CN109996440A - Ve-ptp敲除 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及青光眼，且更具体地涉及使用VE‑PTP无效等位基因来挽救眼内压升高的青光眼症状。本发明还涉及VE‑PTP的条件性敲除以挽救促血管生成素1和促血管生成素2条件性敲除小鼠中表达升高的眼内压的青光眼症状。本发明还涉及VE‑PTP无效等位基因的用途。
Description
发明领域
本发明涉及青光眼，且更具体地涉及VE-PTP抑制用于挽救眼内压升高的青光眼症状的用途。
背景技术
全世界约有六千万患者患有青光眼，这是一种毁灭性的疾病，无法治愈，导致全球800万人双侧失明。目前的疗法只能减缓疾病的进展。导致失明的最主要的风险因素是眼内压升高。
施勒姆管(Schlemm’s canal)是由眼睛周围的一连串细胞形成的专用血管。在美国专利申请号14/790,884(公开号US 2016/0000871A1)中描述了一种小鼠模型，其中促血管生成素1/促血管生成素2(“Angpt 1/Angpt 2”)双敲除小鼠和Tie2敲除小鼠由于眼内压升高而发展出眼积水。Angpt1/Angpt 2双敲除小鼠和Tie2敲除小鼠均缺少施勒姆管。促血管生成素信号传导对施勒姆管的形成具有剂量依赖性影响。Tie2信号传导(活化)对施勒姆管形成具有剂量依赖性影响。Tie2活化促进施勒姆管的管形成(canalogenesis)，并且活化Tie2的因子包括血管内皮-磷酸酪氨酸磷酸酶(“VE-PTP”)抑制剂。
发明概述
在本发明的一个实施方案中，存在一种产生具有降低的VE-PTP的小鼠的方法，其包括用VE-PTP无效等位基因替换至少一个野生型VE-PTP等位基因。
在本发明的另一个实施方案中，存在一种产生具有降低的VE-PTP的小鼠的方法，其包括用VE-PTP无效等位基因替换杂合Tie2小鼠中的至少一个野生型VE-PTP等位基因。
在Tie2杂合小鼠中引入的VE-PTP无效等位基因用于降低高眼内压的表型表达的用途。
本发明的一个实施方案是VE-PTP无效等位基因。
在本发明的一个实施方案中，存在一种小鼠模型，其包含具有促血管生成素1(Angiopoietin 1)、促血管生成素2(Angiopoietin 2)和VE-PTP的条件性三敲除的小鼠。
在本发明的另一个实施方案中，存在一种小鼠模型，其包含具有VE-PTP条件性完全敲除的小鼠。
在本发明的一个实施方案中，存在产生条件性三敲除小鼠的方法，其包括在Ang1/2条件性敲除的小鼠中用VE-PTP无效等位基因替换两个野生型VE-PTP等位基因。
在本发明的一个实施方案中，存在产生VE-PTP条件性敲除小鼠的方法，其包括在小鼠中用VE-PTP无效等位基因替换两个野生型VE-PTP等位基因。
在本发明的一个实施方案中，存在VE-PTP无效等位基因用于在Ang1/2条件性敲除的小鼠中降低高眼内压的用途。
在本发明的一个实施方案中，存在VE-PTP无效等位基因用于在表达高眼内压表型的小鼠中降低高眼内压的用途。
在本发明的一个实施方案中，存在VE-PTP无效等位基因用于在Ang1/2条件性敲除的小鼠中消除高眼内压的表型表达的用途。
附图简述
图1是对照小鼠和VE-PTP杂合小鼠中Tie2磷酸化水平的凝胶比较。
图2是对照小鼠和VE-PTP杂合小鼠中Tie2磷酸化水平的图表比较。
图3是对照小鼠、VE-PTP杂合小鼠、Tie2杂合小鼠和Tie2杂合/VE-PTP杂合小鼠的眼内压测量值的比较。
图4a是对照小鼠、Ang 1/2条件性敲除小鼠和Ang 1/2/VE-PTP条件性敲除(“3KO”)小鼠中眼睛的表型外观和施勒姆管的组织学横截面的比较。
图4b是对照小鼠、VE-PTP条件性敲除小鼠、Ang 1/2条件性敲除小鼠和Ang 1/2/VE-PTP条件性敲除(“3KO”)小鼠的眼内压测量值的比较。
详细说明
用于本发明小鼠的构建体、引物和组分与用于先前在美国专利申请号14/790,884(公开号US 2016/0000871 A1)中描述的小鼠的相同。根据该参考文献，已知A1A2FloxWB ΔE16.5(cKO或条件性敲除)小鼠发生双侧眼积水且在促血管生成素1和促血管生成素2条件性敲除小鼠(“Ang1/2条件性敲除小鼠”)中缺少施勒姆管和眼内压(“IOP“)升高。
Angpt/Tie2信号传导在管形成中具有剂量依赖性作用。虽然Angpt 1/2双敲除完全缺少施勒姆管，但Angpt 1敲除的小鼠仅具有保留一些管组织的亚型表型。单独的Angpt2敲除没有效果，这表明Angpt 1是主要配体，而Angpt 2可提供一些补偿。眼压(“IOP”)测量值验证了这些组织学结果，因为Angpt 1敲除小鼠的压力升高(尽管不像双敲除那样升高)，而Angpt 2敲除是正常的。Tie2活化(即Angpt/Tie2信号传导的水平)对管形成具有剂量依赖性影响。
本发明的一个实施方案是VE-PTP无效等位基因。本发明的一个实施方案是通过将VE-PTP无效等位基因引入对照小鼠或Tie2杂合小鼠以产生小鼠的方法和产生的小鼠。本发明的一个实施方案是杂合VE-PTP小鼠。在本发明的另一个实施方案中，存在杂合VE-PTP/杂合Tie2小鼠。
如图1和2所示，与对照同窝小鼠相比，VE-PTP杂合小鼠具有升高的Tie2磷酸化。
图1是对照小鼠和杂合VE-PTPLacZ/WT小鼠之间的比较，其显示虽然VE-PTPLacZ/WT小鼠与对照相比具有更少VE-PTP，但是VE-PTPLacZ/WT小鼠中pTie2和Tie2的水平更高。
图2显示对照中Tie2的磷酸化小于VE-PTPLacZ/WT小鼠中Tie2磷酸化的一半。
引入VE-PTP无效等位基因(VE-PTP杂合性)可挽救上述Tie2杂合小鼠的发育表型并防止它们发展升高的IOP。图3显示杂合VE-PTP小鼠或组合Tie2/VE-PTP杂合小鼠中的眼内压(“IOP”)接近对照中所见的正常水平，并且远小于Tie2敲除小鼠。
在该实施方案中，VE-PTP杂合小鼠衍生自Charles River的WT-LacZ小鼠，所述WT-LacZ小鼠中引入了VE-PTP无效等位基因以产生“VE-PTPLacZ/WT”小鼠。
这表明，在Tie2杂合小鼠中引入VE-PTP无效等位基因时发生青光眼表型的挽救。
在介导Tie2或Tie2杂合小鼠的情况下敲除VE-PTP，将小鼠从升高的IOP的表型中挽救(即VE-PTP降低，IOP正常，且因此小鼠没有增加眼压的青光眼症状)。
图4a是对照小鼠、Ang 1/2条件性敲除小鼠和Ang 1/2/VE-PTP条件性敲除(“3KO”)小鼠中眼睛的表型外观和施勒姆管的组织学横截面的比较。
图4b是对照小鼠、条件性VE-PTP敲除小鼠、Ang 1/2条件性敲除小鼠和Ang 1/2/VE-PTP条件性敲除(“3KO”)小鼠的眼内压测量值的比较。
Angpt 1/2条件性双敲除小鼠完全缺少施勒姆管，并且与对照小鼠相比具有突出的眼睛。眼内压(“IOP”)测量验证了这些表型和组织学结果，因为Angpt 1/2条件性敲除小鼠具有升高的压力，而对照和VE-PTP条件性敲除的小鼠是正常的。
如图4a和b中所示，Ang 1/2条件性敲除还VE-PTP条件性敲除的小鼠接近眼睛的正常表型、施勒姆管的组织学外观和眼内压测量值。
与只有Ang 1和Ang 2被敲除而VE-PTP仍然存在的“青光眼”小鼠相比，当Ang 1/Ang 2和VE-PTP在小鼠中都被条件性敲除时，存在挽救的正常IOP。
本发明的一个实施方案是通过将VE-PTP无效等位基因引入Ang 1/2条件性敲除小鼠中来产生小鼠的方法和产生的小鼠。本发明的另一个实施方案是纯合的VE-PTP条件性敲除小鼠。
如图4b所示，3KO小鼠、VE-PTP条件性敲除小鼠和对照小鼠与具有升高的IOP的Ang1/2条件性敲除小鼠相比具有相似的IOP。
引入VE-PTP无效等位基因(VE-PTP纯合子)可拯救上述Ang 1/2条件性敲除小鼠的发育表型并防止它们发展升高的IOP。
这表明，将VE-PTP无效等位基因引入Ang 1/2条件性敲除的小鼠发生青光眼表型的拯救。
在抑制Tie2或Ang 1/2条件性敲除小鼠的情况下敲除VE-PTP，将小鼠从升高的IOP表型中拯救(即消除VE-PTP，IOP是正常的，且因此小鼠没有增加的IOP的青光眼症状)。
Claims (11)
1.一种产生具有降低的VE-PTP的小鼠的方法，其包括用VE-PTP无效等位基因替换至少一个野生型VE-PTP等位基因。
2.权利要求1所述的方法，其中所述小鼠还是杂合的Tie2小鼠。
3.引入Tie2杂合的小鼠VE-PTP无效等位基因用于降低高眼内压的表型表达的用途。
4.一种VE-PTP无效等位基因。
5.一种小鼠模型，其包含具有促血管生成素1、促血管生成素2和VE-PTP的条件性三敲除的小鼠。
6.一种小鼠模型，其包含具有VE-PTP条件性完全敲除的小鼠。
7.产生条件性三敲除小鼠的方法，其包括在Ang 1/2条件性敲除的小鼠中用VE-PTP无效等位基因替换两个野生型VE-PTP等位基因。
8.产生VE-PTP条件性敲除小鼠的方法，其包括在小鼠中用VE-PTP无效等位基因替换两个野生型VE-PTP等位基因。
9.VE-PTP无效等位基因用于在Ang 1/2条件性敲除的小鼠中降低高眼内压的用途。
10.VE-PTP无效等位基因用于在表达高眼内压表型的小鼠中降低高眼内压的用途。
11.VE-PTP无效等位基因用于在Ang 1/2条件性敲除的小鼠中消除高眼内压的表型表达的用途。
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