CN110146480A - 基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明揭示了一种基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法及应用,该方法包括以下步骤:利用云母表面辅助的方法,2条DNA骨架链S1,S2和3条订书针链N1,N2,N3在水浴条件下自组装形成DNA晶格结构;利用ssDNA1修饰5 nm,10 nm,20 nm,30 nm的金纳米颗粒,同样利用云母表面辅助的方法与5条DNA链经过一步法组装,形成AuNPs晶格。本发明结合DNA纳米技术和金纳米颗粒的独特的物理化学性质,设计了五条链的DNA瓦片结构,该结构对于将AuNPs一步法,快速和高产率组装成等离子体超材料非常重要。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法及应用,可用于DNA纳米技术及检测分析技术领域。
背景技术
基于良好有序的基于金纳米颗粒的多维纳米结构,例如一维(1D)纳米线,二维(2D)纳米晶格和三维(3D)晶格因为金纳米颗粒本身独特的光学和电学性质和其在纳米电子学(nanoelectronics),纳米光子学(nanophotonics)和生物传感(biosensors)等方面的潜在应用而得到广泛关注。目前两种典型的纳米加工方法是自上而下和自下而上,与电子束光刻和聚焦离子束蚀刻所代表的自上而下方法相比,DNA定向自组装因为DNA本身的可寻址性以及可编程性,在构建组织良好的金颗粒(AuNPs)方面具有更可靠的方法。此外,由于组织状态下未出现分布状态下未观察到的新特性,因此从一维(D)到三维(3D)的AuNPs的精确排列是自下而上纳米技术的重要技术目标之一。
自1996年以来,在Mirkin和Alivisatos的小组中独立设计了单链(ss)或双链(ds)DNA作为连接链将AuNPs组装成纳米结构。结构DNA纳米技术为自组装AuNPs纳米结构提供了前所未有的机会。在过去的二十年中,已经制造出了数千个多种形状的DNA纳米结构。特别是DNA折纸技术,DNA折纸是Rothemund发明的一种DNA纳米技术,一条含有7000多个碱基的DNA链(例如M 13)折叠成图案,例如三角形,矩形等,然后通过使用上百条订书针链(staple)固定该骨架链,从而创建出任何想设计的图案。
DNA折纸的一个特别的优点是可以选择性地修改一些短staple以实现功能性纳米结构的特异性位点修饰,由于其在纳米尺度的精度,DNA纳米结构作为模板或连接链将AuNPs组织成多维离散的纳米结构,例如金纳米线,金纳米晶格和金纳米晶体。
组装AuNPs纳米结构的通常包含两个步骤:DNA结构模板的组装和AuNPs的组装,这将花费几个小时甚至几天。然而,以前的工作主要集中在研究多功能方法,以制造具有多种功能或定制光学响应的复杂等离子体结构,DNA纳米结构的稳定性设计方法以及AuNPs结构组装的省时仍有待实现。这里,利用云母表面辅助的方法,将AuNPs和五条DNA链混合在一起组装出了二维DNA晶格和AuNPs晶格。这些等离子体金纳米颗粒超材料表现出良好的拉曼增强。
当光在某种介质中传播的时候,会发生散射现象,一部分为没有能量交换的弹性散射,即瑞利散射(Rayleigh scattering);另一部分为发生能量交换的非弹性散射,即拉曼散射(Raman scattering)。利用拉曼散射光谱(Raman scattering spectroscopy)可以得到目标分子中所含基团、化学键等信息,从而达到检测的目的,这在化学、生物医学、材料学等领域具有广泛用途。但拉曼散射强度比较弱,仅是瑞利散射强度的10-6-10-9倍,这就严重限制了拉曼光谱的应用。
1974年,Fleischmann等研究人员在粗糙银电极表面首次检测到了单分子层吡啶的增强拉曼信号。1977年,Duyne和Creighton两个课题组独立地提出具有粗糙表面的贵金属能极大增强目标物的拉曼信号,即表面增强拉曼散射效应(Surface Enhanced RamanScattering),增强因子能达到104-108,达到了检测单分子目标物的水平。但迄今为止还没有利用云母表面辅助的方法,一步法组装出AuNPs晶格,并对其进行拉曼检测的研究和专利报道。
发明内容
本发明的目的就是为了解决现有技术中存在的上述问题,提出一种基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法及应用。
本发明的目的将通过以下技术方案得以实现:基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法,该方法包括以下步骤:利用云母表面辅助的方法,2条DNA骨架链S1,S2和3条订书针链N1,N2,N3在水浴条件下自组装形成DNA晶格结构;利用ssDNA1修饰5nm,10nm,20nm,30nm的金纳米颗粒,同样利用云母表面辅助的方法与5条DNA链经过一步法组装,形成AuNPs晶格。
优选地,DNA晶格的制备方法为:
S1:将摩尔浓度为5~10μmol/L的2条DNA骨架链S1,S2与摩尔浓度为5~10μmol/L的3条订书针链N1,N2,N3按浓度比1∶1混合在1.5ml的离心管中,体系溶液环境为1×TAE-Mg2+,得到DNA的混合溶液;
S2:将云母片剪成20mm×4mm的矩形长条状,用透明胶带将云母片粘至表面光滑后,插到S1步骤中得到的DNA混合溶液中,95℃水浴条件下,缓慢降温至室温,持续时间为6~8h,得到反应后的DNA晶格结构。
优选地,所述金纳米颗粒为经过ssDNA1所示的DNA序列修饰后的金纳米颗粒,通过以下步骤制得:
S10:将不同的金纳米颗粒溶液与ssDNA1按体积比为10∶1~40∶1混合,溶液环境为0.5×TBE,震荡摇匀,35~40℃条件下,孵育4~8h,得到金纳米颗粒和ssDNA1的混合溶液;
S20:往S200步骤得到的金纳米颗粒和ssDNA1的混合溶液中滴加3mol/L的氯化钠溶液,滴加4次,时间间隔为0.5~1h,每次滴加不超过6μL,保证最终溶液体系里的氯化钠在250~300mol/L;在35~40℃条件下,孵育过夜,得到加盐老化后的修饰有ssDNA1的金纳米颗粒混合溶液;
S30:采用离心去除上清液的方式除去金纳米颗粒溶液中多余的ssDNA1,纯化和浓缩S20步骤中获得的金纳米颗粒混合溶液,将最终的溶液常温下保存。
优选地,AuNPs晶格的制备方法为:
S100:将摩尔浓度为5~10μmol/L的2条DNA骨架链S1,S2与摩尔浓度为5~10μmol/L的3条订书针链N1,N2,N3按浓度比1∶1混合,不同尺寸的S30步骤中得到的浓缩后的金纳米颗粒溶液与订书针链N1,N3杂交的浓度比例分别为1∶1~1∶6,体系溶液环境为1×TAE-Mg2+,得到金纳米颗粒和DNA链的混合溶液;
S200:将云母片剪成20mm×4mm的矩形长条状,用胶带将云母片粘至表面光滑后,插到S100步骤中得到的金纳米颗粒和DNA链的混合溶液中,95℃水浴条件下,缓慢降温至室温,持续时间为6~8h,得到反应后的AuNPs晶格结构。
优选地,所述金纳米颗粒间距由DNA晶格结构上N1,N3延伸出来的与ssDNA1互补的捕获链来控制,通过加入4-MBA拉曼信后分子后增强结构的拉曼信号。
优选地,应用于拉曼检测中。
本发明采用以上技术方案与现有技术相比,具有以下技术效果:本发明结合DNA纳米技术和金纳米颗粒的独特的物理化学性质,设计了五条链的DNA瓦片结构,该结构对于将AuNPs一步法,快速和高产率组装成等离子体超材料非常重要。随着半导体和信息技术接近其物理极限,将生物系统和半导体的功能结合起来是一项巨大的挑战,将提供生物材料与传统半导体接口的潜力,这将有助于应用于实际。
通过简单的DNA瓦片的设计,实现等离子体结构的快速组装,该方法操作简单,节约成本,并且通过修饰4-MBA拉曼信号分子能够进一步增强拉曼信号。在原子力显微镜和扫描电子显微镜下成像,实现对DNA晶格和AuNPs晶格表征,并对AuNPs晶格的拉曼应用进行探究。
(1)DNA晶格结构设计简单,只需要2条DNA骨架链和3条订书针链,碱基少,与传统的DNA晶格组装相比,DNA序列短,合成成本低,错配率低;(2)借助云母表面辅助法,解决了二维DNA结构在溶液状态下不易形成致密阵列的问题;通过一步法组装DNA晶格和AuNPs晶格,与传统的DNA晶格和AuNPs晶格的组装步骤繁琐相比,时间成本降低,而且组装效率高;(3)4-MBA信号分子具有很强的拉曼信号,修饰AuNPs晶格结构中的AuNPs,使其在拉曼检测中更有优势;(4)借助原子力显微镜和扫描电子显微镜对DNA晶格和AuNPs晶格进行表征,具有简单、有效、低成本等优势。
附图说明
图1为本发明的一步法组装DNA晶格的原理图。
图2为本发明的一步法组装AuNPs晶格的原理图。
图3为本发明的一步法组装形成的DNA晶格的AFM图。
图4为本发明的一步法组装形成的5nmAuNPs晶格的AFM图。
图5为本发明的一步法组装形成的10nmAuNPs晶格的AFM图。
图6为本发明的一步法组装形成的20nmAuNPs晶格的SEM图。
图7为本发明的一步法组装形成的30nmAuNPs晶格的SEM图。
图8为本发明的不同尺寸的的金纳米颗粒溶液修饰4-MBA后的拉曼信号检测结果。
图9为本发明的对不同尺寸的AuNPs晶格修饰4-MBA后的拉曼信号检测结果。
具体实施方式
本发明的目的、优点和特点,将通过下面优选实施例的非限制性说明进行图示和解释。这些实施例仅是应用本发明技术方案的典型范例,凡采取等同替换或者等效变换而形成的技术方案,均落在本发明要求保护的范围之内。
本发明揭示了一种基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法,该方法包括以下步骤:利用云母表面辅助的方法,2条DNA骨架链S1,S2和3条订书针链N1,N2,N3在水浴条件下自组装形成DNA晶格结构;利用ssDNA1修饰5nm,10nm,20nm,30nm的金纳米颗粒,同样利用云母表面辅助的方法与5条DNA链经过一步法组装,形成AuNPs晶格。
本发明所述DNA晶格结构构建方法如下,如图1所示:2条DNA骨架链S1,S2与3条订书针链N1,N2,N3,通过特异性杂交形成矩形的DNA瓦片结构,借助云母表面辅助的方法,水浴条件下自然降温形成DNA晶格结构。
本发明所述AuNPs晶格结构构建方法如下,如图2所示:图中的5条链和修饰好巯基DNA的不同尺寸的金纳米颗粒分别混合在一起,借助云母表面辅助的方法,订书钉链N1,N3延伸出来的捕获链会在接下来的自组装过程种与巯基DNA修饰的不同尺寸的金纳米颗粒进行特异性杂交,水浴条件下自然降温形成AuNPs晶格结构。自组装形成的AuNPs晶格通过4-MBA拉曼信号分子修饰以后进行拉曼信号检测。
实施例1制备DNA晶格
(1)将摩尔浓度为5μmol/L的2条DNA骨架链S1,S2与摩尔浓度为5μmol/L的3条订书针链N1,N2,N3按1∶1混合,体积为100μL,体系溶液环境为1×TAE-Mg2+,此时得到100μL的DNA混合溶液;
(2)将云母片剪成20mm×4mm的矩形长条状,用透明胶带将云母片粘至表面光滑后,插到DNA混合溶液中,95℃水浴条件下,缓慢降温至室温,持续时间为6h。
通过原子力显微镜表征本实施例制备获得的DNA晶格的形貌,结果如图3所示。从AFM图结果可见,本实施例制备获得的DNA晶格能够清楚的看到二维边界和致密的DNA排布。
实施例2制备经ssDNA1修饰的不同尺寸的金纳米颗粒
分别取200μL 5nm,10nm,20nm,30nm金纳米颗粒溶液,制备ssDNA1修饰的金纳米颗粒:
(1)往四组200μL的金纳米颗粒溶液中分别加入22μL5×TBE,保证此时的溶液环境为~0.5×TBE;
(2)分别取10μL,2.5μL,1μL,1μL的100μM的ssDNA1加入到步骤(1)中的四组溶液中,用移液枪混匀之后,放置于恒温摇匀仪上震荡,温度设置为37℃,转速设置为250rpm,孵育4h;
(3)分别往步骤(2)的四组溶液中滴加3mol/L的氯化钠溶液,每次滴加6μL,间隔时间为0.5h,滴加4次后,滴加完毕后37℃静置过夜;
(4)步骤(3)结束后,通过离心机离心去除多余的ssDNA1,达到纯化和浓缩金纳米颗粒的效果,离心参数分别为12000rpm/25min,10000rpm/15min,8000pm/10min,5000rpm/10min,离心纯化四次,得到10μL浓缩后的金纳米颗粒溶液。
其中,与3’修饰捕获链的订书针链N1,N3互补的SH-DNA序列如下:
5’-TTTTTTTTTTTTTTTAGCGA-3’,(ssDNA1)。
实施例3制备AuNPs晶格
(1)将摩尔浓度为5μmol/L的2条DNA骨架链S1,S2与摩尔浓度为5μmol/L的3条订书针链N1,N2,N3按浓度比1∶1混合,不同尺寸的实施例2中得到的金纳米颗粒与订书针链N1,N3杂交的比例分别1∶1,1∶2,1∶4,1∶6,体系溶液环境为1×TAE-Mg2+,此时得到100μL的金纳米颗粒和DNA的混合溶液;
(2)将云母片剪成20mm×4mm的矩形长条状,用胶带将云母片粘至表面光滑后,插到金纳米颗粒和DNA的混合溶液中,95℃水浴条件下,缓慢降温至室温,持续时间为6h。
从图4-图7中可以看到合成的AuNPs晶格,随着金球尺寸的增大,金球的致密程度降低,这是因为对于二维DNA纳米结构来说,DNA之间的作用力更大,组装后的金纳米颗粒之间的斥力也越来越大。
其中,DNA晶格结构的骨架链S1,S2和订书针单链N1,N2,N3的序列分别如下:
5’-GAGATCCAGCATTCACAGGGCTGGGCATAGAAGTCAGGGCAGAGACGAGTTGAGAATACGAGTAGAATGCGAACTGGT-3’,(S1)。
5’-TGAATGCTGGATCTCTGAGAATACGAGTTGAGAATCCGACCATTGTGCGCTATCTTCATCTTAACCAGTTCGCATTCT-3’,(S2)。
5’-AAAAAAAAAAAAAAACAGCCCTGTAAGATGAAGATAGCGTCTATGCC-3’,(N1)。
5’-CCCTGACT CACAATGG TCGGATTC CGTCTCTG-3’,(N2)。
5’-AAAAAAAAAAAAAAATCTCAACTTCAACTCGTATTCTCAACTCGTAT-3’,(N3)。
实施例4对AuNPs晶格的拉曼信号检测
将5nm,10nm AuNPs晶格溶液中的云母片取出后用超纯水冲洗干净之后用N2吹干,用胶带将其粘在原子力显微镜样品台上进行表征,通过图4和图5的AFM图可以看出金球之间排列致密;同样将20nm,30nm AuNPs晶格溶液中的云母片用N2吹干后,使用导电胶带粘在扫描电子显微镜样品台上进行表征,由于云母片的导电性能低,所以需要对云母片上的样品进行喷金处理,通过图6和图7的SEM图可以看出随着尺寸的增加,金纳米颗粒之间的致密程度降低。在进行拉曼检测时,将10μL 1mmol/L的4-MBA分子滴到冲洗干净的云母片上,拉曼分子与样品吸附3h以上进行拉曼检测。通过图8所示,5nm和10nm的AuNPs溶液拉曼信号都没有明显的4-MBA的信号峰,这是由于金纳米颗粒的尺寸小;20nm和30nm的AuNPs溶液在1075cm-1和1580cm-1处有4-MBA的信号峰,但是信号强度弱,分别是253.68a.u.和429.93a.u.。
通过图9所示,5nm和10nm的AuNPs晶格拉曼信号虽然很弱,但是出现了4-MBA的信号峰,信号强度分别是94.32a.u.和102.34a.u.。20nm和30nm的AuNPs晶格在1075cm-1和1580cm-1处都有明显的拉曼信号峰,信号强度分别是1927.94a.u.和2456.63a.u.,比相应尺寸的AuNPs溶液拉曼强度分别增强了7.5倍和5.7倍。
随着尺寸的增大,AuNPs晶格的拉曼强度逐渐增大。有以上结果可以得出以下结论:通过DNA纳米结构自组装形成的AuNPs晶格,对比单纯的AuNPs溶液,金纳米颗粒之间的间距通过捕获链的杂交得到了控制,从而实现了拉曼信号分子检测强度的增大,有力地证实了本发明所述的DNA纳米结构的设计的优越性以及检测信号分子的可靠性。
本发明揭示了一种基于表面辅助,简单快速和高效的一步法组装DNA晶格结构的新方法,降低了实验成本,提高了组装效率,并且成功的利用一步法构建出AuNPs晶格结构,该AuNPs晶格结构具有明显的拉曼信号增强。
本发明尚有多种实施方式,凡采用等同变换或者等效变换而形成的所有技术方案,均落在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:利用云母表面辅助的方法,2条DNA骨架链S1,S2和3条订书针链N1,N2,N3在水浴条件下自组装形成DNA晶格结构;利用ssDNA1修饰5nm,10nm,20nm,30nm的金纳米颗粒,同样利用云母表面辅助的方法与5条DNA链经过一步法组装,形成AuNPs晶格。
2.根据权利要求1所述的基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法,其特征在于:
DNA晶格的制备方法为:
S1:将摩尔浓度为5~10μmol/L的2条DNA骨架链S1,S2与摩尔浓度为5~10μmol/L的3条订书针链N1,N2,N3按浓度比1∶1混合在1.5ml的离心管中,体系溶液环境为1×TAE-Mg2+,得到DNA的混合溶液;
S2:将云母片剪成20mm×4mm的矩形长条状,用透明胶带将云母片粘至表面光滑后,插到S1步骤中得到的DNA混合溶液中,95℃水浴条件下,缓慢降温至室温,持续时间为6~8h,得到反应后的DNA晶格结构。
3.根据权利要求1所述的基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法,其特征在于:
所述金纳米颗粒为经过ssDNA1所示的DNA序列修饰后的金纳米颗粒,通过以下步骤制得:
S10:将不同的金纳米颗粒溶液与ssDNA1按体积比为10∶1~40∶1混合,溶液环境为0.5×TBE,震荡摇匀,35~40℃条件下,孵育4~8h,得到金纳米颗粒和ssDNA1的混合溶液;
S20:往S200步骤得到的金纳米颗粒和ssDNA1的混合溶液中滴加3mol/L的氯化钠溶液,滴加4次,时间间隔为0.5~1h,每次滴加不超过6μL,保证最终溶液体系里的氯化钠在250~300mol/L;在35~40℃条件下,孵育过夜,得到加盐老化后的修饰有ssDNA1的金纳米颗粒混合溶液;
S30:采用离心去除上清液的方式除去金纳米颗粒溶液中多余的ssDNA1,纯化和浓缩S20步骤中获得的金纳米颗粒混合溶液,将最终的溶液常温下保存。
4.根据权利要求3所述的基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法,其特征在于:
AuNPs晶格的制备方法为:
S100:将摩尔浓度为5~10μmol/L的2条DNA骨架链S1,S2与摩尔浓度为5~10μmol/L的3条订书针链N1,N2,N3按浓度比1∶1混合,不同尺寸的S30步骤中得到的浓缩后的金纳米颗粒溶液与订书针链N1,N3杂交的浓度比例分别为1∶1~1∶6,体系溶液环境为1×TAE-Mg2+,得到金纳米颗粒和DNA链的混合溶液;
S200:将云母片剪成20mm×4mm的矩形长条状,用胶带将云母片粘至表面光滑后,插到S100步骤中得到的金纳米颗粒和DNA链的混合溶液中,95℃水浴条件下,缓慢降温至室温,持续时间为6~8h,得到反应后的AuNPs晶格结构。
5.根据权利要求1所述的基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法,其特征在于:所述金纳米颗粒间距由DNA晶格结构上N1,N3延伸出来的与ssDNA1互补的捕获链来控制,通过加入4-MBA拉曼信后分子后增强结构的拉曼信号。
6.基于表面辅助法DNA晶格和AuNPs晶格的一步法组装方法的应用,其特征在于:应用于拉曼检测中。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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