CN110664992B - Bdnf在制备治疗母婴分离抑郁症药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于抑郁症药物技术领域，涉及BDNF在制备治疗母婴分离抑郁症药物中的应用。本发明运用动物行为学、细胞生物学、分子生物学、基因芯片等技术手段研究HDAC7在焦虑抑郁中的作用，明确“应激→BDNF→HDAC7核浆穿梭→靶基因调控→焦虑抑郁”这一信号通路和调控机制，为焦虑抑郁的分子生物学机制提供新的理论基础，同时充实和完善对HDAC7功能的认识。

Description

BDNF在制备治疗母婴分离抑郁症药物中的应用

技术领域

本发明属于抑郁症药物技术领域，涉及BDNF在制备治疗母婴分离抑郁症药物中的应用。

背景技术

抑郁症是一种常见的疾病，约17%的人终生受其影响。患者常年不能处于正常的生活状态，其致残致死率超过47%，在各类精神障碍排列首位，被列为全球第二大卫生保健问题。抑郁症通常是通过心理治疗，抗抑郁药或者二者联合来治疗的。然而，这两种治疗方法不仅存在时间和金钱的压力，而且有明显的副作用，并不能治愈患者。部分可有残留症状或转为慢性。同时，抑郁症的诊断依靠病人口述病史及评分量表，主观性较强，没有客观检测指标，导致很多病人没有及时发现病情。因此，研究抑郁症的发病原因及机制，寻找参与抑郁症发病的关键靶点，对抑郁症的预防、诊断和治疗有重要的理论意义和实际应用价值。

抑郁症具有很多种类型，比如狂躁型抑郁症、反应性抑郁症、青春期抑郁症、精神病性抑郁症、产后抑郁症母婴分离抑郁等，目前针对单独种类的抑郁症研究较少。而且虽然抑郁症病情多样，发病机制不清，但有研究表明，抑郁症的遗传率为47%。有文献报道，童年时期缺乏照顾与成年后抑郁症发病有很大关系，例如不可预知的母婴分离并对母亲施压模型 (unpredictable maternal separation combined with unpredictable maternalstress , MSUS)，会导致母鼠对幼鼠的哺乳及舔舐行为的减少及幼时照顾不周，这会显著增加幼鼠成年后焦虑抑郁的发生，而且这种焦虑抑郁样行为能够传递给后代，这种情况显然不是由于染色质DNA序列的改变引起的。同时，有研究发现同卵双生子发病率并不均等，提示我们可能存在新型的遗传调控机制对其产生影响。表观遗传学作为非经典的遗传调控机制受到了很大的青睐。

发明内容

本发明针对传统抑郁症治疗中存在的问题提出BDNF在制备治疗母婴分离抑郁症药物中的应用。

真核生物的遗传信息主要储存在染色质上，染色质的基本结构主要由H2A、H2B、H3、H4四种组蛋白构成的八聚体以及缠绕在上面的DNA所组成。表观遗传学在保持核苷酸序列不变的情况下，通过改变染色质的空间构型，调节转录因子与相关基因的结合，来影响基因的表达，主要包括组蛋白的修饰（包括乙酰化、甲基化、磷酸化等）、DNA甲基化、染色质重塑和非编码RNA等作用方式。乙酰化可发生于每一个组蛋白的多个位点上，严格受到两种作用完全相反的酶，组蛋白乙酰化转移酶（histone acetyltransferase, HAT）和组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase, HDAC）的动态调控。HAT激活后将乙酰辅酶A的乙酰基转移到组蛋白氨基末端特定的赖氨酸残基上，主要使DNA与组蛋白的亲和力降低，有利于各种转录因子和协同转录因子与DNA结合位点特异性结合，激活特定基因的转录。而HDAC则使组蛋白去乙酰化，与带负电荷的DNA紧密结合，染色质致密卷曲，基因的转录受到抑制。

由于机体内现有HDAC共4类，18种（HDAC1-11和SIRT1-7），加之使用的HDAC抑制剂又具有广谱性，所以迄今HDAC抑制剂具体通过作用于何种HDAC发挥改善焦虑抑郁的作用仍不清楚，这极大限制了选择性HDAC抑制剂的开发和应用。

HDAC7属于II类HDAC，具有核浆穿梭的特点。HDAC7可以被PCLγ—PKD信号通路磷酸化，从而出核。我们研究发现，HDAC7在小鼠出生后在脑中表达持续升高，至出生后28天达到高峰并维持稳定（见图2A）。同时，大脑中与情绪相关的脑区，如腹侧被盖区、海马、杏仁体、前额叶等部位HDAC7都有表达（图2B）。而且慢性应激中，腹侧被盖区中HDAC7的水平选择性升高。

HDAC7作为组蛋白去乙酰化酶，通过调控组蛋白乙酰化的位点和下游靶基因及下游信号通路发挥作用。

HDAC7通过BDNF调控的信号通路磷酸化出核，从而增加组蛋白的乙酰化水平，促进靶基因的转录分泌，抵抗母婴分离性焦虑抑郁精神疾病。

BDNF是中枢神经系统中分布最为广泛的一种神经营养因子，在个体发育期和成年期都有广泛的表达。BDNF是一种分泌蛋白，主要是通过与两种不同的受体：高亲和力的酪氨酸激酶受体B（Tropomyosin-related kinase B, TrkB）和低亲和力的p75受体结合调节神经元的结构和功能。

BDNF可以通过体内合成，也可以采用体外模拟方法合成，例如Thermo Scientific公司生产的赛默飞。

BDNF序列为:

aatatcaagt atcacttaat tagagatttt taagcctttt cctcctgctg tgccgggtgtgtaatccggg cgataggagt ccattcagca ccttggacag agccaacgga tttgtccgag gtggcggtacccccagttcc accaggtgag aagagtgatg accatccttt tccttactat ggttatttca tactttggttgcatgaaggc tgcccccatg aaagaagcaa acatccgagg acaaggtggc ttggcctacc caggtgtgcggacccatggg actctggaga gcgtgaatgg gcccaaggca ggttcaagag gcttgacatc attggctgacactttcgaac acgtgataga agagctgttg gatgaggacc agaaagttcg gcccaatgaa gaaaacaataaggacgcaga cttgtacacg tccagggtga tgctcagtag tcaagtgcct ttggagcctc ctcttctctttctgctggag gaatacaaaa attacctaga tgctgcaaac atgtccatga gggtccggcg ccactctgaccctgcccgcc gaggggagct gagcgtgtgt gacagtatta gtgagtgggt aacggcggca gacaaaaagactgcagtgga catgtcgggc gggacggtca cagtccttga aaaggtccct gtatcaaaag gccaactgaagcaatacttc tacgagacca agtgcaatcc catgggttac acaaaagaag gctgcagggg catagacaaaaggcattgga actcccagtg ccgaactacc cagtcgtacg tgcgggccct taccatggat agcaaaaagagaattggctg gcgattcata aggatagaca cttcttgtgt atgtacattg accattaaaa ggggaagatagtggatttat gttgtataga ttagattata ttgagacaaa aattatctat ttgtatatat acataacagggtaaattatt cagttaagaa aaaaataatt ttatgaactg catgtataaa tgaagtttat acagtacagtggttctacaa tctatttatt ggacatgtcc atgaccagaa gggaaacagt catttgcgca caacttaaaaagtctgcatt acattccttg ataatgttgt ggtttgttgc cgttgccaag aactgaaaac ataaaaagttaaaaaaaata ataaattgca tgctgcttta attgtgaatt gataataaac tgtcctcttt cagaaaacagaaaaaaacac acacacacac aacaaaaatt tgaaccaaaa cattccgttt acattttaga cagtaagtatcttcgttctt gttagtacta tatctgtttt actgctttta acttctgata gcgttggaat taaaacaatgtcaaggtgct gttgtcattg ctttactggc ttaggggatg ggggatgggg ggtatatttt tgtttgttttgtgttttttt ttcgtttgtt tgttttgttt tttagttccc acagggagta gagatgggga aagaattcctacaatatata ttctggctga taaaagatac atttgtatgt tgtgaagatg tttgcaatat cgatcagatgactagaaagt gaataaaaat taaggcaact gaacaaaaaa atgctcacac tccacatccc gtgatgcacctcccaggccc cgctcattct ttgggcgttg gtcagagtaa gctgcttttg acggaaggac ctatgtttgctcagaacaca ttctttcccc ccctccccct ctggtctcct ctttgttttg ttttaaggaa gaaaaatcagttgcgcgttc tgaaatattt taccactgct gtgaacaagt gaacacattg tgtcacatca tgacactcgtataagcatgg agaacagtga ttttttttta gaacagaaaa caacaaaaaa taaccccaaa atgaagattattttttatga ggagtgaaca tttgggtaaa tcatggctaa gcttaaaaaa aactcatggt gaggcttaacaatgtcttgt aagcaaaagg tagagccctg tatcaaccca gaaacaccta gatcagaaca ggaatccacattgccagtga catgagactg aacagccaaa tggaggctat gtggagttgg cattgcattt accggcagtgcgggaggaat ttctgagtgg ccatcccaag gtctaggtgg aggtggggca tggtatttga gacattccaaaacgaaggcc tctgaaggac ccttcagagg tggctctgga atgacatgtg tcaagctgct tggacctcgtgctttaagtg cctacattat ctaactgtgc tcaagaggtt ctcgactgga ggaccacact caagccgacttatgcccacc atcccacctc tggataattt tgcataaaat tggattagcc tggagcaggt tgggagccaaatgtggcatt tgtgatcatg agattgatgc aatgagatag aagatgtttg ctacctgaac acttattgctttgaaactag acttgaggaa accagggttt atcttttgag aacttttggt aagggaaaag ggaacaggaaaagaaacccc aaactcaggc cgaatgatca aggggaccca taggaaatct tgtccagaga caagacttcgggaaggtgtc tggacattca gaacaccaag acttgaaggt gccttgctca atggaagagg ccaggacagagctgacaaaa ttttgctccc cagtgaaggc cacagcaacc ttctgcccat cctgtctgtt catggagagggtccctgcct cacctctgcc attttgggtt aggagaagtc aagttgggag cctgaaatag tggttcttggaaaaatggat ccccagtgaa aactagagct ctaagcccat tcagcccatt tcacacctga aaatgttagtgatcaccact tggaccagca tccttaagta tcagaaagcc ccaagcaatt gctgcatctt agtagggtgagggataagca aaagaggatg ttcaccataa cccaggaatg aagataccat cagcaaagaa tttcaatttgttcagtcttt catttagagc tagtctttca cagtaccatc tgaatacctc tttgaaagaa ggaagactttacgtagtgta gatttgtttt gtgttgtttg aaaatattat ctttgtaatt atttttaata tgtaaggaatgcttggaata tctgctatat gtcaacttta tgcagcttcc ttttgaggga caaatttaaa acaaacaaccccccatcaca aacttaaagg attgcaaggg ccagatctgt taagtggttt cataggagac acatccagcaattgtgtggt cagtggctct tttacccaat aagatacatc acagtcacat gcttgatggt ttatgttgacctaagattta ttttgttaaa atctctctct gttgtgttcg ttcttgttct gttttgtttt gttttttaaagtcttgctgt ggtctctttg tggcagaagt gtttcatgca tggcagcagg cctgttgctt ttttatggcgattcccattg aaaatgtaag taaatgtctg tggccttgtt ctctctatgg taaagatatt attcaccatgtaaaacaaaa aacaatattt attgtatttt agtatattta tataattatg ttattgaaaa aaattggcattaaaacttaa ccgcatcaga acctattgta aatacaagtt ctatttaagt gtactaatta acatataatatatgttttaa atatagaatt tttaatgttt ttaaatatat tttcaaagta cataaaa。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：

1.本发明运用动物行为学、细胞生物学、分子生物学、基因芯片等技术手段研究HDAC7在焦虑抑郁中的作用，明确“应激→BDNF→HDAC7核浆穿梭→靶基因调控→焦虑抑郁”这一信号通路和调控机制，为焦虑抑郁的分子生物学机制提供新的理论基础，同时充实和完善对HDAC7功能的认识。

2.构建特异性脑区HDAC7基因敲除小鼠(HDAC7^-/- mice)模型，有效验证HDAC7在焦虑抑郁中的作用。

3.以BDNF，HDAC7为基础，给出BDNF作用在HDAC7上对母婴分离焦虑抑郁的手段和检测方法，为母婴分离型焦虑抑郁的基因检测和治疗提供新途径。

附图说明

图1为正常组及MSUS组的F1和F2代小鼠进行焦虑及抑郁行为检测结果。

图2 中A为HDAC7在不同发育期的表达； B为成年小鼠个脑区的表达；C为体外培养的神经元细胞中HDAC7的表达。

图3为MSUS模型建立后检测F1 F2代脑中HDAC7 mRNA及蛋白水平结果。

图4 A为体外培养的神经元加BDNF刺激后，免疫荧光标记HDAC7，DAPI标记细胞核，统计位于细胞质中的HDAC7的比例。B为体外培养神经元，加TrkB抑制剂K252a与BDNF，提取细胞核蛋白，检测HDAC7蛋白水平结果。

图5为体外培养神经元，加BDNF及相应信号通路抑制剂后，检测HDAC7磷酸化水平结果。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点，下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是，本发明还可以采用不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本发明并不限于下面公开说明书的具体实施例的限制。

实施例1

1.MSUS模型的建立

选取C57/BL6J品系雌鼠20余只，C57/BL6J雄鼠1只，此为F0代。将雌雄鼠合笼交配后，选取10只怀孕生产时间接近的雌鼠，随机分为两组（正常组和MSUS组），每组10只。每只雌鼠单独笼饲养。生产后，正常组不给予处理，MSUS组从出生后第1天开始，每天将母鼠与幼鼠分离3小时，并对母鼠进行15分钟的束缚刺激，持续14天结束。期间记录母鼠的喂养行为。两组小鼠断奶后（出生后21天），将母鼠分离，幼鼠在社会团体中饲养（约3-4只/笼），此为F1代。F1代成年后（8周龄），取两组里的雄鼠，分别与未经任何处理的且未生产过的雌鼠合笼1-2周，然后分离，以确保F1雄鼠与其后代没有任何接触。同样记录雌鼠母性行为。雌鼠生产的幼鼠为F2代，生产后不经过任何处理，令雌鼠正常哺育。如需进行F3代检测，同前选取上一代雄鼠与新购雌鼠进行交配即可。

检测方法

焦虑样行为评价采用高架十字实验和矿场实验进行检测。高架十字实验将小鼠置于十字交叉的两臂上，其中一臂开放，一臂的两侧有封闭，检测小鼠位于开放一臂的时间比例，以反映小鼠焦虑情况。矿场实验将小鼠置于模拟矿场中，矿场周围有遮挡，顶部开放。记录小鼠位于矿场中间的时间比例，以反映小鼠焦虑情况。抑郁样行为评价采用悬尾实验和强迫游泳实验进行检测。悬尾实验时将小鼠尾尖固定，整体倒悬，检测小鼠挣扎时间，以反映抑郁程度。强迫游泳实验时将小鼠置于较小的烧杯中，水面保持后足不能接触杯底且无法爬出，记录在水中游动时间，以反映抑郁程度。

二.表观遗传学相关分子HDAC7在MSUS模型中的表达变化

HDAC7分布检测

取正常10周龄C57/BL6J小鼠，处死后，分离各脑区，主要包括腹侧被盖区，海马区，杏仁体，背外侧区，前额叶等部分。提取RNA及蛋白，实时荧光定量PCR检测HDAC7 mRNA的表达情况，Western blot检测HDAC7蛋白水平，以了解其正常分布状态。

临床标本检测

收集焦虑抑郁患者(包括相关精神疾病)和正常人群血液及脑脊液标本，ELISA法检测脑脊液中BDNF蛋白水平及HDAC7蛋白水平变化；并统计分析BDNF和HDAC7水平与焦虑抑郁的关系，确定二者表达变化是否与焦虑抑郁有相关性。

动物模型

如上所述建立MSUS动物模型，分别取正常组和MSUS组F1和F2代雄鼠，处死后分离不同脑区，提取RNA及蛋白，实时荧光定量PCR检测BDNF及HDAC7的mRNA水平，Western blot检测BDNF及HDAC7蛋白水平，组织免疫荧光染色检测HDAC7在细胞内的定位，同时采用Western blot检测染色体DNA整体乙酰化水平的变化情况。

细胞实验

体外培养神经元，分组如下：

实验组在培养液中加BDNF，对照组加溶剂对照；继续培养24h，收集细胞，提取蛋白，实时荧光定量PCR和Western blot实验检测HDAC7 mRNA及蛋白水平，免疫细胞荧光染色检测HDAC7定位情况，检测细胞整体乙酰化水平，明确中枢神经元在BDNF刺激下HDAC7的表达变化及细胞定位变化。

三.HDAC7在MSUS模型中的作用及机制

(1)HDAC7上游机制

采用脑室内注射BDNF小鼠建立MSUS组模型

小鼠分两组，脑室内注射BDNF及溶剂对照组，进行MSUS组建模，检测两组小鼠的焦虑抑郁情况及HDAC7的mRNA水平、蛋白水平及细胞内定位，验证BDNF是否是调控HDAC7的上游调节分子。

(2)HDAC7下游机制

动物体内实验检测HDAC7是否对MSUS产生影响以及通过哪个靶基因对其产生影响。

采用Cre-loxp基因敲除技术，构建脑区特异性敲除HDAC7的小鼠（HDAC7^-/-）。HDAC7^+/+和HDAC7^-/-小鼠分别建立MSUS小鼠模型。

模型建立后，首先进行F1及F2代成年雄鼠焦虑抑郁行为的检测，以观察HDAC7缺失对焦虑抑郁产生的影响。然后取组织，进行基因芯片分析及蛋白质谱分析，筛选可能的“应激→BDNF→HDAC7核浆穿梭→下游靶蛋白→焦虑抑郁”信号通路。对筛选结果进行类聚分析，主要关注变化较大的分泌型蛋白，以便用于液体检测。确定了下游信号分子，用CoIP实验检测HDAC7与其的结合，用CHIP实验检测HDAC7对其的调控。确定了HDAC7的调控作用后，在HDAC7^-/- 小鼠脑内再干扰下游基因，检测小鼠行为学，验证其上下游关系。

(3)细胞培养进行体外实验验证上下游机制

上游机制验证

小鼠神经元体外原代培养，加BDNF或溶剂对照后，WB检测HDAC7蛋白水平、磷酸化水平变化；免疫荧光检测HDAC7定位变化；将HDAC7持续磷酸型和持续非磷酸型突变体质粒转入神经元中，免疫荧光检测其在细胞中定位情况。说明BDNF能够促进HDAC7的磷酸化出核过程。

下游机制验证

小鼠神经元体外原代培养，在神经元中过表达或干扰HDAC7，加BDNF刺激，检测下游信号通路激活情况，从正反两方面验证体内结果。

四. BDNF，HDAC7检测，应用BDNF及HDAC7抗体作为母婴分离焦虑的检测和治疗策略

筛选出下游靶基因后，收集相关病人及正常人群的血液及脑脊液，对BDNF，HDAC7和下游靶基因进行检测并进行相关性分析。

实验方法

ELISA检测血及脑脊液中各成分的水平。

本部分需要的临床标本收集，ELISA检测依托单位为山东大学第二医院，完成相应标本收集及检测任务。

结果

图1为MSUS小鼠的行为学检测情况，结果显示，F1代有焦虑抑郁样行为，能够导致未受母子分离刺激的F2代小鼠的焦虑抑郁样行为。

通过图2可知，HDAC7在各脑区中均有表达，体外培养的神经元中用免疫荧光方法也能检测到。

通过图3可知，在野生型小鼠中，建立MSUS模型后，与正常组相比，HDAC7 mRNA及蛋白水平有显著增多

通过图4可知，HDAC7在中枢神经系统有广泛的表达，同时参与MSUS模型中。BDNF能够降低HDAC7蛋白水平及核内分布， HDAC7受到BDNF调控，BDNF-HDAC7通路对焦虑抑郁产生影响。

通过图5可知，体外培养的神经元中，加BDNF刺激后，HDAC7磷酸化水平显著升高，TrkB受体下游信号PLCγ通路抑制剂U73122能够显著抑制BDNF引起的HDAC7磷酸化水平升高， BDNF通过此信号通路影响HDAC7磷酸化水平。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例应用于其它领域，但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 山东大学第二医院

<120> BDNF在制备治疗母婴分离抑郁症药物中的应用

<130> 1

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 3827

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

aatatcaagt atcacttaat tagagatttt taagcctttt cctcctgctg tgccgggtgt 60

gtaatccggg cgataggagt ccattcagca ccttggacag agccaacgga tttgtccgag 120

gtggcggtac ccccagttcc accaggtgag aagagtgatg accatccttt tccttactat 180

ggttatttca tactttggtt gcatgaaggc tgcccccatg aaagaagcaa acatccgagg 240

acaaggtggc ttggcctacc caggtgtgcg gacccatggg actctggaga gcgtgaatgg 300

gcccaaggca ggttcaagag gcttgacatc attggctgac actttcgaac acgtgataga 360

agagctgttg gatgaggacc agaaagttcg gcccaatgaa gaaaacaata aggacgcaga 420

cttgtacacg tccagggtga tgctcagtag tcaagtgcct ttggagcctc ctcttctctt 480

tctgctggag gaatacaaaa attacctaga tgctgcaaac atgtccatga gggtccggcg 540

ccactctgac cctgcccgcc gaggggagct gagcgtgtgt gacagtatta gtgagtgggt 600

aacggcggca gacaaaaaga ctgcagtgga catgtcgggc gggacggtca cagtccttga 660

aaaggtccct gtatcaaaag gccaactgaa gcaatacttc tacgagacca agtgcaatcc 720

catgggttac acaaaagaag gctgcagggg catagacaaa aggcattgga actcccagtg 780

ccgaactacc cagtcgtacg tgcgggccct taccatggat agcaaaaaga gaattggctg 840

gcgattcata aggatagaca cttcttgtgt atgtacattg accattaaaa ggggaagata 900

gtggatttat gttgtataga ttagattata ttgagacaaa aattatctat ttgtatatat 960

acataacagg gtaaattatt cagttaagaa aaaaataatt ttatgaactg catgtataaa 1020

tgaagtttat acagtacagt ggttctacaa tctatttatt ggacatgtcc atgaccagaa 1080

gggaaacagt catttgcgca caacttaaaa agtctgcatt acattccttg ataatgttgt 1140

ggtttgttgc cgttgccaag aactgaaaac ataaaaagtt aaaaaaaata ataaattgca 1200

tgctgcttta attgtgaatt gataataaac tgtcctcttt cagaaaacag aaaaaaacac 1260

acacacacac aacaaaaatt tgaaccaaaa cattccgttt acattttaga cagtaagtat 1320

cttcgttctt gttagtacta tatctgtttt actgctttta acttctgata gcgttggaat 1380

taaaacaatg tcaaggtgct gttgtcattg ctttactggc ttaggggatg ggggatgggg 1440

ggtatatttt tgtttgtttt gtgttttttt ttcgtttgtt tgttttgttt tttagttccc 1500

acagggagta gagatgggga aagaattcct acaatatata ttctggctga taaaagatac 1560

atttgtatgt tgtgaagatg tttgcaatat cgatcagatg actagaaagt gaataaaaat 1620

taaggcaact gaacaaaaaa atgctcacac tccacatccc gtgatgcacc tcccaggccc 1680

cgctcattct ttgggcgttg gtcagagtaa gctgcttttg acggaaggac ctatgtttgc 1740

tcagaacaca ttctttcccc ccctccccct ctggtctcct ctttgttttg ttttaaggaa 1800

gaaaaatcag ttgcgcgttc tgaaatattt taccactgct gtgaacaagt gaacacattg 1860

tgtcacatca tgacactcgt ataagcatgg agaacagtga ttttttttta gaacagaaaa 1920

caacaaaaaa taaccccaaa atgaagatta ttttttatga ggagtgaaca tttgggtaaa 1980

tcatggctaa gcttaaaaaa aactcatggt gaggcttaac aatgtcttgt aagcaaaagg 2040

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atggaagagg ccaggacaga gctgacaaaa ttttgctccc cagtgaaggc cacagcaacc 2760

ttctgcccat cctgtctgtt catggagagg gtccctgcct cacctctgcc attttgggtt 2820

aggagaagtc aagttgggag cctgaaatag tggttcttgg aaaaatggat ccccagtgaa 2880

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atatagaatt tttaatgttt ttaaatatat tttcaaagta cataaaa 3827

<210> 2

<211> 2865

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

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agcagcgtgg tcaagcagaa gctagcggag gtgattctga aaaaacagca ggcggcccta 420

gaaagaacag tccatcccaa cagccccggc attccctaca gaaccctgga gcccctggag 480

acggaaggag ccacccgctc catgctcagc agctttttgc ctcctgttcc cagcctgccc 540

agtgaccccc cagagcactt ccctctgcgc aagacagtct ctgagcccaa cctgaagctg 600

cgctataagc ccaagaagtc cctggagcgg aggaagaatc cactgctccg aaaggagagt 660

gcgcccccca gcctccggcg gcggcccgca gagaccctcg gagactcctc cccaagtagt 720

agcagcacgc ccgcatcagg gtgcagctcc cccaatgaca gcgagcacgg ccccaatccc 780

atcctgggct cggaggctga cagtgaccgc aggacccatc cgactctggg ccctcggggg 840

ccaatcctgg ggagccccca cactcccctc ttcctgcccc atggcttgga gcccgaggct 900

gggggcacct tgccctctcg cctgcagccc attctcctcc tggacccctc aggctctcat 960

gccccgctgc tgactgtgcc cgggcttggg cccttgccct tccactttgc ccagtcctta 1020

atgaccaccg agcggctctc tgggtcaggc ctccactggc cactgagccg gactcgctca 1080

gagcccctgc cccccagtgc caccgctccc ccaccgccgg gccccatgca gccccgcctg 1140

gagcagctca aaactcacgt ccaggtgatc aagaggtcag ccaagccgag tgagaagccc 1200

cggctgcggc agataccctc ggctgaagac ctggagacag atggcggggg accgggccag 1260

gtggtggacg atggcctgga gcacagggag ctgggccatg ggcagcctga ggccagaggc 1320

cccgctcctc tccagcagca ccctcaggtg ttgctctggg aacagcagcg actggctggg 1380

cggctccccc ggggcagcac cggggacact gtgctgcttc ctctggccca gggtgggcac 1440

cggcctctgt cccgggctca gtcttcccca gccgcacctg cctcactgtc agccccagag 1500

cctgccagcc aggcccgagt cctctccagc tcagagaccc ctgccaggac cctgcccttc 1560

accacagggc tgatctatga ctcggtcatg ctgaagcacc agtgctcctg cggtgacaac 1620

agcaggcacc cggagcacgc cggccgcatc cagagcatct ggtcccggct gcaggagcgg 1680

gggctccgga gccagtgtga gtgtctccga ggccggaagg cctccctgga agagctgcag 1740

tcggtccact ctgagcggca cgtgctcctc tacggcacca acccgctcag ccgcctcaaa 1800

ctggacaacg ggaagctggc agggctcctg gcacagcgga tgtttgtgat gctgccctgt 1860

ggtggggttg gggtggacac tgacaccatc tggaatgagc ttcattcctc caatgcagcc 1920

cgctgggccg ctggcagtgt cactgacctc gccttcaaag tggcttctcg tgagctaaag 1980

aatggtttcg ctgtggtgcg gcccccagga caccatgcag atcattcaac agccatgggc 2040

ttctgcttct tcaactcagt ggccatcgcc tgccggcagc tgcaacagca gagcaaggcc 2100

agcaagatcc tcattgtaga ctgggacgtg caccatggca acggcaccca gcaaaccttc 2160

taccaagacc ccagtgtgct ctacatctcc ctgcatcgcc atgacgacgg caacttcttc 2220

ccggggagtg gggctgtgga tgaggtaggg gctggcagcg gtgagggctt caatgtcaat 2280

gtggcctggg ctggaggtct ggaccccccc atgggggatc ctgagtacct ggctgctttc 2340

aggatagtcg tgatgcccat cgcccgagag ttctctccag acctagtcct ggtgtctgct 2400

ggatttgatg ctgctgaggg tcacccggcc ccactgggtg gctaccatgt ttctgccaaa 2460

tgttttggat acatgacgca gcaactgatg aacctggcag gaggcgcagt ggtgctggcc 2520

ttggagggtg gccatgacct cacagccatc tgtgacgcct ctgaggcctg tgtggctgct 2580

cttctgggta acagggtgga tcccctttca gaagaaggct ggaaacagaa acccaacctc 2640

aatgccatcc gctctctgga ggccgtgatc cgggtgcaca gtaaatactg gggctgcatg 2700

cagcgcctgg cctcctgtcc agactcctgg gtgcctagag tgccaggggc tgacaaagaa 2760

gaagtggagg cagtgaccgc actggcgtcc ctctctgtgg gcatcctggc tgaagatagg 2820

ccctcggagc agctggtgga ggaggaagaa cctatgaatc tctaa 2865

Claims (5)

1.BDNF在制备降低母婴分离抑郁小鼠神经元HDAC7蛋白水平、升高母婴分离抑郁小鼠神经元HDAC7磷酸化水平药物中的应用。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，应用方法为直接注射。

3.根据权利要求1所述的应用，所述BDNF核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。

4.根据权利1或3所述应用，所述BDNF通过提取人体或哺乳动物中枢神经系统的分泌物获得。

5.根据权利1或3所述的应用，所述BDNF通过模拟人体或哺乳动物中枢神经系统的分泌蛋白人工合成。

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