CN111040990A - 一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：搭建显微注射系统平台；配制含全氟化合物的样品溶液，所述全氟化合物包括全氟羧酸类化合物和全氟磺酸类化合物中的一种或多种；选取处于卵裂期的斑马鱼胚胎，利用所述显微注射系统平台，将所述样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎的植物极内。该构建方法能够构建一种内暴露模型，可以使精确定量的全氟化合物直接注入到处于卵裂期的斑马鱼胚胎植物极内，以获得一种更为直接、稳定、准确度高的用于全氟化合物胚胎发育毒性预测的内暴露模型。本发明还提供了一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的应用，包括一种全氟化合物胚胎发育毒性的评价方法。

Description

一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法及应用
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法及应用。
背景技术
随着全球工业化的快速发展，大量污染物产生并进入环境中，以及食品的生产、贮存、运输和加工等过程中。这些污染物大部分具有持久性、广泛分布、生物积累和毒性的特点，对自然环境和人类健康都构成了严重威胁。例如，全氟化合物(PerfluororinatedCompounds，PFCs)就是一种在水生生物的体内普遍检出的环境污染物。目前，对于这些污染物的毒性研究并不深入，尤其是这些污染物对生物体的胚胎发育的潜在影响仍未得到有效评估。
现有技术中，主要以斑马鱼(Brachydanio rerio)胚胎和仔鱼为试验体进行胚胎毒性测试；并且在评估污染物对斑马鱼胚胎的发育毒性的实验过程，往往仅通过静水外暴露途径。然后，现有的静水外暴露途径一般是将斑马鱼胚胎置于含有相当于自然水体中的剂量100-1000倍污染物的水中测试；这也导致后续获得的实验数据不能准确地说明实际环境相关剂量(例如纳克级)污染物对斑马鱼胚胎发育的影响；而且不同种类或溶度的污染物跨越胚胎屏障并最终进入胚胎的含量是无法控制的。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法及应用，该构建方法能够构建一种内暴露模型，可以使精确定量的全氟化合物直接注入到处于卵裂期的斑马鱼胚胎植物极内，以获得一种更为直接、稳定、准确度高的用于全氟化合物胚胎发育毒性预测的内暴露模型。本发明还提供了一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型在全氟化合物胚胎发育毒性的评价方法中的应用。
第一方面，本发明提供了一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法，包括以下步骤：
搭建显微注射系统平台；
配制含全氟化合物的样品溶液，所述全氟化合物包括全氟羧酸类化合物和全氟磺酸类化合物中的一种或多种；
选取处于卵裂期的斑马鱼胚胎，利用所述显微注射系统平台，将所述样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎的植物极内。
本发明中，所述显微注射系统平台是一个用于实施显微注射技术的平台。其中，显微注射技术是一种利用显微操作系统，控制显微注射针在显微镜视野内移动，用来进行细胞或早期胚胎操作的一种方法；其主要在将mRNA和DNA进入实验动物细胞或胚胎中，实现基因的瞬时过表达、表达敲除、以及制备转基因或突变体等领域应用。
可选地，所述显微注射系统平台包括：拉针仪、持针器、显微操纵器、显微注射器和体视显微镜；其中，所述拉针仪用于将毛细管拉制成注射针；所述持针器用于固定所述注射针；所述显微操纵器用于调控所述注射针在显微注射过程中位置；所述显微注射器用于给所述注射针施加注射压，以将所述待测样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎内；所述体视显微镜用于在显微注射过程中观察和聚焦所述注射针及所述斑马鱼胚胎。
可选地，所述全氟羧酸类化合物包括全氟丁酸(PFBA)、全氟戊酸(PFPeA)、全氟己酸(PFHxA)、全氟庚酸(PFHpA)、全氟辛酸(PFOA)、全氟壬酸(PFNA)、全氟癸酸(PFDA)、全氟十一酸(PFUnA)、全氟十二酸(PFDoA)、全氟十三酸(PFTrDA)、全氟十四酸(PFTeDA)、全氟十六酸(PFHxDA)和全氟十八酸(PFODA)中的一种或多种；所述全氟磺酸类化合物包括全氟丁烷磺酸(PFBS)、全氟己烷磺酸(PFHxS)、全氟辛烷磺酸(PFOS)和全氟癸烷磺酸(PFDS)中的一种或多种。
可选地，所述配制含全氟化合物的样品溶液的过程包括：称取全氟化合物固体粉末，然后加入去离子水，混合溶解后得到所述含全氟化合物的样品溶液。
可选地，所述待测样品溶液的注射剂量体积小于或等于所述斑马鱼胚胎体积的10％。
可选地，所述斑马鱼胚胎的植物极内，所述全氟化合物的注射质量为0.1ng-50ng。
可选地，所述选取处于卵裂期的斑马鱼胚胎的过程包括：按照雌:雄为(1-2):1的比例将成年斑马鱼放置于配种缸内，混合并让所述成年斑马鱼进行交配，然后收集所述配种缸底部的鱼卵，经分选、洗净后获得卵裂期的斑马鱼胚胎，将所述卵裂期的斑马鱼胚胎置于平板培养皿中，并清除所述平板培养皿内的其他异物和水。
本发明第一方面所述构建方法能够构建一种内暴露模型，该构建方法能够构建一种内暴露模型，可以使精确定量的全氟化合物直接注入到处于卵裂期的斑马鱼胚胎植物极内，以获得一种更为直接、稳定、准确度高的用于全氟化合物胚胎发育毒性预测的内暴露模型。该内暴露模型能更加有效的获取定量全氟化合物对斑马鱼胚胎发育影响的数据。
相比于传统的静水外暴露途径，本发明所述构建方法构建的斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型可以避免将斑马鱼胚胎置于含有高溶度的全氟化合物溶液中都带来的含量不确定的影响。同时，本申请所述构建方法构建的斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型，全氟化合物都注射在的斑马鱼胚胎的植物极区域，一方面，该方法有利于保证各组测试的统一性，能够避免传统静水外暴露途径中，全氟化合物跨越胚胎屏障并最终进入胚胎的位置区域的分布不确定性，导致实验数据的不可靠性的影响；另一方面，由于斑马鱼胚胎植物级主要为胚胎发育提供营养物质，通过将全氟化合物注射至植物级，还可以最小程度地减小注射过程本身对胚胎带来的伤害。因此，本发明第一方面所述的斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型能够在全氟化合物的毒性评价领域应用。
第二方面，本发明还提供了一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的应用，具体为一种全氟化合物胚胎发育毒性的评价方法，包括：按本发明第一方面所述斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法构建斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型，然后将经注射后的所述斑马鱼胚胎转移至养殖水中恒温培养，观察和记录所述斑马鱼胚胎发育过程中形态学变化。
可选地，所述观察和记录所述斑马鱼胚胎发育过程中形态学变化的过程包括：观察所述斑马鱼胚胎发育过程，并记录所述斑马鱼胚胎发育过程中的死亡率和畸形率。
可选地，配制不同溶度梯度的所述含全氟化合物的样品溶液，分别将不同溶度梯度的所述样品溶液注射至各自对应的斑马鱼胚胎的植物极内。
本发明第二方面所述全氟化合物胚胎发育毒性的评价方法，能够有效用于评估全氟化合物对胚胎的发育毒性，在环境毒理学领域中具有重要意义。所述评估方法还可以服务于生化分析检测或生命科学领域，或者其他领域。由于所述全氟化合物胚胎发育毒性的评价方法能有效反映环境相关剂量的全氟化合物(纳克级)对胚胎发育的影响，且数据精准、可靠；因此，该评价方法还可以作为一种全新的评价指标。
由于全氟化合物是一种水生生物，以及环境中广泛存在的有害物质，严重危害人类的健康。因此，全面、准确地评估全氟化合物对胚胎的发育毒性，对以后其用于评估人体健康影响也具有重要意义，同时也可为毒理学相关研究提供重要的技术支撑。
本发明的优点将会在下面的说明书中部分阐明，一部分根据说明书是显而易见的，或者可以通过本发明实施例的实施而获知。
附图说明
为更清楚地阐述本发明的内容，下面结合附图与具体实施例来对其进行详细说明。
图1为本发明一实施例提供的斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法的工艺流程图；
图2为本发明一实施例提供的利用显微注射系统平台将样品溶液注射至斑马鱼胚胎的植物极的过程图；
图3为本发明一实施例提供的不同溶度全氟化合物对斑马鱼胚胎发育毒性测试图。
具体实施方式
以下所述是本发明实施例的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明实施例原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明实施例的保护范围。
下面分多个实施例对本发明实施例进行进一步的说明。其中，本发明实施例不限定于以下的具体实施例。在不变主权利的范围内，可以适当的进行变更实施。
若无特别说明，本发明实施例所采用的原料及其它化学试剂皆为市售商品。
参见图1，本发明一实施例提供了一种同时检测苯并[a]芘及其代谢产物的方法，包括以下步骤：
S10、搭建显微注射系统平台；
S20、配制含全氟化合物的样品溶液，所述全氟化合物包括全氟羧酸类化合物和全氟磺酸类化合物中的一种或多种；
S30、选取处于卵裂期的斑马鱼胚胎，利用所述显微注射系统平台，将所述样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎的植物极内。
其中，所述步骤S10中，所述显微注射系统平台包括：拉针仪、持针器、显微操纵器、显微注射器和体视显微镜；其中，所述拉针仪用于将毛细管拉制成注射针；所述持针器用于固定所述注射针；所述显微操纵器用于调控所述注射针在显微注射过程中位置；所述显微注射器用于给所述注射针施加注射压，以将所述待测样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎内；所述体视显微镜用于在显微注射过程中观察和聚焦所述注射针及所述斑马鱼胚胎。
可选地，所述显微注射系统平台还包括测微尺，所述测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺，所述测微尺用于测量待测物体尺寸。
本实施方式中，所述拉针仪拉制注射针的具体过程包括：使用拉针仪，调节的温度、拉力、拉制时间等参数，经毛细管拉制出合适针尖的注射针。为了防止空气中灰尘颗粒沾染注射针引起针尖阻塞，注射针最好现用现拉。
本发明实施方式中，所述显微注射器用于对所述注射针内的样品溶液施加可调节气压脉冲，将精确体积的样品溶液注射至胚胎体内。显微注射器包括空气管。所述显微注射器还和一个脚踏板控制器相连，使得实验人员在使用双手的同时还可以通过所述脚踏板控制器激活压力脉冲将样品溶液注射入胚胎中。
本实施方式中，所述持针器常装在显微操作器上，所述持针器固定在注射过程中使用的所述注射针，并将所述注射针与显微注射器的空气管相连。
本实施方式中，所述用于注射针内的溶液施加压力脉冲，利用可调节气压脉冲将精确体积的样品注射至胚胎体内。注射器还和一个脚踏板相连，使得实验人员在使用双手的同时还可以激活压力脉冲将实验材料注射入胚胎中。
其中，所述步骤S20中，所述全氟化合物为全氟羧酸类化合物，或为全氟磺酸类化合物。所述全氟化合物还可以但不限于由全氟羧酸类化合物和全氟磺酸类化合物组成。
其中，所述全氟羧酸类化合物可以为所述全氟羧酸化合物，或其化学或药学上可接受的盐。所述全氟磺酸类化合物可以为全氟磺酸，或其或其化学或药学上可接受的盐。
进一步地，可选地，所述全氟羧酸类化合物包括全氟丁酸、全氟戊酸、全氟己酸、全氟庚酸、全氟辛酸、全氟壬酸、全氟癸酸、全氟十一酸、全氟十二酸、全氟十三酸、全氟十四酸、全氟十六酸和全氟十八酸中的一种或多种。可选地，所述全氟磺酸类化合物包括全氟丁烷磺酸、全氟己烷磺酸、全氟辛烷磺酸和全氟癸烷磺酸中的一种或多种。
一实施方式中，所述全氟羧酸类化合物包括全氟丁酸、全氟戊酸、全氟己酸、全氟庚酸、全氟辛酸、全氟壬酸、全氟癸酸、全氟十一酸、全氟十二酸、全氟十三酸、全氟十四酸、全氟十六酸和全氟十八酸中的一种。
另一实施方式中，所述全氟羧酸类化合物包括全氟丁酸、全氟戊酸、全氟己酸、全氟庚酸、全氟辛酸、全氟壬酸、全氟癸酸、全氟十一酸、全氟十二酸、全氟十三酸、全氟十四酸、全氟十六酸和全氟十八酸中的至少两种。
一实施方式中，所述全氟磺酸类化合物包括全氟丁烷磺酸、全氟己烷磺酸、全氟辛烷磺酸和全氟癸烷磺酸中的一种。
另一实施方式中，所述全氟磺酸类化合物包括全氟丁烷磺酸、全氟己烷磺酸、全氟辛烷磺酸和全氟癸烷磺酸中的至少两种。
本实施方式中，所述含全氟化合物的样品溶液为一种含全氟化合物的水溶液。通过将所述样品溶液的溶剂设置为去离子水，由于去离子水对胚胎发育几乎不存在干扰；因此，可以将对胚胎发育影响因素主要集中在全氟化合物的物质本身，减少其他溶剂带来的毒性干扰，使构建的内暴露模型的实验数据更科学。
可选地，所述配制含全氟化合物的样品溶液的过程包括：称取全氟化合物固体粉末，然后加入去离子水，混合溶解后得到所述含全氟化合物的样品溶液。
例如，称取25mg PFOS固体粉末于样品瓶中，加入1mL水溶解配制成25mg/mL的样品溶液，根据所需要的注射浓度可以通过稀释方式配制。
本实施方式中，所述样品溶液注入至所述注射针过程(或称注射针的上样)包括：将拉制好的注射针竖直固定，然后吸取1-3μL样品溶液，逐滴地将样品溶液滴在注射针顶端，在注射针内芯引导下，液体通过虹吸作用将汇聚于注射针针头部分。然后，对经上样后的注射针进行破针操作，所述破针操作包括：将上好样品溶液的注射针插入所述持针器中固定，然后在体视显微镜最高倍放大率下，用尖头镊子将注射针的前端夹断。
本实施方式中，所述显微注射器可以为以脉冲压力注射仪。例如MPPI-3脉冲压力注射仪。通过控制所述显微注射器主操作面板上的压力值，对所述注射针内的样品溶液施加可调节气压脉冲，将精确体积的样品溶液注射至胚胎体内。
例如，所述显微注射器连接一氮气罐，注射过程中，先打开氮气罐总阀，调节压力至0-0.5之间，然后打开显微注射器开关，调节主操作面板上的压力值为10-20左右，然后通过大量试验筛选合适的注射压力和脉冲时间。
可选地，在将所述样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎的植物极内之前，还包括对所述注射针进行调整。例如，把镜台测微尺(1DIV＝0.01mm)放置到体视显微镜下，加入一滴矿物油，将注射针伸入矿物油中，踩动踏板压将一滴注射液送到矿物油，测量注射样品的大小；并通过调节显微注射器参数或注射针参数对所述注射针进行调整。
其中，所述步骤S30中，所述选取处于卵裂期的斑马鱼胚胎的过程包括：按照雌:雄为(1-2):1的比例将成年斑马鱼放置于配种缸内，混合并让所述成年斑马鱼进行交配，然后收集所述配种缸底部的鱼卵，经分选、洗净后获得卵裂期的斑马鱼胚胎，将所述卵裂期的斑马鱼胚胎置于平板培养皿中，并清除所述平板培养皿内的其他异物和水。
可选地，可以通过过滤的方式收集所述鱼卵。例如，取180μm孔径的过滤网，收集配种缸底部的鱼卵。
可选地，注射过程中，将卵裂期的斑马鱼胚胎放置到体视显微镜镜下，先用低倍物镜对准胚胎调焦，轻轻的落下所述注射针针尖，并将所述注射针针尖推入视野中心，通过微操作系统的微调调整所述注射针位置，直到清晰见到针尖为止；然后进一步调整显微镜焦距和所述注射针、所述卵裂期的斑马鱼胚胎的位置，使所述卵裂期的斑马鱼胚胎和所述注射针尖均达到最佳清晰程度；然后推动操纵杆，小心进针，使所述注射针针尖进入所述卵裂期的斑马鱼胚胎的植物极；然后脚踏开关将样品溶液注入所述卵裂期的斑马鱼胚胎的植物极内。注射结束时，先关闭氮气罐总阀，排空仪器中的气体后，关闭总开关。
可选地，所述待测样品溶液的注射剂量体积小于或等于所述斑马鱼胚胎体积的10％。
可选地，所述待测样品溶液的注射剂量体积为所述斑马鱼胚胎体积的8-10％。
可选地，所述斑马鱼胚胎的植物极内，所述全氟化合物的注射质量为0.1ng-50ng。
一实施方式中，所述斑马鱼胚胎的植物极内，所述全氟化合物的注射质量为0.1ng-10ng。另一实施方式中，所述斑马鱼胚胎的植物极内，所述全氟化合物的注射质量为0.1ng-20ng。
参见图2，为利用显微注射系统平台将样品溶液注射至斑马鱼胚胎的植物极的过程图；通过显微注射系统平台，使精确定量的全氟化合物直接注入到处于卵裂期的斑马鱼胚胎植物极内。
本实施方式中，所述斑马鱼胚胎选取为卵裂期，而卵裂期是胚胎发育的第一个时期，因此，本发明所述构建方法构建的斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型可以更好用于评估全氟化合物对胚胎的发育影响。
本实施方式中，所述构建方法构建的斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型，全氟化合物都注射在的斑马鱼胚胎的植物极区域，一方面，该方法有利于保证各个实验组测试的统一性，防止传统静水外暴露途径中，全氟化合物跨越胚胎屏障并最终进入胚胎的位置区域的不确定性分布的影响，造成实验数据的不可靠性；另一方面，由于斑马鱼胚胎植物级主要为胚胎发育提供营养物质，通过将全氟化合物注射至植物级，还可以减小注射过程本身对胚胎的伤害。所述构建方法构建的斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型是一种全新的暴露模型(或暴露途径)，能够精准控制全氟化合物的暴露含量，可以用于更加直接、科学地测定全氟化合物对斑马鱼胚胎的发育影响。
本发明另一实施例还提供了一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的应用，具体为一种全氟化合物胚胎发育毒性的评价方法，包括以下步骤：
S210、搭建显微注射系统平台；然后配制含全氟化合物的样品溶液，所述全氟化合物包括全氟羧酸类化合物和全氟磺酸类化合物中的一种或多种；然后选取处于卵裂期的斑马鱼胚胎，利用所述显微注射系统平台，将所述样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎的植物极内；
S220、将经注射后的所述斑马鱼胚胎转移至养殖水中恒温培养，观察和记录所述斑马鱼胚胎发育过程中形态学变化。
可选地，所述观察和记录所述斑马鱼胚胎发育过程中形态学变化的过程包括：观察所述斑马鱼胚胎发育过程，并记录所述斑马鱼胚胎发育过程中的死亡率和畸形率。例如，畸形特征常见为心包水状、脊柱弯曲和头目畸形。
可选地，配制不同溶度梯度的所述含全氟化合物的样品溶液，分别将不同溶度梯度的所述样品溶液注射至各自对应的斑马鱼胚胎的植物极内。
本实施方式中，所述全氟化合物胚胎发育毒性的评价方法，能够有效用于评估全氟化合物对胚胎的发育毒性，在环境毒理学领域中具有重要意义。所述评估方法还可以服务于生化分析检测或生命科学领域，或者其他领域。由于所述全氟化合物胚胎发育毒性的评价方法能有效反映环境相关剂量的全氟化合物(纳克级)对胚胎发育的影响，且数据精准、可靠。
效果实施例
(1)全氟化合物对斑马鱼胚胎发育毒性评价
随机选取一种全氟化合物，以全氟辛酸(PFOA)为例，按本发明实施方式所述构建方法，在测试前获取卵裂期的斑马鱼胚胎，然后配制约0.025ng/nL、0.25ng/nL和2.5ng/nL的不同梯度溶度的PFOA水溶液，利用所述显微注射系统平台，将不同溶度PFOA水溶液注射至不同的多个斑马鱼胚胎的植物极内，采用0.1s的注射时间，注射压力为0.3psi；注射结束后，将斑马鱼胚胎转移至养殖水中，于28C培养箱恒温培养，每天观察胚胎发育过程中形态学变化。其中，每个溶度的PFOA对应设置50个平行实验组，空白对照组为等体积的去离子水；结构如图3所示。
结果显示，空白对照组中的斑马鱼胚胎能发育成形态正常的斑马鱼，几乎对斑马鱼胚胎没有影响；而不同溶度PFOA实验组却不同程度地影响斑马鱼胚胎发育，对斑马鱼胚胎存在毒性影响；其中，随着PFOA在斑马鱼胚胎植物极的溶度增加，PFOA对斑马鱼胚胎的毒性影响也越来越大，出现心包水状、脊柱弯曲和头目畸形的概率和死亡率也增加。
相比于传统方法，本发明实施例所述方法能够用于评价定量的全氟化合物对定量全氟化合物的毒性影响，全氟化合物的浓度可以精准到纳克级或更小。本发明实施例所述构建方法能够获得一种更为直接、稳定、准确度高的用于全氟化合物胚胎发育毒性预测的内暴露模型，该内暴露模型能更加有效的获取定量全氟化合物对斑马鱼胚胎发育影响的数据；并且所述内暴露模型能够应该用于实现更加高效，更加灵敏的全氟化合物斑马鱼胚胎能发育毒性评价。进一步地，本发明实施例所述方法也可为全氟化合物对人体健康的影响及相关毒理学研究提供重要的参考信息。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
搭建显微注射系统平台；
配制含全氟化合物的样品溶液，所述全氟化合物包括全氟羧酸类化合物和全氟磺酸类化合物中的一种或多种；
选取处于卵裂期的斑马鱼胚胎，利用所述显微注射系统平台，将所述样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎的植物极内。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述显微注射系统平台包括：拉针仪、持针器、显微操纵器、显微注射器和体视显微镜；其中，所述拉针仪用于将毛细管拉制成注射针；所述持针器用于固定所述注射针；所述显微操纵器用于调控所述注射针在显微注射过程中位置；所述显微注射器用于给所述注射针施加注射压，以将所述待测样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎内；所述体视显微镜用于在显微注射过程中观察和聚焦所述注射针及所述斑马鱼胚胎。
3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述全氟羧酸类化合物包括全氟丁酸、全氟戊酸、全氟己酸、全氟庚酸、全氟辛酸、全氟壬酸、全氟癸酸、全氟十一酸、全氟十二酸、全氟十三酸、全氟十四酸、全氟十六酸和全氟十八酸中的一种或多种；所述全氟磺酸类化合物包括全氟丁烷磺酸、全氟己烷磺酸、全氟辛烷磺酸和全氟癸烷磺酸中的一种或多种。
4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述配制含全氟化合物的样品溶液的过程包括：称取全氟化合物固体粉末，然后加入去离子水，混合溶解后得到所述含全氟化合物的样品溶液。
5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述待测样品溶液的注射剂量体积小于或等于所述斑马鱼胚胎体积的10％。
6.如权利要求1或5所述的构建方法，其特征在于，所述斑马鱼胚胎的植物极内，所述全氟化合物的注射质量为0.1ng-50ng。
7.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述选取处于卵裂期的斑马鱼胚胎的过程包括：按照雌:雄为(1-2):1的比例将成年斑马鱼放置于配种缸内，混合并让所述成年斑马鱼进行交配，然后收集所述配种缸底部的鱼卵，经分选、洗净后获得卵裂期的斑马鱼胚胎，将所述卵裂期的斑马鱼胚胎置于平板培养皿中，并清除所述平板培养皿内的其他异物和水。
8.一种全氟化合物胚胎发育毒性的评价方法，其特征在于，包括：按如权利要求1-7任一项所述斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法构建斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型，然后将经注射后的所述斑马鱼胚胎转移至养殖水中恒温培养，观察和记录所述斑马鱼胚胎发育过程中形态学变化。
9.如权利要求8所述的评价方法，其特征在于，所述观察和记录所述斑马鱼胚胎发育过程中形态学变化的过程包括：观察所述斑马鱼胚胎发育过程，并记录所述斑马鱼胚胎发育过程中的死亡率和畸形率。
10.如权利要求8所述的评价方法，其特征在于，配制不同溶度梯度的所述含全氟化合物的样品溶液，分别将不同溶度梯度的所述样品溶液注射至各自对应的斑马鱼胚胎的植物极内。
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