CN110800745A - 芸苔素内酯在促进三七生长发育中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了芸苔素内酯在促进三七生长发育中的应用,在三七出苗率为2/3时,对其喷洒浓度为18.75~37.5μg/kg的芸苔素内酯,同时公开研究了不同浓度的芸苔素内酯对三七农艺性状、株高、生物量及品质的影响,为芸苔素内酯在三七种植中的推广使用提供理论依据。

Description

芸苔素内酯在促进三七生长发育中的应用
技术领域
本发明涉及植物学技术领域,更具体地说是涉及芸苔素内酯在促进三七生长发育中的应用。
背景技术
三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chem的干燥根和根茎,是我国特有的名贵中药材,其发挥药效的物质主要是三七总皂苷(PNS),主要成分包括人参皂苷Rg1、Rb1、Rd、Re和三七皂苷R1等。现代药理学研究表明,三七中的PNS具有抗癌、抗动脉粥样硬化、脑神经保护等多种药理活性,被广泛应用于临床、制药、保健、日化等领域。三七的市场需求量日益趋增,但在三七的产业化种植过程中仍存在一些制约瓶颈,如有些农户为了追求高产,以及控制连年发生的病虫害,盲目施用过量化肥和农药(包括生长调节剂),导致三七品质得不到保障。
芸苔素内酯(Brassinolide,称BR),是20世纪70年代从植物界分离出的一种甾体类新型植物生长调节物质,是国际上公认的最新型的广谱、高效、安全、活性高、抗逆性强的植物生长调节剂类型。番茄喷施适宜浓度的芸苔素内酯水剂对其安全无害,不仅能提高坐果率,增加单果重和产量,而且可改善番茄品质,提高果实的商品性;小白菜喷施适宜浓度的芸苔素内酯能显著增加产量并能改善其品质;玉米喷施适宜浓度的芸苔素内酯能促进植株的生长,有效调节生殖生长,可增加产量。但有关芸苔素内酯的浓度对三七品质调控方面的研究未见报道。
因此,如何合理应用芸苔素内酯,使其促进三七的生长发育和品质提升是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了芸苔素内酯在促进三七生长发育中的应用,研究了不同浓度的芸苔素内酯对三七农艺性状、株高、生物量及品质的影响。
芸苔素内酯在促进三七生长发育中的应用,其特征在于,在三七出苗率为2/3时,对其喷洒浓度为18.75~37.5μg/kg的芸苔素内酯。
作为本发明优选的技术方案,芸苔素内酯的喷洒量为50kg/亩。
作为本发明优选的技术方案,在三七出苗率为2/3时,对其喷洒芸苔素内酯,每隔7天喷洒一次,喷洒3次后,结束喷洒。
经由上述的技术方案可知,与现有技术相比,本发明公开提供了芸苔素内酯在促进三七生长发育中的应用,当芸苔素内酯的浓度为9.375~150μg/kg时,对三七叶的生长均有不同程度地促进作用;当芸苔素内酯的浓度为9.375~37.5μg/kg时,利于三七株高的生长;当芸苔素内酯的浓度为18.75~37.5μg/kg时,对三七的成活率、产量及品质有显著的提高;当芸苔素内酯的浓度为18.75~75μg/kg时,对三七农艺性状有显著增高的作用,因此,综合考量芸苔素内酯的浓度,当其浓度为18.75~37.5μg/kg时,对三七的叶、株高、农艺性状及品质均有促进作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为不同芸苔素内酯浓度对三七株高影响的示意图;
图2附图为不同芸苔素内酯浓度对三七茎基粗影响的示意图;
图3附图为不同芸苔素内酯浓度对三七叶促进作用的示意图;
图4附图为皂苷含量的HPLC图谱;其中,A为对照品中皂苷含量的HPLC图谱,1为三七皂苷R1出峰曲线;2代表人参皂苷Rg1出峰曲线;3代表人参皂苷Re出峰曲线;4代表人参皂苷Rb1出峰曲线;5代表人参皂苷Rd出峰曲线;B为样品中皂苷含量的HPLC图谱;
图5附图为不同芸苔素内酯浓度对三七皂苷R1含量的影响示意图;
图6附图为不同芸苔素内酯浓度对人参皂苷Rg1含量的影响示意图;
图7附图为不同芸苔素内酯浓度对人参皂苷Rb1含量的影响示意图;
图8附图为不同芸苔素内酯浓度对人参皂苷Rd含量的影响示意图;
图9附图为不同芸苔素内酯浓度对人参皂苷Re含量的影响示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1芸苔素内酯喷施浓度对三七株高的影响
根据三七种植地规划,将每亩地划分为175个小区,每个小区面积为1.95m×1.95m,有110株三七植株。试验设置7个处理,分别为CK(清水喷施)和喷施浓度梯度为9.375μg/kg、18.75μg/kg、37.5μg/kg、75μg/kg、150μg/kg及750μg/kg的芸苔素内酯,每个浓度处理3个重复,共计21个小区,小区排列为随机排列;具体分组见表1;
表1
Figure BDA0002221304700000031
处理方法:2018年4月9日,于三七出苗率达2/3时,采用药液喷雾法开始施药,每间隔7d喷施一次,连续喷施3次。所有田间试验施药选择在晴天进行,使用容量为20L的背负式电动喷雾器对茎叶进行喷雾,喷施要求达到药液呈“露”状均匀分布在植株叶、茎上。后期田间按常规管理,2018年10月25日对各小区三七药材采收。
在喷施芸苔素内酯前,每个小区采用对角线5点取样,每点选取6株,每个小区共选取的三七为30株,绑上标签并做好标记。于2018年4月9日喷药前测定原始生长数据,之后每隔7d测定一次,连续测3次,测定指标包括三七植株株高、茎基粗和叶面积。三七株高增长趋势如图1所示;茎基粗增长趋势如图2所示;三七叶面积增长趋势如图3所示;
由图1可知,试验组B1和B2在14d内增长幅度较大,试验组B3在7-21d内增长幅度变大,变化趋势最为突出。而试验组B4、B5、B6在整个试验过程中增长趋势均较小。试验组B3、B2、B1株高的平均增长率分别为55.24%、52.86%、51.94%,比对照组A1增加了16.19%、13.81%、12.89%。综上所述,芸苔素内酯浓度范围为9.375~37.5μg/kg时有利于促进三七植株高生长;
由图2可知,与对照相比,6个试验组的增长趋势无明显差异。表明不同浓度芸苔素内酯对三七茎基部生长无明显影响;
由图3可知,各试验组增长趋势均高于对照组,试验组B1、B2、B3、B4、B5、B6的平均增长率分别为128.7%、149.5%、132.0%、128.0%、140.6%、115.2%,比对照组分别增加14.5%、35.9%、18.4%、14.4%、27.0%、1.6%,其中以B2、B3和B5促增加趋势最为明显。综上所述,芸苔素内酯浓度范围为9.375~150μg/kg时对三七叶生长均有不同程度促进作用。
实施例2芸苔素内酯浓度对三七农艺性状的影响
试验设置8个处理,分别为CK(清水喷施)和喷施浓度梯度为B19.375μg/kg、B218.75μg/kg、B325.35μg/kg、B437.5μg/kg、B575μg/kg、B6150μg/kg及B7750μg/kg的芸苔素内酯,每个浓度处理3个重复,共计24个小区,增加于2018年10月25日统计好每小区三七成活数量,再将其全部采收、洗净。分别测量选取的30株(按照实施例1中的取样方法)三七的主根长、主根粗和须根长三项指标,结果见表2;
表2
Figure BDA0002221304700000051
由表2可知,同对照组相比,在三七生长期喷施不同浓度芸苔素内酯对三七主根长、主根粗、须根长三种农艺性状表现出一定的调节作用,其中低浓度B1试验组对三个指标无显著影响;B2、B3、B4试验组须根长显著高于对照组,但对主根长、主根粗无显著影响;高浓度B5、B6试验组比对照组各指标表现出降低的影响。综上,芸苔素内酯浓度范围为18.75~75μg/kg时对三七农艺性状有显著增高影响。
实施例3芸苔素内酯浓度对三七植物生长量的影响
将实施例2采集到的三七烘干后分别称量其地下部分干重即单株生物量,折算亩产量(亩产量=小区成活株数*单株生物量*每亩小区数(175)),结果见表3;
表3
Figure BDA0002221304700000061
由表3可知,同对照组相比,在三七生长期阶段喷施不同浓度芸苔素内酯对三七单株生物量增加的调节作用不明显,但随着喷施浓度的升高,芸苔素内酯对三七成活率和亩产量呈先增后减的调节趋势,其中B2和B3试验组的成活率达到81.8%和78.2%,比对照组分别提高17.3%和13.7%,亩产量比对照显著提高,增产率达30.07%和23.45%。综上,芸苔素内酯浓度范围为18.75~37.5μg/kg时,对三七的成活率和产量有显著提高作用。
实施例4芸苔素内酯浓度对三七皂苷成分的影响
(1)色谱条件
色谱柱:phenomenexC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)-水(B)二元梯度洗脱,0~35min,80%B;35~55min,80%~71%B;55~70min,71%B;70~90min,71%~60%B;90~95min,60%~79%B;95~100min,79%B;流速:1.0mL/min;检测波长:230nm;柱温:40℃,进样量:10μL。结果见图4。
A.对照品;B.样品:1.三七皂苷R1;2.人参皂苷Rg1;3.人参皂苷Re;4.人参皂苷Rb1;5.人参皂苷Rd
(2)对照品溶液的制备
分别精密称定对照品人参皂苷Rg1、Rb1、Rd、Re和三七皂苷R1,均配制成1mg/mL的母液,分别精密吸取五种皂苷对照品溶液0.1、0.25、0.5、1、2、3、6、8mL置于10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。
(3)供试品溶液的制备
精密称取三七粉末(过四号筛)2.0g,置于具塞锥形瓶中,精密加入50mL甲醇,密塞,称定重量,放置过夜。置于80℃水浴上保持微沸2h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,取上清液过0.22μm微孔滤膜,取续滤液即得。
(4)线性关系考察
分别精密吸取五种皂苷对照品溶液10μL,按上述色谱条件进样分析,以各对照品溶液浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),得各标准品的标准曲线,结果显示各成分在相应的进样范围内线性关系良好,结果见表4;
表4
Figure BDA0002221304700000071
(5)精密度试验
分别取一定浓度5种皂苷的对照品溶液充分混合后,按上述色谱条件连续进样6次,计算三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd、Re五个成分峰面积的RSD(n=6),其值分别为0.75%、1.85%、1.49%、1.16%、2.08%,结果表明仪器精密度良好。
(6)重复性试验
精密称取以9.375μg/kg芸苔素内酯处理的三七样品6份,按照(3)中的方法制备待测样品溶液,按上述色谱条件进样测定,计算三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd、Re的平均含量分别为10.49、23.57、32.65、11.08、2.98mg/g,RSD值分别为1.25%、1.06%、1.29%、2.84%、0.77%。
(7)稳定性试验
取供试品溶液,于0、2、4、6、8、10、12、24h进样测定,计算三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd、Re五个成分峰面积的RSD,其值分别为1.54%、1.93%、1.36%、1.72%、1.99%,结果表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
(8)加标回收率试验
精密称取已知含量的样品6份,每份中分别加入1ml不同浓度的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd、Re对照品溶液,按上述(3)中的条件制备供试品溶液,按(1)中的色谱条件进样测定,结果见表5;
表5
Figure BDA0002221304700000081
按照实施例1中的处理方式和取样方式进行处理和取样,并在(1)中的色谱条件下对不同处理组中皂苷成分进行测定,结果如图5-图9所示。
由图5-图9可知,喷施不同浓度芸苔素内酯对三七皂苷R1含量的积累有显著增加作用。同对照组相比,不同浓度芸苔素内酯对三七皂苷R1的含量提升增幅为21.09%~47.01%,其中浓度为18.75μg/kg时对其影响最大;喷施不同浓度芸苔素内酯对人参皂苷Rg1、Re两种成分的影响呈先增后减的趋势,其中以浓度为75μg/kg时对其影响最大;喷施低浓度芸苔素内酯时,对三七中的人参皂苷Rb1、Rd成分无显著影响,但随着浓度的增加,其含量会有降低的趋势。
综合实施例1-4可知,喷施的芸苔素内酯浓度范围为9.375~150μg/kg时对促进三七叶的生长有较明显的作用,对三七植高变化的影响次之,而对三七茎基粗变化无调节作用。芸苔素内酯进入植物体内后,不仅加强了植物的光合作用,促进其生长发育,而且对植物细胞的膜系统有保护作用,能激发植物体内某些起保护作用的酶的活性,从而增强了植物的抗逆性,对植物的病害起到一定的防控作用。
芸苔素内酯浓度为18.75~37.5μg/kg时三七的成活率比对照显著提高。即在三七生长期喷施一定浓度的芸苔素内酯有增加其成活率的趋势,三七在生长期尤其是出苗展叶期极易感染各种病害如黑斑病、圆斑病、炭疽病、疫霉病等,会造成三七植株倒伏或死苗。喷施一定浓度的芸苔素内酯,可促进三七叶和株高的快速生长,避免了出苗展叶期各种病原菌浸染而导致的倒伏和死苗,从而提高了其成活率,具体调控机制还有待进一步深入研究探讨。
喷施的芸苔素内酯浓度范围为18.75~37.5μg/kg时对三七农艺性状和植株生物量的影响显著,即喷施该浓度范围的芸苔素内酯可在一定程度上改善三七的生长发育,并显著提升其产量。
芸苔素内酯各处理浓度对三七皂苷R1含量的积累均有显著增加作用,其中以浓度为18.75μg/kg时影响最显著。但植物生长调节剂对中药材药用活性成分既有促进积累的作用也有抑制的作用,有研究表明,过量使用多效唑可降低川麦冬总皂苷的积累,且随剂量的增加,降低愈明显;党参中施用壮根灵(主要成分为矮壮素、氯化胆碱)会使党参炔苷含量明显下降;金银花开花前喷施矮壮素、缩节胺和多效唑会明显降低三青期绿原酸含量,矮壮素和多效唑会降低二白期绿原酸含量。如抑制有效成分的积累,则药材质量达不到药典标准,导致临床使用效果不显著或无效。因此,在中药材种植上不能盲目使用植物生长调节剂,需要通过严格的科学试验,选择确定适宜的种类、浓度和喷施时间,在关注药材产量提升同时,更要对药材有效成分含量的变化严格把关,以保障中药材的品质。
基于促进三七生长、提高产量及提升品质等数据的综合分析,确定喷施的芸苔素内酯浓度范围为18.75~37.5μg/kg(即稀释2000~4000倍)时,对三七植株生长发育、三七苗成活率、产量及品质均有一定的提升作用。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述,每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处,各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言,由于其与实施例公开的方法相对应,所以描述的比较简单,相关之处参见方法部分说明即可。
对所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (3)

1.芸苔素内酯在促进三七生长发育中的应用,其特征在于,在三七出苗率为2/3时,对其喷洒浓度为18.75~37.5μg/kg的芸苔素内酯。
2.根据权利要求1所述的芸苔素内酯在促进三七生长发育中的应用,其特征在于,芸苔素内酯的喷洒量为50kg/亩。
3.根据权利要求1-2任一所述的芸苔素内酯在促进三七生长发育中的应用,其特征在于,在三七出苗率为2/3时,对其喷洒芸苔素内酯,每隔7天喷洒一次,喷洒3次后,结束喷洒。
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