CN110769843A - C5a受体激动剂肽的盐酸盐 - Google Patents

Abstract

C5a的合成C末端肽类似物的盐酸盐形式，其是带有C5aR的抗原呈递细胞的反应选择性激动剂。还公开了通过单独或与其他活性剂组合给药这样的肽类似物在受试者中诱导免疫反应的方法。

Description

C5A受体激动剂肽的盐酸盐

相关申请的交叉引用

本申请要求于2017年6月12日提交的名称为“C5A受体激动剂肽的盐酸盐”的美国临时专利申请序列No.62/518,335的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

联邦赞助的研究或开发

本发明是在国家过敏和感染性疾病研究所(National Institutes of Allergyand Infectious Diseases)授予的1R41AI94710-01和1R01AI125137-01的政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。

序列表

以下申请包含计算机可读格式(CRF)的序列表，该序列表以ASCII格式的文本文件提交，名称为“Sequence_Listing_49770-PCT”，创建于2018年6月11日，大小为8KB。CRF的内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及生物活性肽的HCl盐形式，且尤其涉及C5a的反应选择性C末端类似物。

背景技术

血液补体(C)在宿主防御外来物质方面起着重要作用。缺乏某些C组分的个体经常遭受反复感染，且有时是致命的感染。C系统的激活导致产生过敏毒素C3a和C5a。这些片段分别是较大的C蛋白C3和C5的生物活性切割产物。C5a是短的(在人体内有74个残基)糖蛋白，通过C5的酶切产生。

由于C5a能够激活和募集中性粒细胞、诱导痉挛形成、增加血管通透性并刺激继发性炎症介质从多种细胞类型(例如白细胞和巨噬细胞)中释放，因此被认为是局部和全身炎症反应的主要介质。C5a还在调节先天性和获得性免疫反应方面起作用，因为它具有啮合(engage)和激活抗原呈递细胞(APC)的能力，以直接或间接地诱导细胞因子(诸如白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-12(IL-12)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α))的合成与释放，并增强这些APC的抗原加工和呈递能力。当C5a配体与其在某些循环和组织细胞类型的表面上表达的一种或多种受体相互作用时，这些炎症和免疫调节活性被认为通过跨膜的、G蛋白介导的信号转导机制表达。C5a的促炎活性可以分为两大类。第一类活性(1类)通常与组胺和其他次要介质(例如，血管收缩剂和血管扩张类花生酸)的释放有关。C5a的这些活性影响许多系统，并与痉挛形成现象和某些细胞聚集活性(例如血小板聚集)相关。第二类活性(2类)涉及中性粒细胞的募集和激活以及这种中性粒细胞积累和激活的后续影响，诸如血管通透性增加、细胞因子释放和其他促炎反应。由于其促炎活性，C5a被认为是某些炎性疾患(诸如类风湿关节炎、成人呼吸窘迫综合征、牙龈炎以及与动脉粥样硬化和心肌梗塞相关的组织损伤)的表达中的致病因素。因此，在开发用作治疗这些疾病的抗炎剂的特定C5a拮抗剂方面，已经花费了大量的研究工作。但是，大多数与C5a受体激动剂和拮抗剂有关的文献未能区分带有C5a受体的巨噬细胞上的C5a受体和带有C5a受体的粒细胞上的C5a受体。因此，在本领域中很少有关于一种类型的C5a受体相对于另一种的选择性结合/活化的认识。

美国专利No.5,696,230和5,942,599描述了人C5a的C末端肽类似物的构象表征。美国专利No.6,821,517描述了用于通过在这些APC上表达的独特的C5aR(其不同于在炎性粒细胞上表达的C5aR)将特异性抗原递送至APC的组合物和方法。共同未决的于2012年11月30日提交的U.S.2012/0314839和于2011年6月29日提交的U.S.2015/0297668展示了选择性结合带有C5a受体的APC但不结合带有C5a受体的中性粒细胞的优势。前述专利和未决申请中的每一个均通过引用整体并入本文，除非与本公开内容相矛盾。

发明内容

本发明广泛地涉及生物活性肽的，尤其是C5a的C末端类似物的盐酸盐(HCl)形式。已经证明命名为EP67(SEQ ID NO：2)的示例性C5a的C末端类似物是带有C5a受体的APC的有效选择性激动剂。按照惯例，大写字母表示氨基酸的L立体异构形式，小写字母表示氨基酸的D立体异构形式；(MeL)对应于N-甲基亮氨酸。EP67和相关类似物具有有效的免疫增强特性。在于2012年11月30日提交的U.S.2012/0314839和于2011年6月29日提交的U.S.2015/0297668中详细描述了EP67，其通过引用并入本文。生物活性肽EP67的生物相容性HCl盐形式表现出比三氟乙酸盐(TFA)和乙酸盐形式增强的功效和更快的获得最大效力。本文也考虑了EP67的构象稳定的类似物的HCl盐形式。这些构象稳定的肽包括以下式、基本上由以下式组成，或由以下式组成：

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Xaa-(Xaa2)-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：1)，

其中，Xaa是修饰的脯氨酸残基或脯氨酸的残基替换，并且Xaa2是亮氨酸或N-甲基亮氨酸。当使用修饰的脯氨酸残基时，其是缺少未修饰的脯氨酸的顺式/反式异构化的残基。有利地，这些肽具有固定的构象和选择性C5a受体结合活性。EP67的这种构象稳定的类似物在于2016年3月11日提交的共同待决的WO 2016/0145365中有详细描述，并且这些类似物的细节通过引用整体并入本文。与天然柔性C5a结构不同，这些肽类似物被修饰为限制在刚性(特异性)构象中，从而有助于其对带有C5aR的APC的特异性。此外，因为避免了顺式/反式异构化，所以本发明的肽在其3维结合结构方面比EP67受到甚至更多的限制。

根据本发明的一种或多种实施方式，示例性的肽类似物包括EP67(其中Xaa为P且Xaa2为MeL，SEQ ID NO：2)、EP144(其中Xaa为2-氨基异丁酸且Xaa2为MeL，SEQ ID NO：3)或EP145(其中Xaa是5,5'-二甲基脯氨酸且Xaa2是MeL，SEQ ID NO：4)，如图1所示。图2中示出了EP7中脯氨酸残基的其他可能的残基替换，包括2-氨基金刚烷-2-羧酸、2-氮杂双环[2.1.1]己烷-1-羧酸、八氢-1H-吲哚-2-羧酸、2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羧酸、哌啶-4-羧酸和L-环己基丙氨酸。图3中示出了EP67中脯氨酸残基的其他残基替换，包括哌可酸、2-氮杂环丁烷羧酸和其他所示出的。

在一种或多种实施方式中，EP67的脯氨酸残基(Xaa)的示例性替代残基包括丙氨酸；亮氨酸；异亮氨酸；N-甲基丙氨酸；2-氨基异丁酸；3-氨基异丁酸；N-甲基异亮氨酸；在吡咯烷侧链的2、3、4和/或5位上的单取代脯氨酸类似物；在吡咯烷侧链的2、3、4和/或5位上的双取代脯氨酸类似物；假脯氨酸类似物：半胱氨酸衍生的噻唑烷、丝氨酸衍生的噁唑烷或苏氨酸衍生的噁唑烷；三氟甲基化假脯氨酸；具有受限的构象的脯氨酸类似物或同源物；三氟甲基化氮杂环丁烷2-羧酸；三氟甲基化高丝氨酸；含氧杂环丁烷基的拟肽；N-氨基咪唑烷-2-酮类似物；以及非手性哌可酸类似物。示例性的单取代或双取代脯氨酸类似物包括5,5'-二甲基脯氨酸、2,4-亚甲基桥-β-脯氨酸或2,5-亚乙基桥-β-脯氨酸。示例性的丝氨酸/苏氨酸/半胱氨酸衍生的假脯氨酸类似物选自由以下组成的组：

其中R和R’＝H或CH₃。示例性的非手性哌可酸类似物选自由以下组成的组：

示例性的N-氨基咪唑烷-2-酮类似物选自由N-氨基-咪唑烷酮、α-氨基-γ-内酰胺和氮杂肽组成的组。

本文还考虑了C5a的其他C末端类似物，包括包含下式、基本由下式组成或由下式组成的那些：

A1-Ser-Phe-Lys-A2-A3-A4-A5-A6-A7(SEQ ID NO：5)

其中：A1是Tyr、Trp或者Tyr或Trp的N-乙酰基衍生物；A2是Asp、Gly、Pro或者Asp或Gly的N-甲基衍生物；A3是Ala、Cys、Leu、Met或者Ala、Cys、Leu或Met的N-甲基衍生物；A4是Gln、Leu、Pro或者Gln或Leu的N-甲基衍生物；A5是Pro、Leu、α-甲基Leu或N-甲基Leu；A6是D-Ala、Gly、D-Pro、氨基异丁酸(Aib)或者D-Ala或Gly的N-甲基衍生物；以及A7是Arg或N-甲基Arg；诸如选自由以下组成的组的肽：

Tyr-Ser-Phe-Lys-Pro-Met-Pro-Leu-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：6)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Ala-Pro-Leu-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：7)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-Leu-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：8)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：9)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Ala-Pro-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：10)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Cys-Pro-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：11)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-Leu-(D-Pro)-Arg(SEQ ID NO：12)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Gln-Leu-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：13)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Gln-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：14)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Gln-Pro-Gly-Arg(SEQ ID NO：15)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-Leu-Aib-Arg(SEQ ID NO：16)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Gly-Met-Pro-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：17)；以及

Tyr-Ser-Phe-Lys-Gly-Leu-Leu-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：18)。

根据本发明的一个方面，根据本发明的各种实施方式的肽选择性地引发免疫反应。特别地，肽类似物的HCl盐形式选择性地结合并激活APC，而不直接啮合/结合参与C5a的促炎活性(1类或2类)的带有C5a受体的细胞。因此，肽类似物是带有C5aR的APC的选择性激动剂。在结合APC上的C5aR时，这些肽激活了受试者的先天性免疫系统，其可用于在受试者中诱导非特异性免疫反应。非特异性免疫反应可以用于治疗本文讨论的微生物感染以及非感染性疾病，诸如癌症等。

同样地，在一些方面，这些HCl盐形式C5a受体激动剂肽的选择性可用于通过将HCl盐形式肽类似物功能性地连接至特定免疫原(例如抗原)来将特异性免疫原性剂靶向APC。当肽与APC结合时，连接的免疫原被APC内化，并产生对该免疫原特异的免疫反应。肽的这种APC-靶向利用在美国专利No.6,821,517中有更详细的描述，其通过引用并入本文。

另一方面，本公开还涉及包含分散在药学上可接受的载体中的本发明的HCl盐形式肽类似物的组合物。

本文还描述了在受试者中通过带有C5aR的APC的选择性啮合和激活来诱导针对感染的免疫反应的方法。该方法通常包括向受试者给药治疗有效量的本发明的HCl盐形式的肽类似物，其为响应选择性C5a激动剂并具有选择性C5a受体结合活性。

根据一个方面，本公开还涉及包含本发明的HCl盐形式肽类似物和用于向有需要的受试者给药所述肽(一种或多种)的说明书的试剂盒。

本文还描述了本发明的HCl盐形式肽类似物的用途。在一方面，所述肽用于制备用于在受试者中诱导针对感染的免疫反应的治疗或预防药物。

具有构象并且包含本文所述的式的肽是高效力C5a类似物，其可以选择性地引发与天然C5a相关的不同类别的生物学反应。这些高效力类似物可用作激动剂，以选择性地引发与天然C5a相关的所需免疫反应，并在治疗免疫功能低下的患者中具有广泛的效用，优选地没有炎症副作用。

附图说明

图(图)1示出了SEQ ID NO：1中残基7的残基替换选项的结构，以及优选的肽的命名；

图2示出了肽类似物的其他残基替换；

图3示出了EP67(7位上的脯氨酸替换)和另外的替代的残基替换；

图4说明了免疫原性化合物，其包含通过精氨酸接头与活性剂缀合的肽类似物(例如，EP67)；以及

图5是实施例2中以100μg/ml测试的C5a肽类似物的HCL、AC和TFA盐随时间的IL-6释放动力学的图。

具体实施方式

与通常在生物学上产生并使用的相应的三氟乙酸盐和乙酸盐形式相比，C5a类似物(诸如EP67)的生物相容性HCl盐形式显示出改善的功效/效力和动力学。而且，相对于三氟乙酸盐和乙酸盐形式，HCl盐没有显示出溶液稳定性的任何降低。这些结果大大增强了EP67及相关类似物的治疗潜力和价值，并为适应法规要求和转化为商业产品提供了相当大的支持。

本发明广泛地涉及一类新型寡肽产物，其能够在不引发有害炎症反应的情况下通过选择性激活带有C5a受体的APC(例如巨噬细胞、单核细胞、树突细胞)来引发有利的免疫结果。换句话说，这些肽选择性地结合带有C5a受体的APC，而不结合促炎性粒细胞。本发明涉及用于治疗和预防感染性和非感染性疾病的材料和方法。更具体地，本公开涉及这些新的HCl盐形式C5a受体激动剂肽，以及其在治疗和预防感染性和非感染性疾病中的用途。

这些C5a受体激动剂肽能够在没有炎症反应的情况下选择性地诱导先天宿主免疫反应，并因此可用于治疗多种疾病，包括但不限于微生物感染，诸如病毒、细菌和真菌感染；以及非感染性疾病，包括但不限于癌症、免疫相关疾患和炎性疾患。

当与免疫原性剂偶联时，本发明中描述的HCl盐形式C5a受体激动剂肽也可以用于选择性地诱导获得性免疫反应，然后可以通过该肽的特异性结合将免疫原性剂直接靶向APC。在一种或多种实施方式中，HCl盐形式肽类似物共价连接至免疫原性剂(任选地通过间隔基部分)，从而肽与APC C5a受体的结合激活抗原呈递细胞，从而实现免疫原性剂递送至APC的抗原呈递途径。因此，这些HCl盐形式受体激动剂可用作分子疫苗佐剂，以增强各种类型疫苗的功效和免疫刺激特性。示例性免疫原性剂是类似于引起疾病的微生物或感染性剂的成分，和/或由它们的弱化的或杀灭的形式、其毒素、亚基、颗粒和/或其表面蛋白之一制成，使得可以在宿主中引起特异于该微生物或感染性剂的免疫反应。一些疫苗含有已被破坏的杀灭的但以前具有毒性的微生物。实例包括流感、霍乱、小儿麻痹症、甲型肝炎和狂犬病疫苗。一些疫苗含有活的减毒的微生物(改性的活病毒)。这些疫苗使用的活病毒是在破坏其毒性的条件下培养的，或者是紧密相关但危险性较小的生物，可产生广泛的免疫反应。还有一些本质上是细菌。活疫苗通常会引起更持久的免疫反应，且在人类中，这是健康成年人的优选类型。实例包括麻疹、腮腺炎、风疹、百日咳等。类毒素疫苗是由会引起疾病的灭活的有毒化合物而非微生物本身制成的。基于类毒素的疫苗的实例包括破伤风和白喉。也可以使用蛋白质亚基疫苗。在这些疫苗中，微生物的片段用于产生免疫反应。实例包括针对HPV、乙型肝炎的亚基疫苗，以及流感病毒的血凝素和神经氨酸酶亚基。也可以使用病毒或细菌DNA配制疫苗以引发免疫反应。此外，尽管大多数当前的疫苗是使用来自微生物的灭活或减毒的化合物制备的，但也可以使用合成肽、碳水化合物或抗原的合成疫苗。本文还考虑了使用肿瘤特异性抗原的癌症疫苗。合适的疫苗可以是单价或多价的。

本发明中描述的方法还可以应用于其他肽或蛋白质分子以增强或调节这些分子的功效。

HCl盐形式C5a受体激动剂肽可用于诱导先天性和获得性免疫反应，同时避免炎症。有利地，本发明允许使用较低治疗剂量，而APC上C5aR结合亲和力和生物选择性增加，从而防止了由非结合类似物构象异构体引起的副作用。

本文还描述了包含HCl盐形式C5a受体激动剂肽的组合物。在各种实施方式中，组合物包含药学上可接受的载体。本文所用的术语载体是指稀释剂、赋形剂、媒介物、包衣等，其中肽(一种或多种)可以分散或包衣，用于给药。合适的载体是药学上可接受的。如本文所用，术语“药学上可接受的”是指非生物学上或其他方面不期望的，在于其可以在没有过度毒性、刺激或过敏反应的情况下给药至受试者，并且不会引起不可接受的生物学作用，也不会与包含其的组合物中的任何其他组分以有害的方式相互作用。如本领域技术人员所熟知的，将自然地选择药学上可接受的载体以使化合物或其他试剂的任何降解最小化并且使受试者中的任何不利副作用最小化。药学上可接受的成分包括对于兽医用途以及人类药物用途可接受的成分，并取决于给药途径。可以使用与赋形剂(一种或多种)和EP67类似物兼容的任何载体。补充活性化合物也可掺入组合物中。

将本公开的组合物配制成与其预期的给药途径相容。给药途径的实例包括口服给药(食入)和肠胃外给药，例如静脉内、皮内、皮下、吸入、鼻、透皮(局部)、透粘膜、颊、舌下、肺和直肠给药。

适合于注射用途的药物组合物包括无菌水溶液(在水溶性情况下)，无菌等渗水性缓冲液中的溶液，或用于即时制备无菌注射液或分散液的分散剂和无菌粉剂。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水、Cremophor EL^TM(BASF，Parsippany，N.J.)、抑菌/无菌水/蒸馏高压消毒水(DAW)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，该组合物是无菌的并且是流体，以允许注射。载体可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。通过以下方式维持流动性：例如，通过使用诸如卵磷脂的包衣，通过在分散剂的情况下维持所需的粒径，以及通过使用表面活性剂。可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现防止微生物的作用。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇诸如甘露醇、山梨糖醇和氯化钠。可以通过在组合物中包含延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射组合物的延长吸收。可将注射制剂包封在由玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量小瓶中。

用于肠胃外应用(注射或输注)的溶液或混悬剂可包括以下组分：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐溶液、不挥发性油、聚乙二醇类、甘油、丙二醇、各种水包油或油包水乳液以及二甲基亚砜(DMSO)或其他合成溶剂；抗菌剂，诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲液，诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的试剂，诸如氯化钠或葡萄糖。pH可以用酸或碱(诸如盐酸或氢氧化钠)调节。

口服组合物通常包含惰性稀释剂或可食用载体。口服制剂通常采取丸剂、片剂、胶囊剂(例如软胶囊、固体填充胶囊或液体填充胶囊)、固体锭剂、液体填充锭剂、口和/或喉咙滴剂或喷雾剂、泡腾片、口腔崩解片、混悬剂、乳剂、糖浆、酏剂或酊剂的形式。组合物可以包含在肠溶形式中以在胃中无损，或者可以通过已知方法进一步包衣或混合以在胃肠道的特定区域中释放。固体口服剂型通常立即被吞咽，或在口中缓慢溶解。还可以使用流体载体制备作为漱口液使用的口服组合物，其中将流体载体中的化合物通过口腔施用并漱口并吐出或吞咽。口服制剂任选地包含任何以下成分或性质相似的化合物：粘合剂，诸如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；淀粉或乳糖；崩解剂，诸如藻酸、Primogel^TM或玉米淀粉；润滑剂，诸如硬脂酸镁；助流剂，诸如胶体二氧化硅；和/或甜味剂，诸如蔗糖或糖精。

对于通过吸入给药，组合物任选地以喷雾形式递送。喷雾剂可以是来自加压容器或分配器(其包含合适的推进剂，例如气体，诸如二氧化碳)或喷雾器的气雾喷雾剂。任选地将组合物配制为通过干粉吸入器(DPI)、定量吸入器(pMDI)、鼻喷雾剂或蒸发器递送。对于涉及通过粘膜吸收试剂和/或赋形剂的给药途径，组合物还任选地包含渗透剂。

任选地，组合物被配制成“液体呼吸组合物”，即为通过口腔、嘴部、喉咙、鼻腔通道或其组合可递送给哺乳动物的形式的组合物。这些组合物可以通过选自滴器、泵、喷雾器、液体滴器、匙、杯、可挤压的小囊、强射器(power shots)和其他包装和设备及其组合的递送装置来递送。在一种实施方式中，液体呼吸组合物包含治疗剂和赋形剂、增稠聚合物(例如，黄原胶、纤维素聚合物诸如羧甲基纤维素(CMC)、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素、角叉菜胶、聚丙烯酸、

聚卡波非、藻酸盐、粘土及其组合)，以及任选地粘膜粘附性聚合物(例如聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮，Povidone)、马来酸酐的甲基乙烯基醚共聚物

瓜尔胶、黄蓍胶、聚右旋糖、阳离子聚合物、聚(环氧乙烷)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(丙烯酸)、

)、聚卡波非、聚(甲基丙烯酸羟乙酯)、壳聚糖、纤维素聚合物诸如羧甲基纤维素(CMC)、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素，以及它们的组合)。组合物优选是非牛顿液体，其在约37℃的温度下，如根据剪切粘度法所测量，表现出约100厘泊(cP)至约1,000,000cP、约100cP至约500,000cP、约100cP至约100,000cP、约100cP至约50,000cP、约200cP至约20,000cP、约1,000至约10,000cP的零剪切粘度。制剂的pH范围通常为约1至约7、约2至约6.5和约4至约6。

通常，用于组合物中的其他药学上可接受的成分包括佐剂、抗原、缓冲剂、盐、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗生素、等渗剂、细胞培养基(例如MEM、FBS)、调味剂等。示例性等渗剂包括右旋糖、乳糖、糖醇(例如山梨糖醇、甘露糖醇)等。稳定剂包括糖(诸如蔗糖和乳糖)、氨基酸(诸如甘氨酸或谷氨酸单钠盐)和蛋白质(诸如白蛋白或明胶)，以及它们的混合物。示例性的防腐剂包括甲醛、硫柳汞等。

在各种实施方式中，除本文所述的载体和肽类似物外，鼻喷雾制剂还可包含苯扎氯铵、樟脑、葡萄糖酸氯己定、柠檬酸、EDTA二钠、桉油精、薄荷醇、纯化水和/或泰洛沙泊。除了赋形剂和对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏和HCl苯肾上腺素(或右美沙芬)之外，示例性口服组合物还可以包含FD&C Blue No.1、明胶、甘油、聚乙二醇、聚维酮、丙二醇、纯化水、特别的山梨糖醇和/或二氧化钛。

在各种实施方式中，考虑将粉剂、乳膏剂和凝胶剂用于药物组合物的局部给药。在一种实施方式中，局部给药是指将治疗组合物施用于需要作用或症状减轻的身体局部区域或身体部位表面(例如皮肤上)。在一种实施方式中，根据本公开使用透皮贴剂。在其他实施方式中，根据本公开的药物组合物被包埋在例如伤口敷料、绷带(例如亲水胶体、水凝胶、藻酸盐、泡沫、纱布)和/或外科缝合线中，以预防和/或治疗感染并改善伤口(例如擦伤、割伤和手术切口)愈合。

在一种实施方式中，组合物的组分与载体一起制备，载体将保护组分免于从体内快速清除，诸如控释制剂，包括包衣、植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，诸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。

在各个方面，该制剂以单位剂型提供，以易于给药和剂量均匀。如本文所用，“单位剂型”是指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理上离散的单位，每个单位包含经计算可产生与所需药物载体相关的期望治疗效果的预定量的活性化合物。剂量单位形式的规格由赋形剂和治疗剂的独特特点以及要实现的特定生物学效果决定，并直接依赖于赋形剂和治疗剂的独特特点以及要实现的特定生物学效果。

本文描述的组合物的安全性和功效通过使用体外或体内技术的标准程序来确定，诸如本文描述的和/或本领域已知的材料和方法。可以根据需要或根据期望给药，例如每月一次、每周一次或每天一次，包括每天多次，例如每天至少一次、每天一次至约十次、每天约2至约4次或每天约3次。组合物的剂量任选地包含约从约0.001mg至约1000mg的活性剂，替代地从约2.5mg至约750mg的活性剂，以及替代地从约5mg至约650mg的活性剂。在一种实施方式中，根据本公开的组合物的剂量包括约0.1mg至约0.25mg。在各种实施方式中，根据本公开的组合物的剂量包括25μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、125μg、150μg、175μg、200μg、225μg、250μg、275μg、300μg、325μg、350μg、375μg、400μg、425μg、450μg、475μg或500μg。在各种实施方式中，根据本公开的组合物的剂量包括25μg至500μg、50μg至400μg、100μg至300μg或200μg至250μg。

在各种实施方式中，HCl盐形式C5a受体激动剂肽或包含HCl盐形式C5a受体激动剂肽的药物组合物与可用于治疗或预防感染或疾病的一种或多种其他活性剂组合使用。该其他活性剂(一种或多种)可以增强治疗剂的作用和/或发挥除了治疗剂的那些作用之外的其他药理作用。可以与治疗剂组合使用的活性剂的非限制性实例是免疫抑制剂(例如环孢素、硫唑嘌呤)、皮质类固醇、抗炎剂、化疗剂、抗生素、抗真菌剂和抗病毒剂。

如本文所述，考虑的其他示例性活性剂包括疫苗(例如，针对特定病原体或疾病的现有疫苗)和包含缀合至特定抗原的C5a的C末端类似物的疫苗。例如，抗原可以通过两个精氨酸接头附连至C5a的C末端类似物的N末端，这两个接头为抗原呈递细胞的细胞质中的蛋白水解酶提供了切割位点，作为将抗原/表位与C5a的C末端类似物分离并在抗原呈递细胞表面上的MHC/HLA-I/II的情况下增强其加工和呈递的手段。例如，示例性的A型猪流感肽混合疫苗可包含一种或多种以下免疫原性组合物：

NA(449-457；SEQ ID NO：19)：NSDTVGWSW-[精氨酸接头]-[肽类似物]

NA(25-33；SEQ ID NO：20)：QIGNIISIW-[精氨酸接头]-[肽类似物]

NA(266-274；SEQ ID NO：21))：SVEMNAPNY-[精氨酸接头]-[肽类似物]

NA(414-423；SEQ ID NO：22)：GLDCIRPCFW-[精氨酸接头]-[肽类似物]

HA(87-95；SEQ ID NO：23)：LSTASSWSY-[精氨酸接头]-[肽类似物]

HA(16-24；SEQ ID NO：24)：NADTLCIGY-[精氨酸接头]-[肽类似物]

HA(445-454；SEQ ID NO：25)：LLENERTLDY-[精氨酸接头]-[肽类似物]

也可以使用化学缀合方法。

在本发明中可以选择作为抗原部分的抗原类型可以是需要免疫反应或产生抗体的任何肽、多肽或其衍生物。这些包括但不限于肽、多肽(即蛋白质)及其衍生物，诸如糖肽、磷酸肽等。可以与靶向受体的部分缀合的合成肽和多肽衍生物或类似物，或任何其他类似化合物可用于本发明。而且，这些肽、蛋白质和衍生物可以包含单个表位或多个表位，以产生不同类型的免疫反应。实际上，如果整个蛋白质与靶向部分缀合，则该蛋白质可能包含许多表位，这些表位可以根据溶剂条件及其对蛋白质的二级和三级结构的影响而变化。碳水化合物、核酸和其他非蛋白质物质也可用作抗原部分。如图4总体所示，现有技术中存在用于将这些物质与肽或蛋白质靶向部分缀合的方法。

在一种或多种实施方式中，抗原部分包含在当前可用的免疫条件下为弱抗原性或非抗原性的试剂。许多与肿瘤相关的抗原属于这一类，因为这些抗原也由正常细胞表达。因此，对此类分子的免疫耐受性使得难以刺激针对此类抗原的反应。属于该类别的其他蛋白质包括来自一个物种(例如人)的天然存在的蛋白质，对于这种情况，理想的是在另一物种中产生抗体，但是在另一物种中的抗体生成是困难的。可以分别制造这些组分，然后进行缀合。例如，小的肽类似物，诸如上述的C5a激动剂盐形式，可以通过肽合成方法生产，并与已经从天然存在的生物来源纯化的蛋白质缀合。特别地，本发明的蛋白质和/或肽组分是分别合成的，然后使用间马来酰亚胺基苯甲酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBF)化学缀合。该试剂使肽中的氨基和羧基末端硫醇基与蛋白质中存在的赖氨酸侧链交联。替代地，可以使用戊二醛(一种常见的交联剂)将合成肽与蛋白质连接。将肽化学连接至蛋白质的另一种方法是通过使用碳二亚胺和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺甲碘化物(EDC)。替代地，可以使用通过重组方法工程改造用于表达的蛋白质。另外，包含肽组分的靶向的抗原(即缀合至肽受体配体的肽抗原表位)可以根据已知方法和如下文更详细地描述的，通过肽合成化学以逐一的方式合成。同样，可以通过重组技术制备包含两个更大的多肽部分的本发明的靶向的抗原(即与大配体连接的大多肽抗原)。例如，同时编码两种组分的DNA分子可以通过重组方式连接在一起，然后表达为缀合的融合蛋白。

本文所述的组合物可以用作多种疾病的治疗的部分，所述疾病包括但不限于微生物感染，诸如病毒、细菌和真菌感染；这些组合物还可用于治疗非感染性疾病，包括但不限于癌症、免疫相关疾患和炎性疾患。本发明中描述的组合物也可用作疫苗佐剂，以增强各种类型疫苗的功效和免疫刺激特性。

在使用中，向受试者给药治疗有效量的HCl盐形式C5a受体激动剂肽。给药HCl盐形的C5a受体激动剂肽在受试者中引起免疫反应，且更具体地，引起先天性免疫反应的选择性激活，而没有引起促炎性中性粒细胞和其他粒细胞的直接激活。免疫反应将通过缺乏可观察到的临床症状或被感染受试者通常表现出的临床症状的减轻、感染恢复时间更快、感染持续时间缩短等来证明。在另一种实施方式中，提供了在感染或疾病部位激活免疫细胞的方法，包括向哺乳动物给药有效量的HCl盐形式C5a受体激动剂肽，所述类似物具有选择性C5a受体结合活性。应当理解，尽管HCl盐形式C5a受体激动剂肽不直接结合或激活促炎性粒细胞，但是由于APC一旦被肽类似物激活后所释放的趋化因子/细胞因子，则可能引发继发性炎症反应。

在本公开的每个实施方式的各个方面，感染或疾病是由选自由细菌、病毒和真菌组成的组中的感染性剂引起的。在每个实施方式的其他各个方面，疾病是癌症。在该方法的每个实施方式的各个方面，感染包括生物膜。

在本公开的每个实施方式的各个方面中，涉及细菌感染，诸如乳腺炎，或由一种或多种细菌引起的感染，这些细菌诸如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(S.aureus)(MRSA)、MRSA菌株USA300-FPR3757、耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)、耐大环内酯化脓性链球菌(S.pyogenes)、耐青霉素肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、广泛耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(XDR TB)、多重耐药粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、多重耐药屎肠球菌(Enterococcus faecium)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、耐克林霉素艰难梭菌(Clostridium difficile)、耐氟喹诺酮艰难梭菌、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、支气管败血性博德特氏菌(Bordetellabronchiseptica)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、流产布鲁氏菌(Brucellaabortus)、犬布鲁氏菌(Brucella canis)、羊布鲁氏菌(Brucella melitensis)、猪布鲁氏菌(Brucella suis)、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)、肺炎衣原体(Chlamydiapneumonia)、砂眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、鹦鹉热衣原体(Chlamydophilapsittaci)、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、艰难梭菌、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、白喉棒状杆菌(Corynebacteriumdiphtheriae)、粪肠球菌、屎肠球菌、犬埃立克体(Ehrlichia canis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、钩端螺旋体(Leptospira interrogans)、单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、铜绿假单胞菌、立氏立克次氏体(Rickettsia rickettsii)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、宋内志贺菌(Shigella sonnei)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、变异链球菌(Streptococcus mutans)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、梅毒螺旋体(Treponema pallidum)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)和/或鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis)。

在涉及病毒感染的本公开的每个实施方式的各个方面中，病毒选自由以下组成的组：痘病毒科(Poxviridae)、脊索动物痘病毒亚科(Chordopoxvirinae)、正痘病毒(Orthopoxvirus)、牛痘病毒(Cowpoxvirus)、猴痘病毒(Monkeypox virus)、牛痘病毒(Vaccinia virus)、天花病毒(Variola virus)、副痘病毒(Parapoxvirus)、牛丘疹性口腔炎病毒(Bovine papular stomatitis virus)、猪流行性腹泻病毒(Porcine EpidemicDiarrhea virus、PEDv)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome Virus、PRRSV)、Orf病毒、牛病毒性腹泻病毒(bovine viraldiarrhea virus、BVDV)、伪牛痘病毒(Pseudocowpox virus)、软疣痘病毒(Molluscipoxvirus)、传染性软疣病毒(Molluscum contagiosum virus)、亚塔痘病毒(Yatapoxvirus)、塔那痘病毒(Tanapox virus)、雅巴猴肿瘤病毒(Yaba monkey tumorvirus)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、疱疹病毒甲亚科(Alphaherpesvirinae)、单纯疱疹病毒(Simplexvirus)、人疱疹病毒1(Human herpesvirus 1)、单纯疱疹病毒1、人疱疹病毒2、单纯疱疹病毒2、水痘病毒(Varicellovirus)、人疱疹病毒3、水痘带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus)、疱疹病毒乙亚科(Betaherpesvirinae)、巨细胞病毒(Cytomegalovirus)、人疱疹病毒5、人巨细胞病毒、玫瑰疱疹病毒(Roseolovirus)、人疱疹病毒6、人疱疹病毒7、疱疹病毒丙亚科(Gammaherpesvirinae)、淋巴滤泡病毒(Lymphocryptovirus)、人疱疹病毒4、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)、猴疱疹病毒(Rhadinovirus)、人疱疹病毒8、卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus)、腺病毒科(Adenoviridae)、巨大腺病毒(Mastadenovirus)、人腺病毒A(Human adenovirus A)、人腺病毒B、人腺病毒C、人腺病毒D、人腺病毒E、人腺病毒F、多瘤病毒科(Polyomaomaviridae)、多瘤病毒(Polyomavirus)、BK多瘤病毒、人多瘤病毒、JC多瘤病毒、乳头状瘤病毒科(Papillomaviridae)、α乳头瘤病毒(Alphapapillomavirus)、人乳头瘤病毒2、人乳头瘤病毒10、人乳头瘤病毒6、人乳头瘤病毒7、人乳头瘤病毒16、人乳头瘤病毒18、人乳头瘤病毒26、人乳头瘤病毒32、人乳头瘤病毒34、人乳头瘤病毒53、人乳头瘤病毒54、人乳头瘤病毒61、人乳头瘤病毒71、人乳头瘤病毒cand90、β乳头瘤病毒、人乳头瘤病毒5、人乳头瘤病毒9、人乳头瘤病毒49、人乳头瘤病毒cand92、人乳头瘤病毒cand96、γ乳头瘤病毒、人乳头瘤病毒4、人乳头瘤病毒48、人乳头瘤病毒50、人乳头瘤病毒60、人乳头瘤病毒88、丑型乳头瘤病毒(Mupapillomavirus)、人乳头瘤病毒1、人乳头瘤病毒63、细小病毒科(Parvoviridae)、细小病毒亚科(Parvovirinae)、红病毒属(Erythrovirus)、B19病毒、嗜肝病毒科(Hepadnaviridae)、正肝病毒属(Orthohepadnavirus)、乙型肝炎病毒、逆转录病毒科(Retroviridae)、正逆转录病毒亚科(Orthoretrovirinae)、丁型逆转录病毒(Deltaretrovirus)、灵长类T淋巴细胞白血病病毒1(Primate T-lymphotropic virus 1)、灵长类T淋巴细胞白血病病毒2、慢病毒、人类免疫缺陷病毒1、人类免疫缺陷病毒2、呼肠孤病毒科(Reoviridae)、正呼肠孤病毒(Orthoreovirus)、哺乳动物正呼肠孤病毒、环状病毒(Orbivirus)、非洲马瘟病毒(African horse sickness virus)、钱吉诺拉病毒(Changuinola virus)、科里帕塔病毒(Corriparta virus)、奥轮谷病毒(Orungo virus)、轮状病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、单股反链病毒目(Mononegavirales)、丝状病毒科(Filoviridae)、马尔堡病毒(Marburgvirus)、维多利亚湖马尔堡病毒(Lake Victoriamarburgvirus)、埃博拉病毒(Ebolvirus)、象牙海岸埃博拉病毒(Ivory Coastebolavirus)、雷斯顿埃博拉病毒(Reston ebolavirus)、苏丹埃博拉病毒(Sudanebolavirus)、扎伊尔埃博拉病毒(Zaire ebolavirus)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)、副粘病毒亚科(Paramyxovirinae)、呼吸道病毒(Respirovirus)、人副流感病毒1、人副流感病毒3、麻疹病毒属(Morbillivirus)、麻疹病毒(Measles virus)、埃德蒙斯顿病毒(Edmonston virus)、腮腺炎病毒属(Rubulavirus)、人副流感病毒2、人副流感病毒4、腮腺炎病毒、亨尼病毒属(Henipavirus)、亨德拉病毒(Hendravirus)、尼帕病毒(Nipahvirus)、肺病毒亚科(Pneumovirinae)、肺病毒(Pneumovirus)、人类呼吸道合胞病毒(Humanrespiratory syncytial virus)、偏肺病毒(Metapneumovirus)、人类偏肺病毒、弹状病毒科(Rhabdoviridae)、水泡病毒属(Vesiculovirus)、钱迪普拉病毒(Chandipura virus)、科卡尔病毒(Cocal virus)、伊斯法罕病毒(Isfahan virus)、帛黎病毒(Piry virus)、阿拉戈斯水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis Alagoas virus)、印第安纳水泡性口炎病毒、新泽西水泡性口炎病毒、狂犬病病毒属(Lyssavirus)、澳大利亚蝙蝠狂犬病毒、狂犬病毒、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、甲型流感病毒属、甲型流感病毒、甲型猪流感病毒、禽流感(H5N1、H7N9)、犬流感病毒、马流感病毒、乙型流感病毒属、乙型流感病毒、丙型流感病毒属、丙型流感病毒、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、布尼亚病毒、布尼奥罗病毒(Bunyamweravirus)、布温巴病毒(Bwamba virus)、加利福利亚脑炎病毒(California encephalitisvirus)、瓜马病毒(Guama virus)、奥里博卡病毒(Oriboca virus)、奥罗普切病毒(Oropouche virus)、汉坦病毒属(Hantavirus)、安第斯病毒(Andes virus)、汉坦病毒、普马拉病毒(Puumala virus)、汉城病毒(Seoul virus)、多布拉瓦-贝尔格莱德病毒(Dobrava-Belgrade virus)、长沼病毒(Bayou virus)、黑渠港病毒(Black Creek Canalvirus)、纽约病毒、辛诺柏病毒(Sin Nombre virus)、内罗病毒属(Nairovirus)、克里米亚-刚果出血热病毒、内罗毕绵羊病病毒、白蛉病毒属(Phlebovirus)、裂谷热病毒(RiftValley fever virus)、那不勒斯白蛉热病毒(Sandfly fever Naples virus)、沙粒病毒科(Arenaviridae)、沙粒病毒属、拉沙病毒(Lassa virus)、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(Lymphocytic choriomeningitis virus)、瓜纳里托病毒(Guanarito virus)、胡宁病毒(Junín virus)、马丘波病毒(Machupo virus)、萨比亚病毒(Sabiávirus)、δ病毒属(Deltavirus)、丁型肝炎病毒、网巢病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科、冠状病毒、人冠状病毒229E、人类冠状病毒OC43、人肠道冠状病毒、严重急性呼吸系统综合症冠状病毒、环曲病毒属(Torovirus)、微小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、肠病毒属(Enterovirus)、人肠病毒A、人肠病毒B、人肠病毒C、人肠病毒D、脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)、鼻病毒(Rhinovirus)、人鼻病毒A、人鼻病毒B、肝病毒属(Hepatovirus)、甲型肝炎病毒、副肠孤病毒属(Parechovirus)、人副肠孤病毒、杯状病毒科(Caliciviridae)、诺如病毒(Norovirus)、诺瓦克病毒(Norwalk virus)、沙波病毒(Sapovirus)、札幌病毒、肝炎病毒属(Hepevirus)、戊型肝炎病毒、星状病毒科(Astroviridae)、哺乳动物星状病毒属(Mamastrovirus)、人类星状病毒、披膜病毒科(Togaviridae)、甲病毒属(Alphavirus)、基孔肯雅病毒(Chikungunya virus)、奥绒绒病毒(O’nyong-nyong virus)、马亚罗病毒(Mayaro virus)、罗斯河病毒(Ross River virus)、巴马森林病毒(Barmah Forestvirus)、辛德比斯病毒(Sindbis virus)、奥克尔布病毒(Ockelbo virus)、委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus)、西部马脑炎病毒、东部马脑炎病毒、风疹病毒属(Rubivirus)、风疹病毒、黄病毒科(Flaviviridae)、黄病毒属(Flavivirus)、科萨努尔森林病病毒(Kyasanur Forest disease virus)、鄂木斯克出血热病毒(Omskhemorrhagic fever virus)、波瓦森病毒(Powassan virus)、跳跃病病毒(Louping illvirus)、蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus)、登革病毒(Dengue virus)、日本脑炎病毒、墨累溪谷脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、西尼罗河病毒、伊列乌斯病毒(Ilheusvirus)、黄热病病毒(Yellow fever virus)、阿波伊病毒(Apoi virus)、肝炎病毒(Hepacivirus)、丙型肝炎病毒、GB病毒B、GB病毒A、猫白血病病毒(FeLV)、猫冠状病毒(猫传染性腹膜炎病毒)。

具有多于一种病毒或细菌病原体的感染也可以用本发明的化合物治疗，包括乳腺炎、牛呼吸道疾病(BRD，其与革兰氏阴性细菌溶血曼海姆氏菌(Mannheimia haemolytica)、多杀巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)和睡眠嗜组织菌(Histophilus somni)以及牛支原体(Mycoplasma bovis)有关)、瘟热等。

在涉及真菌的每个实施方式的各个方面中，真菌选自由以下组成的组：白色念珠菌(C.albicans)、烟曲霉(A.fumigates)、黄曲霉(A.flavus)、棒曲霉(A.clavatus)、新型隐球菌(C.neoformans)、罗伦隐球菌(C.laurentii)、浅白隐球菌(C.albidus)、格特隐球菌(C.gatti)、组织胞浆菌(H.capsulatum)、耶氏肺孢子菌(P.jirovecii)、黑葡萄穗霉菌(S.chartarum)、粗球孢子菌(C.immitis)和波萨球孢子菌(C.posadasii)。

在本公开的每个实施方式的各个方面中，该疾病选自由以下组成的组：瘙痒病、牛海绵状脑病、可传播的貂脑病、慢性消耗性疾病、猫海绵状脑病、外来有蹄类脑病、克雅二氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、医源性克雅二氏病、变种克雅二氏病、家族性克雅二氏病、散发性克雅二氏病、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克综合征(Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome)、致命性家族性失眠症和库鲁病(Kuru)。

为了在联合疗法中实现期望的治疗结果，通常以能有效产生期望的治疗结果(例如减少或消除一种或多种症状)的组合量向受试者给药HCl盐形式C5a受体激动剂肽和其他活性剂(一种或多种)。组合疗法可以包括大约同时给药HCl盐形式C5a受体激动剂肽和其他活性剂(一种或多种)。通过给药包含HCl盐形式C5a受体激动剂肽和其他活性剂(一种或多种)两者的单一组合物可以实现同时给药。替代地，其他活性剂(一种或多种)可以与包含HCl盐形式C5a受体激动剂肽的药物制剂大约同时分开服用(即，相继服用)。在这两种情况下，都认为活性剂和HCl盐形式C5a受体激动剂肽是“共同给药”的。

在其他替代方案中，HCl盐形式C5a受体激动剂肽的给药可以在其他活性剂(一种或多种)的给药之前或之后进行，间隔几分钟至几小时。在于不同时间给药HCl盐形式C5a受体激动剂肽和其他活性剂(一种或多种)的实施方式中，HCl盐形式C5a受体激动剂肽和其他活性剂(一种或多种)在彼此合适的时间内给药，使得HCl盐形式C5a受体激动剂肽和其他活性剂(一种或多种)二者都可以对接受者产生有益作用(例如，协同地或叠加地)。在一些实施方式中，在给药其他活性剂(一种或多种)之前或之后的约0.5-12小时内或之前或之后的约0.5-6小时内，向受试者给药HCl盐形式C5a受体激动剂肽。在某些实施方式中，在给药其他活性剂(一种或多种)之前或之后的约0.5小时或1小时内，向受试者给药HCl盐形式C5a受体激动剂肽。

本公开还考虑HCl盐形式C5a受体激动剂肽或包含HCl盐形式C5a受体激动剂肽的药物组合物，单独或与如上所述的其他活性剂组合的“加强”剂量。加强剂量可以在初次给药之后大约1周、大约1个月、大约2个月、大约3个月、大约4个月、大约5个月、大约6个月、大约7个月、大约8个月、大约9个月、大约10个月、大约11个月、大约12个月、大约2年、大约3年、大约4年、大约5年、大约6年、大约7年、大约8年、大约9年、大约10年、大约15年以及大约20年时给药。

本文还公开了包含HCl盐形式C5a受体激动剂肽的试剂盒。该试剂盒还包括用于向受试者给药HCl盐形式C5a受体激动剂肽的说明书。HCl盐形式C5a受体激动剂肽可以作为剂量单位的一部分提供，其已经分散在药学上可接受的载体中，或者可以与载体分开提供。试剂盒还可包含用于制备向受试者给药的HCl盐形式C5a受体激动剂肽的说明书，包括例如用于将类似物(一种或多种)分散于合适的载体中的说明书。

应当理解，本文所述的治疗和预防方法适用于人类以及任何合适的动物，包括但不限于狗、猫和其他伴侣动物，以及啮齿动物、灵长类动物、马、牛、猪等。该方法也可以应用于临床研究和/或学习。

如本文所述，以非抗原特异性方法诱导先天性免疫的能力具有的优点在于，不管这些病原体表达的抗原的性质如何，它都可以诱导对大范围病原体的免疫反应。因此，诱导保护性免疫反应的能力不取决于对病原体表达的特定抗原的反应，而是取决于病原体本身。

通过阅读本文的公开内容和以下的工作实施例，本发明的各种实施方式的其他优点对于本领域技术人员将是显而易见的。将理解的是，除非本文另外指出，否则本文描述的各种实施方式不一定相互排斥。例如，在一个实施方式中描述或描绘的特征也可以被包括在其他实施方式中，但不是必须被包括。因此，本发明涵盖本文描述的具体实施方式的各种组合和/或集成。

一般定义

除非本文另外定义，否则本公开中采用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解和使用的含义。除非上下文另外要求，否则将理解单数术语应包括其复数形式，并且复数术语应包括单数。具体地，如本文和权利要求书中所使用的，单数形式“一个”和“一种”包括复数引用，除非上下文另外明确指出。因此，例如，对特定的C5a的C末端类似物的引用是对一个这样的类似物或多个这样的类似物(包括其等同物)的引用。同样，术语“至少一个”和“一个或多个”具有相同的含义，并且包括一个、两个、三个或更多。除非另外指出，否则以下术语在本公开的上下文中使用时应理解为具有以下含义。

本文提供的实例，包括在“诸如”和“例如”之后的实例，被认为仅是本公开及其实施方式的各个方面的示例，而不特别地受限于此。可以使用或实施本领域技术人员已知和/或可获得的任何合适的等价物、替代物及其修改形式(包括材料、物质、构造、组合物、制剂、手段、方法、条件等)来代替本文公开的那些或与本文公开的那些组合，并且被认为落入本公开的范围内。

如本公开中所使用的，术语“治疗”或“治疗”是指旨在防止疾病或感染的发展或改变疾病或感染的病理而进行的干预。因此，“治疗”是指治疗性治疗和预防性或预防性措施。治疗剂可以直接降低疾病或感染的病理，或使疾病或感染更易于被其他治疗剂或例如宿主的免疫系统治疗。对患有疾病或感染的临床、生化、放射学或主观症状的患者的治疗可包括缓解某些或所有此类症状或减少疾病易感性。治疗后的改善可能表现为这些症状的减轻或消除。因此，该组合物可用于通过预防由感染引起的可观察到的临床症状的发展和/或减少临床症状的发生率或严重性和/或感染的影响，和/或减少感染/症状/效果的持续时间来治疗病症。

如本文所用，“感染”是指对生物体(宿主)有害的活组织的任何微生物入侵。微生物感染可能是由微生物或“感染原”引起的，包括细菌、病毒或真菌。类似地，术语“疾病”是指任何病理病症，并且包括症状(即病)的明显表现或异常临床指标(例如生化指标)的表现。替代地，术语“疾病”是指发生这种症状或异常临床指标的遗传或环境风险或倾向。感染或疾病是将从用根据本公开的分子的治疗中受益的任何病症。这包括慢性和急性疾患或疾病，包括那些使哺乳动物易患所述疾患的病理病症。

如本文所用，短语“有效量”或“治疗有效量”是指适用于本公开的实施方式的HCl盐形式C5a受体激动剂肽的治疗或预防量，当根据期望的治疗方案给药时，其将引起期望的治疗或预防效果或反应，包括缓解这种疾病或感染的一些或所有症状或减少该疾病或感染的易感性。本领域技术人员认识到，即使未完全根除或预防该病症，但病症或其症状和/或影响在受试者中部分得到改善或减轻，也可认为该量是治疗“有效的”。肽的治疗有效剂量可以根据受试者的大小和种类以及根据给药方式而变化。

本文提及的肽的“构象”或“构象异构体”通常是指肽在给定时间可采用的几何取向/结构/分子排列，并特别是几何异构体的范围。“构象稳定的”是指肽通常固定在单一的几何取向/构象/分子排列，并且不易于转化/旋转成不同的取向。换句话说，在构象稳定的类似物中，键的旋转(特别是在顺式和反式构型之间)被限制或消除。各个残基也可具有“受约束的构象”，这意味着它们不会进行顺/反异构化。

术语“寡肽”是指长度为至少约5个氨基酸且长度小于40个氨基酸的肽。在本公开的一种实施方式中，寡肽的长度为约5至约10个残基。在一种实施方式中，寡肽是十肽(即长度为10个氨基酸)。

如本文所用，术语“羧基末端”或“C末端”是指C5a的羧基末端。

如本文所用，具有“选择性C5a受体结合活性”和类似表达的短语是指HCl盐形式C5a受体激动剂肽结合CD88以刺激抗原呈递细胞中的免疫调节作用的能力，而没有其他C5a介导的炎症反应。换句话说，结合尤其引起APC的激活，而不直接结合或激活带有C5a受体的粒细胞。

如本文所用，两种治疗剂的“同时”给药不需要在相同时间或通过相同途径给药试剂，只要在这些试剂发挥其治疗作用的时间段上存在重叠即可。考虑了同时或顺序给药(“共同给药”)，如在不同天或周给药。“之前”给药是指在给药第二种治疗活性剂之前的某个时间给药HCl盐形式C5a受体激动剂肽，而与两种治疗剂是否一起发挥治疗作用无关。此外，“之后”给药是指在给药第二种治疗剂之后的某个时间给药HCl盐形式C5a受体激动剂肽，而与两种治疗剂是否一起发挥治疗作用无关。

如本文中所用，短语“和/或”在用于两个或多个项目的列表中时是指所列出的项目中的任何一个可以单独使用，或者可以使用所列出的项目中的两个或多个的任何组合。例如，如果组合物被描述为包含或不包含组分A、B和/或C，则该组合物可以包含或不包含单独A；单独B；单独C；A和B组合；A和C组合；B和C组合；或A、B和C组合。

本说明书还使用数值范围来量化与本发明的各种实施方式有关的某些参数。应该理解的是，当提供数值范围时，这些范围将被解释为为仅陈述该范围的较低值的权利要求限定以及仅陈述该范围的较高值的权利要求限定提供文字支持。例如，公开的约10至约100的数值范围为陈述“大于约10”(无上限)的权利要求和陈述“小于约100”(无下限)的权利要求提供文字支持。

实施例

以下实施例阐述了根据本发明的方法。然而，应理解，这些实施例仅作为举例说明而提供，且其中的任何内容均不应视为对本发明的总体范围的限制。

实施例1

肽的合成与纯化

根据标准Fmoc正交固相方法在AAPPTEC(先进自动肽蛋白技术，Louisville,KY)APEX 396肽合成仪上合成肽。在载有Arg的Wang树脂(0.30-0.40meq/g取代，100-200目)上以0.10mmol的规模进行合成。N^α-氨基被碱不稳定的9-芴基甲氧羰基(Fmoc)基团保护。侧链官能团的保护如下：Arg(Pbf或2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基)；Asp(O叔丁酯)；Cys、Gln&His(Trt或三苯甲基)；Lys(Boc或叔丁氧羰基)；Ser&Tyr(叔丁基)。通过用20％哌啶的DMF溶液除去Arg-Wang树脂上的Fmoc基团12分钟以暴露出游离的^αN-氨基从而开始合成。通过作为由等量的HBTU和10％过量的二异丙基乙胺(DIEA)制备的六氟磷酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲(HBTU)的活化酯的下一个残基的原位连接来实现酰胺键形成。通过重复此Fmoc去保护然后与下一个氨基酸的HBTU酯连接的循环来实现肽的延长。

通过di-Cys(SH)肽在稀水溶液(0.1mg/mL，pH 7.5)中被K₃Fe(CN)₆氧化来实现二硫键形成。通过分析型HPLC监测二硫化物形成的过程。将该溶液酸化至pH 3.5，并向该溶液中加入弱碱性阳离子交换珠(Amberlite-HCl IRA-68，Sigma)以形成浆液。将浆液搅拌20分钟，过滤，并将澄清溶液冷冻并冻干。

通过在室温下在含0.75g苯酚、0.5mL水和0.25mL三异丙基硅烷的10mL三氟乙酸(TFA)溶液中搅拌肽树脂1.5hr，可以在一步酸解反应中完成侧链脱保护和从树脂上切割。通过加入过量的冷二乙醚从该溶液中沉淀出游离肽。将混合物通过烧结的玻璃布氏漏斗(中等孔隙率)过滤，并将肽/树脂用冷醚洗涤两次以除去清除剂。通过将漏斗中的肽/树脂与20-30ml等分的10％乙酸涡旋然后过滤来提取肽。将提取的等分试样合并，冷冻并冻干以产生粉末状的粗肽。

通过在Waters DeltaPrep色谱系统上的制备型和分析型反相HPLC纯化肽。将粗肽溶解在40mL水或运行缓冲液(TEAP)中，并通过0.45um尼龙过滤器过滤。将二十微升(20μl)该溶液上样到分析柱(Waters Symmetry C₁₈,5μm,4.6x250mm)，并用由三乙胺/磷酸(TEAP)缓冲液(0.5％三乙胺(v/v)和0.5％磷酸(v/v))pH 2.3(溶剂系统A)和TEAP中的60％(v/v)乙腈pH 2.3(溶剂系统B)产生的线性梯度洗脱。通过Waters PrepLC Controller模块生成梯度(30min内15-45％B，流速1.5mL/min)。用可编程的吸光度检测器(Waters 2487双吸光度检测器)在214nm处监测分离，并记录峰并在计算机上进行积分以获得粗肽的分析色谱图和分离条件。

优化后，将这些相同的梯度条件用于制备规模的粗混合物的纯化。将剩余的粗肽(最高达500mg)上样到径向压缩的制备型HPLC柱上，该柱装有四个单独的反相C₁₈ WatersPrepPak小柱(25x100mm，15μm，

)，填充有C₁₈键合的二氧化硅，预先用TEAP pH 2.3平衡。如上所述用该分析流程洗脱肽，但流速为60mL/min。

通过将来自TEAP制备流程的单个分离的肽峰上样到相同的但事先用5mM HCl水溶液平衡的制备柱上，可以实现HCl盐的生成。用5mM HCl作为运行缓冲液和梯度的乙腈(5分钟内0-50％)以60mL/min的流速洗脱肽。通过冻干回收纯化的HCl肽盐。³¹P-NMR结果证实，在TEAP纯化后，没有从用于纯化的三乙胺/磷酸(TEAP)缓冲液(代替常规的0.1％TFA)中产生的磷酸盐，而是存在来自脱盐过程的HCl抗衡离子(5mM HCl)。

乙酸盐(OAc)的产生通过与上述相似的程序实现，使用0.5％(v/v)乙酸作为运行缓冲液并且乙腈作为洗脱液。

类似地，用0.1％TFA作为运行缓冲液和在0.1％TFA中的60％乙腈作为洗脱液实现TFA盐的产生。

实施例2

使用上述程序产生的EP67(SEQ ID NO：2)的盐形式随时间以不同的浓度与鼠脾细胞一起温育。在从鼠脾细胞中释放的细胞因子(IL-6)总量及其释放动力学方面，HCl盐形式优于乙酸盐(OAc)并特别是TFA盐形式；也就是说，HCl形式产生最大IL-6释放比其他两种盐形式更快。

通过将小鼠脾细胞与不同浓度的EP67盐温育24hr来研究24小时剂量反应。收集上清液并通过ELISA测定IL-6。数据示于表I。

表I.24-HR剂量反应

激活剂	μg/mL	IL-6pg/ml±SD
			无	-	176±2
EP67·TFA	0.1	178±1
				1.0	185±2
	10	308±7
				100	803±6
EP67·OAc﹣	0.1	188±1
				1	325±23
	10	225±20
				100	780±9
EP67·HCl	0.1	176±3
				1.0	225±1
	10	738±5
				100	1163±2

SD代表实验中的稀释误差，而不是实验与实验的偏差。

从上面的数据可以看出，将浓度提高到10或100μg/mL会大大增加乙酸盐和HCl形式二者产生的IL-6的量。但是，HCl形式仍然远远超过OAc盐形式。

接下来，通过将小鼠脾细胞与100μg/mL的每种盐形式温育来研究IL-6动力学，并随时间检查释放情况。结果示于表II。

表II.IL-6动力学

激活剂	收集时间(hr)	IL-6pg/ml±SD
			EP67·TFA	6	55±1
	24	803±6
				48	442±13
	72	75±6
			EP67·OAc﹣	6	188±1
	24	325±23
				48	900±17
	72	229±±7
			EP67·HCl	6	47±1
	24	1163±2
				48	923±6
	72	200±11

从上面的数据可以看出，与其他盐形式相比，在与HCl盐形式温育后的最初24小时内，IL-6水平显著增加。此外，48小时后的水平仍然高于OAc或TFA盐形式的最高水平。这也显示在图5的图中。

我们已经观察到，在水性溶液(D₂O)中，EP67的HCl盐形式中比TFA盐形式具有更大量的核欧佛豪瑟效应(NOE)信号，表明与TFA盐相比，在HCl盐形式的情况下维持了更长时间段的更高程度的结构完整性。

讨论

从图5中的数据可以看出，与其他盐形式相比，EP67和衍生物的HCl盐形式得到了许多令人惊讶的结果。例如，与乙酸盐或TFA盐形式相比，HCl盐形式的细胞因子(IL-6)释放幅度更大。另外，HCl盐形式比其他形式更快地实现了细胞因子(IL-6)的最大释放。同样，在水性溶液(D₂O)中，HCl盐比TFA盐具有更大量的NOE，这表明用HCl有更大程度的结构/构象完整性。通常，小化合物或肽的不同盐形式并未被真正给予太多重视，除了它们可能如何影响合成经济性和简易性以及监管机构允许将什么用于人/动物之外。因此，这些结果是令人惊讶的，因为我们仅基于肽的不同盐形式根本没有预料到会有任何区别(也没有其他任何人会预料到)。

序列表

<110> 内布拉斯加大学董事会（BOARD OF REGENTS OF THE UNIVERSITY OFNEBRASKA）

圣地亚哥州立大学研究基金会（SAN DIEGO STATE UNIVERSITY RESEARCHFOUNDATION）

<120> C5A受体激动剂肽的盐酸盐

<130> PN19045021P

<150> US 62/518,335

<151> 2017-06-12

<160> 25

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Ala, Leu, IsoLeu, Aib, 3ib, dmP, mbP, ebP, MeA, MeL, MeI,

取代的Pro类似物, 假脯氨酸, Ser-或Thr-衍生的

噁唑烷, Cys-衍生的噻唑烷, Tfm氮杂环丁烷, Tfm

高丝氨酸, 氧杂环丁烷基, Aid, Nai, Agl, Aza, 或哌可酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (8)..(8)

<223> Xaa是Leu或N-甲基Leu

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-Ala

<400> 1

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Xaa Xaa Ala Arg

1 5 10

<210> 2

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (8)..(8)

<223> N-甲基Leu

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-Ala

<400> 2

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Pro Leu Ala Arg

1 5 10

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是2-氨基异丁酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-Ala

<400> 3

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Xaa Leu Ala Arg

1 5 10

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是5,5'-二甲基脯氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (8)..(8)

<223> N-甲基Leu

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-Ala

<400> 4

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Xaa Leu Ala Arg

1 5 10

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是Tyr, Trp, 或者Tyr或Trp的N-乙酰基衍生物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是Asp, Gly, Pro或者Asp或Gly的N-甲基衍生物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是Ala, Cys, Leu, Met或者Ala, Cys, Leu 或Met的N-甲基衍生物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Gln, Leu, Pro或者Gln或Leu的N-甲基衍生物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (8)..(8)

<223> Xaa是Pro, Leu, α-甲基Leu或N-甲基Leu

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> Xaa是D-Ala, Gly, D-Pro, Aib或者D-Ala或Gly的N-甲基衍生物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Arg或N-甲基Arg

<400> 5

Xaa Ser Phe Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5 10

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-Ala

<400> 6

Tyr Ser Phe Lys Pro Met Pro Leu Ala Arg

1 5 10

<210> 7

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-Ala

<400> 7

Tyr Ser Phe Lys Asp Ala Pro Leu Ala Arg

1 5 10

<210> 8

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-Ala

<400> 8

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Pro Leu Ala Arg

1 5 10

<210> 9

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 9

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Pro Leu Gly Arg

1 5 10

<210> 10

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 10

Tyr Ser Phe Lys Asp Ala Pro Leu Gly Arg

1 5 10

<210> 11

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 11

Tyr Ser Phe Lys Asp Cys Pro Leu Gly Arg

1 5 10

<210> 12

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-Pro

<400> 12

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Pro Leu Pro Arg

1 5 10

<210> 13

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> D-Ala

<400> 13

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Gln Leu Ala Arg

1 5 10

<210> 14

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 14

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Gln Leu Gly Arg

1 5 10

<210> 15

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 15

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Gln Pro Gly Arg

1 5 10

<210> 16

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> Xaa是Aib

<400> 16

Tyr Ser Phe Lys Asp Met Pro Leu Xaa Arg

1 5 10

<210> 17

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 17

Tyr Ser Phe Lys Gly Met Pro Leu Gly Arg

1 5 10

<210> 18

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 18

Tyr Ser Phe Lys Gly Leu Leu Leu Gly Arg

1 5 10

<210> 19

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 19

Asn Ser Asp Thr Val Gly Trp Ser Trp

1 5

<210> 20

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 20

Gln Ile Gly Asn Ile Ile Ser Ile Trp

1 5

<210> 21

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 21

Ser Val Glu Met Asn Ala Pro Asn Tyr

1 5

<210> 22

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 22

Gly Leu Asp Cys Ile Arg Pro Cys Phe Trp

1 5 10

<210> 23

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 23

Leu Ser Thr Ala Ser Ser Trp Ser Tyr

1 5

<210> 24

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 24

Asn Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr

1 5

<210> 25

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 25

Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Tyr

1 5 10

Claims (25)

1.C5a的C末端肽类似物的盐酸(HCl)盐形式，其中所述类似物是包括下式的肽：

A1-Ser-Phe-Lys-A2-A3-A4-A5-A6-A7(SEQ ID NO：5)

或其构象稳定的衍生物，

其中：

A1是Tyr、Trp或者Tyr或Trp的N-乙酰基衍生物；

A2是Asp、Gly、Pro或者Asp或Gly的N-甲基衍生物；

A3是Ala、Cys、Leu、Met或者Ala、Cys、Leu或Met的N-甲基衍生物；

A4是Gln、Leu、Pro或者Gln或Leu的N-甲基衍生物；

A5是Pro、Leu、α-甲基Leu或N-甲基Leu；

A6是D-Ala、Gly、D-Pro、氨基异丁酸(Aib)或者D-Ala或Gly的N-甲基衍生物；以及

A7是Arg或N-甲基Arg。

2.根据权利要求1所述的C5a的C末端肽类似物的HCl盐形式，其中，所述类似物选自由以下组成的组：

Tyr-Ser-Phe-Lys-Pro-Met-Pro-Leu-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：6)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Ala-Pro-Leu-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：7)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-Leu-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：8)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：9)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Ala-Pro-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：10)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Cys-Pro-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：11)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-Leu-(D-Pro)-Arg(SEQ ID NO：12)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Gln-Leu-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：13)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Gln-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：14)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Gln-Pro-Gly-Arg(SEQ ID NO：15)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-Leu-Aib-Arg(SEQ ID NO：16)；

Tyr-Ser-Phe-Lys-Gly-Met-Pro-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：17)；以及

Tyr-Ser-Phe-Lys-Gly-Leu-Leu-Leu-Gly-Arg(SEQ ID NO：18)。

3.根据权利要求1所述的C5a的C末端肽类似物的HCl盐形式，其中，所述类似物被命名为具有下式的EP67：Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-(甲基Leu)-D-Ala-Arg(SEQ ID NO：2)。

4.根据权利要求1所述的C5a的C末端肽类似物的HCl盐形式，其中，所述类似物是具有下式的构象稳定的肽：

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Xaa-(Xaa2)-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：1)，

其中Xaa是修饰的脯氨酸残基或脯氨酸的残基替换，以及Xaa2是亮氨酸或N-甲基亮氨酸。

5.一种组合物，包含分散在药学上可接受的载体中的根据权利要求1-4中任一项所述的C5a的C末端肽类似物的HCl盐形式。

6.根据权利要求5所述的组合物，还包含佐剂、其他活性剂、防腐剂、缓冲剂、盐及其混合物。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述活性剂选自由以下组成的组：杀灭的病毒、改性的活病毒、病毒或细菌蛋白、病毒或细菌DNA、类毒素、蛋白质亚基、肽表位和肿瘤抗原。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述活性剂与所述肽类似物缀合。

9.根据权利要求7所述的组合物，所述组合物包含多种不同的活性剂，每种所述活性剂都与所述组合物中的各自的肽类似物缀合。

10.一种在受试者中诱导针对感染或癌症的免疫反应的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的根据权利要求1-4中任一项所述的C5a的C末端肽类似物的HCl盐形式。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述感染或疾病是由选自由细菌、病毒和真菌组成的组的感染性剂引起的。

12.根据权利要求10所述的方法，其中，所述肽类似物分散在药学上可接受的载体中。

13.根据权利要求10所述的方法，还包括在所述给药之前提供分散在所述药学上可接受的载体中的所述肽类似物的单位剂型。

14.根据权利要求10所述的方法，其中，所述肽类似物通过肌内、皮下、皮内、鼻内、静脉内、口服或通过透皮贴剂给药。

15.根据权利要求10所述的方法，还包括向所述受试者给药活性剂，所述活性剂不同于所述肽类似物。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述肽类似物和活性剂被共同给药。

17.根据权利要求15所述的方法，其中，所述活性剂选自由以下组成的组：杀灭的病毒、改性的活病毒、病毒或细菌蛋白、病毒或细菌DNA、类毒素、蛋白质亚基、肽表位和肿瘤抗原。

18.根据权利要求15所述的方法，其中，所述活性剂与所述肽类似物缀合。

19.根据权利要求15所述的方法，其中，所述受试者是人类或非人类动物。

20.一种试剂盒，包含：

根据权利要求1-4中任一项所述的C5a的C末端肽类似物的HCl盐形式；以及

向有需要的受试者给药所述类似物的说明书。

21.根据权利要求20所述的试剂盒，其中，所述肽类似物以单位剂型提供。

22.根据权利要求20所述的试剂盒，其中，所述肽类似物被提供在第一容器中，所述试剂盒还包含在第二容器中的载体；以及准备所述肽类似物以向所述受试者给药的说明书。

23.一种用于增强对免疫原性剂的免疫反应的化合物，所述化合物包含与免疫原性剂共价连接的根据权利要求1-4中任一项所述的C5a的C末端肽类似物的HCl盐形式。

24.根据权利要求23所述的化合物，所述免疫原性剂选自由以下组成的组：杀灭的病毒、改性的活病毒、病毒或细菌蛋白、病毒或细菌DNA、类毒素、蛋白质亚基、肽表位和肿瘤抗原。

25.根据权利要求1-4中任一项所述的C5a的C末端肽类似物的HCl盐形式制备用于在受试者中诱导针对感染或癌症的免疫反应的治疗性或预防性药物的用途。

Images