CN111100194B

CN111100194B - 一种抗菌肽pd-l4在抑制禽流感病毒中的应用

Info

Publication number: CN111100194B
Application number: CN202010107157.XA
Authority: CN
Inventors: 张济培; 李巨浪; 陈济铛; 张溢珊; 陈建红
Original assignee: Foshan University
Current assignee: Foshan University
Priority date: 2020-02-21
Filing date: 2020-02-21
Publication date: 2022-03-25
Anticipated expiration: 2040-02-21
Also published as: CN111100194A

Abstract

本公开提供了一种抗菌肽PD‑L4在抑制禽流感病毒中的应用，所述禽流感病毒为H9N2亚型禽流感病毒。H9N2亚型禽流感病毒经所述抗菌肽PD‑L4在体外作用后接种SPF鸡胚，鸡胚死亡数量明显下降，胚液HA效价也明显降低，即抗菌肽PD‑L4能够有效的抑制H9N2亚型禽流感病毒。

Description

一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用

技术领域

本公开属于动物免疫技术领域和生物医药技术领域，具体涉及一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用。

背景技术

H9N2型禽流感其病毒(AIV)属于正粘病毒科、正粘病毒属；病毒粒子多呈球形，为80～120纳米的直径，表面有长10～12纳米的密集钉状物或纤突覆盖，包括血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)两种不同形状的表面钉状物，病毒囊膜内有螺旋形核衣壳。H9N2型禽流感给养鸡业带来巨大损失，该病不但造成鸡呼吸道病，还侵害鸡的生殖系统，造成肉鸡生长缓慢，蛋鸡产蛋下降，于此同时还易与其他病原微生物混合感染，可以造成严重的死亡。

抗菌肽是众多动物先天性免疫系统的第一道防线的重要成分，可以保护机体免受大多病原体的入侵。1型核糖体灭活蛋白是一类RNAN-糖苷酶的活性，专门作用于真核细胞损伤核糖体蛋白，广泛存在于高等植物中，具有抗菌、抗肿瘤等多种生物学活性。其中抗菌肽PD-L4是从商陆中提取的1型核糖体灭活蛋白中的一种，化学鉴定其具有抗菌活性，如其他抗菌肽，对人体细胞有免疫调节作用。在现有技术中还未出现针对抗菌肽PD-L4对于H9N2禽流感病毒的作用的研究。

发明内容

本公开的目的是提供一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，以达到抑制禽流感，减少养殖业经济损失的目的。

为实现上述目的，技术方案如下：

一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，所述禽流感病毒为H9N2。

所述抗菌肽PD-L4的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述抗菌肽PD-L4的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本公开的有益效果是：提供了一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，所述禽流感病毒为H9N2亚型禽流感病毒，所述H9N2亚型禽流感病毒经所述抗菌肽PD-L4在体外作用后接种SPF鸡胚，鸡胚死亡数量明显下降，胚液HA效价也明显降低，即抗菌肽PD-L4能够有效的抑制H9N2亚型禽流感病毒。

具体实施方式

以下各步骤仅用以说明本公开的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各步骤对本公开进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各步骤所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本公开各步骤技术方案的范围。

实施例1

一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用

1.材料

抗菌肽PD-L4储存液：根据抗菌肽PD-L4的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，经生物公司合成，得到抗菌肽PD-L4，其中抗菌肽PD-L4的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

抗菌肽PD-L4工作液：每管抗菌肽PD-L4储存液(11μL)中加入348μL生理盐水。

禽流感H9N2亚型病毒株(AIV)；9日龄SPF鸡胚。

2.实验方法

实验组：将纯化的禽流感H9N2亚型病毒液1.5μL、生理盐水934.5μL和抗菌肽PD-L4工作液264μL进行混合，将禽流感H9N2亚型病毒稀释800倍；然后将混合液置于37℃培养箱中进行孵育，其中孵育的时间为2h。

阳性对照组：将纯化的禽流感H9N2亚型病毒液15μL与11985μL的生理盐水进行混合，然后将混合液置于37℃培养箱中进行孵育，其中孵育的时间为2h。

将上述孵育后的实验组的混合液接种至9日龄SPF鸡胚尿囊腔中，共15组重复，其中每组接种的混合液为0.2mL；然后设置阳性对照组：将上述阳性对照组中的混合液接种至9日龄SPF鸡胚尿囊腔中，共15组重复，接种完毕后，将所有鸡胚置于37℃孵化箱中继续培养，每天观察2次接种鸡胚的死亡情况，并及时收集死亡接种鸡胚的尿囊液，观察鸡胚胚体病变情况，在接种5天后，将存活的接种鸡胚置于4℃冰箱中进行冷冻处死，然后收集鸡胚尿囊液。

因为禽流感H9N2亚型病毒(AIV)具有凝集鸡红细胞的特性，因此可通过对禽流感H9N2亚型病毒(AIV)中HA的血凝活，来判断感染情况，其中HA效价≥4为感染。

其中HA血凝实验具体操作步骤为：

(1)首先在96孔微量反应板上各孔加入50μL的生理盐水；

(2)于左侧第1孔加50μL鸡胚尿囊液，混合均匀后，吸50μL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50μL；

(3)依次向各孔加入0.5％鸡红细胞悬液50μL，在振荡器上振荡，37℃静置30min后观察结果。

3.结果分析

观察并记录接种后鸡胚的死亡情况和并检测血凝活性，结果如表1所示，从表1可以看出，抗菌肽PD-L4在体外作用的H9N2亚型禽流感病毒接种SPF鸡胚，鸡胚死亡数量明显下降，胚液HA效价也明显降低，即抗菌肽PD-L4能够有效的抑制H9N2禽流感病毒。

表1抗菌肽PD-L4与流感病毒H9N2反应后鸡胚死亡情况表

SEQUENCE LISTING

<110> 佛山科学技术学院

<120> 一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用

<130> 2020.02.20

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1220

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 1

ttgcctattt aagaagatta tgctacacat taaaccttgc ctttcactaa attatcatac 60

acattagtta tcaatcattt tctacattat caacgcctca acatttactc ctttaacagg 120

taaaatgaat ggaatacaaa caataatgag agcttttgtt gtggtagcta tatcaacatg 180

gttagtcatc cttaaaccaa catttgcggc gtcagatcta agtttcgatg caacaaatcc 240

ggcggcgaca acgtattcga agctattgag cgacttgcgt aacttggtga aggacccaaa 300

actcaaatac ggcggcacca acgtaccagt aatggctgct actttcaaaa agaagtacat 360

tttggttgat cttaagggat cagagggagg aaccatcaca atagctttga atttaaataa 420

tgatatatat gtggttggat atcttgacaa acttaatgga aactttaggt cacatatttt 480

taaagatgct ccttcggacg caaaaaccga tctctttcca gaggcaacgg gtaaaaatcg 540

tctaacaatt aactacaaaa gttcatatgc tgatatagag agtaatgctg gcgtatcgag 600

tcgggctaga gtgggattgg gagttaaacc gctgaacaag ttcatcaacg atgtctacgg 660

aaaggcgctt gttgtcaaga atgaagctca gtttatgctt gttgttattc aaatggtttc 720

agaagcaaca cgtttcaaat atatcgaatc catgattttg gagaaatttg cggattctta 780

taaccccgat ccaaaagcaa tgcgattgga gattcgttgg agtaagatta gtaaaggtat 840

taaggattct aagaagggag taatctcacc ggagctcgat ttaaaggatg tgaatgataa 900

ggattggaaa gtgactaaag tcgaagacat agttaatgat atggcactcc ttaaaaattt 960

tggaagtagc agccaagtat ctgtatttac taagttgaag ctgtttatga ccaagttttt 1020

aataaccaat attggtgaag atcaagctgc tgacttgtga agttctattt aagacgtgca 1080

taaatcatgt aataatgtta agtaacagaa tgtttggtaa gccgtcatat cgacgtgtgt 1140

aatgtatgaa atttgcttat gtttaatttc catttcccaa atgaaataaa gcacaattta 1200

tgtttgattt gttattatta 1220

<210> 2

<211> 311

<212> PRT

<213> 人工合成

<400> 2

Met Asn Gly Ile Gln Thr Ile Met Arg Ala Phe Val Val Val Ala Ile

1 5 10 15

Ser Thr Trp Leu Val Ile Leu Lys Pro Thr Phe Ala Ala Ser Asp Leu

20 25 30

Ser Phe Asp Ala Thr Asn Pro Ala Ala Thr Thr Tyr Ser Lys Leu Leu

35 40 45

Ser Asp Leu Arg Asn Leu Val Lys Asp Pro Lys Leu Lys Tyr Gly Gly

50 55 60

Thr Asn Val Pro Val Met Ala Ala Thr Phe Lys Lys Lys Tyr Ile Leu

65 70 75 80

Val Asp Leu Lys Gly Ser Glu Gly Gly Thr Ile Thr Ile Ala Leu Asn

85 90 95

Leu Asn Asn Asp Ile Tyr Val Val Gly Tyr Leu Asp Lys Leu Asn Gly

100 105 110

Asn Phe Arg Ser His Ile Phe Lys Asp Ala Pro Ser Asp Ala Lys Thr

115 120 125

Asp Leu Phe Pro Glu Ala Thr Gly Lys Asn Arg Leu Thr Ile Asn Tyr

130 135 140

Lys Ser Ser Tyr Ala Asp Ile Glu Ser Asn Ala Gly Val Ser Ser Arg

145 150 155 160

Ala Arg Val Gly Leu Gly Val Lys Pro Leu Asn Lys Phe Ile Asn Asp

165 170 175

Val Tyr Gly Lys Ala Leu Val Val Lys Asn Glu Ala Gln Phe Met Leu

180 185 190

Val Val Ile Gln Met Val Ser Glu Ala Thr Arg Phe Lys Tyr Ile Glu

195 200 205

Ser Met Ile Leu Glu Lys Phe Ala Asp Ser Tyr Asn Pro Asp Pro Lys

210 215 220

Ala Met Arg Leu Glu Ile Arg Trp Ser Lys Ile Ser Lys Gly Ile Lys

225 230 235 240

Asp Ser Lys Lys Gly Val Ile Ser Pro Glu Leu Asp Leu Lys Asp Val

245 250 255

Asn Asp Lys Asp Trp Lys Val Thr Lys Val Glu Asp Ile Val Asn Asp

260 265 270

Met Ala Leu Leu Lys Asn Phe Gly Ser Ser Ser Gln Val Ser Val Phe

275 280 285

Thr Lys Leu Lys Leu Phe Met Thr Lys Phe Leu Ile Thr Asn Ile Gly

290 295 300

Glu Asp Gln Ala Ala Asp Leu

305 310

Claims

1.一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，其特征在于，所述禽流感病毒为H9N2亚型禽流感病毒；

所述抗菌肽PD-L4的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求书1中抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，其特征在于，编码所述抗菌肽PD-L4的mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。