CN111202097A - 一种用于防治线虫病的农用微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于防治线虫病的农用微生物菌剂及其制备方法。农用微生物菌剂包括以下重量份数的原料：木霉菌粉剂20‑25份、淡紫拟青霉菌粉剂15‑30份、酵母菌粉剂10‑20份、糖类物质200‑300份、水18000‑28000份，所述农用微生物菌剂中有效活菌数不低于2×10⁸cfu/g。所述农用微生物菌剂中不仅含有三种针对线虫病的有效生防菌类，还含有这三种微生物代谢后的产物，发酵时代谢产物中主要能生成几丁质酶和葡聚糖酶，各种发酵产物及三种微生物相互配合能有效防治农作物线虫病。

Description

一种用于防治线虫病的农用微生物菌剂及其制备方法

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种用于防治线虫病的农用微生物菌剂及其制备方法。

背景技术

植物寄生线虫是指能寄生于植物的各种组织，使植物发育不良，并且在感染寄主的同时会传播其他植物病原，造成植物出现疾病症状的一类线虫。它们广泛寄生在各种植物的根、茎、叶、花、芽和果实上，使植物发生各种线虫病。目前在我国发现的植物寄生线虫有四十多种，主要有根结线虫、孢囊线虫、小杆线虫、根腐线虫等，其中对作物危害最为严重的是根结线虫和孢囊线虫，主要受危害的作物有黄瓜、花生、大豆、水稻、小麦、马铃薯等。线虫一旦发生就可以使这类作物减产10-40％，严重的能减产70-80％，甚至绝收，其危害程度可见一斑。

专利申请文件CN104982444A公开了一种防治线虫的农药组合物。该农药组合物的有效成分为甲氨基阿维菌素苯甲酸盐与氟吡菌酰胺。虽然农药化合物复配后有一定增效作用，且能一定程度降低线虫耐药性，但依然存在毒性大、易残留的危害，对人体健康和环境保护大大不利。

鉴于化学农药存在的弊病，使得利用生物方法来防治植物寄生线虫日益受到关注。在生物防治的过程中，最关键的问题是要找到并分离出对特定的病虫害有足够杀灭能力的微生物菌株及利用该菌株配制出适于使用的制剂。专利申请文件CN1138096A公开了防治大豆孢囊线虫病的菌株及其制剂，它是用淡紫拟青霉菌CGMCCC0241接种，经过三级发酵并加入复合添加剂而制成，结果表明，在使用本发明制剂的100亩大豆中，孢囊线虫病明显减轻，较对照减少65％，对根腐病防效40％以上，大豆的平均亩产要比未使用本发明制剂的平均亩产高出约20％。可见，现有防治线虫病的微生物菌剂的防效还较低，有待进一步的提高。

发明内容

发明要解决的问题

针对现有技术中单一淡紫拟青霉菌防治线虫病的防治效果较低的缺陷，本发明提供了一种用于防治线虫病的农用微生物菌剂及其制备方法。

用于解决问题的方案

本发明提供了一种用于防治线虫病的农用微生物菌剂。所述农用微生物菌剂包括以下重量份数的原料：木霉菌粉剂20-25份、淡紫拟青霉菌粉剂15-30份、酵母菌粉剂10-20份、糖类物质200-300份、水18000-28000份，所述农用微生物菌剂中有效活菌数不低于2×10⁸cfu/g。

在以上技术方案中，所述木霉菌和所述淡紫拟青霉菌协同作用，可在最短时间内在植物根部土壤中定植，它们的代谢物共同反应生成丰富的几丁质酶和葡聚糖酶，而几丁质酶和葡聚糖酶分别对线虫和虫卵的外壁中含有的几丁质和葡聚糖有分解作用，进而提高所述木霉菌和所述淡紫拟青霉菌对线虫的寄生率，它们与线虫的卵壳、幼虫及雌性成虫体壁接触后，菌丝逐渐包围其外表，由于外源性代谢物和几丁质酶、葡聚糖酶的活动使线虫卵壳或体壁表层破裂，随后侵入在其体内吸取营养，进行繁殖，破坏卵、幼虫及雌性成虫的正常生理代谢，从而导致线虫死亡；另外，所述木霉菌和所述淡紫拟青霉菌还能分泌毒素对线虫起毒杀作用，尤其对线虫二龄幼虫具有明显的毒杀作用，二龄幼虫接触所述木霉菌和所述淡紫拟青霉菌木霉菌菌丝后，二龄幼虫行动自由度降低继而失去活性；此外所述木霉菌还可以诱导植物产生自我防御系统获得抗病性。

在本发明中所述糖类物质作为三种菌的营养物质使用，随着发酵的进行，所述糖类物质中的营养物质转移到发酵液中，提高了所述农用微生物菌剂的肥力，促进作物的生长。在发酵时，所述酵母菌能够分解糖类物质产生更多的营养物质和微量元素，以供应所述木霉菌和所述淡紫拟青霉菌的代谢；另外，所述酵母菌也具有杀线虫活性，作用机理是所述酵母菌产生的胞外蛋白酶分解线虫体壁进而侵染线虫。本发明通过以上三种菌类以及它们在发酵过程中产生的代谢产物的综合作用，不仅能显著防治线虫病，而且还能为植物生长提供部分营养成分和微量元素，促进植物生长。所述农用微生物菌剂的使用方式为土壤喷施、蘸根、穴施、灌根的方式。

优选的，所述糖类物质包括红糖、白糖、葡萄糖、果糖中的一种或多种。更优选的，所述营养物质为红糖。所述红糖的成分有单糖及多糖类物质，如有葡萄糖、果糖等，还含有叶酸、维生素、微量元素、抗氧化物质、氨基酸、纤维素等物质。

优选的，所述木霉菌包括绿色木霉菌、哈茨木霉菌、钩状木霉菌、康化木霉菌；所述酵母菌包括酿酒酵母菌、克鲁丝假丝酵母菌。以上优选菌种对线虫的灭杀能力更强。

优选的，所述农用微生物菌剂包括以下重量份数的原料：木霉菌菌剂22-24份、淡紫拟青霉菌菌剂20-25份、酵母菌菌剂14-17份、糖类物质270-300份、水22000-24000份。更优选的，所述农用微生物菌剂包括以下重量份数的原料：木霉菌菌剂22-24份、淡紫拟青霉菌菌剂23-25份、酵母菌菌剂16-17份、糖类物质290-300份、水23000-24000份。通过调节发酵液中微生物和有机质的配比，保证三种菌类能够快速生长繁殖，使得发酵后的有效活菌数能够达到有效标准。

优选的，所述木霉菌粉剂中，木霉菌有效活菌数不低于2×10¹⁰cfu/g；所述淡紫拟青霉菌粉剂中，淡紫拟青霉菌有效活菌数不低于1×10¹¹cfu/g；所述酵母菌粉剂中，酵母菌有效活菌数不低于5×10⁹cfu/g，保证三种菌种经发酵后能获得充足的总有效活菌数，使得它们能够发挥显著的协同作用，共同抑制线虫的生长繁殖。

另外，本发明还提供了一种用于防治线虫病的农用微生物菌剂的制备方法。所述制备方法包括以下步骤：将所述木霉菌粉剂、所述淡紫拟青霉菌粉剂、所述酵母菌粉剂、所述糖类物质和水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为22-27℃、pH＝6.5-7.0条件下好氧发酵45-50小时，得到所述农用微生物菌剂。综合考虑菌丝生长速度和孢子着生情况，选择以上所述的温度范围和pH值范围。

本发明还提供了一种用于防治线虫病的农用微生物菌剂在防治农作物线虫病中的用途。

发明的效果

(1)本发明的农用微生物菌剂中不仅含有三种针对线虫病的有效生防菌类，还含有这三种微生物代谢后的产物，发酵时代谢产物中主要能生成几丁质酶和葡聚糖酶，各种发酵产物及三种微生物相互配合能有效防治农作物线虫病；

(2)本发明的农用微生物菌剂还能诱导植物产生自我防御系统获得抗病性；

(3)本发明的农用微生物菌剂还含有各种营养物质和微量元素，能促进植物生长；

(4)本发明的农用微生物菌剂在农作物如花生、大豆、葡萄等上的防治效果高达80％以上；

(5)本发明的农用微生物菌剂中，各种微生物易得，发酵方法简单，周期短，能应用于各种农作物线虫病的防治，使用范围广泛。

具体实施方式

以下将以具体优选的实施例对本发明进行进一步的描述。特别的，本发明的实施方式并非仅限于此，进而以下具体的实施例也并非会对本发明的技术方案产生限制。

实施例1

将22g的有效活菌数为2×10¹⁰cfu/g的绿色木霉菌粉剂、23g的有效活菌数为1×10¹¹cfu/g的淡紫拟青霉菌粉剂、16g的有效活菌数为5×10⁹cfu/g的克鲁丝假丝酵母菌粉剂、290g红糖和23kg水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为25℃、pH＝6.5条件下好氧发酵48小时，得到农用微生物菌剂，检测到农用微生物菌剂中总的有效活菌数为2×10⁸cfu/g。

实施例2

将22g的有效活菌数为2×10¹⁰cfu/g的哈茨木霉菌粉剂、23g的有效活菌数为1×10¹¹cfu/g的淡紫拟青霉菌粉剂、16g的有效活菌数为5×10⁹cfu/g的酿酒酵母菌粉剂、290g白糖和23kg水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为25℃、pH＝6.5条件下好氧发酵48小时，得到农用微生物菌剂，检测到农用微生物菌剂中总的有效活菌数为2.1×10⁸cfu/g。

实施例3

将22g的有效活菌数为2×10¹⁰cfu/g的钩状木霉菌粉剂、23g的有效活菌数为1×10¹¹cfu/g的淡紫拟青霉菌粉剂、16g的有效活菌数为5×10⁹cfu/g的克鲁丝假丝酵母菌粉剂、290g葡萄糖和23kg水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为25℃、pH＝6.5条件下好氧发酵48小时，得到农用微生物菌剂，检测到农用微生物菌剂中总的有效活菌数为2×10⁸cfu/g。

实施例4

将24g的有效活菌数为2×10¹⁰cfu/g的绿色木霉菌粉剂、25g的有效活菌数为1×10¹¹cfu/g的淡紫拟青霉菌粉剂、17g的有效活菌数为5×10⁹cfu/g的克鲁丝假丝酵母菌粉剂、300g红糖和24kg水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为27℃、pH＝7条件下好氧发酵48小时，得到农用微生物菌剂，检测到农用微生物菌剂中总的有效活菌数为2.3×10⁸cfu/g。

实施例5

将24g的有效活菌数为2×10¹⁰cfu/g的绿色木霉菌粉剂、20g的有效活菌数为1×10¹¹cfu/g的淡紫拟青霉菌粉剂、14g的有效活菌数为5×10⁹cfu/g的克鲁丝假丝酵母菌粉剂、270g红糖和22kg水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为27℃、pH＝6.7条件下好氧发酵48小时，得到农用微生物菌剂，检测到农用微生物菌剂中总的有效活菌数为2.2×10⁸cfu/g。

实施例6

将25g的有效活菌数为2×10¹⁰cfu/g的绿色木霉菌粉剂、30g的有效活菌数为1×10¹¹cfu/g的淡紫拟青霉菌粉剂、10g的有效活菌数为5×10⁹cfu/g的克鲁丝假丝酵母菌粉剂、200g红糖和18kg水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为25℃、pH＝6.5条件下好氧发酵48小时，得到农用微生物菌剂，检测到农用微生物菌剂中总的有效活菌数为2.0×10⁸cfu/g。

对比例1

将27g的有效活菌数为1×10¹¹cfu/g的淡紫拟青霉菌粉剂、16g的有效活菌数为5×10⁹cfu/g的克鲁丝假丝酵母菌粉剂、290g红糖和23kg水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为25℃、pH＝6.5条件下好氧发酵48小时，得到农用微生物菌剂，检测到农用微生物菌剂中总的有效活菌数为2×10⁸cfu/g。

对比例2

将22g的有效活菌数为2×10¹⁰cfu/g的绿色木霉菌粉剂、23g的有效活菌数为1×10¹¹cfu/g的淡紫拟青霉菌粉剂、290g红糖和23kg水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为25℃、pH＝6.5条件下好氧发酵48小时，得到农用微生物菌剂，检测到农用微生物菌剂中总的有效活菌数为1.7×10⁸cfu/g。

对比例3

将15g的有效活菌数为1.5×10¹⁰cfu/g的绿色木霉菌粉剂、11g的有效活菌数为8×10¹⁰cfu/g的淡紫拟青霉菌粉剂、7g的有效活菌数为4×10⁹cfu/g的克鲁丝假丝酵母菌粉剂、290g红糖和23kg水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为25℃、pH＝6.5条件下好氧发酵48小时，得到农用微生物菌剂，检测到农用微生物菌剂中总的有效活菌数为1.2×10⁸cfu/g。

大田药效试验

选取长势一致，根结线虫发生一致的大豆田块，将实施例1-6和对比例1-3得到的农用微生物菌剂以300mL/亩的量进行喷施，于施药半个月和一个月时观察，防治效果统计情况见表1。

应用实施例1：喷施实施例1的农用微生物菌剂；

应用实施例2：喷施实施例2的农用微生物菌剂；

应用实施例3：喷施实施例3的农用微生物菌剂；

应用实施例4：喷施实施例4的农用微生物菌剂；

应用实施例5：喷施实施例5的农用微生物菌剂；

应用实施例6：喷施实施例6的农用微生物菌剂

应用对比例1：喷施对比例1的农用微生物菌剂

应用对比例2：喷施对比例2的农用微生物菌剂；

应用对比例3：喷施对比例3的农用微生物菌剂；

应用对比例4：喷施清水。

表1应用实施例1-6和应用对比例1-4的大田药效试验结果

从表1可以看出，实施例1-6的农用微生物菌剂对大豆根结线虫病的防治效果明显，喷施1个月后防效均在80％以上。而对比例1的农用微生物菌剂不添加木霉菌，缺少木霉菌和淡紫拟青霉菌的协同作用，因此防效明显降低。对比例2的农用微生物菌剂不添加酵母菌，可能导致其他两种菌群的生长受限，总的有效活菌数也减少，所得到的农用微生物菌剂的防效也降低。对比例3的农用微生物菌剂添加的三种菌类的重量份数以及有效活菌数较低，导致发酵后的总的有效活菌数大大降低，因此所得到的农用微生物菌剂的防效也降低。

Claims (10)

1.一种用于防治线虫病的农用微生物菌剂，其特征在于，包括以下重量份数的原料：木霉菌粉剂20-25份、淡紫拟青霉菌粉剂15-30份、酵母菌粉剂10-20份、糖类物质200-300份、水18000-28000份，所述农用微生物菌剂中有效活菌数不低于2×10⁸cfu/g。

2.根据权利要求1所述的用于防治线虫病的农用微生物菌剂，其特征在于，所述木霉菌包括绿色木霉菌、哈茨木霉菌、钩状木霉菌、康化木霉菌。

3.根据权利要求1或2所述的用于防治线虫病的农用微生物菌剂，其特征在于，所述酵母菌包括酿酒酵母菌、克鲁丝假丝酵母菌。

4.根据权利要求1或2所述的用于防治线虫病的农用微生物菌剂，其特征在于，包括以下重量份数的原料：木霉菌菌剂22-24份、淡紫拟青霉菌菌剂20-25份、酵母菌菌剂14-17份、糖类物质270-300份、水22000-24000份。

5.根据权利要求4所述的用于防治线虫病的农用微生物菌剂，其特征在于，包括以下重量份数的原料：木霉菌菌剂22-24份、淡紫拟青霉菌菌剂23-25份、酵母菌菌剂16-17份、糖类物质290-300份、水23000-24000份。

6.根据权利要求1或2所述的用于防治线虫病的农用微生物菌剂，其特征在于，所述木霉菌粉剂中，木霉菌有效活菌数不低于2×10¹⁰cfu/g。

7.根据权利要求1或2所述的用于防治线虫病的农用微生物菌剂，其特征在于，所述淡紫拟青霉菌粉剂中，淡紫拟青霉菌有效活菌数不低于1×10¹¹cfu/g。

8.根据权利要求1或2所述的用于防治线虫病的农用微生物菌剂，其特征在于，所述酵母菌粉剂中，酵母菌有效活菌数不低于5×10⁹cfu/g。

9.根据权利要求1或2所述的用于防治线虫病的农用微生物菌剂，其特征在于，所述糖类物质包括红糖、白糖、葡萄糖、果糖中的一种或多种。

10.根据权利要求1-9任一项所述的用于防治线虫病的农用微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述木霉菌粉剂、所述淡紫拟青霉菌粉剂、所述酵母菌粉剂、所述糖类物质和水加入发酵罐中，搅拌均匀后在温度为22-27℃、pH＝6.5-7.0条件下好氧发酵45-50小时，得到所述农用微生物菌剂。