CN110655593B - 薄荷多糖组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

薄荷多糖组合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种薄荷多糖组合物及其制备方法和应用。所述薄荷多糖组合物以摩尔百分比计，由83～85％半乳糖、9.5～10％葡萄糖、2.5～3.0％甘露糖和3.0～4.0％阿拉伯糖组成，并且所述薄荷多糖组合物的分子量大于10000Da且小于等于30000Da。在所述薄荷多糖组合物的制备方法中，使用截留分子量为10000Da、30000Da的膜透析。所述薄荷多糖具有抗氧化活性，其在体外能够清除DPPH、OH自由基，具有良好的金属离子螯合作用，并且能够修复D‑半乳糖诱导的衰老小鼠的抗氧化系统。

Description

薄荷多糖组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种薄荷多糖组合物及其制备方法和应用，所述薄荷多糖组合物具有抗氧化作用。
背景技术
薄荷(Mentha haplocalyx Briq)是唇形科植物的干燥地上部分，具有保肝利胆、镇痛、抗菌、抗炎等药理作用，临床多用于风热感冒，温病初起，头痛目赤，咽喉肿痛等证。薄荷含有挥发油、氨基酸、多糖等多种活性成分。目前，对于薄荷的研究主要集中在薄荷精油及脂溶性成分方面。但是对于多糖这类主要活性成分研究的相对较少。
多糖是一类低毒、无副作用，生物学活性良好的生物大分子，因此，多糖的研究及其在保健食品、医药领域的应用已逐渐成为结构化学、分子生物学、医学和食品学新兴研究领域。多糖同时也是一类结构复杂的生物大分子。其生物学活性与其结构密切相关。其中分子量是影响多糖生物学活性的重要因素。因此，以分子量为出发点，寻找活性多糖，并进行构效关系研究也逐渐成为国内外研究的热点。
发明内容
发明要解决的问题
如上所述，目前对于薄荷多糖的研究相对较少，为了寻找薄荷中具有药用价值的多糖类物质，本发明人进行了深入研究。
本发明的目的在于提供一种具有抗氧化活性的薄荷多糖组合物及其制备方法和应用，所述方法简单，操作简便，易于实施。
用于解决问题的技术手段
本发明的目的通过以下实施方式实现。
1、一种薄荷多糖组合物，其特征在于，以摩尔百分比计，由83～85％半乳糖、9.5～10％葡萄糖、2.5～3.0％甘露糖和3.0～4.0％阿拉伯糖组成，并且所述薄荷多糖组合物的分子量大于10000Da且小于等于30000Da。
2、根据上述1所述的薄荷多糖组合物，其中，半乳糖为84.2％,葡萄糖为9.8％,甘露糖为2.8％，阿拉伯糖为3.2％，并且所述分子量为26910Da。
3、根据上述1或2所述的薄荷多糖组合物，其特征在于，所述多糖组合物中包括结构式如下的糖残基重复单元,
Figure BDA0002269062440000021
4、上述1～3中任一项所述的薄荷多糖组合物的制备方法，其特征在于，该方法包括下述步骤：
A将薄荷粉碎，得薄荷粉末；
B对所述薄荷粉末进行水提取，然后过滤，得滤液；
C将所述滤液进行离心，取上清液进行浓缩；
D向所述浓缩液中加入95％乙醇，然后离心，得残渣；
E将所述残渣溶于水中，通过透析或膜过滤，得所述薄荷多糖组合物。
5、根据上述4所述的方法，其特征在于，所述步骤B如下进行：
首先将所述薄荷粉末加入到重量是其8-15倍(w/w)的水中浸泡1-2小时，然后在90-100℃下提取60-120分钟。
6、根据上述4或5所述的方法，其特征在于，所述步骤E如下进行：
将所述残渣溶于水后，利用截留分子量为10000Da的膜过滤，得到分子量大于10000Da和分子量小于等于10000Da两个级分；
将得到的所述分子量大于10000Da的级分进一步溶于水，并利用截留分子量为30000Da的膜过滤，得到分子量大于30000Da和分子量大于10000Da并小于等于30000Da两个级分。
7、上述1～3中任一项所述的薄荷多糖组合物在制备具有抗氧化活性的药物中的应用。
8、根据上述7所述的应用，其特征在于，所述抗氧化活性为清除DPPH、羟基自由基、和/或金属离子螯合的能力。
9、根据上述7或8所述的应用，其特征在于，所述抗氧化活性为增强D-半乳糖诱导氧化损伤小鼠的SOD、CAT及GSH-PX酶活性，并降低MDA水平。
本发明的薄荷多糖组合物可以通过如下具体方法进行制备。
1.薄荷粗多糖提取：将薄荷粉碎至40-60目，用5-15倍(w/w)蒸馏水浸泡2小时，90-100℃条件下用蒸馏水提取90-120分钟，提取物经纱布过滤，过滤得到的残渣在相同条件下重复提取两次。合并三次提取所得滤液，离心，将上清液浓缩至原体积的1/4。向所述浓缩液中加入4倍量(v/v)95％乙醇，静置24小时后离心，得残渣。
2.将所述残渣用5倍水溶解。将所得的溶解液透析或膜分离，透析时间优选为48-72小时，透析用超滤离心管、透析袋，其截留分子量优选为10000Da，分别收集透析内液和透析外液。将透析外液收集液浓缩、冷冻干燥。
3.将所述透析内液再次进行透析或膜分离，透析时间优选为48-72小时，透析用超滤离心管、透析袋，其截留分子量优选为30000Da，分别收集透析内液和透析外液。将透析外液收集液浓缩、冷冻干燥，得活性薄荷多糖组合物。
发明效果
本发明的薄荷多糖组合物在体外具有清除DPPH、羟基自由基，增加金属离子螯合的能力，并且在体内增强D-半乳糖诱导的氧化损伤小鼠加氧化损伤小鼠的SOD，CAT和GSH-PX酶活力，降低MDA水平，因此具有抗氧化作用。
附图说明
图1.表示薄荷多糖组合物的高效凝胶渗透色谱和高效液相色谱图。
图2.薄荷多糖组合物的单糖组成分析图。
图3.薄荷多糖组合物的傅里叶-红外(FT-IR)光谱图。
图4.薄荷多糖组合物的GC-MS分析总离子流图。
图5.薄荷多糖组合物的1D、2D-NMR分析图:1H谱图。
图6.薄荷多糖组合物的1D、2D-NMR分析图:13C谱图。
图7.薄荷多糖组合物的1D、2D-NMR分析图:1H-1H COSY谱图
图8.薄荷多糖组合物的1D、2D-NMR分析图:1H-13C HSQC谱图
图9.薄荷多糖组合物的1D、2D-NMR分析图:HMBC谱图。
具体实施方式
本发明中使用的仪器为：SHIMADZU HPLC液相色谱仪，Thermo公司的ThermoScientific TSQ 8000质谱仪；Bruker公司的Vertex 7.0红外光谱仪；Bruker-600 FT-NMR核磁共振光谱仪。
实施例1
称取干燥后的薄荷1000克，粉碎至40-60目，用15升蒸馏水浸泡1.5小时后在100℃下提取120分钟。然后用5层纱布过滤。过滤得到的残渣在相同条件下重复提取两次。合并三次提取所得滤液，以4000转/分钟离心10分钟，收集上清液，所得上清液利用旋转蒸发仪在60℃下蒸发至750mL，加入4倍量的无水乙醇，60℃下静置24小时，离心，沉淀复溶于水后冷冻干燥，得到干燥残渣(113.0g)。
将上述干燥残渣溶解于蒸馏水中，固液比为1:5(w/w)。利用截留分子量为10000Da的膜对溶解液进行透析，透析96小时。分别收集透析内液和外液。
将上述透析内液利用截留分子量为30000Da的膜对溶解液进行透析，透析96小时。分别收集透析内液和外液，透析外液60℃减压浓缩，并冷冻干燥。由此得到分子量大于10000Da且小于等于30000Da的薄荷粗多糖。
取上述薄荷粗多糖100mg溶解于蒸馏水中(10mL)，以10000转/分钟离心5分钟，收集上清液，所得上清液经Sephadex G-75凝胶柱(3.0cm×90cm)进一步纯化，蒸馏水为洗脱液，流速为0.5mL/min,20min/管，苯酚硫酸法跟踪检测，收集相应多糖级分，冷冻干燥，得到分子量均一的薄荷多糖组合物。
本发明得到的薄荷多糖组合物利用HPLC在下述测定条件下进行分析，得一个单一狭窄对称洗脱峰，洗脱时间为13.75分钟，由此可知，该薄荷多糖组合物分子量均一，根据已知分子量葡聚糖绘制分子量曲线计算得所述薄荷多糖组合物的分子量为26910Da
HPLC测定条件如下：
色谱柱：TSK-G3000 PWXL(7.8mm ID×30.0cm L)
检测器：RID-10A
流动相：去离子水
流速：1.0mL/min
进样量：10μL
本发明得到的薄荷多糖组合物经完全酸水解及PMP衍生，利用HPLC在下述测定条件下进行分析，根据标准单糖的相对保留时间可知，该薄荷多糖中所含单糖由葡萄糖、半乳糖、甘露糖和阿拉伯糖组成，其摩尔百分含量分别为84.2％，9.8％，2.8％和3.2％。
HPLC测定条件如下：
色谱柱：DIKMA Inertsil ODS-3(4.6mm×150mm)
检测器：UV-VIS DAD
检测波长：245nm
流动相：PBS(0.1M,pH 7.0)：乙腈＝82:18(v/v),pH 7.0
流速：1.0mL/min
进样量：10μL
取干燥的薄荷多糖组合物，以KBr压片，在4000～400cm-1的范围内进行红外光谱扫描，记录红外光谱图数据如下：在3600～3200cm-1处有很宽的羟基O-H伸缩振动吸收峰，在2935.8cm-1处显示甲基或次甲基的C–H伸缩振动吸收峰，在1604.1cm–1处显示水化物羟基的弯曲振动吸收峰。在1412.7cm-1显示C–H变形振动，在1071.6cm–1处显示C-O-C的伸缩振动吸收峰。960～930cm–1处显示糖类分子振动峰，910.2cm-1处显示吡喃糖β-端基差向异构的C-H变角振动，850.9cm-1处显示吡喃糖α-端基差向异构的C-H变角振动。
取干燥的薄荷多糖组合物2mg，经过甲基化、完全酸水解、乙酰化后，利用GC-MS在下述测定条件下进行分析其糖苷键类型。GC-MS分析图谱的总离子流图中出现了4个特征峰，相对保留时间分别是17.17min，19.23min，19.35min和21.52min。根据其离子碎片图及其峰面积分析可知，相对保留时间为19.23min的为1→连接的葡萄糖，其摩尔百分含量为10.30％；相对保留时间为17.17分钟的为半乳糖残基，其糖苷键为1→类型，摩尔百分含量为7.41％；相对保留时间为19.35分钟的为半乳糖残基，其糖苷键为1→6类型，摩尔百分含量为69.53％；相对保留时间为21.52min的为半乳糖残基，其糖苷键为1→4，6类型，摩尔百分含量为9.41％。
GC-MS测定条件如下：
色谱柱：DIKMA Inertsil ODS-3(4.6mm×150mm)
检测器：UV-VIS DAD
检测波长：245nm
流动相：PBS(0.1M,pH 7.0)：乙腈＝82:18(v/v),pH 7.0
流速：1.0mL/min
进样量：10μL
色质联机AGILENT 5975GC/6890MS
色谱柱：HP-1石英毛细管柱(23m×0.25mm×0.25nm)
进样口：250℃
离子源：280℃
程序升温：120℃保持5分钟；120℃→280℃(5℃/min)，保持2分钟。
检测范围：30–400m/z
取干燥的薄荷多糖组合物30mg，以0.5mL重水(99.9％)溶解，利用Bruker-600 FT-NMR核磁共振光谱仪进行1H NMR、13C NMR、1H-1H COSY、HSQC、HMBC谱。根据所述薄荷多糖组合物的1D和2D NMR图结果谱可知，所述薄荷多糖组合物由4种糖残基组成，命名为A-D。
根据所述组合物的1H-1H COSY图谱可知，δ5.06是糖残基A的异头质子信号，δ3.82,3.99,4.00,4.07和3.77分别是糖残基A的H-2,H-3,H-4,H-5和H-6的特征峰。根据所述组合物的1H-13C COSY图谱可知，交叉峰δ5.06/98.96,3.82/70.27,3.99/72.65,4.00/73.83,4.07/68.68,3.77/62.35分别归属为该残基的H1/C1，H2/C2，H3/C3，H4/C4，H5/C5和H6/C6。根据文献报道的化学位移值，残基A为判定为t-α-D-Galp。
根据所述组合物的1H-1H COSY图谱可知，δ4.92是糖残基B的异头质子信号，3.76,3.69,3.93,4.17和3.78分别是糖残基B的H-2,H-3,H-4,H-5和H-6的特征峰。根据所述组合物的1H-13C COSY图谱可知，交叉峰δ4.92/97.82,3.76/70.82,3.69/66.32,3.93/73.85,4.17/70.90和3.78/69.32分别归属为该残基的H1/C1，H2/C2，H3/C3，H4/C4，H5/C5和H6/C6。根据文献报道的化学位移值，残基B为判定为(1→6)-α-D-Galp.
根据所述组合物的1H-1H COSY图谱可知，δ4.97是糖残基C的异头质子信号，δ3.78,3.97,4.17,3.98和3.76分别是糖残基C的H-2,H-3,H-4,H-5和H-6的特征峰。根据所述组合物的1H-13C HSQC图谱可知，交叉峰δ4.97/98.36,3.78/69.32,3.97/72.66,4.17/76.19,3.98/73.83和3.76/70.24分别归属为该残基的H1/C1，H2/C2，H3/C3，H4/C4，H5/C5和H6/C6。根据文献报道的化学位移值，残基C为判定为(1→4,6)-α-D-Galp.
根据所述组合物的1H-1H COSY图谱可知，δ4.92是糖残基D的异头质子信号，δ3.74,3.55,4.65,4.17和3.78分别是糖残基D的H-2,H-3,H-4,H-5和H-6的特征峰。根据所述组合物的1H-13C HSQC图谱可知，交叉峰δ4.92/96.77,3.74/70.17,3.55/71.77,3.65/67.88,4.17/70.9和3.78/66.24分别归属为该残基的H1/C1，H2/C2，H3/C3，H4/C4，H5/C5和H6/C6。根据文献报道的化学位移值，残基C为判定为(1→6)-α-D-Glcp。
所述薄荷多糖组合物的4种残基(A-D)的连接顺序可根据HMBC图谱结果进行判定。根据HMBC图谱可知，δ5.06/69.32可归属为AH1-BC6的交叉信号峰，由此可判定所述薄荷多糖组合物中含有α-D-Galp-(1→6)-α-D-Galp-(1→重复结构单元。δ4.92/69.32可归属为BH1-BC6,的交叉信号峰，由此可判定所述薄荷多糖组合物中含有→6)-α-D-Glcp-(1→6)-α-D-Galp-(1→重复结构单元。δ4.92/70.24可归属为BH1-CC6的交叉信号峰；δ4.92/76.19可归属为BH1-CC4的交叉信号峰，由此可知，该薄荷多糖组合物的分支点位于糖残基B的C-4位。
药效试验
利用实施例1制备得到的薄荷多糖组合物进行体外抗氧化活性实验
1、薄荷多糖组合物体外抗氧化实验
1.1DPPH是活性极强的一种以氮原子为中心的自由基，其氧化活性极高。DPPH法是根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当加入一定的自由基清除剂时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析。
实验试剂的配制：
(1)0.1mmol/L DPPH溶液：取DPPH粉末19.716mg，加95％乙醇定容于500mL容量瓶中。
(2)样品溶液的配制：配制7个不同浓度的薄荷粗多糖溶液，浓度分别为0.001mg/mL、0.005mg/mL、0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL。
(3)将DPPH-溶于95％乙醇制成0.1mmol/L溶液，在1.5mL此溶液中加入4.5mL的样品溶液。30分钟后在517nm处测定其吸光度值。反应物的吸光度值越低代表自由基清除能力越高。用蒸馏水作为空白溶液。
清除DPPH的能力用以下公式来计算：
DPPH清除率计算方法：1-(样品吸光度/对照品吸光度)×100％。
表1.薄荷多糖对DPPH自由基清除能力
Figure BDA0002269062440000081
Figure BDA0002269062440000091
由表1可知，薄荷多糖组合物在0.001-0.5mg/mL浓度范围内能不同程度地清除DPPH自由基。并且0.05mg/mL时作用效果最佳，清除率达75.29％。
1.2羟基自由基的清除作用测定
Fe3+-EDTA、抗坏血酸及H2O2产生·OH，使得脱氧核糖降解，在酸性环境中，降解产物可与硫代巴比妥酸反应，形成粉红色物质。反应式如下：
Fe3+-EDTA+Vc→Fe2+-EDTA+氧化型Vc
Fe2+-EDTA+H2O2→Fe3+-EDTA+·OH+·OH
·OH+脱氧核糖→分解物+TBA→MDA
2TBA+MDA→粉红色产物实验试剂的配制：
0.4mmol/L FeSO4溶液:取FeSO4粉末6.08mg，溶于100mL容量瓶即可。
0.2M pH7.4磷酸缓冲液：0.2M Na2HP04溶液405mL(500mL)与0.2M NaH2PO4溶液95mL(100mL)混合。
20mM H2O2溶液：取30％过氧化氢溶液0.057mL，加蒸馏水定容到25mL。
2mM维生素C：取8.807mg维生素C溶于25mL容量瓶中。
0.13mM EDTA：取EDTA 12.0965mg,用磷酸盐缓冲液定容在250mL容量瓶中。
2.0％的三氯乙酸：取5g三氯乙酸溶于250mL容量瓶中。
1％硫代巴比妥酸：取2.5g硫代巴比妥酸，先用1M NaOH溶液溶解，然后用蒸馏水定容到250mL。
1M NaOH溶液：取NaOH粉末1g，加蒸馏水定容于25mL中。
注意事项：Vc、FeSO4、EDTA要现用现配，0.1M NaOH溶解TBA用量不可过多，会使吸光度值变小。
0.1mL样品溶液与0.6mL反应缓冲液[0.2M磷酸缓冲液(pH＝7.4)，2.67mM去氧核糖和0.13mM EDTA]，0.2mL 0.4mM硫酸亚铁盐，0.05mL l2mM维生素C和0.05mL 20mM过氧化氢混合制成反应溶液。将反应溶液在37℃水浴15min，然后加入1mL 1％硫代巴比妥酸和1mL2.0％的三氯醋酸制成混合物。将混合物沸水浴15min，放入冰中冷却，在532nm下测定混合物的吸光度值。用蒸馏水作为空白溶液。反应物的吸光度值越低代表清除能力越高。
羟基的百分抑制率计算方法：(1-样品吸光度/对照品吸光度)×100％。
表2.薄荷多糖组合物对羟基自由清除能力
Figure BDA0002269062440000101
由表2可知，薄荷多糖组合物在0.5-3.0mg/mL浓度范围内能不同程度地清除羟基自由基。并2.5mg/mL时作用效果最佳，清除率达82.48％。
1.3金属离子螯合的能力测定
金属离子可直接催化脂质过氧化的起始反应，还可以催化氢过氧化物促使其分解，这是产生自由基的主要来源。一方面，少量的金属离子产生大量的自由基，另一方面金属离子又加速脂质过氧化的进行。此外，金属离子亦可催化氧分子使其形成超氧阴离子或进一步形成单重态氧，而促使脂质的氧化，活性氧和自由基对生物体的很多损伤是由金属离子导致的。而其中亚铁离子(Fe2+)是最典型的代表。Fe2+与菲洛嗪的复合物在562nm处的呈色反应，可以测得样品对Fe2+的螯合能力，样品与Fe2+螯合后造成在562nm处的吸光度值下降。
实验试剂的配制：
(1)2mM FeCl2溶液：39.762mg FeCl2·4H2O溶于100mL蒸馏水中。
(2)5mM菲洛嗪溶液：25.722mg菲洛嗪溶于10mL蒸馏水中。
(3)20mg/mL EDTA溶液：0.2gEDTA·2Na溶于10mL蒸馏水中。
注意事项：FeCl2溶液要现用现配。
螯合金属能力：1-(样品吸光度/对照品吸光度)×100％。
表3.薄荷多糖组合物对金属离子螯合能力
Figure BDA0002269062440000111
由表3可知，薄荷多糖组合物在0.01-7.5mg/mL浓度范围内能不同程度地清除DPPH自由基。并2.0mg/mL时作用效果最佳，清除率达64.36％。
2.薄荷多糖组合物的体内抗氧化活性研究
D-半乳糖衰老动物模型造模方法简便易行,价格低廉,结果相对稳定,已成为公认的衰老动物模型。D-半乳糖能引起动物的氧化应激损伤，因此在此模型的基础上进一步测定抗氧化的指标。
2.1模型的建立
雄性昆明小鼠(20±2g，8周龄)，21±1℃和50-60％相对湿度,自由摄取食物、水和保持光/暗12小时循环的环境。小鼠随机分为六组,包括正常组(灌胃15mL/kg生理盐水)，D-半乳糖模型对照组(腹腔注射D-半乳糖1.35g/kg、灌胃15mL/kg生理盐水),阳性对照组(腹腔注射D-半乳糖1.35g/kg、灌胃Vc100mg/kg)，实验组10、50、100mg/kg(腹腔注射D-半乳糖1.35g/kg、分别灌胃薄荷多糖组合物10、100、200mg/kg)，连续灌胃42天。
2.2SOD、CAT、GSH-Px、T-AOC的酶活力及MDA水平的检测
末次给药24h以后将所有小鼠眼球取血后离心(4000转/分，10分钟)获得血清。迅速移除肝脏，用生理盐水清洗后匀浆制成10％(w/v)的匀浆液，离心(4000转/分，10分钟)去掉细胞碎片，收集上清液。血清和肝脏匀浆液中SOD、CAT、T-AOC、GSH-Px的酶活力和MDA的水平按试剂盒说明书上的步骤进行测定。
表4
薄荷多糖组合物对氧化损伤小鼠血清中SOD(U/mL),CAT(U/mL),T-AOC(U/mL),GSH-Px(U/mL)及MDA(nmol/mL)水平的影响
Figure BDA0002269062440000121
aP<0.05vs.阴性对照组.
bP<0.01vs.阴性对照组.
表5
薄荷多糖组合物对氧化损伤小鼠肝脏匀浆中SOD(U/mg protein),CAT(U/mgprotein),T-AOC(U/mg protein),GSH-Px(U/mg protein)及MDA(nmol/mg protein)水平的影响
Figure BDA0002269062440000122
aP<0.05vs.阴性对照组.
bP<0.01vs.阴性对照组.
表4、5显示了小鼠血清和肝脏匀浆中SOD、CAT、GSH-Px、T-AOC的酶活力以及MDA的水平，与空白组比较，阴性对照组小鼠血清、肝脏内的酶活力受到抑制，且MDA的水平升高，具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；与阴性对照组小鼠相比，薄荷多糖组合物同程度的提高了小鼠血清与肝脏中SOD、CAT、GSH-Px活性(P<0.01或P<0.05)，降低了MDA(P<0.01或P<0.05)的水平，其中尤以50mg/kg剂量组作用最为明显(P<0.01)。

Claims (4)

1.薄荷多糖组合物的制备方法，其特征在于，
所述薄荷多糖组合物以摩尔百分比计由半乳糖84.2%、葡萄糖9.8%、甘露糖2.8%、阿拉伯糖3.2%组成、并且所述薄荷多糖组合物的分子量为26910 Da，
该方法包括下述步骤：
A、将干燥后的薄荷1000克，粉碎至40-60目，将所述薄荷粉末用15 L蒸馏水中浸泡1.5小时后进行提取，提取温度为100℃，提取时间为120分钟，过滤，残渣在相同条件下重复提取两次，过滤，合并三次提取所得滤液；
B、将所述滤液，以4000转/分钟离心10分钟，收集上清液，所得上清液在60℃减压条件下浓缩；
C、向所述浓缩液中加入95%乙醇，所加入的乙醇体积为原浓缩液的4倍，静置24小时，离心，得残渣；
D、将所述残渣溶于水中，固液比为1:5（w/w），利用截留分子量为10000 Da的膜对溶解液进行透析，透析96小时，分别收集透析内液和外液；
将上述透析内液利用截留分子量为30000 Da的膜对溶解液进行透析，透析96小时，分别收集透析内液和外液；
将上述透析外液60 ℃减压浓缩，并冷冻干燥，由此得到分子量大于10000 Da且小于等于30000 Da的级分；
E、将上述所得级分100 mg溶解于10 mL蒸馏水中，以10000转/分钟离心5分钟， 所得上清液经Sephadex G-75 凝胶柱 (3.0 cm × 90 cm)进一步纯化，蒸馏水为洗脱液，流速为0.5 mL/min, 20 min/管，苯酚硫酸法跟踪检测，收集相应多糖级分，冷冻干燥，得到分子量均一的薄荷多糖组合物。
2.以摩尔百分比计由半乳糖84.2%、葡萄糖9.8%、甘露糖2.8%、阿拉伯糖3.2%组成、并且分子量为26910Da的薄荷多糖组合物在制备具有抗氧化活性的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抗氧化活性为清除DPPH、羟基自由基、和/或金属离子螯合的能力。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抗氧化活性为增强D-半乳糖诱导氧化损伤小鼠的SOD、CAT及GSH-PX酶活性，并降低MDA水平。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009235049A (ja) * 2008-03-25 2009-10-15 Yanagi Tomotama 植物病害虫防除組成物
CN101732427A (zh) * 2008-11-24 2010-06-16 广州白云山和记黄埔中药有限公司 预防和/或治疗抑郁症和更年期综合症的药物组合物
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009235049A (ja) * 2008-03-25 2009-10-15 Yanagi Tomotama 植物病害虫防除組成物
CN101732427A (zh) * 2008-11-24 2010-06-16 广州白云山和记黄埔中药有限公司 预防和/或治疗抑郁症和更年期综合症的药物组合物
CN107057086A (zh) * 2017-04-24 2017-08-18 兰州理工大学 金银花/薄荷复合多糖水凝胶的制备方法及用途

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Structural characteristics, antioxidant properties and antiaging activities of galactan produced by Mentha haplocalyx Briq;peng jiang 等;《Carbohydrate Polymers》;20200130;第234卷;第115936页 *
薄荷多糖的提取工艺及其抗氧化、抗病毒活性的研究;李佩佩 等;《食品科技》;20141231;第39卷(第12期);第196-201页 *
酶法与微波法提取薄荷多糖的比较研究;鲍智娟;《吉林农业科学学院学报》;20160930;第25卷(第3期);第4-6页 *

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