CN110652586A

CN110652586A - Hbegf抗体在防治索拉非尼手足皮肤反应中的应用

Info

Publication number: CN110652586A
Application number: CN201910942740.XA
Authority: CN
Inventors: 何俏军; 杨波; 罗沛华
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2019-09-30
Filing date: 2019-09-30
Publication date: 2020-01-07

Abstract

本发明提供HBEGF抗体在制备防治索拉非尼手足皮肤反应的药物中的应用，所述HBEGF抗体为能够中和外源HBEGF的多克隆抗体、单克隆抗体以及基因工程抗体。HBEGF抗体浓度与血清中测得HBEGF浓度的比例为(1‑500)。本发明的研究发现HBEGF抗体能够逆转索拉非尼诱导的过度角质化，本发明经体内外实验研究证明，HBEGF抗体显著减轻索拉非尼诱导的HFSR，特异性高、靶向性强和毒副作用少。HBEGF抗体可以用于预防和治疗索拉非尼导致的HFSR，从而可以扩大索拉非尼的临床应用，可根据需求改造成一系列用于治疗索拉非尼所致HFSR的药物，应用前景较大。

Description

HBEGF抗体在防治索拉非尼手足皮肤反应中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及肝素结合性表皮生长因子(HBEGF)抗体在预防或治疗索拉非尼手足皮肤反应中的应用，尤其涉及HBEGF抗体在制备预防或治疗索拉非尼导致的手足皮肤反应药物中的新用途。

研究背景

索拉非尼作为抑制RAF-1,VEGFR-2,VEGFR-3和FLT 3等多种受体的多靶点酪氨酸激酶抑制剂，临床主要用于晚期肾癌和肝癌的一线治疗。然而，在治疗过程中，索拉非尼会引起多种不良反应，其中最为常见的为手足皮肤反应(Hand-foot skin reaction,HFSR)，主要特征为过度角质化，其发生率可达70％以上。对于严重的HFSR患者，目前采取的措施是减药或者停药，大大加剧了癌症进展的风险，最终威胁患者的生命。

由于索拉非尼诱导HFSR的分子机制未明，临床上没有很好的策略来解决这一毒副作用。对于轻度HFSR，患者可以使用角质软化剂或者润滑剂来缓解。而用药过程中产生重度HFSR的患者，需要对药物的剂量进行调整甚至中断治疗。上述疗法仅能在一定程度减轻这些症状，但却不能治愈索拉非尼诱导的HFSR。因此，找到索拉非尼诱导HFSR的分子机制，并基于该机制找到合适的干预策略治疗索拉非尼导致的手足皮肤反应具有重要意义。我们的前期研究发现血管内皮细胞释放的肝素结合表皮生长因子(HBEGF)是导致角质形成细胞过度分化进而导致HFSR的关键因子。

肝素结合性表皮生长因子(HBEGF)抗体是一种能够与HBEGF特异性识别，并阻断其信号转导，作为一种抗肿瘤药物已经进入临床试验阶段。至今尚没有其在治疗或预防索拉非尼导致的HFSR方面的报道。

发明内容

本发明的目的是提供HBEGF抗体在制备防治索拉非尼诱导的HFSR药物中的应用。所述HBEGF抗体为能够中和外源HBEGF的多克隆抗体、单克隆抗体以及基因工程抗体。HBEGF抗体浓度与血清中测得HBEGF浓度的比例为(1-500)：HBEGF(Homo sapiens)的核苷酸序列如SEQ N0.1所示、其氨基酸序列如SEQ N0.2所示；HBEGF(Mus musculus)的核苷酸序列如SEQ N0.3所示、其氨基酸序列如SEQ N0.4所示。

所述应用在体外人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)模型中小鼠抗人HBEGF单克隆抗体(Abcam,ab89241)与索拉非尼的剂量分别为250ng/mL与15μM，将索拉非尼作用HUVEC细胞24小时后，收集培养液作为条件培养基，和HBEGF抗体共同作用角质形成细胞HaCaT，同样培养24小时。所述应用在ICR小鼠模型中大鼠抗小鼠重组HBEGF单克隆抗体(R&D,MAB8239)的剂量为100ng/只,尾静脉注射给药，一周两次，连续给药4周；索拉非尼的剂量为100mg/kg，灌胃给药，一日一次，连续给药30天。

本发明的研究发现HBEGF抗体能够逆转索拉非尼诱导的过度角质化，本发明经体内外实验研究证明，HBEGF抗体显著减轻索拉非尼诱导的HFSR。HBEGF抗体可以用于预防和治疗索拉非尼导致的HFSR，从而可以扩大索拉非尼的临床应用。

本发明的优点在于：1、提供了一种能够有效预防或治疗索拉非尼诱导的手足皮肤反应的药物HBEGF抗体，在较大程度上扩大了索拉非尼的临床应用；2、抗体药物特异性高、靶向性强和毒副作用少，HBEGF抗体用于干预索拉非尼所致HFSR具有较高的临床可行性；3、HBEGF抗体可塑性强，可根据需求改造成一系列用于治疗索拉非尼所致HFSR的药物，应用前景较大。

附图说明

图1是HBEGF抗体逆转索拉非尼诱导的过度角质化。

图2是HBEGF抗体逆转索拉非尼诱导的HFSR。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例，本发明作进一步的说明。本发明通过HBEGF抗体与联合给药达到预防或治疗索拉非尼HFSR的目的。在体外、体内实验中HBEGF抗体可以逆转索拉非尼诱导的过度角质化；在体内实验中，HBEGF能够减轻索拉非尼导致的HFSR。

实施例1

在体外细胞实验模型中，给予HUVEC细胞索拉非尼15μM，24小时后收集培养液作为条件培养基单独或与250ng/mL HBEGF抗体共同给予HaCaT细胞，24小时后收集HaCaT细胞检测角质化进程指标keratin 1(KRT1),keratin 10(KRT10)和Loricrin(LOR)的mRNA水平，这些指标的增加说明角质化进程加速，进而可发生过度角质化。研究结果如图1所示：单独给予同时条件培养基的HaCaT细胞中三个角蛋白的mRNA水平显著增加，而HBEGF抗体能够完全逆转这种上调作用。说明HBEGF抗体可以抑制索拉非尼加速的角质化进程。

实施例2

20只ICR雌性小鼠，随机分成4组，分别为空白对照组、索拉非尼单给药组，HBEGF抗体单给药组及索拉非尼和HBEGF抗体合用组。空白对照组给予等量0.05％CMC-Na及100ng/只免疫球蛋白(IgG)；索拉非尼单给药组灌胃给予索拉非尼100mg/kg及100ng/只IgG；HBEGF抗体单给药组给予等量0.05％CMC-Na及100ng/只HBEGF抗体；合用组给予索拉非尼100mg/kg及100ng/只HBEGF抗体。0.05％CMC-Na与索拉非尼采用每天灌胃给药1次，连续灌胃30天；IgG与HBEGF抗体采用尾静脉注射，每周给药2次，连续给药4周。处死小鼠后，取其爪部，进行H&E染色和免疫组化。实验结果如图2所示，给予索拉非尼后，小鼠爪部的角质层厚度及分化指标KRT1明显增加，而同时给予HBEGF抗体和索拉非尼组小鼠爪部的角质层厚度、KRT1水平接近于对照组，说明HBEGF抗体能够逆转索拉非尼诱导的HFSR。

序列表

<110> 浙江大学

<120> HBEGF抗体在防治索拉非尼手足皮肤反应中的应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 625

<212> DNA

<213> HBEGF(Homo sapiens)

<400> 1

atgaagctgc tgccgtcggt ggtgctgaag ctctttctgg ctgcagttct ctcggcactg 60

gtgactggcg agagcctgga gcggcttcgg agagggctag ctgctggaac cagcaacccg 120

gaccctccca ctgtatccac ggaccagctg ctacccctag gaggcggccg ggaccggaaa 180

gtccgtgact tgcaagaggc agatctggac cttttgagag tcactttatc ctccaagcca 240

caagcactgg ccacaccaaa caaggaggag cacgggaaaa gaaagaagaa aggcaagggg 300

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tgcaaatatg tgaaggagct ccgggctccc tcctgcatct gccacccggg ttaccatgga 420

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cttctcatgt ttaggtacca taggagagga ggttatgatg tggaaaatga agagaaagtg 600

aagttgggca tgactaattc ccact 625

<210> 2

<211> 208

<212> PRT

<213> HBEGF(Homo sapiens)

<400> 2

Met Lys Leu Leu Pro Ser Val Val Leu Lys Leu Phe Leu Ala Ala Val

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Leu Ser Ala Leu Val Thr Gly Glu Ser Leu Glu Arg Leu Arg Arg Gly

20 25 30

Leu Ala Ala Gly Thr Ser Asn Pro Asp Pro Pro Thr Val Ser Thr Asp

35 40 45

Gln Leu Leu Pro Leu Gly Gly Gly Arg Asp Arg Lys Val Arg Asp Leu

50 55 60

Gln Glu Ala Asp Leu Asp Leu Leu Arg Val Thr Leu Ser Ser Lys Pro

65 70 75 80

Gln Ala Leu Ala Thr Pro Asn Lys Glu Glu His Gly Lys Arg Lys Lys

85 90 95

Lys Gly Lys Gly Leu Gly Lys Lys Arg Asp Pro Cys Leu Arg Lys Tyr

100 105 110

Lys Asp Phe Cys Ile His Gly Glu Cys Lys Tyr Val Lys Glu Leu Arg

115 120 125

Ala Pro Ser Cys Ile Cys His Pro Gly Tyr His Gly Glu Arg Cys His

130 135 140

Gly Leu Ser Leu Pro Val Glu Asn Arg Leu Tyr Thr Tyr Asp His Thr

145 150 155 160

Thr Ile Leu Ala Val Val Ala Val Val Leu Ser Ser Val Cys Leu Leu

165 170 175

Val Ile Val Gly Leu Leu Met Phe Arg Tyr His Arg Arg Gly Gly Tyr

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<211> 627

<212> DNA

<213> HBEGF(Mus musculus)

<400> 3

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gaccctccca ctggatccac aaaccagctg ctacccacgg gaggtgatcg tgctcagggg 180

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acagtcttgg ctgtggtggc tgtagtactg tcgtccgtct gtcttcttgt catcgtggga 540

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<211> 208

<212> PRT

<213> HBEGF(Mus musculus)

<400> 4

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1 5 10 15

Leu Ser Ala Leu Val Thr Gly Glu Ser Leu Glu Arg Leu Arg Arg Gly

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Leu Ala Ala Ala Thr Ser Asn Pro Asp Pro Pro Thr Gly Ser Thr Asn

35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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Lys Gly Lys Gly Leu Gly Lys Lys Arg Asp Pro Cys Leu Arg Lys Tyr

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130 135 140

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145 150 155 160

Thr Val Leu Ala Val Val Ala Val Val Leu Ser Ser Val Cys Leu Leu

165 170 175

Val Ile Val Gly Leu Leu Met Phe Arg Tyr His Arg Arg Gly Gly Tyr

180 185 190

Asp Leu Glu Ser Glu Glu Lys Val Lys Leu Gly Val Ala Ser Ser His

195 200 205

Claims

1.一种HBEGF抗体在制备预防或治疗索拉非尼手足皮肤反应药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述HBEGF抗体为能够中和外源HBEGF的多克隆抗体、单克隆抗体以及基因工程抗体。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，HBEGF中和抗体用药浓度与血清中测得HBEGF浓度的比例为1-500：1。