CN109765371A - 一种快速检测恶性肿瘤dna的液相纳米胶体金比色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，属于恶性肿瘤检测方法技术领域，其技术特征为：对实验用到的玻璃容器用洗洁剂洗涤，洗洁剂洗涤结束后用蒸馏水冲洗干净，然后用硅化试剂侵泡过夜，对制金器皿的内表面做硅化处理，再用蒸馏水冲洗干净，备用；配制1％(w/v)氯金酸和1％(w/v)柠檬酸钠溶液，使用孔径为0.2微米的滤膜过滤；在清洗干净的1000mL圆底烧瓶中放入磁力搅拌子1枚，加入1000mL超纯水；本发明能够根据纳米胶体金溶液的颜色变化来表征DNA甲基化是否正常，方便医务人员在临床症状出现之前即可对恶性肿瘤做出早期的诊断，利于推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及恶性肿瘤检测方法技术领域，具体是一种快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法。
背景技术
恶性肿瘤是严重威胁人类健康的高发、高死亡率疾病，早期诊断和早期治疗是防治、降低恶性肿瘤死亡率最有效的方法，因此寻找恶性肿瘤早期标志物成为人们关注的焦点，检测DNA甲基化的正常与否已成为公认的有效检测方法之一。
核酸正常的甲基化是对DNA稳定状态的修饰，在甲基转移酶的作用下，可随复制过程遗传给新生子代DNA，是基因的一种正常表观遗传机制，若核酸的甲基化出现了异常则说明细胞代谢也出现了异常，DNA正常的高甲基化表明此时此刻的基因保持沉默，而低甲基化则说明此时此刻的基因已被激活；大量的试验表明恶性肿瘤的发展过程中DNA甲基化与正常状态的DNA甲基化有明显的区别，在细胞癌变过程中DNA不能正常甲基化使得大量恶性肿瘤细胞无序繁殖，无限扩增，导致恶性肿瘤的发生。
液相纳米胶体金比色检测肿瘤细胞内或游离循环DNA的低甲基化程度，为恶性肿瘤的早期筛查、早期诊断、早期治疗提供了一个简单、有效、快速的检测方法，核酸链上的甲基在液相中能够与纳米胶体金颗粒有特异性结合，纯化后的细胞DNA或者是代谢后的游离循环DNA，在溶液中与粒径70-90纳米的胶体金颗粒结合，结合后的纳米胶体金溶液原有的颜色会出现明显改变，由棕红色转为变蓝黑色，波长在540纳米处的最大吸收峰减少，同时波长在660纳米处会出现一个小的吸收峰，反应在5-10分钟内达到稳定、平衡，灵敏度可达到pg级水平。
液相纳米胶体金比色检测DNA甲基化的原理是建立在自然界中不存在含有粒径为100纳米以上的胶体金，当两个粒径大于50纳米的胶体金颗粒被结合相互靠近时会出现颜色变化的物理现象，这个物理变化现象可以目测观察，也可以用透射光或者是拉曼光检测，制备一条已知的校准曲线可以对未知样本中DNA甲基含量进行定量或半定量测定，在临床症状出现之前即可对恶性肿瘤做出早期的诊断；因此，我们提出一种快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，步骤如下：
S1、对实验用到的玻璃容器用洗洁剂洗涤，洗洁剂洗涤结束后用蒸馏水冲洗干净，然后用硅化试剂侵泡过夜，对制金器皿的内表面做硅化处理，再用蒸馏水冲洗干净，备用；
S2、配制1％(w/v)氯金酸和1％(w/v)柠檬酸钠溶液，使用孔径为0.2微米的滤膜过滤；
S3、在清洗干净的1000mL圆底烧瓶中放入磁力搅拌子1枚，加入1000mL超纯水；
S4、向圆底烧瓶中加入浓度为1％(w/v)氯金酸，搅拌速率为600rpm，搅拌过程中对原地烧瓶内溶液加热至沸腾，然后加入氯金酸1：1体积的浓度为1％的柠檬酸钠溶液到圆底烧瓶中，持续加热搅拌10min；
S5、停止加热，对圆底烧瓶内溶液继续搅拌10min，然后停止搅拌冷却至室温，用超纯水恢复到原体积，得到纳米胶体金溶液，备用；
S6、选用纳米胶体金颗粒检测细胞内和游离循环DNA-甲基化程度，对恶性肿瘤进行早期筛查。
作为本发明进一步的方案：步骤S6中，纳米胶体金颗粒粒径为70-90纳米。
作为本发明再进一步的方案：步骤S6中，纳米胶体金颗粒粒径为80纳米。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明能够根据纳米胶体金溶液的颜色变化来表征DNA甲基化是否正常，方便医务人员在临床症状出现之前即可对恶性肿瘤做出早期的诊断，利于推广使用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，步骤如下：
S1、对实验用到的玻璃容器用洗洁剂洗涤，洗洁剂洗涤结束后用蒸馏水冲洗干净，然后用硅化试剂侵泡过夜，对制金器皿的内表面做硅化处理，再用蒸馏水冲洗干净，备用；
S2、配制1％(w/v)氯金酸和1％(w/v)柠檬酸钠溶液，使用孔径为0.2微米的滤膜过滤；
S3、在清洗干净的1000mL圆底烧瓶中放入磁力搅拌子1枚，加入1000mL超纯水；
S4、向圆底烧瓶中加入浓度为1％(w/v)氯金酸，搅拌速率为600rpm，搅拌过程中对原地烧瓶内溶液加热至沸腾，然后加入氯金酸1：1体积的浓度为1％的柠檬酸钠溶液到圆底烧瓶中，持续加热搅拌10min；
S5、停止加热，对圆底烧瓶内溶液继续搅拌10min，然后停止搅拌冷却至室温，用超纯水恢复到原体积，得到纳米胶体金溶液，备用；
S6、选用粒径为70纳米的纳米胶体金颗粒检测细胞内和游离循环DNA-甲基化程度，对恶性肿瘤进行早期筛查。
实施例2
一种快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，步骤如下：
S1、对实验用到的玻璃容器用洗洁剂洗涤，洗洁剂洗涤结束后用蒸馏水冲洗干净，然后用硅化试剂侵泡过夜，对制金器皿的内表面做硅化处理，再用蒸馏水冲洗干净，备用；
S2、配制1％(w/v)氯金酸和1％(w/v)柠檬酸钠溶液，使用孔径为0.2微米的滤膜过滤；
S3、在清洗干净的1000mL圆底烧瓶中放入磁力搅拌子1枚，加入1000mL超纯水；
S4、向圆底烧瓶中加入浓度为1％(w/v)氯金酸，搅拌速率为600rpm，搅拌过程中对原地烧瓶内溶液加热至沸腾，然后加入氯金酸1：1体积的浓度为1％的柠檬酸钠溶液到圆底烧瓶中，持续加热搅拌10min；
S5、停止加热，对圆底烧瓶内溶液继续搅拌10min，然后停止搅拌冷却至室温，用超纯水恢复到原体积，得到纳米胶体金溶液，备用；
S6、选用粒径为90纳米的纳米胶体金颗粒检测细胞内和游离循环DNA-甲基化程度，对恶性肿瘤进行早期筛查。
实施例3
一种快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，步骤如下：
S1、对实验用到的玻璃容器用洗洁剂洗涤，洗洁剂洗涤结束后用蒸馏水冲洗干净，然后用硅化试剂侵泡过夜，对制金器皿的内表面做硅化处理，再用蒸馏水冲洗干净，备用；
S2、配制1％(w/v)氯金酸和1％(w/v)柠檬酸钠溶液，使用孔径为0.2微米的滤膜过滤；
S3、在清洗干净的1000mL圆底烧瓶中放入磁力搅拌子1枚，加入1000mL超纯水；
S4、向圆底烧瓶中加入浓度为1％(w/v)氯金酸，搅拌速率为600rpm，搅拌过程中对原地烧瓶内溶液加热至沸腾，然后加入氯金酸1：1体积的浓度为1％的柠檬酸钠溶液到圆底烧瓶中，持续加热搅拌10min；
S5、停止加热，对圆底烧瓶内溶液继续搅拌10min，然后停止搅拌冷却至室温，用超纯水恢复到原体积，得到纳米胶体金溶液，备用；
S6、选用粒径为80纳米的纳米胶体金颗粒检测细胞内和游离循环DNA-甲基化程度，对恶性肿瘤进行早期筛查。
实施例4
一种快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，步骤如下：
S1、对实验用到的玻璃容器用洗洁剂洗涤，洗洁剂洗涤结束后用蒸馏水冲洗干净，然后用硅化试剂侵泡过夜，对制金器皿的内表面做硅化处理，再用蒸馏水冲洗干净，备用；
S2、配制1％(w/v)氯金酸和1％(w/v)柠檬酸钠溶液，使用孔径为0.2微米的滤膜过滤；
S3、在清洗干净的1000mL圆底烧瓶中放入磁力搅拌子1枚，加入1000mL超纯水；
S4、向圆底烧瓶中加入浓度为1％(w/v)氯金酸，搅拌速率为600rpm，搅拌过程中对原地烧瓶内溶液加热至沸腾，然后加入氯金酸1：1体积的浓度为1％的柠檬酸钠溶液到圆底烧瓶中，持续加热搅拌10min；
S5、停止加热，对圆底烧瓶内溶液继续搅拌10min，然后停止搅拌冷却至室温，用超纯水恢复到原体积，得到纳米胶体金溶液，备用；
S6、选用粒径为85纳米的纳米胶体金颗粒检测细胞内和游离循环DNA-甲基化程度，对恶性肿瘤进行早期筛查。
本发明的有益效果是：本发明能够根据纳米胶体金溶液的颜色变化来表征DNA甲基化是否正常，方便医务人员在临床症状出现之前即可对恶性肿瘤做出早期的诊断，利于推广使用。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (7)
1.一种快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，其特征在于，步骤如下：
S1、对实验用到的玻璃容器用洗洁剂洗涤，洗洁剂洗涤结束后用蒸馏水冲洗干净，然后用硅化试剂侵泡过夜，对制金器皿的内表面做硅化处理，再用蒸馏水冲洗干净，备用；
S2、配制氯金酸和柠檬酸钠溶液，使用孔径为0.2微米的滤膜过滤；
S3、在清洗干净的圆底烧瓶中放入磁力搅拌子1枚，加入1000mL超纯水；
S4、向圆底烧瓶中氯金酸，搅拌过程中对原地烧瓶内溶液加热至沸腾，然后加入氯金酸1：1体积的柠檬酸钠溶液到圆底烧瓶中，持续加热搅拌10min；
S5、停止加热，对圆底烧瓶内溶液继续搅拌10min，然后停止搅拌冷却至室温，用超纯水恢复到原体积，得到纳米胶体金溶液，备用；
S6、选用纳米胶体金颗粒检测细胞内和游离循环DNA-甲基化程度，对恶性肿瘤进行早期筛查。
2.根据权利要求1所述的快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，其特征在于，步骤S2中，氯金酸的浓度为1％(w/v)。
3.根据权利要求2所述的快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，其特征在于，步骤S2中，柠檬酸钠的浓度为1％(w/v)。
4.根据权利要求3所述的快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，其特征在于，步骤S3中，圆底烧瓶的容积为1000mL。
5.根据权利要求1所述的快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，其特征在于，步骤S4中，搅拌速率为600rpm，。
6.根据权利要求1所述的快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，其特征在于，步骤S6中，纳米胶体金颗粒粒径为70-90纳米。
7.根据权利要求6所述的快速检测恶性肿瘤DNA的液相纳米胶体金比色方法，其特征在于，步骤S6中，纳米胶体金颗粒粒径为80纳米。
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