CN110476901A - 一种延长蠋蝽卵货架期的方法 - Google Patents

一种延长蠋蝽卵货架期的方法 Download PDF

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廖平
陈红印
张礼生
王孟卿
毛建军
李玉艳
殷焱芳
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Abstract

本发明涉及一种种延长蠋蝽卵货架期的方法，包括(1)和/或(2)；(1)用具有消毒作用的溶液和水处理亲本蠋蝽卵，孵化、饲养配对产卵，遮光条件饲养；(2)将蠋蝽卵在遮光条件下梯度降温贮存。本发明具有蠋蝽卵的保存期长等优点，对蠋蝽的生产和种质资源保存都具有重要的意义。

Description

一种延长蠋蝽卵货架期的方法
技术领域
本发明属于昆虫技术领域，尤其涉及一种延长蠋蝽卵货架期的方法。
背景技术
长期的化学农药的使用严重地威胁到我国食品及生态安全，也极大地影响到了国民健康；蠋蝽属于半翅目蝽科，是一种捕食范围广的天敌昆虫，可捕食叶甲、棉铃虫、银纹夜蛾、刺蛾、金龟子、蚜虫等40余种农林害虫的幼虫或成虫。
以天敌昆虫运用为核心的生物防治可有效控制害虫的数量，减少农药的使用。而做好天敌昆虫的室内扩繁工作是其应用于有害生物防治的首要工作。蠋蝽无滞育现象，存在蠋蝽卵货架期短，不利于大规模应用等问题。因此，如何延长蠋蝽卵的货架期、保证蠋蝽能定期大批量生产，是实现将蠋蝽应用于农林生产控制害虫的关键。
发明内容
鉴于现有技术所存在的问题，本发明提供一种延长蠋蝽卵货架期的方法，具有蠋蝽卵的保存期长等优点，对蠋蝽的生产和种质资源保存都具有重要的意义。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
本发明提供一种延长蠋蝽卵货架期的方法，包括(1)和/或(2)；
(1)用具有消毒作用的溶液和水处理亲本蠋蝽卵，孵化、饲养配对产卵，遮光条件饲养；
(2)将蠋蝽卵在遮光条件下梯度降温贮存。
本发明的有益效果是：本发明发现在上述过程中采用遮光条件，有利于延迟蠋蝽卵的发育。本发明具有蠋蝽卵的保存期长等优点，对蠋蝽的生产和种质资源保存都具有重要的意义。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，步骤(1)中，所述具有消毒作用的溶液选自乙醇溶液、甲醛溶液、碘伏、碘酊中的一种或几种。
采用上述方案的有益效果是：采用上述溶液有清洁对亲本蠋蝽卵表携带的对蠋蝽生长发育不利的微生物。
进一步，步骤(1)中，用具有消毒作用的溶液和水处理亲本蠋蝽卵的包括以下步骤：收集新产蠋蝽卵，加75％(体积百分数)乙醇溶液处理10min，吸出液体；加4％(体积百分数)甲醛溶液处理5min,吸出液体；加75％(体积百分数)乙醇溶液处理4min，吸出液体；用灭菌去离子水冲洗，并吸干卵表面水分。
采用上述方案的有益效果是：采用上述浓度的乙醇溶液有利于对亲本蠋蝽卵消毒杀菌，采用上述的浓度的甲醛溶液有利于对亲本蠋蝽卵消毒杀菌。
采用先乙醇处理、甲醛处理、再乙醇处理、最后水清洗的顺序有利于消毒杀菌更加充分。
采用上述的乙醇溶液处理时间和甲醛溶液的处理时间有利于更好地发挥该溶液消毒杀菌的效果。
进一步，加75％(体积百分数)乙醇溶液处理10min后，震荡3次，每次15s；加4％(体积百分数)甲醛溶液处理5min后，震荡1次,震荡时间15s；加75％(体积百分数)乙醇溶液处理4min后，震荡1次，震荡时间15s。
采用上述方案的有益效果是：合适的振荡次数有利于对卵块缝隙进行更好地清洁，合适的震荡时间有利于清洁卵块的同时不损坏卵块。
进一步，步骤(1)中，孵化、饲养配对产卵的方法包括以下步骤：在温度26±1℃、65±5％RH、光暗比16:8条件下，将处理过的卵块较为光滑的一面朝下放置在6-12cm灭菌玻璃培养皿中，培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿喷一次灭菌蒸馏水，直至卵孵化，孵化后的蠋蝽若虫及成虫进行常规饲养、配对、产卵。
采用上述方案的有益效果是：确保卵块表面消毒杀菌工作充足的情况下，在该环境将蠋蝽卵孵化。
进一步，步骤(1)中，遮光条件饲养的方法包括以下步骤：将待贮存的蠋蝽卵装在铺有滤纸的干净培养皿后置于不透光的盒子后再放在人工气候箱中保存。
采用上述方案的有益效果是：处理亲本卵块可有效延长其子代卵块的孵化时间，在此基础上进行遮光处理，可减少该过程中蠋蝽卵能量积累，进一步延长卵的储存时间。
进一步，步骤(2)中，将待贮存的蠋蝽卵装在铺有滤纸的干净培养皿后置于不透光的盒子后再放在人工气候箱中，以每30-60min下调1-2℃的速度将温度下调到指定温度10±1℃～15±1℃；在10±1℃～15±1℃，40±5％～70±5％RH，光暗比16:8条件下储存蠋蝽卵。
优选的，下调到指定温度15℃，优选的储存温度15±1℃，储存湿度65±5％RH。
采用上述方案的有益效果是：采用上述的降温条件有利于模拟环境温度变化、提高蠋蝽卵对环境温度的适应性，减少蠋蝽卵因环境温度突变造成的顺坏；采用上述的储存条件有利于在延长蠋蝽卵储存期的同时，提高储存后蠋蝽卵的孵化率。
进一步，蠋蝽卵贮存场所在使用前24h做好清洁工作，并用75％(体积百分数)乙醇溶液喷洒消毒两次；每个月对蠋蝽卵贮存场所进行清理消毒。
采用上述方案的有益效果是：为蠋蝽卵贮存提供清洁的场所，避免影响蠋蝽卵的保存期。
进一步，贮存的蠋蝽卵使用前，将其从贮存场所取出，置放在26±1℃，65±5％RH，光暗比16:8条件下孵化、饲养。
采用上述方案的有益效果是：合适的温度、湿度、光暗比等条件有利于蠋蝽的饲养。
附图说明
图1为实施例1中，不遮光处理条件下，不同贮存温度和贮存期的蠋蝽孵化率。
图2为实施例2中，遮光处理条件下，不同贮存温度和贮存期的蠋蝽孵化率。
图3为实施例3中，不同处理蠋蝽的孵化历期和孵化率。
图4为实施例4中，不同处理和贮存期的蠋蝽孵化率。
图5为实施例5中，不同处理和贮存期的蠋蝽孵化率。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
为了解决蠋蝽卵保存时间短的问题，本发明的一个目的是提供几种延长蠋蝽卵保存时间的方法，具体方法如下：
方法(1)：
a、蠋蝽卵贮存场所以人工气候箱为例在使用前24h做好清洁工作，并用75％(体积百分数)乙醇喷洒消毒两次，以保证人工气候箱的整洁干净；
b、将待贮存的蠋蝽卵装在铺有滤纸的干净培养皿后置于不透光的盒子(材质塑料、硬瓦楞纸板皆可)后再放在人工气候箱中，以每30-60min下调1-2℃的速度将温度下调到指定温度10±1℃～15±1℃，(优选15℃)
c、在10±1℃～15±1℃，40±5％～70±5％RH(优选15±1℃，65±5％RH，16:8(L:D))条件下储存蠋蝽卵，贮存场所可选择为人工气候箱、冰箱等；
d、每个月对蠋蝽卵贮存场所进行清理消毒；
方法(2)：
将新产蠋蝽卵收集到50ml离心管中；
a、加75％(体积百分数)乙醇没过蠋蝽卵处理10min(震荡3次，每次15s)，用移液枪吸尽离心管中的液体；加4％(体积百分数)甲醛溶液没过蠋蝽卵处理5min(震荡1次,时间15s),用移液枪吸尽离心管中的液体；加75％(体积百分数)乙醇没过蠋蝽卵处理4min(震荡1次，时间15s)，用移液枪吸尽离心管中的液体；用灭菌去离子水将卵表试剂冲洗干净，并放置在灭菌滤纸上吸干表面水分；上述75％乙醇、4％甲醛溶液可用碘伏、碘酊等有消毒作用的溶液代替，使用后用灭菌去离子水冲洗干净即可；
b、在温度26±1℃、65±5％RH、16:8(L:D)条件下，将处理过的卵块较为光滑的一面朝下放置在6-12cm灭菌玻璃培养皿中，培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿喷一次灭菌蒸馏水，直至卵孵化，孵化后的蠋蝽若虫及成虫进行实验室内常规饲养、配对、产卵(柞蚕蛹为食物)。
c、将待贮存的蠋蝽卵装在铺有滤纸的干净培养皿后置于不透光的盒子(材质塑料、硬瓦楞纸板皆可)后再放在人工气候箱中保存。
方法(3)：
将方法(2)中收集得到的蠋蝽卵按照方法(1)的方法进行贮存。
贮存的蠋蝽卵使用前，将其从贮存场所取出，置放在26±1℃，65±5％RH，16:8(L:D)条件下孵化、饲养即可。
下面通过具体实施例来进行介绍。
实施例1
蠋蝽卵贮存场所以人工气候箱为例在使用前24h做好清洁工作，并用75％(体积百分数)乙醇喷洒消毒两次，以保证人工气候箱的整洁干净；将待贮存的蠋蝽卵装在铺有滤纸的干净培养皿后置于人工气候箱中，以每30min下调2℃的速度将温度下调到指定温度T1(10℃)和T2(15℃)，在65±5％RH，16:8(L:D)条件下储存蠋蝽卵；每隔两天取出30粒蠋蝽卵，在正常温度下孵化，记录其孵化率，设置3个重复。以常温贮存的蠋蝽卵孵化历期作为对照。图1。
图1为不遮光处理条件下，检测不同贮存温度和贮存期的蠋蝽孵化率的结果。由图1可以看出，在不进行遮光处理的条件下，T2温度进行贮存的蠋蝽卵在各贮存期的孵化率均高于T1温度蠋蝽孵化率；当贮存期为26天时，T1温度下贮存的蠋蝽卵已经不能孵化。
实施例2
蠋蝽卵贮存场所以人工气候箱为例在使用前24h做好清洁工作，并用75％(体积百分数)乙醇喷洒消毒两次，以保证人工气候箱的整洁干净；将待贮存的蠋蝽卵装在铺有滤纸的干净培养皿中，将培养皿放在不透光的盒子内避光处理后再置于人工气候箱中贮存，以每30min下调2℃的速度将温度下调到指定温度T1(10℃)和T2(15℃)，在65±5％RH条件下储存蠋蝽卵；每隔两天取出30粒蠋蝽卵，在正常温度下孵化，记录其孵化率，设置3个重复。以常温贮存的蠋蝽卵孵化历期作为对照。图2。
图2为遮光处理条件下，检测不同贮存温度和贮存期的蠋蝽孵化率的结果。由图2可以看出，在进行遮光处理的条件下，T2温度进行贮存的蠋蝽卵在各贮存期的孵化率均高于T1温度蠋蝽孵化率；当贮存期为32天时，T1温度下贮存的蠋蝽卵几乎已经不能孵化。采用遮光处理有利于延长蠋蝽的贮存期。
实施例3
将新产蠋蝽卵收集到50ml离心管中，加75％(体积百分数)乙醇没过蠋蝽卵处理10min(震荡3次，每次15s)，用移液枪吸尽离心管中的液体；再加4％(体积百分数)甲醛溶液没过蠋蝽卵处理5min(震荡1次,时间15s),用移液枪吸尽离心管中的液体；再加75％(体积百分数)乙醇没过蠋蝽卵处理4min(震荡1次，时间15s)，用移液枪吸尽离心管中的液体；用灭菌去离子水将卵表试剂冲洗干净后放置在灭菌滤纸上吸干表面水分，为EG组。用灭菌去离子水做上述处理的即为PG组，用没经过任何处理的蠋蝽卵作为对照组，即CG组。在温度26±1℃、65±5％RH、16:8(L:D)条件下，将卵块较为光滑的一面朝下(或者是带有产卵介质的一面)放置在12cm灭菌玻璃培养皿中，培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿喷一次灭菌蒸馏水，直至卵孵化，孵化后的蠋蝽若虫及成虫进行实验室内常规饲养(给蠋蝽提供蒸馏水和柞蚕蛹，蒸馏水每天加一次、柞蚕蛹3～5天更换一次；若虫小群体饲养，成虫一雌一雄配对饲养)。各组共进行了5次以上处理，充分避免了实验操作偶然性，各组各配对蠋蝽四百余对，随机抽取雌雄蠋蝽各100头雌虫所产卵的孵化历期。图3。
图3为不同处理蠋蝽的孵化历期和孵化率。由图3可知处理后的蠋蝽卵孵化历期延长，但对孵化率无显著影响。
实施例4
将新产蠋蝽卵收集到50ml离心管中，加75％(体积百分数)乙醇没过蠋蝽卵处理10min(震荡3次，每次15s)，用移液枪吸尽离心管中的液体；再加4％(体积百分数)甲醛溶液没过蠋蝽卵处理5min(震荡1次,时间15s),用移液枪吸尽离心管中的液体；再加75％(体积百分数)乙醇没过蠋蝽卵处理4min(震荡1次，时间15s)，用移液枪吸尽离心管中的液体；用灭菌去离子水将卵表试剂冲洗干净后放置在灭菌滤纸上吸干表面水分，为EG组。在温度26±1℃、65±5％RH、16:8(L:D)条件下，将卵块较为光滑的一面朝下(或者是带有产卵介质的一面)放置在12cm灭菌玻璃培养皿中，培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿喷一次灭菌蒸馏水，直至卵孵化，孵化后的蠋蝽若虫及成虫进行实验室内常规饲养(给蠋蝽提供蒸馏水和柞蚕蛹，蒸馏水每天加一次、柞蚕蛹3～5天更换一次；若虫小群体饲养，成虫一雌一雄配对饲养)。将新收蠋蝽卵装在铺有滤纸的干净培养皿中，将培养皿放在不透光的盒子内避光处理后再置于人工气候箱中贮存，在65±5％RH条件下储存蠋蝽卵；每隔两天取出30粒蠋蝽卵，在正常温度下孵化，记录其孵化率，设置3个重复。试验设正常饲养不作任何处理蠋蝽卵为对照，图4。
图4为不同处理和贮存期的蠋蝽孵化率。由图4可知，亲代卵经过清洗处理蠋蝽卵，将其进行遮光处理，可保存12天左右，对其孵化率无显著影响。
实施例5
将新产蠋蝽卵收集到50ml离心管中，加75％(体积百分数)乙醇没过蠋蝽卵处理10min(震荡3次，每次15s)，用移液枪吸尽离心管中的液体；再加4％(体积百分数)甲醛溶液没过蠋蝽卵处理5min(震荡1次,时间15s),用移液枪吸尽离心管中的液体；再加75％(体积百分数)乙醇没过蠋蝽卵处理4min(震荡1次，时间15s)，用移液枪吸尽离心管中的液体；用灭菌去离子水将卵表试剂冲洗干净后放置在灭菌滤纸上吸干表面水分，为EG组。在温度26±1℃、65±5％RH、16:8(L:D)条件下，将卵块较为光滑的一面朝下(或者是带有产卵介质的一面)放置在12cm灭菌玻璃培养皿中，培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿喷一次灭菌蒸馏水，直至卵孵化，孵化后的蠋蝽若虫及成虫进行实验室内常规饲养(给蠋蝽提供蒸馏水和柞蚕蛹，蒸馏水每天加一次、柞蚕蛹3～5天更换一次；若虫小群体饲养，成虫一雌一雄配对饲养)。将新收蠋蝽卵装在铺有滤纸的干净培养皿中，将培养皿放在不透光的盒子内避光处理后再置于人工气候箱中贮存，以每30min下调2℃的速度将温度下调到指定温度T1(10℃)和T2(15℃)，在65±5％RH条件下储存蠋蝽卵；每隔两天取出30粒蠋蝽卵，在正常温度下孵化，记录其孵化率，设置3个重复。试验设正常饲养不作任何处理蠋蝽卵为对照，图5。
图5为不同处理和贮存期的蠋蝽孵化率。由图5可知，亲代卵经过清洗处理蠋蝽卵，将其进行遮光和降温处理，蠋蝽卵贮存36天仍能孵化，但研究中也发现孵化率会有所降低，在低温下，遮光可显著延长蠋蝽卵的货架期，但其孵化率会随着贮存时间的延长降低。因此，在实际应用中，总合考虑人力、时间等成本、应用范围、操作难度、需求、货架期和孵化率等因素，来从上述三种方法中进行选择应用。例如，从操作难易程度来说，选择方法(1)更为合适。单纯从货架期和孵化率来看，方法(2)更合适。方法(3)更适合于对贮存期要求很高，对孵化率要求不太严格的情况下使用。
综上所述，本发明提供了几种提高捕食性天敌昆虫蠋蝽卵货架期(即新产卵到初孵若虫出现所用时长)的方法。这几种方法分别是：方法(1)、将装有蠋蝽卵的培养皿置于不透光盒子中，用梯度降温的方法，将蠋蝽卵贮存温度降至10-15℃后贮存；方法(2)、用75％乙醇、4％甲醛溶液、灭菌去离子水等处理亲本蠋蝽卵，将处理后蠋蝽卵孵化并正常饲养配对产卵，所产卵收集到培养皿中，将装有蠋蝽卵的培养皿置于不透光盒子中置于正常饲养温度26℃中饲养；方法(3)、将方法(2)所产卵用方法(1)处理。
这几种方法操作简单，分别将蠋蝽卵的保存期延长了25d、6d、30d，效果显著，对蠋蝽的生产和种质资源保存都具有重要的意义。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种延长蠋蝽卵货架期的方法，其特征在于，包括(1)和/或(2)；
(1)用具有消毒作用的溶液和水处理亲本蠋蝽卵，孵化、饲养配对产卵，遮光条件饲养；
(2)将蠋蝽卵在遮光条件下梯度降温贮存。
2.根据权利要求1所述一种延长蠋蝽卵货架期的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述具有消毒作用的溶液选自乙醇溶液、甲醛溶液、碘伏、碘酊中的一种或几种。
3.根据权利要求2所述一种延长蠋蝽卵货架期的方法，其特征在于，步骤(1)中，用具有消毒作用的溶液和水处理亲本蠋蝽卵的包括以下步骤：收集新产蠋蝽卵，加体积分数为75％的乙醇溶液处理10min，吸出液体；加体积分数为4％的甲醛溶液处理5min,吸出液体；加体积分数为75％的乙醇溶液处理4min，吸出液体；用灭菌去离子水冲洗，并吸干卵表面水分。
4.根据权利要求3所述一种延长蠋蝽卵货架期的方法，其特征在于，加体积分数为75％的乙醇溶液处理10min后，震荡3次，每次15s；加体积分数为4％的甲醛溶液处理5min后，震荡1次,震荡时间15s；加体积分数为75％的乙醇溶液处理4min后，震荡1次，震荡时间15s。
5.根据权利要求1所述一种延长蠋蝽卵货架期的方法，其特征在于，步骤(1)中，孵化、饲养配对产卵的方法包括以下步骤：在温度26±1℃、65±5％RH、光暗比16:8条件下，将处理过的卵块较为光滑的一面朝下放置在6-12cm灭菌玻璃培养皿中，培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿喷一次灭菌蒸馏水，直至卵孵化，孵化后的蠋蝽若虫及成虫进行常规饲养、配对、产卵。
6.根据权利要求1所述一种延长蠋蝽卵货架期的方法，其特征在于，步骤(1)中，遮光条件饲养的方法包括以下步骤：将待贮存的蠋蝽卵装在铺有滤纸的干净培养皿后置于不透光的盒子后再放在人工气候箱中保存。
7.根据权利要求1-6任一项所述一种延长蠋蝽卵货架期的方法，其特征在于，步骤(2)中，将待贮存的蠋蝽卵装在铺有滤纸的干净培养皿后置于不透光的盒子后再放在人工气候箱中，以每30-60min下调1-2℃的速度将温度下调到指定温度10±1℃～15±1℃；在10±1℃～15±1℃，40±5％～70±5％RH，光暗比16:8条件下储存蠋蝽卵。
8.根据权利要求7所述一种延长蠋蝽卵货架期的方法，其特征在于，蠋蝽卵贮存场所在使用前24h做好清洁工作，并用体积分数为75％的乙醇溶液喷洒消毒两次；每个月对蠋蝽卵贮存场所进行清理消毒。
9.根据权利要求7所述一种延长蠋蝽卵货架期的方法，其特征在于，储存温度15±1℃，湿度为65±5％RH。
10.根据权利要求1-6任一项所述一种延长蠋蝽卵货架期的方法，其特征在于，贮存的蠋蝽卵使用前，将其从贮存场所取出，在26±1℃，65±5％RH，光暗比16:8条件下孵化、饲养。
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