CN109602730B

CN109602730B - 白藜芦醇联合双氢青蒿素在治疗肝癌和乳腺癌中的应用及其产品

Info

Publication number: CN109602730B
Application number: CN201811525953.4A
Authority: CN
Inventors: 李国荣; 高俊英
Original assignee: Shandong Normal University
Current assignee: Shandong Normal University
Priority date: 2018-12-13
Filing date: 2018-12-13
Publication date: 2021-10-01
Anticipated expiration: 2038-12-13
Also published as: CN109602730A

Abstract

本发明提供一种白藜芦醇联合双氢青蒿素在治疗肝癌和乳腺癌中的应用及其产品。联合应用时白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例最优为25μM:50μM。经试验证明，双氢青蒿素与白藜芦醇联合用药组与它们的单独用药组相比，能够更显著的抑制肝癌细胞核乳腺癌细胞的存活率，而对正常细胞影响较小；在同样达到IC₅₀的情况下，联合用药组的用药剂量低于单独用药组，降低了药物不良反应的发生，表现出良好的协同抗肿瘤作用，因而具有较好的实际应用之价值。

Description

白藜芦醇联合双氢青蒿素在治疗肝癌和乳腺癌中的应用及其产品

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及白藜芦醇联合双氢青蒿素在治疗肝癌和乳腺癌中的应用及其产品。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

原发性肝癌是目前全球最常见的恶性肿瘤之一，其全球发病率居肿瘤性疾病的第5位。肝癌恶性程度高、手术切除率低、化疗效果差、5年生存率仅5％(Wagistri et al.,2017、Jeong et al.,2017)。乳腺癌是女性最常见的癌症之一，在全球范围内，大约有210万新诊断的女性为乳腺癌病例，占女性癌症病例的四分之一。该疾病是绝大多数国家中最常被诊断出的癌症(185个国家中有154个)，也是女性患癌症死亡的主要原因(Bray F.etal.,2018)。

双氢青蒿素(Dihydroartemisinin，DHA)是青蒿素(ART)的衍生物，属于倍半萜内酯过氧化物，为一线抗疟药，与青蒿素相比具有药性更好、毒性低、吸收好的特点。越来越多的报道指出，双氢青蒿素具有治疗癌症的作用，可通过多种方式选择性地杀死癌细胞，对正常细胞的影响却很小。双氢青蒿素的抗癌机制主要涉及以下几个方面：1.通过ROS上调DR5进而增强Apo2L/TRAIL介导的结肠癌细胞凋亡(Kong et al.,2012)；2.诱导细胞周期阻断，通过减少靶基因产物： PCNA、cyclin D1和CDK4(Han et al.,2013)；3.通过靶向结合原癌基因TCTP抑制其蛋白表达，减少肿瘤的发生(Fujita et al.,2008)；4.影响细胞附着、扩散和黏着斑的形成(Zhang et al.,2017)；5.通过抑制NF-κB/GLUT1信号通路抑制癌细胞的迁移和侵袭(Jiang et al.,2016)。

白藜芦醇(Resveratrol,RES)是一种多酚类天然产物，属于二苯乙烯家族，在葡萄、花生、虎杖等多种植物中广泛存在，可安全服用，具有抗氧化、抗炎症等多种药理学作用，也发现它具有抗癌功能(Singh et al.,2014；)。白藜芦醇抗癌作用的机制涉及：1.通过抑制JAK1、JAK2和Tyk2及其下游的调节因子STAT3和 STAT5的磷酸化，抑制JAK2(V617F)突变的肿瘤细胞增殖，诱导其凋亡(Trung et al.,2015)；2.抑制血红素加氧酶-1(HO-1)，使肺癌A549细胞内MMP-2和 MMP-9的表达降低，从而降低肺癌A549细胞的侵袭力(Liu etal.,2010)；3.通过激活FOXO转录因子抑制原位胰腺肿瘤的生长(Roy et al.,2011)；4.通过活性氧 (ROS)介导的DNA损伤诱导肺癌细胞的早衰(Luo et al.,2013)。

尽管天然药物具有抗癌活性，但单独的天然药物往往对肿瘤细胞的杀伤作用不如化学合成药物，然而化学合成药物的不良反应远远大于天然药物。因此，近年来有研究人员采用多种天然药物联合使用的方式用药以期获得更好的抗肿瘤效果。但限于药物作用机理以及抗癌机制的复杂性，有些药物联用后效果不及预期，甚至出现拮抗作用。目前，尚未有关于白藜芦醇联合双氢青蒿素用于治疗肝癌和乳腺癌中的报道。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，发明人经长期的技术与实践探索，提供一种白藜芦醇联合双氢青蒿素治疗肝癌和乳腺癌的应用及其产品。经试验证明，双氢青蒿素与白藜芦醇联合用药后，在较低的药物浓度下即表现出较强的抗癌活性，表现出良好的协同抗肿瘤作用，因而具有较好的实际应用之价值。

本发明的目的之一在于提供白藜芦醇联合双氢青蒿素在制备治疗肝癌和/或乳腺癌产品中的应用。

本发明的目的之二在于提供一种治疗肝癌和/或乳腺癌的组合物。

本发明的目的之三在于提供一种药物制剂。

为了实现上述目的，本发明涉及以下技术方案：

本发明的第一个方面，提供白藜芦醇联合双氢青蒿素在制备治疗肝癌和/或乳腺癌产品中的应用。

优选的，所述产品为药物。

优选的，联合应用时所述白藜芦醇的药物浓度为20-170μM；进一步优选的，所述白藜芦醇的药物浓度为20μM、50μM、80μM、110μM、140μM、170μM；

所述双氢青蒿素的药物浓度为10-200μM；进一步优选的，所述双氢青蒿素的药物浓度为10μM、20μM、25μM、40μM、80μM、160μM、200μM。

优选的，联合应用时白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为10μM:40 μM-20μM:80μM。

进一步优选的，联合应用时白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为10 μM:20μM、25μM:50μM、40μM:20μM、40μM:50μM、10μM:80μM、20μM:80 μM或40μM:80μM。

更进一步优选的，联合应用时白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为25 μM:50μM、40μM:80μM、10μM:80μM或20μM:80μM。

最优选的，联合应用时白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为25 μM:50μM。

本发明的第二个方面，提供一种治疗肝癌和/或乳腺癌的组合物，所述组合物是以白藜芦醇与双氢青蒿素为主要活性成分。

优选的，所述组合物中白藜芦醇的药物浓度为20-170μM；进一步优选的，所述白藜芦醇的药物浓度为20μM、50μM、80μM、110μM、140μM、170μM。

优选的，所述组合物中白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为10μM:40 μM-20μM:80μM。

进一步优选的，所述组合物中白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为10 μM:20μM、25μM:50μM、40μM:20μM、40μM:50μM、10μM:80μM、20μM:80 μM或40μM:80μM。

更进一步优选的，所述组合物中白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为25μM:50μM、40μM:80μM、10μM:80μM或20μM:80μM。

最优选的，所述组合物中白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为25 μM:50μM。

本发明的第三个方面，提供一种药物制剂，所述药物制剂由上述组合物和一种或多种药学上或食品学上可接受的辅料组成。所用辅料可为固态或液态。固态形式的制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒、胶囊、药丸及栓剂。适当的固体辅料可以是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖或者乳糖。片剂、粉剂、药丸及胶囊为适于口服用的固态剂型。液态形式的制剂包括溶液、悬浮液及乳液，其实施例为非经肠注射用水溶液或水-丙二醇溶液，或添加甜味剂及造影剂的口服溶液。此外，还可制成注射用小水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。

本发明的有益效果：

本发明首次研究了白藜芦醇联合双氢青蒿素用药在治疗肝癌和乳腺癌中的应用。经试验证明，双氢青蒿素与白藜芦醇联合用药组与它们的单独用药组相比，能够更显著的抑制肝癌细胞核乳腺癌细胞的存活率，而对正常细胞影响较小；在同样达到IC₅₀的情况下，联合用药组的用药剂量低于单独用药组，降低了药物不良反应的发生，表现出良好的协同抗肿瘤作用，表明联合用药安全有效，为新药的开发及老药新用提供了研究方向。

本发明排除了白藜芦醇联合双氢青蒿素用药会发生相互作用进而降低双氢青蒿素药物作用的可能性，发现白藜芦醇联合双氢青蒿素用药会产生有益效果，能够有效提高双氢青蒿素的抗癌功能。本发明发现了白藜芦醇联合双氢青蒿素用药抑制癌细胞增殖和迁移的分子机制为调控DLC1/TCTP/Cdc42信号通路。

本发明首次报道了白藜芦醇联合双氢青蒿素对癌细胞迁移的影响，结果显示联合用药相比于二者单独用药更有效的抑制了癌细胞的迁移。同时，本发明也研究了白藜芦醇联合双氢青蒿素用药对迁移相关分子机制的影响，通过实验发现，联合用药后可上调抑癌基因DLC1的蛋白表达，下调致癌基因TCTP的蛋白表达， CO-IP实验证实DLC1与TCTP存在相互作用；白藜芦醇能够显著增强了双氢青蒿素通过DLC1/TCTP复合物调控Cdc42相关信号通路来抑制肝癌和乳腺癌细胞迁移的能力。需要说明的是，抗癌机制极其复杂，尚有许多机制仍不是很清楚，如能将白藜芦醇联合双氢青蒿素的抗癌机制研究透彻，有助于为抗癌药物研究提供新的思路。

附图说明

构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。

图1为双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药对HepG2、MDA-MB-231和 HL-7702细胞增殖的影响；利用不同浓度的双氢青蒿素、白藜芦醇及二者的联合用药处理两种癌细胞系HepG2、MDA-MB-231和正常肝细胞系HL-7702，检测这三种细胞的存活率(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n＝3)。

图2为双氢青蒿素、白藜芦醇单独或联合用药对HepG2、MDA-MB-231细胞迁移水平的影响；图2A：分别为两种癌细胞0h和24h的划痕照片；图2B：细胞迁移率的量化统计(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n＝3)。

图3为双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药后对癌细胞中DLC1和TCTP 蛋白表达的影响；图3A：Western blotting检测DLC1和TCTP的表达水平；图 3B：柱状图表示以GAPDH为内参的DLC1和TCTP蛋白相对表达量(*P<0.05, **P<0.01,***P<0.001,n＝3)。

图4为DLC1与TCTP相互作用图；图4A：在HepG2细胞系中两种内源性蛋白DLC1与TCTP相互结合图(n＝3)；图4B：在MDA-MB-231细胞系中两种内源性蛋白DLC1与TCTP相互结合图(n＝3)。

图5为双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药抑制癌细胞HepG2、 MDA-MB-231中Cdc42/JNK/NF-κB信号通路并减少MMPs的表达水平；图5A： Western blotting检测癌细胞中Cdc42、p-JNK、JNK、NF-κB、MMP-2和MMP-9 的蛋白水平；图5B：相关蛋白表达水平的量化数据(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001, n＝3)。

图6为双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药抑制癌细胞HepG2、 MDA-MB-231中N-WASP蛋白的影响；图6A：Western blotting检测癌细胞中 N-WASP的蛋白水平；图6B:蛋白表达水平的量化数据 (*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n＝3)。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

如前所述，现有技术中，尽管天然药物具有抗癌活性，但单独的天然药物往往对肿瘤细胞的杀伤作用不如化学合成药物，然而化学合成药物的不良反应远远大于天然药物。因此，近年来有研究人员采用多种天然药物联合使用的方式用药以期获得更好的抗肿瘤效果。由于药物作用机理的复杂性，有些药物联用后效果不及预期，甚至出现拮抗作用。目前，尚未有关于白藜芦醇联合双氢青蒿素用于治疗肝癌和乳腺癌中的报道。

有鉴于此，本发明的一个具体实施方式中，提供白藜芦醇联合双氢青蒿素在制备治疗肝癌和/或乳腺癌产品中的应用。

经研究发现，双氢青蒿素与白藜芦醇联合用药与二者单独用药相比更加显著地上调DLC1蛋白表达量，下调TCTP的蛋白表达量，CO-IP实验发现DLC1与 TCTP之间存在相互作用。双氢青蒿素与白藜芦醇联合用药下调了DLC1/TCTP 复合物下游蛋白Cdc42的表达，从而抑制了Cdc42介导的F-actin细胞骨架和 MMPs蛋白，最终抑制了癌细胞的迁移。

本发明的又一具体实施方式中，所述产品为药物。

本发明的又一具体实施方式中，联合应用时所述白藜芦醇的药物浓度为 20-170μM。

本发明的又一具体实施方式中，所述白藜芦醇的药物浓度为20μM、50μM、 80μM、110μM、140μM、170μM。

本发明的又一具体实施方式中，所述双氢青蒿素的药物浓度为10-200μM；

本发明的又一具体实施方式中，所述双氢青蒿素的药物浓度为10μM、20 μM、25μM、40μM、80μM、160μM、200μM。

本发明的又一具体实施方式中，联合应用时白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为10μM:40μM-20μM:80μM；

本发明的又一具体实施方式中，联合应用时白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为10μM:20μM、25μM:50μM、40μM:20μM、40μM:50μM、10μM:80 μM、20μM:80μM或40μM:80μM。

本发明的又一具体实施方式中，根据IC₅₀结果，联合应用时优选白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为25μM:50μM、40μM:80μM、10μM:80μM或20 μM:80μM。

本发明的又一具体实施方式中，根据IC₅₀及CI结果显示，联合应用时白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为25μM:50μM时抗癌效果最优。

本发明的又一具体实施方式中，提供一种治疗肝癌和/或乳腺癌的组合物，所述组合物是以白藜芦醇与双氢青蒿素为主要活性成分。

本发明的又一具体实施方式中，所述组合物中白藜芦醇的药物浓度为20-170 μM；进一步优选的，所述白藜芦醇的药物浓度为20μM、50μM、80μM、110μM、 140μM、170μM。

本发明的又一具体实施方式中，所述双氢青蒿素的药物浓度为10-200μM；进一步优选的，所述双氢青蒿素的药物浓度为10μM、20μM、25μM、40μM、 80μM、160μM、200μM。

本发明的又一具体实施方式中，所述组合物中白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为10μM:40μM-20μM:80μM。

本发明的又一具体实施方式中，所述组合物中白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为10μM:20μM、25μM:50μM、40μM:20μM、40μM:50μM、10μM:80 μM、20μM:80μM或40μM:80μM。

本发明的又一具体实施方式中，根据IC₅₀结果，所述组合物中白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为25μM:50μM、40μM:80μM、10μM:80μM或20 μM:80μM。

本发明的又一具体实施方式中，根据IC₅₀及CI结果显示，所述组合物中白藜芦醇与双氢青蒿素的药物浓度比例为25μM:50μM。

本发明的又一具体实施方式中，提供一种药物制剂，所述药物制剂由上述组合物和一种或多种药学上或食品学上可接受的辅料组成。所用辅料可为固态或液态。固态形式的制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒、胶囊、药丸及栓剂。适当的固体辅料可以是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖或者乳糖。片剂、粉剂、药丸及胶囊为适于口服用的固态剂型。液态形式的制剂包括溶液、悬浮液及乳液，其实施例为非经肠注射用水溶液或水-丙二醇溶液，或添加甜味剂及造影剂的口服溶液。此外，还可制成注射用小水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。

以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件进行。

实施例

材料与仪器：

一、双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药对癌细胞增殖的影响

实施方法：肝癌细胞HepG2、人乳腺癌MDA-MB-231和人正常肝细胞HL-7702接种于96孔板，接种数量约6000个/孔，接种16小时后，细胞分别用 20、40、80、160和200μM双氢青蒿素，50、80、110、140和170μM白藜芦醇、双氢青蒿素:白藜芦醇:10μM:20μM、25μM:50μM、40μM:80μM、40μM:20 μM、40μM:50μM和10μM:80μM和20μM:80μM处理24小时，然后加入MTT (3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)，37℃培养箱孵育4小时，移除孔内培养液，加入150μl DMSO，摇床摇晃20分钟，使用酶标仪检测吸光度。吸光度数值反应了细胞活力。设置空白对照组和DMSO对照组均不加任何药物干预。

实验结果：

MTT实验检测细胞活力，实验结果如图1和表1所示：双氢青蒿素与白藜芦醇联合用药组与它们的单独用药组相比，能够更显著的抑制癌细胞HepG2和 MDA-MB-231的存活率，而对正常肝细胞HL-7702存活率的影响较小；在同样达到IC₅₀的情况下，联合用药组的用药剂量低于单独用药组，表明联合用药安全有效。

在七种双氢青蒿素与白藜芦醇的联合用药浓度比例中，其中25μM:50μM、 40μM:80μM 10μM:80μM、20μM:80μM的浓度比例达到了IC₅₀，再根据CI在这四个组合中找出最优选的浓度。CI可通过IC₅₀值的计算对两种药物的协同、拮抗或相加效应进行分析。CI的计算公式为:CI＝(D₁)/(Dx)₁+(D₂)/(Dx)₂,其中(D)₁和(Dx)₁分别代表一种药物分别在联合用药和单独用药时的IC₅₀值，而(D)₂和 (Dx)₂代表另一种药物分别在联用和单用时的IC₅₀值。当CI<1时表示协同作用, CI＝1时表示相加作用,CI>1时表示拮抗作用。根据图1和表1的结果，我们计算出药物的合用指数CI,结果测得两药联合指数分别为:(25/80)+(50/110) ＝0.767、(40/80)+(80/110)＝1.227、(10/80)+(80/110)＝0.852、(20/80)+ (80/110)＝0.977。可以看出双氢青蒿素与白藜芦醇联合用药时的浓度为25+50 μM时为优选浓度，在之后的实验中，联合用药组均是使用这一优选浓度。

表1双氢青蒿素、白藜芦醇单独或二者联合用药处理HepG2和MDA-MB-231 24h后达到IC₅₀的浓度

二、双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药对癌细胞迁移的影响

实施方法：人肝癌细胞HepG2和人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞接种于 12孔板，使细胞在划痕铺满12孔板底面，在接种16小时后，利用200μL枪头进行划痕，横向划3条划痕，每条划痕间距不小于0.5cm；IX PBS清洗细胞,吸去划痕过程中漂浮的细胞，避免细胞漂到划痕处以影响实验结果；含有1％血清的培养基中加入25μM双氢青蒿、50μM白藜芦醇、及25μM双氢青蒿素:50μM 白藜芦醇的联合药物，摇匀；细胞立刻置于显微镜下观察,进行0h拍照,记录拍照位置；细胞放入37℃,5％CO₂培养箱中继续培养；细胞培养24h后进行拍照, 记录相同位置细胞迁移的变化；统计分析不同组别间细胞迁移的差异。

实验结果：

本实验通过划痕实验检测双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药组对 HepG2、MDA-MB-231细胞迁移的影响。结果如图2所示：与对照组相比，双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药组对HepG2、MDA-MB-231迁移率的影响分别为27.29±0.12％、30.09±0.11％和11.58±0.19％，30.72±0.18％、31.09±0.18％和17.55±0.25％。这说明白藜芦醇联合双氢青蒿素用药增强了其抑制HepG2、 MDA-MB-231细胞迁移的作用，显示了白藜芦醇联合双氢青蒿素用药在抑制癌细胞迁移方面发挥协同作用。

三、双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药抑制癌细胞迁移相关的信号通路

实施方法：双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药处理HepG2、MDA-MB-231 24h后，用含蛋白酶抑制剂的WB-IP细胞蛋白裂解液裂解细胞，提取蛋白。电泳， 80V，30分钟，转至110V，电泳90分钟，分离蛋白。转膜至PVDF膜，60分钟。使用5％脱脂奶粉封闭1小时。一抗(GAPDH、TCTP、DLC1、Cdc42、N-WASP、 NF-κB、p-JNK、JNK、MMP-2和MMP-9)4℃孵育过夜，然后室温孵育60分钟。TBST洗膜三次，每次10分钟。二抗室温孵育90分钟。TBST洗膜三次，每次15分钟。使用ECL化学发光液检测蛋白表达水平。

1.双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药上调DLC1、下调TCTP的蛋白表达

Western blotting检测各组中DLC1和TCTP蛋白的表达变化。结果如图3所示：与对照组相比，双氢青蒿素、白藜芦醇单独组及联合用药组均能够显著性的上调DLC1的表达，但联合用药组的效果更显著。与对照组相比，白藜芦醇组处理后TCTP的表达量没有显著的变化，双氢青蒿素组显著降低了TCTP的蛋白表达，但两者联合用药后更显著地降低了其表达。由于联合用药后对DLC1和TCTP 的调节作用是相反的，我们接下来探究二者之间是否存在相互作用。

2.CO-IP实验证明DLC1与TCTP之间存在相互作用

CO-IP实验检测DLC1与TCTP两种蛋白之间是否可以相互结合。我们首先利用DLC1或是IgG的抗体分别与HepG2、MDA-MB-231细胞系对照组中提取的蛋白共同孵育，通过IB可以在DLC1的IP液中检测到TCTP蛋白，而在IgG的IP液中则检测不到TCTP的表达(见图4A)。其次，我们还做了反向IP实验，我们又利用 TCTP、IgG的抗体与各组蛋白共同孵育,通过IB也在TCTP的IP液中检测到了 DLC1蛋白,而在IgG的IP液中则检测不到DLC1的表达(见图4B)。这些结果表明，在这两种癌细胞中，两种内源性的蛋白DLC1和TCTP相互结合形成蛋白复合物。

3.双氢青蒿素、白藜芦醇单独及联合用药通过DLC1/TCTP调控Cdc42相关的 JNK/NF-κB和N-WASP信号通路抑制癌细胞迁移

一方面：Cdc42介导JNK的激活和它的磷酸化，JNK位于NF-κB的上游, 可激活其表达，激活后的NF-κB可靶向MMPs家族蛋白导致癌细胞迁移。Western blotting检测各组中DLC1/TCTP复合物下游信号通路Cdc42/JNK/NF-κB中蛋白的表达变化。由结果图5得出：总的JNK蛋白表达量在各组没有明显差异，而相比于双氢青蒿素或白藜芦醇单独用药组，二者联合用药显著下调了Cdc42、 p-JNK、NF-κB的蛋白表达，最终通过抑制MMP2/9对细胞外基质的降解，达到对癌细胞迁移的抑制作用。

另一方面：癌细胞在侵袭过程中会形成特殊的细胞伪足，它的形成依赖于细胞膜下的肌动蛋白单体(G-actin)聚合成肌动蛋白丝(F-actin)多聚体，这一过程依靠蛋白复合物Arp2/3的催化作用，而Arp2/3复合体的激活需要激活因子，N-WASP 就是其中的一种激活因子。Cdc42可靶向N-WASP进而调控肌动蛋白actin组成的细胞骨架来影响细胞迁移。由结果图6可知：相比于双氢青蒿素、白藜芦醇单独用药，二者联合用药显著下调了N-WASP的蛋白表达，抑制了癌细胞的迁移。

这些数据表明，双氢青蒿素与白藜芦醇联合用药涉及TCTP/DLC1/Cdc42信号通路。

应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims

1.白藜芦醇联合双氢青蒿素在制备治疗肝癌和/或乳腺癌药品中的应用，其特征在于，联合应用时白藜芦醇的浓度为25 μM，双氢青蒿素的浓度为50μM，或白藜芦醇的浓度为10 μM，双氢青蒿素的浓度为80 μM。

2.一种治疗肝癌和/或乳腺癌的组合物，其特征在于，所述组合物是以白藜芦醇与双氢青蒿素为主要活性成分，其特征在于，白藜芦醇的浓度为25 μM，双氢青蒿素的浓度为50μM，或白藜芦醇的浓度为10 μM，双氢青蒿素的浓度为80 μM。

3.一种药物制剂，其特征在于，所述药物制剂由权利要求2所述组合物和一种或多种药学上的辅料组成。