CN109813901A - 一种检测乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法 - Google Patents
一种检测乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109813901A CN109813901A CN201711162989.6A CN201711162989A CN109813901A CN 109813901 A CN109813901 A CN 109813901A CN 201711162989 A CN201711162989 A CN 201711162989A CN 109813901 A CN109813901 A CN 109813901A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ethiprole
- gold
- film
- solution
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法，涉及动物源食品兽药残留检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含乙虫腈单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有乙虫腈蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测乙虫腈，方便、快捷、结果准确。
Description
技术领域
本发明涉及谷物食品中农药残留检测技术领域，特别是涉及乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法。
背景技术
乙虫腈（ethiprole）是一种新型吡唑类杀虫剂，化学名称为5-氨基-1-（2，6-二氯-对三氟甲基苯基）-4-乙基亚磺（硫）酰基吡唑-3-腈基。乙虫腈在环境中的代谢产物主要有：氧化产物RPA097973，为乙虫腈氧化后形成的砜；还原产物RPA107566，为乙虫腈还原后形成的硫化物。乙虫腈悬浮剂可用于水稻、蔬菜等多种作物，能有效防治多种咀嚼式口器和刺吸式口器害虫。随着乙虫腈的广泛施用，其在环境中的讲解归趋及残留状况就成为人们的关注热点。因此，需要发明一种工序少、操作简便检测的新方法。
发明内容
针对以上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法，可有效解决能快速、简便地检测出乙虫腈的问题。
本发明的乙虫腈胶体金检测卡，包括包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了乙虫腈-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、PVC胶板和塑料模具组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。
本发明的乙虫腈胶体金检测卡的制备方法，是由以下步骤实现：
(1)胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl4·3H2O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠(Na3C6H5O7·2H2O)溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；
(2)抗体的预处理：将要标记的乙虫腈抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/ml，过0.22 µm滤膜；
(3)胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40 mL，用0.25 mol/L K2CO3调节胶体金溶液pH至 8.5，电磁搅拌器250 r/min搅拌，逐滴加入4 mL 含0.3 mg 抗体蛋白的蛋白溶液，反应10 min；逐滴加入4 mL 10% BSA，继续搅拌反应10 min；金标抗体溶液常温低速（1500 r/min）离心10 min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000r/min 离心20 min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1 mL，制备成乙虫腈单克隆抗体胶体金标记物；
(4)胶体金膜的制备：将步骤(3)乙虫腈蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5 µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3 h，制成含乙虫腈蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜；
(5)包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、乙虫腈蛋白质偶联物稀释成1 mg/mL，用划膜仪依次以1 µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2 h后，室温自然晾干或者37℃烘干；
(6)样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；
(7)检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。
所述步骤(5)中所包被的检测线T设在质控线C的下方；
所述步骤(6)中的样品垫处理液是由1 g小牛血清蛋白(BSA)和0.8 g氯化钠(NaCl)，用含有0.5%TRITON-100的0.01 mol/L PBS定容至100 mL；
本发明可有效用于测定乙虫腈，方法简单，方便、快捷，结果准确。
附图说明
图1为本发明乙虫腈的免疫胶体金检测卡的结构图：图中1.加样孔 2.检测线 3.质控线 4.检测孔 5.试纸条 6.检测卡外壳。
图2为本发明乙虫腈的免疫胶体金检测卡内的试纸条的剖视结构图，图中7.样品垫 8.胶体金结合垫 9.PVC胶板 10.硝酸纤维素膜 11.吸水垫 。
具体实施方式
实施例1
图1、图2所示的实施例：图中9为PVC胶板；7为样品垫；8为胶体金结合垫，该胶体金结合垫上包被了单克隆抗体胶体金标记物；10为包被膜，即硝酸纤维素膜，该硝酸纤维素膜上包被了乙虫腈-BSA和羊抗鼠IgG；11为吸水垫，由吸水材料如滤纸制成。
在PVC胶板9的一端上(样品端)粘附样品垫7、结合垫8，样品垫7和结合垫8为并排结构。
在PVC胶板9的中间粘附硝酸纤维素膜10。在硝酸纤维素膜10上设置有羊抗鼠IgG质控线3和乙虫腈-BSA检测线2。
在PVC胶板9的另一端粘附吸水垫11。硝酸纤维素膜10的一端与结合垫8略交叉，另一端与吸水垫11略交叉。该试纸条5可装入有塑料模具制成的检测卡外壳6中，制成检测卡，在检测卡外壳6的上盖上设有加样孔1和检测孔4，样品垫7正对加样孔1，硝酸纤维素膜10正对检测孔4。
实施例2
乙虫腈胶体金检测卡制备，是由以下步骤具体实现：
胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl4·3H2O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠(Na3C6H5O7·2H2O)溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；
抗体的预处理：将要标记的乙虫腈抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/ml，过0.22 µm滤膜；
胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40 mL，用0.25 mol/L K2CO3调节胶体金溶液pH至 8.5，电磁搅拌器250 r/min搅拌，逐滴加入4 mL 含0.3 mg 抗体蛋白的蛋白溶液，反应10 min；逐滴加入4 mL 10% BSA，继续搅拌反应10 min；金标抗体溶液常温低速（1500 r/min）离心10 min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000 r/min 离心20 min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1 mL，制备成乙虫腈单克隆抗体胶体金标记物；
胶体金膜的制备：将步骤(3)乙虫腈蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5 µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3 h，制成含乙虫腈蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜；
包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、乙虫腈蛋白质偶联物稀释成1 mg/mL，用划膜仪依次以1 µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2 h后，室温自然晾干或者37℃烘干；
样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；
检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。
Claims (2)
1.乙虫腈胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到：
(1)胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸HAuCl4·3H2O)5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；
(2)抗体的预处理：将要标记的乙虫腈抗体在1000 r/min，4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/ml，过0.22 µm滤膜；
(3)胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40 mL，用0.25 mol/L K2CO3调节胶体金溶液pH至 8.5，电磁搅拌器250 r/min搅拌，逐滴加入4 mL 含0.3 mg 抗体蛋白的蛋白溶液，反应10 min；逐滴加入4 mL 10% BSA，继续搅拌反应10 min；金标抗体溶液常温1500 r/min离心10 min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000 r/min离心20 min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1 mL，制备成乙虫腈单克隆抗体胶体金标记物；
(4)胶体金膜的制备：将步骤(3)乙虫腈蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5 µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3 h，制成含乙虫腈蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜；
(5)包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、乙虫腈蛋白质偶联物稀释成1 mg/mL，用划膜仪依次以1 µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2 h后，室温自然晾干或者37℃烘干；
(6)样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；
(7)检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。
2.根据权利要求1所述的乙虫腈胶体金检测卡，其特征在于所述步骤(5)中所包被的检测线T设在质控线C的下方；
所述步骤(6)中的样品垫处理液是由1 g小牛血清蛋白(BSA)和0.8 g氯化钠(NaCl)，用含有0.5%TRITON-100的0.01 mol/L PBS定容至100 mL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711162989.6A CN109813901A (zh) | 2017-11-21 | 2017-11-21 | 一种检测乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711162989.6A CN109813901A (zh) | 2017-11-21 | 2017-11-21 | 一种检测乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109813901A true CN109813901A (zh) | 2019-05-28 |
Family
ID=66598252
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711162989.6A Withdrawn CN109813901A (zh) | 2017-11-21 | 2017-11-21 | 一种检测乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109813901A (zh) |
Citations (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110293553A1 (en) * | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Tai-Teh Wu | Identification of insect attractant, arresting, and/or aggregation compounds and methods thereof |
| CN104655835A (zh) * | 2013-11-20 | 2015-05-27 | 南京亿特生物科技有限公司 | 氯丙嗪的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN104785511A (zh) * | 2015-03-18 | 2015-07-22 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一种利用生物炭修复氟虫腈和/或乙虫腈污染沉积物及其检测方法 |
| CN105510587A (zh) * | 2014-10-16 | 2016-04-20 | 镇江先创生物科技有限公司 | 新霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN105572373A (zh) * | 2014-10-17 | 2016-05-11 | 南京亿特生物科技有限公司 | 多菌灵的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN105572371A (zh) * | 2014-10-17 | 2016-05-11 | 南京亿特生物科技有限公司 | 地克珠利的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN105572372A (zh) * | 2014-10-17 | 2016-05-11 | 南京亿特生物科技有限公司 | 吡虫啉的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN106405088A (zh) * | 2015-08-03 | 2017-02-15 | 镇江亿特生物科技发展有限公司 | 吉他霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN106405073A (zh) * | 2015-08-03 | 2017-02-15 | 南京亿特生物科技有限公司 | 氟氯氰菊酯胶体金检测卡 |
| CN106568947A (zh) * | 2015-10-13 | 2017-04-19 | 镇江亿特生物科技发展有限公司 | 敌敌畏的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN106568946A (zh) * | 2015-10-13 | 2017-04-19 | 镇江亿特生物科技发展有限公司 | 丙环唑的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN106568945A (zh) * | 2015-10-13 | 2017-04-19 | 镇江先创生物科技有限公司 | 多果定的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN106568934A (zh) * | 2015-10-13 | 2017-04-19 | 镇江先创生物科技有限公司 | 丁草胺的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
-
2017
- 2017-11-21 CN CN201711162989.6A patent/CN109813901A/zh not_active Withdrawn
Patent Citations (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110293553A1 (en) * | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Tai-Teh Wu | Identification of insect attractant, arresting, and/or aggregation compounds and methods thereof |
| CN104655835A (zh) * | 2013-11-20 | 2015-05-27 | 南京亿特生物科技有限公司 | 氯丙嗪的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN105510587A (zh) * | 2014-10-16 | 2016-04-20 | 镇江先创生物科技有限公司 | 新霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN105572372A (zh) * | 2014-10-17 | 2016-05-11 | 南京亿特生物科技有限公司 | 吡虫啉的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN105572373A (zh) * | 2014-10-17 | 2016-05-11 | 南京亿特生物科技有限公司 | 多菌灵的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN105572371A (zh) * | 2014-10-17 | 2016-05-11 | 南京亿特生物科技有限公司 | 地克珠利的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN104785511A (zh) * | 2015-03-18 | 2015-07-22 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一种利用生物炭修复氟虫腈和/或乙虫腈污染沉积物及其检测方法 |
| CN106405088A (zh) * | 2015-08-03 | 2017-02-15 | 镇江亿特生物科技发展有限公司 | 吉他霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN106405073A (zh) * | 2015-08-03 | 2017-02-15 | 南京亿特生物科技有限公司 | 氟氯氰菊酯胶体金检测卡 |
| CN106568947A (zh) * | 2015-10-13 | 2017-04-19 | 镇江亿特生物科技发展有限公司 | 敌敌畏的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN106568946A (zh) * | 2015-10-13 | 2017-04-19 | 镇江亿特生物科技发展有限公司 | 丙环唑的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN106568945A (zh) * | 2015-10-13 | 2017-04-19 | 镇江先创生物科技有限公司 | 多果定的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
| CN106568934A (zh) * | 2015-10-13 | 2017-04-19 | 镇江先创生物科技有限公司 | 丁草胺的免疫胶体金检测卡及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 吴文铸等: "乙虫腈及其代谢产物在稻田中的残留消减动态研究", 《生态环境学报》 * |
| 吴文铸等: "环境样品中乙虫腈及其代谢产物残留量分析", 《生态与农村环境学报》 * |
| 罗雁: "关于乙虫腈及其代谢物残留量在水稻及其环境中检测分析的研究", 《黑龙江科技信息》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105572373A (zh) | 多菌灵的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN103048455B (zh) | 除草剂2,4-d-杀虫剂chi二联检测卡及其制备方法 | |
| CN104655835A (zh) | 氯丙嗪的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN105510587A (zh) | 新霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN205374469U (zh) | 猪蓝耳病毒抗体检测卡 | |
| CN105572371A (zh) | 地克珠利的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN105606808A (zh) | 一种a/b族链球菌胶体金免疫层析检测装置及其检测方法 | |
| CN102901818A (zh) | 检测β-兴奋剂类药物的五联检测卡及其制备方法 | |
| CN105572390A (zh) | 除草剂2,4-d的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN109813901A (zh) | 一种检测乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN106405088A (zh) | 吉他霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN105572372A (zh) | 吡虫啉的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN108226501A (zh) | 黄曲霉毒素b1的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN106568960A (zh) | 灭多威的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN106568946A (zh) | 丙环唑的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN110873801A (zh) | 甲状腺激素免疫层析试纸条及其制备方法和试剂盒 | |
| CN106568904A (zh) | 百草枯的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN109085353A (zh) | 一种白色念珠菌胶体金检测卡及其应用 | |
| CN109752535A (zh) | 一种检测组织中氯霉素的免疫胶体检测卡 | |
| CN106568947A (zh) | 敌敌畏的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN109752555A (zh) | 一种检测组织中恩诺沙星的免疫胶体检测卡 | |
| CN108226502A (zh) | 恩诺沙星的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN105572360A (zh) | 丙草胺的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN106568945A (zh) | 多果定的免疫胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN106932592A (zh) | 检测人表面活性蛋白a的胶体金试纸条及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20190528 |
|
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |