CN109142013A - 一种血浆乳糜微粒的分离方法 - Google Patents

一种血浆乳糜微粒的分离方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及医疗技术领域，具体为一种血浆乳糜微粒的分离方法，包括如下步骤：A、冷冻血浆：将装有血浆的血浆袋冷冻，冷冻时间2‑8小时，冷冻温度‑40℃至‑10℃；B、静置血浆：将步骤A中冷冻后的血浆袋倒立静置，静置温度0℃‑4℃，静置时间8‑12小时；C、离心：将步骤B中静置后的血浆置于离心机中离心，离心机的离心力为3900g‑4200g，离心时间为8‑12分钟，离心温度0℃‑4℃；D、分离：抽出步骤C中离心后的血浆袋中的血浆，实现血浆和乳糜微粒的分离。本发明解决了从血浆中分离乳糜微粒的问题。

Description

一种血浆乳糜微粒的分离方法
技术领域
本发明涉及医疗技术领域，具体为一种血浆乳糜微粒的分离方法。
背景技术
现有技术中在抽血时无偿捐献的血液中，血浆中的乳糜微粒(人体血浆中最大的脂蛋白颗粒)含量超标则直接将该血浆报废丢弃，造成大量血浆浪费，若能对血浆中的乳糜微粒进行分离使其含量达到规定标准则会节约大批量的血浆。但是，现有技术中还不存在从血浆中分离乳糜微粒的方法。
目前，有广州、山东两地学者开展高脂肪含量血液的制备技术，但仅仅是将悬浮红细胞中的高脂肪含量血浆整体去除的技术，并未发现高脂肪含量血浆自身去除乳糜微粒的研究报道成果,因为乳糜微粒在滤除时的二次溶解的技术障碍无法解决。一些大型医院联合生物公司(四川南格尔、山东威高等)曾做过去除脂肪微粒类似的治疗研究，因为无法及时破解样本中高、低密度脂蛋白的分离技术而进展缓慢或终止研究。上海交通大学在脂肪血的治疗领域进行了技术改良，对比了吸附柱、肝素诱导沉淀等多种材料与方法，因材料成本高昂或加入了诱导剂影响安全性等原因阻碍了推广及应用。
发明内容
本发明意在提供一种血浆乳糜微粒的分离方法，以解决从血浆中分离乳糜微粒的问题。
为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种血浆乳糜微粒的分离方法，包括如下步骤：
A、冷冻血浆：将装有血浆的血浆袋冷冻，冷冻时间2-8小时，冷冻温度-40℃至-10℃；
B、静置血浆：将步骤A中冷冻后的血浆袋倒立静置，静置温度0℃-4℃，静置时间8-12 小时；
C、离心：将步骤B中静置后的血浆置于离心机中离心，离心机的离心力为3900g-4200g，离心时间为8-12分钟，离心温度0℃-4℃；
D、分离：抽出步骤C中离心后的血浆袋中的血浆，实现血浆和乳糜微粒的分离。
本方案的原理和效果为：
高脂肪含量血浆中的乳糜微粒分子直径是800～5000(sf值)，上浮率＞400(gcm-3), 大于血浆中所有脂蛋白的分子大小及上浮率，利用乳糜微粒质量轻、易漂浮的这一特性，通过将血浆冷冻后静置，然后通过离心机离心能够使得血浆中的乳糜微粒上浮至血浆表层并在血浆表层聚集，使得血浆和乳糜分层，便于分离血浆和乳糜。
步骤A：将血浆先进行冷冻能够降低血浆中乳糜微粒的活性，有助于乳糜微粒聚集分层，在-40℃至-10℃冷冻血浆，能够缩短冷冻时间。
步骤B：冷冻后的血浆袋置于0℃-4℃倒立静置，使得血浆解冻。由于乳糜微粒质量轻、易漂浮，将血浆袋倒置能够使得乳糜微粒漂浮聚集在血浆袋的底部，从而便于利用注射器将血浆从血浆袋的袋口抽出，将乳糜微粒滞留在血浆袋中，由此实现血浆和乳糜微粒的分离。若直接将乳糜微粒从血浆袋中抽取，极易将血浆袋中的血浆连同乳糜微粒一起抽出，从而造成不必要的血浆浪费。
步骤C：经冷冻静置后的血浆置于离心机中离心，保持离心机的离心力为3900-4200g，离心时间为8-12分钟，能够加快乳糜微粒的分层，同时也不会导致血浆袋在离心的过程中破裂；将离心的温度控制在0-4摄氏度能够使得血浆中的乳糜微粒始终处于冰冻的状态而不结冰，使得乳糜微粒一直保持在低活性的状态下，不会在血浆中四处分散，便于乳糜微粒聚集分层。
采用上述方法去除乳糜微粒后，血浆中的乳糜含量可下降90～95％，分离滤除乳糜微粒后的血浆符合《献血法》规定的外观标准。
进一步，步骤A中的冷冻时间为4小时，冷冻温度为-20℃。在此条件下冷冻血浆，血浆和乳糜微粒能够发生分层。
进一步，步骤A中的冷冻时间为8小时，冷冻温度为-40℃。在条件下冷冻血浆，血浆和乳糜微粒分层效果较好。
进一步，步骤B中的静置温度0℃，静置时间8小时。在此条件下静置血浆，血浆和乳糜微粒的分层效果最好。
进一步，步骤B中的静置温度4℃，静置时间12小时。在此条件下静置血浆，血浆和乳糜微粒能够分层。
进一步，步骤B中的静置温度2℃，静置时间10小时。在此条件下静置血浆，血浆和乳糜微粒的分层效果较好。
进一步，步骤C中离心机的离心力为3900g，离心时间为12分钟，离心温度0℃。在此条件下对血浆进行离心，乳糜微粒和血浆能够分层，不会破坏血浆袋。
进一步，步骤C中离心机的离心力为4200g，离心时间为10分钟，离心温度0℃。在此条件下对血浆进行离心，乳糜微粒和血浆分层效果最佳，且不会破坏血浆袋。
进一步，步骤C中离心机的离心力为4000g，离心时间为10分钟，离心温度4℃。在此条件下对血浆进行离心，乳糜微粒和血浆分层效果较好，且不会破坏血浆袋。
进一步，血浆袋包括袋体，袋体顶部连通有加料管，袋体底部设置有第一底板，第一底板一侧设置有第二底板，第一底板和第二底板均与袋体相抵，袋体上设置有第一转轴，第一转轴一侧设置有第二转轴，第一转轴和第二转轴分别与第一底板和第二底板之间可拆卸连接有连杆，第一底板和第二底板相对的一侧可拆卸连接，第一底板另一侧竖直连接有第一护板，第二底板另一侧竖直连接有第二护板，第一护板和第二护板均与袋体相抵；所述步骤D中，从所述加料管处抽出袋体内的血浆。
通过连接第一底板和第二底板在袋体底部形成底座，便于放置袋体，能够防止袋体倾斜，便于袋体冷冻时放置。设置第一护板和第二护板在袋体外侧形成防护板，能够进一步防止袋体倾斜，同时能够防止袋体与尖锐物体接触导致袋体破损。通过转动第一转轴和第二转轴带动第一底板和第二底板转动，使得第一底板和第二底板转动至袋体顶部，从而使得第一护板和第二护板在袋体顶部靠拢再次形成底座，便于血浆袋倒立静置时稳定放置。
附图说明
图1为本发明实施例的结构示意图；
图2为图1的右视图；
图3为图2中第一底板和第二底板转动至袋体顶部形成提手的状态示意图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
说明书附图中的附图标记包括：第一转轴1、固定柱10、第一护板11、第一磁铁12、拉绳13、第一底板14、插孔15、橡胶插销16、第二底板19、第二磁铁20、第二护板21、绕线柱22、连杆23、第二转轴24、袋体25、加料管28。
本发明一种血浆乳糜微粒的分离方法的实施例，实施例1～8、对比例1、对比例2的分离方法技术参数如表1所示，并取分离后各实施例及对比例得到的血浆，测定血浆中甘油三酯(TG)的含量。甘油三脂是乳糜微粒的主要成分，通过检测甘油三酯的含量即可检测出血浆中乳糜微粒的含量，即可判定其乳糜的分离效果。
表1
现以实施例1举例，具体说明本发明的实施方式。
实施例1：
本发明一种血浆乳糜微粒的分离方法，包括如下步骤：
A、冷冻血浆：将血浆袋中的血浆连同血浆袋一起放入冰箱的冷冻室冷冻，冷冻温度为 -40℃，冷冻8小时后取出；
具体的，将血液抽取至如图1所示的血浆袋中，如图1所示，该血浆袋包括袋体25，袋体25顶部连通有加料管28，结合图2可知，袋体25底部横向安装有第一底板14，第一底板14右侧横向安装有第二底板19，第一底板14和第二底板19均与袋体25相抵且相抵面均胶接有橡胶垫。袋体25上密封转动安装有第一转轴1，第一转轴1右侧密封转动安装有第二转轴24，第一转轴1与第一底板14之间可拆卸连接有连杆23，第二转轴24与第二底板 19之间也可拆卸连接有连杆23。第一底板14右侧横向开设有漏斗形的插孔15，第二底板 19左侧胶接有可插入插孔15内的橡胶插销。第一底板14左侧竖直连接有第一护板11，第二底板19右侧竖直连接有第二护板21，第一护板11和第二护板21均与袋体25相抵。第一护板11左侧胶接有第一磁铁12，第二护板21右侧胶接有可吸附第一磁铁12的第二磁铁20。第一护板11上胶接有固定柱10，固定柱10上固定连接有拉绳13，第二护板21上胶接有用于缠绕拉绳13的绕线柱22。
将第二底板19上的橡胶插销16插入至第一底板14上的插孔15内，由于插孔15呈漏斗形，橡胶插销16在插入插孔15内时能够受到挤压发生形变，位于插孔15大径端处的橡胶插销16形变后的直径大于位于插孔15小径端处的橡胶插销16形变后的直径，由此使得橡胶插销16稳定插设在插孔15内，由此实现了第一底板14和第二底板19的连接。第一底板14和第二底板19连接形成底座支撑袋体25，便于放置袋体25，防止袋体25倾斜。第一底板14上连接的第一护板11和第二底板19上连接的第二护板21分别在袋体25两侧形成防护板，能够在侧面支撑袋体25，进一步防止袋体25放置时倾斜，同时能够防止袋体25 与尖锐物品接触导致袋体25破损。放置袋体25时还可以将固定柱10上的拉绳13缠绕在绕线柱22上并固定，从而利用拉绳13拉紧第一护板11和第二护板21，使得袋体25放置的更加稳固。B、静置血浆：将步骤A中的血浆袋放入冰箱的冷藏室倒立静置，静置温度2℃，静置10小时后取出；
具体的，顺时针转动第一转轴1，同时逆时针转动第二转轴24，第一转轴1和第二转轴24分别通过连杆23带动第一底板14和第二底板19转动，使得第二底板19上的橡胶插销16从第一底板14上的插孔15内拔出，从而使得第一底板14和第二底板19分离。当第一底板14和第二底板19转动至袋体25顶部，如图3所示，同时第一护板11和第二护板21 也转动至袋体25顶部，第一护板11上的第一磁铁12和第二护板21上的第二磁铁20相互吸附使得第一护板11和第二护板21连接，从而使得第一底板14和第二底板19在袋体25 顶部再次连接形成底座，此时即可通过底座使得倒置的血浆袋稳定放置。
C、离心：将步骤B中的血浆袋倒立置于离心机中离心，将离心机的离心力调为4200g，离心温度2℃，离心10分钟后取出。
具体的，将连杆23从第一转轴1和第二转轴24上拆下，从而将第一底板14、第二底板19、第一护板11和第二护板21从袋体25上拆下，防止第一底板14、第二底板19、第一护板11和第二护板21在离心机中离心时损坏。
高脂肪含量血浆中的乳糜微粒分子直径是800～5000(sf值)，上浮率＞400(gcm-3), 大于血浆中所有脂蛋白的分子大小及上浮率，因此乳糜微粒在经冷冻和离心后会聚集分层，将袋体25倒立静置能够使得血浆中的乳糜微粒聚集在袋体25的底部。
D、分离：将干净的血浆袋与步骤C中的袋体25上的加料管28连通，由于此时袋体25倒置，位于袋体25内底部的血浆即可在重力作用下流动至干净的血浆袋中，从而将乳糜微粒滞留在袋体25中，由此实现了血浆和乳糜微粒的分离。
实施例2
本实施例与实施例1的不同之处在于，血浆的冷冻时间为8小时，冷冻温度为-40℃。
实施例3
本实施例与实施例1的不同之处在于，血浆的静置温度为0℃，静置时间为8小时。
实施例4
本实施例与实施例1的不同之处在于，血浆的静置温度为4℃，静置时间为12小时。
实施例5
本实施例与实施例1的不同之处在于，血浆的静置温度为2℃，静置时间为10小时。
实施例6
本实施例与实施例5的不同之处在于，离心机的离心力为3900g，离心时间为12分钟，离心温度为0℃。
实施例7
本实施例与实施例5的不同之处在于，离心机的离心力为4200g，离心时间为10分钟，离心温度为0℃。
实施例8
本实施例与实施例5的不同之处在于，离心机的离心力为4000g，离心时间为10分钟，离心温度为4℃。
对比例1
对比例1与实施例1的不同之处在于，血浆的冷冻时间为4小时，冷冻温度为-20℃。
对比例2
将抽取后的血浆直接放入离心机中离心，不经过冷冻和静置步骤，实验数据如表1所示。
由表1可知，对比例2中血浆内的乳糜无法聚集，由此可知，本发明中冰冻静置有助于乳糜微粒聚集分层。由表1可知，实施例3中乳糜微粒的分离效果最好，即血浆在冷冻温度为-20℃、冷冻时间为4小时，静置温度为0℃、静置时间为8小时的条件下，且离心机的离心力为4200g、离心时间为10分钟、离心温度为2℃的条件下乳糜微粒的分层效果最好。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种血浆乳糜微粒的分离方法，其特征在于：包括如下步骤：
A、冷冻血浆：将装有血浆的血浆袋冷冻，冷冻时间2-8小时，冷冻温度-40℃至-10℃；
B、静置血浆：将步骤A中冷冻后的血浆袋倒立静置，静置温度0℃-4℃，静置时间8-12小时；
C、离心：将步骤B中静置后的血浆置于离心机中离心，离心机的离心力为3900g-4200g，离心时间为8-12分钟，离心温度0℃-4℃；
D、分离：抽出步骤C中离心后的血浆袋中的血浆，实现血浆和乳糜微粒的分离。
2.根据权利要求1所述的血浆乳糜微粒的分离方法，其特征在于：所述步骤A中的冷冻时间为4小时，冷冻温度为-20℃。
3.根据权利要求1所述的血浆乳糜微粒的分离方法，其特征在于：所述步骤A中的冷冻时间为8小时，冷冻温度为-40℃。
4.根据权利要求2所述的血浆乳糜微粒的分离方法，其特征在于：所述步骤B中的静置温度0℃，静置时间8小时。
5.根据权利要求2所述的血浆乳糜微粒的分离方法，其特征在于：所述步骤B中的静置温度4℃，静置时间12小时。
6.根据权利要求2所述的血浆乳糜微粒的分离方法，其特征在于：所述步骤B中的静置温度2℃，静置时间10小时。
7.根据权利要求6所述的血浆乳糜微粒的分离方法，其特征在于：所述步骤C中离心机的离心力为3900g，离心时间为12分钟，离心温度0℃。
8.根据权利要求6所述的血浆乳糜微粒的分离方法，其特征在于：所述步骤C中离心机的离心力为4200g，离心时间为10分钟，离心温度0℃。
9.根据权利要求6所述的血浆乳糜微粒的分离方法，其特征在于：所述步骤C中离心机的离心力为4000g，离心时间为10分钟，离心温度4℃。
10.根据权利要求1-9任一项所述的血浆乳糜微粒的分离方法，其特征在于：所述血浆袋包括袋体，袋体顶部连通有加料管，袋体底部设置有第一底板，第一底板一侧设置有第二底板，第一底板和第二底板均与袋体相抵，袋体上设置有第一转轴，第一转轴一侧设置有第二转轴，第一转轴和第二转轴分别与所述第一底板和第二底板之间可拆卸连接有连杆，第一底板和第二底板相对的一侧可拆卸连接，第一底板另一侧竖直连接有第一护板，第二底板另一侧竖直连接有第二护板，第一护板和第二护板均与所述袋体相抵；所述步骤D中，从所述加料管处抽出袋体内的血浆。
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