蔗糖密度梯度、流式分选等，这都是本领域的标准技术。通过将有义多核苷酸如一个基因连接在适当的启动子或控制序列下游，使随体小染色体具有特殊的遗传功能。可以用不同的方法将适当的DNA的序列插入到载体中。一般说来，DNA序列通过本领域已知的方法插入到适当的限制性内切酶法位点上，这些限制性内切酶位点最好来自不常见的内切酶，如NotI，BglI等。本领域的技术人员易于制造和/或探测这样独特的限制性位点，这些及其它操作方法都被认为是在这些本领域的技术人员的能力范围内。如果需要，可以用脉冲场凝胶电泳法来纯化限制后的片段。
要插入载体的DNA除含有编码所需蛋白质和启动子的多核苷酸序列外，还可以含有适当的增强子，也可含有任何必需的核糖体结合位点、多聚腺苷酸化位点，拼接供体和受体位点、转录终止序列以及5′端连接的非转录序列。来自SV40的t抗原拼接位点和多聚腺苷酸化位点的DNA序列可以用来提供所需的非转录的遗传元件。
作为另一个实施方案，为了使操作和处理容易进行，本发明的载体可以修饰成含有一个或多个下列片段：
a.编码至少一个可选择标记的DNA或基因组DNA区域，
b.编码多个克隆位点的DNA或基因组DNA区域，以及
c.启动子、增强子、核糖体结合位点、多聚核苷酸化位点、拼接供体和受体位点以及转录终止序列。
表达载体也可以修饰成包括适当的表达控制序列(启动子)，来指导mRNA的合成。可以应用的适合的启动子包括，但不限于逆转录病毒LTR、SV40启动子、Miller等人介绍的人类巨细胞病毒(CMV)启动子(Miller et.al.，Biotechniques 7：980-990(1989))或任何其它启动子(细胞启动子，例如象包括，但不限于组蛋白、RNA聚合酶III和β-肌动蛋白启动子的真核细胞启动子)。其它可以应用的病毒启动子包括，但不限于腺病毒启动子、胸苷激酶(TK)启动子和B19细小病毒启动子。从本文介绍来看，合适启动子的选择对本领域技术人员来说是显而易见的。
通过插入增强子序列，提高编码所需高等真核生物多肽的DNA的转录。增强子是通常大约100-300bp的DNA顺式作用元件，它作用于启动子以增强它的转录。实例包括位于复制起点后边100-270bp的SV40增强子、巨细胞病毒早期启动子增强子、位于复制起点后边的多瘤增强子和腺病毒增强子。
表达载体也可含有用于转录启动和转录终止子的核糖体结合位点。载体也可包含适当的表达扩增序列。
本发明的载体也可制作成包括包含含有不常见的限制性酶切位点的多克隆盒样序列的DNA区域，以便于插入所需基因。可以从几个不同的公司(Stratagene，Promega，New Engand Biolabs，等)买到多克隆盒样序列盒。典型的盒样序列盒应该包括8-11个不同酶(即EcoRI，SacI，Smal，Aval，NotI，BamHI，XbaI，HincII，AccI，SalI，PstI，HindIII等)的限制性位点。本领域技术人员知道这些盒的利用价值。
对哺乳类细胞来讲，一旦提供抗性的DNA转染到拥有适合于载体所用的选择标记遗传方式的个别细胞中，可选择标记提供对特异选择试剂的抗性。本领域技术人员知道有大量不同的显性和隐性选择试剂。以下任何一种基因和试剂就应用的选择系统而论，都应该是有效的。
G418抗性通过暴露于含有100至800ug/ml G418的培养基中来选择。G418用来筛选氨基葡萄糖苷磷酸转移酶缺失细胞，并被称为新霉素抗性细胞(Southern and Berg，J.Molec.Appl.Gen.，1：327-341，1982；Colbere Garapin et al.，J.Molec.Biol.，150：1，1981)。
用于向前筛选(将胸核苷激酶阴性细胞转化为胸核苷激酶阳性细胞)的HAT抗性用添加100uM次黄嘌呤、0.4uM氨基蝶呤、16uM胸苷和3uM甘氨酸的完全培养基来筛选。HAT培养基用来筛选次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶或胸核苷激酶缺陷变异株(Littlefield，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，50：568，1963；Littlefield，Science.145：709-710，1964)(Littlefield，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，50：568，1963；Littlefield，Science.145：709-710，1964)。
潮霉素B抗性通过暴露于添加10-400ug/ml潮霉素B的完全培养基中来筛选。潮霉素B用来筛选潮霉素-B-磷酸转移酶有缺陷的变异株(Gritz and Davis，Gene，25：179-188，1983，Santerre，et al.，Gene，30：147，1984；Palmer，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84：1055-1059，1987)。
腺嘌呤磷酸核糖转移酶(APRT)阳性变异株通过暴露于添加25uM腺苷、50uM重氮丝氨酸和100uM腺嘌呤的培养基来筛选(Lowy，et al.，Cell，22：817，1980，Adair，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86：4574-4578，1989)。
黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SGPRT)阳性变异株用添加透析过的胎牛血清、250ug/ml黄嘌呤、15ug/ml次黄嘌呤、10ug/ml胸苷、2ug/ml氨基蝶呤、25ug/ml霉酚酸、150ug/ml L-谷氨酰胺的完全培养基来筛选(Mulligan and Berg，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，78：2073-2076，1981)。
氨甲蝶呤抗性通过暴露于0.01uM-300uM氨甲蝶呤和透析过的胎牛血清的完全培养基中来筛选。氨甲蝶呤用来筛选高水平表达二氢叶酸还原酶的细胞(O.Hare，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，78：1527，1981；Simonsen and Levinson，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，80：2495-2499，1983)。
脱氧柯福霉素抗性细胞通过暴露于添加10ug/ml胸苷、15ug/ml次黄嘌呤、4uM 9-B-D-呋喃木糖基腺嘌呤(XyLA)和0.01-0.03uM 2′脱氧柯福霉素(dCF)的完全培养基来筛选。这是用来筛选表达腺苷脱氨酶的突变株(ADS，Kaufman et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，83：3136-3140，1986)。
构建到宿主细胞中的载体的导入，可以通过用于本领域的传统技术如磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染以及显微注射来实现(Davis，L.，Dibner，M.，Battey，I.，Basic Methods in Molecular Biology，(1986))。其它的转染技术包括：(1)将含有插入的载体包裹到脂质体中，(2)当细胞周期进行到G1期时，将载体用电穿孔法导入到进行有丝分裂的细胞受体中，以加强它在细胞核中的包埋，以及(3)将包被DNA的粒子用Biolistic粒子传递系统(DuPont)注射到细胞中；这最后一个步骤必需将包被DNA的子弹射入到细胞或组织中。
在一个实施方案的一个例子中，在假肥大性肌肉营养障碍或肌强直性营养障碍，或者其它大量与肌肉机能障碍有关的疾病中的一种方面有缺陷的基因或基因的cDNA衍生物可以克隆到随体小染色体载体中。然后将染色体用下文介绍的适于靶物的方法，在体外导入到细胞、组织或动物中。转染后的染色体作为受体细胞的组份，在受体细胞中它可稳定地保持和表达。原来因基因缺陷引起机能障碍的受体细胞、组织或动物，由于导入载体中的正常基因产物的表达和合成而得到治疗，并变为正常。当细胞或组织被体外转化后，可将它们提供给要用所需多肽治疗的患者。可以被转化的哺乳类细胞的实例包括，但不限于胚 干细胞(embryonic stem cells)、胚癌细胞(embryonic carcinomacells)，而且也包括造血干细胞(hematopoietic stem cells)、肝细胞、成纤维细胞、成肌细胞、角化细胞、内皮细胞和支气管上皮细胞。

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1.细胞系，它于1996年10月14日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC C96004。
2.细胞系，它于1996年10月14日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC C96003。
3.细胞系，它于1996年10月14日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC C96002。
4.细胞系，它于1996年10月14日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC C96001。
5.随体小染色体，它包含于权利要求1的细胞系中。
6.随体小染色体，它包含于权利要求2的细胞系中。
7.随体小染色体，它包含于权利要求3的细胞系中。
8.随体小染色体，它包含于权利要求4的细胞系中。
9.根据权利要求5的随体小染色体，它包含一个用于基因治疗的多核苷酸。
10.根据权利要求6的随体小染色体，它包含一个用于基因治疗的多核苷酸。
11.根据权利要求7的随体小染色体，它包含一个用于基因治疗的多核苷酸。
12.根据权利要求8的随体小染色体，它包含一个用于基因治疗的多核苷酸。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6077697A (en) 1996-04-10 2000-06-20 Chromos Molecular Systems, Inc. Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes
US20030033617A1 (en) 1996-04-10 2003-02-13 Gyula Hadlaczky Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes
US6025155A (en) * 1996-04-10 2000-02-15 Chromos Molecular Systems, Inc. Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes
JPH11335269A (ja) * 1998-05-19 1999-12-07 Hisamitsu Pharmaceut Co Inc 遺伝子関連医薬の経口投与固形製剤
EP1325144A2 (en) * 2000-04-07 2003-07-09 Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. Chromosomal vectors and uses thereof
WO2002020802A1 (fr) 2000-09-04 2002-03-14 Hunan Royal Biotech Lignee cellulaire exprimant un activateur de plasminogene tissulaire humain mutant, procede de recombinaison et procede de preparation de la proteine exprimee

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4464472A (en) * 1980-09-09 1984-08-07 The Regents Of The University Of California Construction and use of functional minichromosomes
IL63035A (en) * 1980-09-09 1985-05-31 Univ California Dnas capable of replication and stable mitotic maintenance in a host eukaryote,their preparation and eukaryotic cells comprising them
CA2006011A1 (en) * 1988-12-21 1990-06-21 Cecilia Lo Transgenic organisms and cells and methods of producing transgenic organisms and cells

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