CN110117554B - 一种微生物菌剂、制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物制药领域，具体地说是一种微生物菌剂的制备方法和应用。本发明所提供的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12‑1，已于2016年09月23日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为：CGMCC)，保藏号为：CGMCC No.13033，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明还提供了一种菌剂，其活性成分为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12‑1。本发明的菌剂对马铃薯疮痂病的防治有较好的效果，可以用于马铃薯疮痂病的生物防治。

Description

一种微生物菌剂、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及微生物菌剂技术领域。
背景技术
马铃薯疮痂病，是一种危害马铃署块茎植物病害。表现为块茎表面出现近圆形至不定形木栓化疮痂状淡褐色病斑或斑块，手摸质感粗糙。一般分为两种发病症状，分别是网纹状病斑和裂口状病斑。通常病斑虽然仅限于皮层，但被害薯块质量和产量仍可降低，不耐贮藏，且病薯外观不雅，商品品级大为下降，招致一定的经济损失。以前在我国境内由于发病率不高，为害面积不大，所以没有引起人们的重视。但近些年来，在内蒙、河北、山东等地区的发病面积越来越大，引起的经济损失也非常可观。因此，迫切需要对这种病害进行科学防治。
根据人们长期对病原微生物的分离鉴定研究，已经确定引起马铃薯疮痂病的病原菌主要为疮痂链霉菌等。并且这些致病菌属于条件致病菌，即在土壤环境偏碱性条件下容易生长和引起马铃薯病害，而在偏酸性土壤环境中则很少出现。
防治方法主要有以下几种：(1)、选用无病种薯；(2)、多施有机肥或绿肥，可部分抑制发病；(3)、与葫芦科、豆科、百合科蔬菜进行5年以上轮作；(4)选择保水好的菜地种植，结薯期遇干旱应及时浇水；(5)、化学预防：一些化学农药可以用来防治疮痂病；(6)生物防治法：筛选对疮痂病病原菌有良好抑制效果且定植能力强的微生物，在生产种薯过程中及农田种植过程中施用，达到抑制病原菌生长的效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种有效防治马铃薯疮痂病的含有特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1的菌剂。
本发明所提供的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1，已于2016年09月23日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为：CGMCC)，保藏号为：CGMCC No.13033，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
为实现上述目的，本发明所述的微生物菌剂，它的活性成分为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1。
微生物菌剂的制备方法：
1)马铃薯固体培养基(g/L)制备：马铃薯浸取液1L，葡萄糖20g，pH自然；固体培养基加入15g琼脂；
2)特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1在马铃薯固体培养基上活化3次；
3)取1环于50ml马铃薯液体培养基，28℃，摇床培养2天；
4)发酵液经12,000r/min离心1min钟后，弃上清，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，制备细胞悬液。
微生物菌剂的应用：
活性成分为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1的微生物菌剂通过对(疮痂病链霉菌)疮痂病链霉菌(Streptomyces scabiei)、酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)、肿痂链霉菌(S.Turgidiscabies)、加利利链霉菌(S.galilaeus)的抑菌试验，发现其能不同程度抑制这些病原微生物生长，能对马铃薯疮痂病起到有效的防治作用。
本发明的微生物菌剂具有以下优点：1)本发明的微生物菌剂为纯生物制剂，对人体无害，不污染环境，可以解决化学农药污染带来的环境问题；同时微生物菌剂施入土壤后可以改善土壤质量，对降低病害发生具有积极的作用。2)本发明的微生物菌剂可以有效防治马铃薯疮痂病。
附图说明
图1菌剂对疮痂病链霉菌4.0076的抑菌效果图。
图2菌剂对疮痂病链霉菌4.1765的抑菌效果图。
图3菌剂对酸疮痂链霉菌4.1789的抑菌效果图。
图4菌剂对微白黄链霉菌4.3598的抑菌效果图。
图5菌剂对疮痂病链霉菌4.0076、酸疮痂链霉菌、微白黄链霉菌4.3598三种混合菌株的抑菌效果图。
具体实施方式
1、微生物菌剂的制备方法：
1)马铃薯固体培养基(g/L)制备：马铃薯浸取液1L，葡萄糖20g，pH自然；固体培养基加入15g琼脂；
2)特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1在马铃薯固体培养基上活化3次；
3)取1环于50ml上述马铃薯液体培养基，28℃，摇床培养2天；
4)发酵液经12,000r/min离心1min钟后，弃上清，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，制备细胞悬液。发酵液、发酵液上清、细胞悬液三种形态都用于抑菌试验。
2、马铃薯固体培养基的制备：
1)马铃薯培养基(g/L)：马铃薯浸取液1L，葡萄糖20g，pH自然；固体培养基加入15g琼脂。
2)ISP-2培养基(g/L)：酵母提取物4g，麦芽提取物10g，葡萄糖4g，PH7.3，加入15g琼脂。
3、特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1培养：
特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1在马铃薯固体培养基上活化3次。然后取1环于50ml马铃薯液体培养基，28℃，摇床培养2天。发酵液经12,000r/min离心1min钟后，弃上清，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，制备细胞悬液。
4、病原菌培养方法：
1)疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)4.0076：在马铃薯培养基上培养4－5天，28℃。
2)酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)4.1789和微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)4.3598在ISP-2培养基上培养4－5天，28℃。
5、病原菌悬液制备：
用3ml无菌水刮取孢子和菌丝体，制成一定浓度的病原体悬液；要求50ul体积涂布平板时菌丝生长后可以铺满平板表面。
6、单独抑菌试验：
疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)4.0076、酸疮痂链霉菌(Streptomycesacidiscabies)4.1789、微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)4.3598各50ul涂布于不同平板上(PDA，ISP-2)，在平板局部点接10ul特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)。28℃培养。2天以后观察。
结果：特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1对三株菌株都有效果，其中对疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)4.0076和微白黄链霉菌(Streptomycesalbidoflavus)4.3598效果最为明显。
7、抑制混合菌生长试验：
疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)4.0076、酸疮痂链霉菌(Streptomycesacidiscabies)4.1789、微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)4.3598各50ul涂布于同一平板上(ISP-2)，在平板局部点接10ul特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1。28℃培养。2天以后观察。
结果：特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1对混合病原菌具有抑制效果。
8、特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1的pH生长范围：
将特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌株T12-1在pH值为4,5,6,7,8,9的马铃薯液体培养基，28℃，摇床培养2天。
结果：除了在pH值为4条件下不生长外，在5,6,7,8,9中都有良好的生长。

Claims (3)

1.一种微生物菌剂，其特征在于，活性成分为特基拉芽孢杆菌（Bacillustequilensis）菌株T12-1；所述特基拉芽孢杆菌（Bacillus tequilensis）菌株T12-1保藏编号为CGMCC NO.13033。
2.一种微生物菌剂的制备方法，其特征在于： 1）马铃薯浸取液1L，葡萄糖20g，pH自然，固体培养基加入15g琼脂； 2）权利要求1所述的特基拉芽孢杆菌（Bacillus tequilensis）菌株T12-1在马铃薯固体培养基上活化3次； 3）取1环于50ml上述马铃薯液体培养基，28℃，摇床培养2天； 4）发酵液经12,000r/min离心1min钟后，分离上清，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，制备细胞悬液； 5）发酵液、发酵液上清、细胞悬液各10ul用于抑菌试验。
3.权利要求1所述的微生物菌剂在制备防治马铃薯疮痂病药物中的应用，其特征在于：所述的马铃薯疮痂病是由疮痂病链霉菌、酸疮痂链霉菌、和/或微白黄链霉菌引起。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111187743B (zh) * 2020-03-13 2023-04-11 宁夏大学 一株苏云金芽孢杆菌菌株yn-2-2及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106701624A (zh) * 2016-12-29 2017-05-24 山东农业大学 一株拮抗枸杞根腐病的特基拉芽孢杆菌及其应用
CN107034158A (zh) * 2017-04-27 2017-08-11 中国科学院微生物研究所 暹罗芽孢杆菌b‑3及其应用
CN107432286A (zh) * 2016-05-25 2017-12-05 中国科学院微生物研究所 一种微生物菌剂及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107432286A (zh) * 2016-05-25 2017-12-05 中国科学院微生物研究所 一种微生物菌剂及其制备方法和应用
CN106701624A (zh) * 2016-12-29 2017-05-24 山东农业大学 一株拮抗枸杞根腐病的特基拉芽孢杆菌及其应用
CN107034158A (zh) * 2017-04-27 2017-08-11 中国科学院微生物研究所 暹罗芽孢杆菌b‑3及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
柑橘内生菌的分离、鉴定及其对沙皮病的防治作用;刘胜贵等;《生命科学研究》;20011231(第05期);第57-62页 *
降解食品中胆固醇的芽孢杆菌T12-1的筛选与应用研究;牛天贵等;《中国农业大学学报》;20161231(第01期);第76-80页 *

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