CN109069629A - 癌的治疗和/或预防用药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明的目的是鉴定在癌细胞的表面特异性地表达的癌抗原蛋白质，提供依此为靶标的抗体作为癌的治疗和/或预防剂的用途。本发明涉及用于癌的治疗和/或预防的药物组合物等，其特征在于，包含与MCEMP1蛋白质、或该蛋白质的包含连续7个以上氨基酸的片段具有免疫反应性的抗体或其片段作为有效成分，所述MCEMP1蛋白质具有序列号2～8中偶数序列号所示的任一氨基酸序列、或与该氨基酸序列有80％以上的序列同一性的氨基酸序列。

Description

癌的治疗和/或预防用药物组合物

技术领域

本发明涉及针对MCEMP1抗体或其片段作为癌的治疗和/或预防剂等的新的药物用途。

背景技术

近年来，以癌细胞上的抗原蛋白质为靶标用于治疗癌的各种抗体药物在世界上发展起来。这些抗体药物作为癌特异的治疗药获得一定的药效而受到关注，但成为靶标的抗原蛋白质大多在大量的正常细胞中也表达，抗体施与的结果是不仅癌细胞，连抗原表达的正常细胞也被毒害，其结果产生的副作用成为问题。因此，如果能够鉴定在癌细胞表面特异性地表达的癌抗原、并使用以该癌抗原为靶标的抗体作为药物，则可以期待利用副作用更少的抗体药物进行治疗。

Mast Cell-Expressed Membrane Protein 1(肥大细胞表达的膜蛋白1，MCEMP1)是2型跨膜蛋白质，已经报告了肥大细胞特异性地在细胞膜表达，提示可能参与肥大细胞的分化、免疫反应、变态反应(非专利文献1)。但是，不存在MCEMP1蛋白质对癌细胞具有免疫诱导活性，由此该蛋白质对于癌的治疗、预防有用这样的报告。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Kang Li.et al.Genomics,86:68-75(2005)

发明内容

发明要解决的课题

本发明的目的是鉴定在癌细胞的表面特异性地表达的癌抗原蛋白质，提供以该癌抗原蛋白质为靶标的抗体作为癌的治疗和/或预防剂的用途。

用于解决课题的方法

本发明者们进行了深入研究，结果通过使用来源于犬的精巢组织的cDNA文库和白血病患犬的血清的SEREX法，获得了编码与来源于荷癌生物体的血清中存在的抗体结合的蛋白质的cDNA，以获得的犬基因及其人、猫、小鼠同源性基因为基础，制作了具有序列号2、4、6或8所示的氨基酸序列的MCEMP1和针对这些MCEMP1的抗体。并且发现，MCEMP1在白血病、骨髓增生异常综合征、骨肉瘤、胸腺瘤、肥大细胞瘤、肛周腺癌特异性地表达，并且MCEMP1蛋白质的一部分在这些癌细胞的细胞表面特异性地表达。然后发现，在针对这些MCEMP1在各癌细胞的细胞表面表达的部分的抗体毒害表达MCEMP1的癌细胞，从而完成了本发明。

因此，本发明包含以下方式。

(1)用于癌的治疗和/或预防的药物组合物，包含与MCEMP1蛋白质、或该蛋白质的包含连续7个以上氨基酸的片段具有免疫反应性的抗体或其片段作为有效成分，所述MCEMP1蛋白质具有序列号2、4、6或8所示的氨基酸序列、或与该氨基酸序列有80％以上的序列同一性的氨基酸序列。

(2)根据(1)所述的药物组合物，包含与下述多肽具有免疫反应性的抗体或其片段作为有效成分，所述多肽包含所述MCEMP1蛋白质的细胞外区域部分，并且是由序列号10、12、14或16所示的氨基酸序列的连续7个以上氨基酸组成的多肽、或由与该氨基酸序列有80％以上的序列同一性的氨基酸序列组成的多肽。

(3)根据(1)或(2)所述的药物组合物，所述癌是在细胞表面表达MCEMP1的癌。

(4)根据(1)～(3)的任一项所述的药物组合物，所述癌选自由白血病、骨髓增生异常综合征、骨肉瘤、胸腺瘤、肥大细胞瘤和肛周腺癌组成的组。

(5)根据(1)～(4)的任一项所述的药物组合物，所述抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。

(6)根据(1)～(5)的任一项所述的药物组合物，所述抗体是人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体或多特异性抗体。

(7)抗体或其片段，与包含MCEMP1蛋白质的细胞外区域部分的多肽具有免疫反应性，所述多肽是由序列号10、12、14或16所示的氨基酸序列、或与该氨基酸序列有80％以上的序列同一性的氨基酸序列组成的多肽。

(8)根据(7)所述的抗体或其片段，所述抗体是人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体或多特异性抗体。

(9)用于癌的治疗和/或预防的组合药物，包含：(1)～(6)的任一项所述的药物组合物、和含抗肿瘤剂的药物组合物。

(10)癌的治疗和/或预防方法，包括对受检者施与与MCEMP1蛋白质、或该蛋白质的包含连续7个以上氨基酸的片段具有免疫反应性的抗体或其片段的工序，所述MCEMP1蛋白质具有序列号2、4、6或8所示的氨基酸序列、或与该氨基酸序列有80％以上的序列同一性的氨基酸序列。

本说明书包含成为本申请的优先权基础的日本专利申请号2016-064035号的公开内容。

发明的效果

本发明中使用的针对MCEMP1的抗体毒害癌细胞。因此，针对MCEMP1的抗体在癌的治疗、预防中有用。

附图说明

图1是显示所鉴定的犬MCEMP1基因在犬的肿瘤组织中的表达图谱的图。

图2是显示所鉴定的MCEMP1基因在人的各组织和癌细胞株中的表达图谱的图。A表示人MCEMP1基因在人的各组织中的表达图谱。B表示人MCEMP1基因在人的各癌细胞株中的表达图谱。

图3是显示所鉴定的小鼠MCEMP1基因在小鼠的各癌细胞株中的表达图谱的图。

图4是显示针对MCEMP1的多克隆抗体(抗MCEMP1多克隆抗体)对表达MCEMP1基因的白血病细胞株(U937)和骨髓增生异常综合征细胞株(MDS92)的细胞毒活性的图。对照-1：添加对照多克隆抗体时对U937细胞的细胞毒活性，抗MCEMP1-1：添加抗MCEMP1多克隆抗体时对U937细胞的细胞毒活性。对照-2：添加对照多克隆抗体时对MDS92细胞的细胞毒活性，抗MCEMP1-2：添加抗MCEMP1多克隆抗体时对MDS92细胞的细胞毒活性。

具体实施方式

本发明涉及针对MCEMP1蛋白质或其片段的抗体或其片段、优选为抗原结合性片段的癌的治疗和/或预防用途。

本发明涉及用于癌的治疗和/或预防的药物组合物，包含与MCEMP1蛋白质、或该蛋白质的包含连续7个以上(7个～各序列的全长、优选为7个～150个、更优选为7个～50个)氨基酸的片段具有免疫反应性的抗体或其片段作为有效成分，所述MCEMP1蛋白质具有序列号2、4、6或8所示的氨基酸序列、或与该氨基酸序列有80％以上(优选为85％以上、更优选为90％以上、进一步优选为95％以上、特别优选为99％以上、例如99.5％以上)的序列同一性的氨基酸序列。

本发明还涉及用于癌的治疗和/或预防的药物组合物，包含与MCEMP1蛋白质的部分多肽具有免疫反应性的抗体或其片段作为有效成分，所述多肽是由序列号10～24中偶数序列号的任一项所示的氨基酸序列的连续7个以上(7个～各序列的全长、优选为7个～40个、更优选为7个～20个、例如7～12个或8～11个)氨基酸组成的多肽、或由与该氨基酸序列有80％以上(优选为85％以上、更优选为90％以上、进一步优选为95％以上、特别优选为97％以上)的序列同一性的氨基酸序列组成的多肽。

本发明中使用的针对由序列号2、4、6或8所示的氨基酸序列组成的多肽或其片段的抗体或其片段的抗肿瘤活性，可以通过在生物体内(in vivo)调查对担癌动物的肿瘤增殖的抑制，或者如后所述，在生物体外(in vitro)调查对表达该多肽的肿瘤细胞是否显示介由免疫细胞或补体的细胞毒活性来评价。

同样地，本发明中使用的针对序列号10～16中偶数序列号的多肽或其片段的抗体或其片段的抗肿瘤活性，可以通过在生物体内(in vivo)调查对担癌动物的肿瘤增殖的抑制，或者如后所述，在生物体外(in vitro)调查对表达该多肽的肿瘤细胞是否显示介由免疫细胞或补体的细胞毒活性来评价。

此外，编码由序列号2、4、6、8、10、12、14、16的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸的碱基序列分别示于序列号1、3、5、7、9、11、13、15。

本发明所公开的序列表的序列号4所示的氨基酸序列，是通过使用来源于犬精巢组织的cDNA文库和白血病患犬的血清的SEREX法，作为与来源于荷癌犬的血清中特异性地存在的抗体结合的多肽分离而得到的MCEMP1的氨基酸序列，另外序列号2所示的氨基酸序列是作为其人同源因子(同源物)分离而得到的MCEMP1的氨基酸序列，序列号6所示的氨基酸序列是作为其猫同源因子分离而得到的MCEMP1的氨基酸序列，序列号8所示的氨基酸序列是作为其小鼠同源因子分离而得到的MCEMP1的氨基酸序列(参考后述的实施例1)。

本发明中，优选使用与MCEMP1蛋白质内在癌细胞的细胞表面表达的部分结合的抗体。具体可列举作为包含MCEMP1蛋白质的细胞外区域部分的多肽的序列号10(人)、12(犬)、14(猫)或16(小鼠)所示的氨基酸序列、其片段(优选为由这些氨基酸序列的连续7个以上氨基酸组成)、或与这些多肽有80％以上、优选为85％以上、更优选为90％以上、进一步优选为95％以上、特别优选为99％以上的序列同一性的氨基酸序列，本发明的抗体包含与这些多肽结合且显示抗肿瘤活性的全部抗体。

本发明中使用的针对上述MCEMP1的抗体只要能够发挥抗肿瘤活性就可以是任何种类的抗体，可以是例如，单克隆抗体、多克隆抗体、合成抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、或单链抗体(scFV)等。本发明中使用的抗体还可以包含抗体片段(例如Fab、F(ab’)₂等抗原结合性片段。这些抗体及其片段还可以通过本领域技术人员公知的方法制备。本发明中期望是能与MCEMP1蛋白质特异性地结合的抗体或其片段，优选为单克隆抗体，但只要能够稳定地生产均质的抗体，则也可以是多克隆抗体。另外，在受检者是人的情况下，为了避免或抑制排斥反应，期望为人抗体或人源化抗体。

其中，“与MCEMP1蛋白质或其片段特异性地结合”是指与MCEMP1蛋白质或其片段特异性地结合，与除此以外的蛋白质实质上不结合。

本发明中能够使用的抗体的抗肿瘤活性可以通过在生物体内调查对荷癌动物的肿瘤增殖的抑制，或者如后所述在生物体外调查针对表达该多肽的肿瘤细胞是否显示介由免疫细胞或补体的细胞毒活性来评价。

此外，本发明中作为癌的治疗和/或预防的对象的受检者是人、宠物、家畜类、竞技用动物、实验动物等哺乳动物，优选的受检者是人。

以下，关于本发明的抗原的制作、抗体的制作和药物组合物进行说明。

＜抗体制作用抗原的制作＞

作为用于获得本发明中使用的针对MCEMP1的抗体的致敏抗原使用的蛋白质或其片段，可以来源于人、犬、猫、小鼠、牛、马、大鼠、鸡等，对成为其来源的动物种类没有限制。但是优选考虑与在细胞融合中使用的母细胞的相容性来选择，一般来说，优选来源于哺乳动物的蛋白质，特别优选来源于人的蛋白质。例如，当MCEMP1是人MCEMP1时，可以使用人MCEMP1蛋白质、其部分多肽、表达人MCEMP1的细胞等。

人MCEMP1及其同源物的碱基序列和氨基酸序列例如可以通过访问GenBank(美国NCBI)的网站，利用BLAST、FASTA等算法(Karlin and Altschul，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：5873-5877，1993；Altschul et al.，Nucleic Acids Res.25：3389-3402，1997)来获得。

本发明中，当以人MCEMP1的序列号1的碱基序列或序列号2的氨基酸序列为基准时，由与它们的ORF或成熟部分的碱基序列或氨基酸序列有70％～100％、优选为80％～100％、更优选为90％～100％、进一步优选为95％～100％、例如97％～100％、98％～100％、99％～100％或99.5％～100％的序列同一性的序列组成的核酸或蛋白质成为靶标。其中，“％序列同一性”是指将2个序列在导入间隙或不导入间隙的状态下以形成最大类似度的方式进行比对(对齐)时，相对于氨基酸(或碱基)的总数，相同的氨基酸(或碱基)的百分比(％)。

MCEMP1蛋白质的片段具有从作为抗体所识别的最小单位的表位(抗原决定簇)的氨基酸长，至小于该蛋白质的全长的长度。表位是指在哺乳动物、优选为人中具有抗原性或免疫原性的多肽片段，其最小单位由约7～12个氨基酸、例如8～11个氨基酸组成，可列举由与MCEMP1蛋白质的氨基酸序列有80％以上、优选为85％以上、更优选为90％以上、进一步优选为95％以上的序列同一性的氨基酸序列组成的多肽。

上述的人MCEMP1蛋白质、包含其部分肽的多肽可以按照例如Fmoc法(芴基甲基氧基羰基法)、tBoc法(叔丁基氧基羰基法)等化学合成法来合成(日本生化学会编、生化学实验讲座1、タンパク質の化学(蛋白质的化学)IV、化学修饰とペプチド合成(化学修饰和肽合成)、东京化学同人(日本)、1981年)。另外，还可以利用各种市售的肽合成仪通过常规方法合成。另外，还可以使用公知的基因工程学方法(Sambrook等，Molecular Cloning，第2版，Current Protocols in Molecular Biology(1989)，Cold Spring Harbor LaboratoryPress、Ausubel等，Short Protocols in Molecular Biology，第3版，A compendium ofMethods from Current Protocols in Molecular Biology(1995)，John Wiley&Sons等)，制备编码上述多肽的多核苷酸，将该多核苷酸整合到表达载体中并导入宿主细胞，在该宿主细胞中生产多肽，从而得到目的多肽。

编码上述多肽的多核苷酸可以通过公知的基因工程学方法和/或使用了市售的核酸合成仪的常规方法来容易地制备。例如，包含序列号1的碱基序列的DNA可以通过使用人染色体DNA或cDNA文库作为模板，使用以能扩增序列号1所记载的碱基序列的方式设计的一对引物进行PCR，从而制备。PCR的反应条件可以适当设定，可以列举例如，使用耐热性DNA聚合酶(例如Taq聚合酶等)和含有Mg²⁺的PCR缓冲液，将包含在94℃保持30秒(变性)、在55℃保持30秒～1分钟(退火)、在72℃保持1分钟(延伸)的反应过程作为1个循环，例如进行30个循环后，在72℃反应7分钟的条件等，但不限定于此。对于PCR的方法、条件等，例如记载于Ausubel等，Short Protocols in Molecular Biology，第3版，A compendium of Methodsfrom Current Protocols in Molecular Biology(1995)，John Wiley&Sons(特别是第15章)中。

另外，基于本说明书中的序列表的序列号1～8所示的碱基序列和氨基酸序列的信息，制备合适的探针和/或引物，使用该探针和/或引物来对人等的cDNA文库进行筛选，从而分离所需的DNA。cDNA文库优选由表达序列号2、4、6或8的蛋白质的细胞、器官或组织制作。这样的细胞或组织的例子是来源于骨髓、外周血单核细胞(PBMC)、白血病、骨髓增生异常综合征、骨肉瘤、胸腺瘤、肥大细胞瘤、肛周腺癌等癌或肿瘤的细胞或组织，但不限于此。上述探针或引物的制备、cDNA文库的构建、cDNA文库的筛选、以及目的基因的克隆等操作对于本领域技术人员而言是已知的，可以依据例如Sambrook等，Molecular Cloning，第2版，Current Protocols in Molecular Biology(1989)、Ausbel等(上述)等所记载的方法来进行。由这样得到的DNA，可以获得编码人MCEMP1蛋白质、其部分肽的DNA。

作为上述宿主细胞只要是可表达上述多肽的细胞，就可以是任何细胞，作为原核细胞的例子可以列举大肠杆菌等，作为真核细胞的例子可以列举猴肾脏细胞COS1、中国仓鼠卵巢细胞CHO等哺乳动物细胞、人胎儿肾脏细胞株HEK293、小鼠胚胎皮肤细胞株NIH3T3、芽殖酵母、裂殖酵母等酵母细胞、蚕细胞、非洲爪蟾卵细胞等，但不限于这些。

当使用原核细胞作为宿主细胞时，作为表达载体，优选使用具有能在原核细胞中复制的复制起点(Origin)、启动子、核糖体结合部位、多克隆位点、终止子、抗药性基因、营养缺陷型互补基因、报告基因等的表达载体。作为大肠杆菌用表达载体，可以例示pUC系、pBluescriptII、pET表达系统、pGEX表达系统等。如果将编码上述多肽的DNA整合到这样的表达载体中，用该载体转化原核宿主细胞后，培养所得的转化体，则可以在原核宿主细胞中表达由上述DNA编码的多肽。此时，也可以将该多肽制成与其他蛋白质的融合蛋白质来表达。

当使用真核细胞作为宿主细胞时，作为表达载体，优选使用具有启动子、剪接区、多聚(A)添加部位等的真核细胞用表达载体。作为这样的表达载体，可以例示pKA1、pCDM8、pSVK3、pMSG、pSVL、pBK-CMV、pBK-RSV、EBV载体、pRS、pcDNA3.1、pSecTag(A、B、C)、pYES2等。与上述同样地，如果将编码上述多肽的DNA整合到这样的表达载体中，用该载体转化真核宿主细胞后，培养所得的转化体，则可以在真核宿主细胞中表达由上述DNA编码的多肽。当使用pIND/V5-His、pFLAG-CMV-2、pEGFP-N1、pEGFP-C1等作为表达载体时，可以作为附加了His标签(例如(His)₆～(His)₁₀)、FLAG标签、myc标签、HA标签、GFP等各种标签的融合蛋白质，而表达上述多肽。

表达载体向宿主细胞中的导入可以使用电穿孔法、磷酸钙法、脂质体法、DEAE葡聚糖法、显微注射、病毒感染、脂质体转染、与细胞膜透过性肽结合等周知的方法。

为了从宿主细胞中分离纯化目的多肽，可以将公知的分离操作组合来进行。作为分离纯化技术，可以列举例如，利用脲等变性剂和/或表面活性剂进行处理、超声波处理、酶消化、盐析和/或溶剂分别沉淀法、透析、离心分离、超滤、凝胶过滤、SDS-PAGE、等电点电泳、离子交换层析、疏水层析、亲和层析、反相层析等，但不限于这些。

＜抗体的结构＞

抗体是通常至少包含2条重链和2条轻链的杂多聚体糖蛋白质。除了IgM以外，其他类型的抗体是由2条相同的轻(L)链和2条相同的重(H)链构成的约150kDa的杂四聚体糖蛋白质。典型地，各个轻链通过1个二硫共价键与重链连接，但各种免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键的数是变化的。各个重链和轻链还具有链内二硫键。各个重链在一端具有可变结构域(VH区)，几个恒定区与其连接。各个轻链具有可变结构域(VL区)，在其另一端具有1个恒定区。轻链的恒定区与重链最初的恒定区对齐，并且轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐。抗体的可变结构域中，特定的区域显示被称为互补决定区(CDR)的特定可变性，赋予抗体以结合特异性。可变区的相对保守的部分被称为框架区(FR)。完全的重链和轻链的可变结构域分别包含由3个CDR连接的4个FR。3个CDR在重链中从其N末端起依次被称为CDRH1、CDRH2、CDRH3，同样地在轻链中被依次称为CDRL1、CDRL2、CDRL3。抗体对抗原的结合特异性中CDRH3最为重要。另外，各链的CDR通过FR区以接近的状态被保持在一起，与来自其他链的CDR一同有助于抗体的抗原结合部位的形成。恒定区不直接有助于抗体与抗原结合，但表现各种效应器功能，例如，显示与抗体依赖性细胞毒活性(ADCC活性)的相关、介由对Fcγ受体的结合而产生的吞噬作用、介由新生儿Fc受体(FcRn)的半衰期/清除速度、介由补体级联的C1q构成要素的补体依赖性细胞毒活性(CDC活性)。

＜抗体的制作＞

本发明中的抗MCEMP1抗体，是指与上述那样的MCEMP1蛋白质的全长或其片段有免疫反应性的抗体。

其中，“免疫反应性”是指抗体与MCEMP1抗原在生物体内或生物体外结合的特性，介由这样的结合而发挥毒害(例如，死灭、抑制或衰退)肿瘤或肿瘤细胞的功能。即，本发明中的抗体只要能够与MCEMP1蛋白质结合而毒害肿瘤、优选为在细胞表面表达(具有)MCEMP1蛋白质的癌、例如白血病、骨髓增生异常综合征、骨肉瘤、胸腺瘤、肥大细胞瘤或肛周腺癌等，就不限制其种类。

抗体的例子包含单克隆抗体、多克隆抗体、合成抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体等。抗体还包含例如抗体片段(例如Fab、F(ab’)₂等片段。另外，抗体可以是免疫球蛋白分子的任意类，例如IgG、IgE、IgM、IgA、IgD和IgY，或任意亚类例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2等。

抗体进而除了糖基化以外，也可以通过乙酰化、甲酰化、酰胺化、磷酸化、或聚乙二醇(PEG)化等而被修饰。

以下显示各种抗体的制作例。

本发明中可以使用的多克隆抗体例如可以如下获得。

将天然的MCEMP1蛋白质、或作为与GST等的融合蛋白质而在大肠杆菌等微生物中表达的重组MCEMP1蛋白质、或其部分肽免疫小鼠、产生人抗体的小鼠、兔等小动物，获得血清。将其通过例如硫酸铵沉淀、蛋白A、蛋白G柱、DEAE离子交换层析、偶联了MCEMP1蛋白质和/或合成肽的亲和柱等进行纯化，从而制备。在后述的实施例中，制作了针对MCEMP1蛋白质的氨基酸序列中在癌细胞的细胞表面表达的区域的小鼠多克隆抗体，确认了抗肿瘤效果。

本发明中可以使用的抗体的别的例子是单克隆抗体。单克隆抗体例如可以如下获得。例如，可以将在细胞表面表达MCEMP1的细胞(白血病细胞株U937等)施与小鼠进行免疫，从该小鼠提取脾脏，分离细胞，然后使该细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，从所得的融合细胞(杂交瘤)中选择产生具有癌细胞增殖抑制作用的抗体的克隆。分离产生具有癌细胞增殖抑制作用的单克隆抗体的杂交瘤，培养该杂交瘤，从培养上清通过一般的亲和纯化法纯化抗体，从而制备。

产生单克隆抗体的杂交瘤例如也可以如下制作。首先，按照公知的方法，用致敏抗原对动物进行免疫。作为一般的方法，可以通过将致敏抗原向哺乳动物的腹腔内或皮下注射来进行。具体来说，可以将致敏抗原用PBS(磷酸盐缓冲液，Phosphate-Buffered Saline)和/或生理盐水等稀释成适当量、进行悬浮，在所得的产物中根据需要适量混合通常的佐剂、例如弗氏完全佐剂，乳化后，每隔4～21天对哺乳动物施与，施与数次。另外，致敏抗原免疫时也可以使用合适的担载体。

这样将哺乳动物进行免疫，确认在血清中所需的抗体水平升高，然后从哺乳动物采取免疫细胞，进行细胞融合，作为优选的免疫细胞，特别可列举脾细胞。

作为与上述免疫细胞融合的其他母细胞，使用哺乳动物的骨髓瘤细胞。作为该骨髓瘤细胞，适合使用公知的各种细胞株，例如P3U1(P3-X63Ag8U1)、P3(P3x63Ag8.653)(J.Immunol.(1979)123，1548-1550)、P3x63Ag8U.1(Current Topics in Microbiologyand Immunology(1978)81，1-7)、NS-1(Kohler.G.and Milstein，C.Eur.J.Immunol.(1976)6，511-519)、MPC-11(Margulies.D.H.et al.，Cell(1976)8，405-415)、SP2/0(Shulman，M.et al.，Nature(1978)276，269-270)、FO(deSt.Groth，S.F.et al.，J.Immunol.Methods(1980)35，1-21)、S194(Trowbridge，I.S.J.Exp.Med.(1978)148，313-323)、R210(Galfre，G.et al.，Nature(1979)277，131-133)等。

上述免疫细胞与骨髓瘤细胞的细胞融合基本上可以按照公知的方法，例如Kohler和Milstein等的方法(Kohler，G.and Milstein，C.Methods Enzymol.(1981)73，3-46)等来进行。

更具体地，上述细胞融合例如可在细胞融合促进剂的存在下、在通常的营养培养液中实施。作为融合促进剂，可以使用例如聚乙二醇(PEG)、仙台病毒(HVJ)等，进而根据需要为了提高融合效率，还可以添加使用二甲基亚砜等助剂。

免疫细胞与骨髓瘤细胞的使用比例可以任意地设定。例如优选使免疫细胞相对于骨髓瘤细胞为1～10倍。作为在上述细胞融合中使用的培养液，可以使用例如，适合上述骨髓瘤细胞株的增殖的RPMI1640培养液、MEM培养液、其他可以在这种细胞培养中使用的通常的培养液，进一步也可以联合使用胎牛血清(FCS)等血清补液。

在细胞融合中，将规定量的上述免疫细胞和骨髓瘤细胞在上述培养液中充分混合，将预先加温至37℃左右的PEG溶液(例如平均分子量1000～6000左右)以通常30～60％(w/v)的浓度添加、混合，由此形成作为目的的杂交瘤。接着，将逐次添加适当的培养液、离心除去上清的操作反复进行，由此除去对于杂交瘤的生长不利的细胞融合剂等。

这样得到的杂交瘤可以通过在通常的选择培养液、例如HAT培养液(含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶脱氧核苷的培养液)中培养来进行选择。上述HAT培养液中的培养持续对于除了作为目的的杂交瘤以外的细胞(非融合细胞)死灭充分的时间(通常数天～数周)。接着，实施通常的有限稀释法，进行产生目的抗体的杂交瘤的筛选和单克隆化。

另外，除了对除人以外的动物免疫抗原来得到上述杂交瘤以外，还可以将人淋巴细胞、例如感染了EB病毒的人淋巴细胞在体外(in vitro)用蛋白质、蛋白质表达细胞或其溶解物致敏，使致敏淋巴细胞与来源于人的具有永久分裂能力的骨髓瘤细胞、例如U266(注册号TIB196)融合，得到产生具有所希望的活性(例如，细胞增殖抑制活性)的人抗体的杂交瘤。

这样制备的产生单克隆抗体的杂交瘤可以在通常的培养液中传代培养，另外，可在液氮中长期保存。

即，使用所期望的抗原、表达所期望的抗原的细胞作为致敏抗原，将其按照通常的免疫方法进行免疫，使所得的免疫细胞通过通常的细胞融合法与公知的母细胞融合，通过通常的筛选法筛选产生单克隆抗体的细胞(杂交瘤)，从而制作。

其中，作为产生人抗体的小鼠，已知例如KM小鼠(キリンファーマ/Medarex)和Xeno小鼠(Amgen)(例如，国际公开第WO02/43478号、国际公开第WO02/092812号等)。将这样的小鼠用MCEMP1蛋白质或其片段进行免疫时，可以从血液得到完全人多克隆抗体。另外，从免疫后的小鼠取出脾脏细胞，通过与骨髓瘤细胞的融合法可以制作完全人单克隆抗体。

抗原的制备可以根据例如使用了动物细胞的方法(日本特表2007-530068)和/或使用了杆状病毒的方法(例如，国际公开第WO98/46777号等)等来进行。当抗原的免疫原性低时，可以使其与白蛋白等具有免疫原性的巨大分子结合而进行免疫。

此外，可以使用将抗体基因由杂交瘤克隆，整合到适当的载体中，并将其导入宿主，使用基因重组技术而产生的基因重组型抗体(参照例如Carl，A.K.Borrebaeck，James，W.Larrick，THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES，Published in the United Kingdomby MACMILLAN PUBLISHERS LTD，1990)。具体来说，由杂交瘤的mRNA使用逆转录酶来合成抗体的可变区(V区)的cDNA。如果得到编码目的抗体的V区的DNA，则将其与编码所希望的抗体恒定区(C区)的DNA连接，将所得的DNA整合到表达载体中。或者，也可以将编码抗体的V区的DNA整合到包含抗体C区的DNA的表达载体中。上述DNA以在表达控制区域、例如增强子、启动子的控制下表达的方式整合到表达载体中。接着，可以用该表达载体转化宿主细胞，使抗体表达。

单克隆抗体包含人单克隆抗体、非人动物单克隆抗体(例如小鼠单克隆抗体、大鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体、鸡单克隆抗体等)等。单克隆抗体可以通过培养将来自免疫了MCEMP1蛋白质或其片段的非人哺乳动物(例如，小鼠、产生人抗体的小鼠等)的脾细胞与骨髓瘤细胞融合而得的杂交瘤来制作。

嵌合抗体是将来源于不同动物的序列组合而制作的抗体，例如是包含小鼠抗体的重链、轻链的可变区和人抗体的重链、轻链的恒定区的抗体等。嵌合抗体的制作可以使用公知的方法来进行，例如可以通过将编码抗体V区的DNA与编码人抗体C区的DNA连接，将其整合到表达载体中并导入宿主，而使其产生，从而得到。

多克隆抗体包含对产生人抗体的动物(例如，小鼠)免疫MCEMP1蛋白质或其片段而得到的抗体。

人源化抗体是也称为重构(reshaped)人抗体的改造抗体。人源化抗体通过将来源于免疫动物的抗体的CDR移植到人抗体的互补性决定区中来构建。其一般的基因重组方法也是已知的。

具体地，通过PCR法，由以末端部具有重叠部分的方式制作的数个寡核苷酸，合成以将小鼠抗体的CDR与人抗体的框架区(framework region；FR)连接的方式设计的DNA序列。将所得的DNA与编码人抗体恒定区的DNA连接，接着整合到表达载体中，将其导入宿主而使抗体产生，从而得到人源化抗体(参照欧洲专利申请公开第EP239400号、国际公开第WO96/02576号)。介由CDR连接的人抗体的FR可以选择互补性决定区形成良好的抗原结合部位的FR。根据需要，也可以替换抗体的可变区中的框架区的氨基酸，以使重构人抗体的互补性决定区形成适当的抗原结合部位(Sato K.et al.，Cancer Research 1993，53：851-856)。另外，可以替换为来源于各种人抗体的框架区(参考国际公开第WO99/51743号)。

在制作嵌合抗体或人源化抗体后，可以将可变区(例如，FR)和/或恒定区中的氨基酸用其他氨基酸替换等。

氨基酸的替换例如是小于15个、小于10个、8个以下、7个以下、6个以下、5个以下、4个以下、3个以下、或2个以下的氨基酸、优选1～5个氨基酸、更优选1或2个氨基酸的替换，替换抗体应与未替换抗体在功能上等同。期望替换是保守的氨基酸替换，这是电荷、侧链、极性、芳香族性等性质类似的氨基酸之间的替换。性质类似的氨基酸例如可以分类为碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸、组氨酸)、酸性氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)、无电荷极性氨基酸(甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸)、无极性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、蛋氨酸)、支链氨基酸(苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、组氨酸)等。

本发明的抗体也可以是抗体修饰物。作为抗体修饰物，可以列举例如与聚乙二醇(PEG)等各种分子结合的抗体。在本发明的抗体修饰物中，不限定所结合的物质。为了获得这样的抗体修饰物，可以通过对所得的抗体实施化学修饰来得到。这些方法在本领域已经被确立。

其中“在功能上等同”是指成为对象的抗体与本发明的抗体具有同样的生物学或生物化学活性，具体来说，是指具有毒害肿瘤的功能、以及在对人应用时本质上不发生排斥反应等。作为这样的活性，可以列举例如细胞增殖抑制活性、或结合活性。

作为用于制备与某多肽在功能上等同的多肽的本领域技术人员熟知的方法，已知在多肽中导入突变的方法。例如只要是本领域技术人员，就可以使用定点诱变法(Hashimoto-Gotoh，T.et al.，(1995)Gene 152，271-275、Zoller，MJ.，and Smith，M.(1983)Methods Enzymol.100，468-500、Kramer，W.et al.，(1984)Nucleic Acids Res.12，9441-9456、Kramer，W.and Fritz，HJ.，(1987)Methods Enzymol.154，350-367、Kunkel，TA.，(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA.82，488-492、Kunkel(1988)Methods Enzymol.85，2763-2766)等，在本发明的抗体中导入适当突变，由此制备与该抗体在功能上等同的抗体。

识别上述抗MCEMP1抗体所识别的MCEMP1蛋白质的表位的抗体可以通过本领域技术人员公知的方法获得。例如，可以通过下述方法等获得：通过通常的方法(例如表位作图(epitope mapping)等)确定抗MCEMP1抗体所识别的MCEMP1蛋白质的表位，以具有该表位中所含的氨基酸序列的多肽作为免疫原来制作抗体的方法；确定通过通常的方法制作的抗体的表位，选择表位与抗MCEMP1抗体表位相同的抗体的方法等。其中，“表位”是指在哺乳动物、优选为人中具有抗原性或免疫原性的多肽片段，其最小单位由约7～12个氨基酸、优选为8～11个氨基酸组成。

本发明的抗体的亲和常数Ka(kon/koff)优选为至少10⁷M^-1、至少10⁸M^-1、至少5×10⁸M^-1、至少10⁹M^-1、至少5×10⁹M^-1、至少10¹⁰M^-1、至少5×10¹⁰M^-1、至少10¹¹M^-1、至少5×10¹¹M^-1、至少10¹²M^-1、或者至少10¹³M^-1。

本发明的抗体可以与抗肿瘤剂缀合。抗体与抗肿瘤剂的结合可以介由间隔物来进行，所述间隔物具有与氨基、羧基、羟基、硫醇基等为反应性的基团(例如，琥珀酰亚胺基、甲酰基、2-吡啶基二硫代基、马来酰亚胺基、烷氧基羰基、羟基等)。

抗肿瘤剂的例子包含在文献等中公知的下述抗肿瘤剂，即，紫杉醇、多柔比星、柔红霉素、环磷酰胺、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、噻替哌、白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、benzodopa、卡波醌、meturedopa、uredopa、六甲蜜胺(altretamine)、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺(triethilenethiophosphoramide)、三羟甲基三聚氰胺(trimethylolomelamine)、布拉他辛、布拉他辛酮、喜树碱、苔藓虫素、海绵多聚乙酰(callystatin)、cryptophycin1、cryptophycin8、海兔毒素(dolastatin)、倍癌霉素(duocarmycin)、艾榴塞洛素(eleutherobin)、水鬼蕉碱(pancratistatin)、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、spongistatin、苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、甲氮芥、盐酸甲氧氮芥、美法仑、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、乌拉莫司汀、卡莫司汀、氯乙链脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、卡奇霉素(calicheamicin)、达内霉素(dynemicin)、氯屈膦酸、埃斯培拉霉素(esperamicin)、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素(authramycin)、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C(cactinomycin)、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素、更生霉素、detorbicin、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素(ADRIAMYCIN)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素C、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉素、甲基丝裂霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素、链佐星、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)、二甲叶酸(denopterin)、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)、氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤、安西他滨、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮杂尿苷(azauridine)、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素类、例如卡普睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酮(testolactone)、氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦、亚叶酸(frolinic acid)、醋葡醛内酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶(eniluracil)、安吖啶(amsacrine)、阿莫司汀(bestrabucil)、比生群(bisantrene)、依达曲沙(edatraxate)、defofamine、秋水仙胺(demecolcine)、地吖醌(diaziquone)、依氟鸟氨酸(elfornithine)、依利醋铵(elliptinium)、埃博霉素(epothilone)、依托格鲁(etoglucid)、香茹多糖、氯尼达明(lonidamine)、美登素(maytansine)、安丝菌素(ansamitocine)、米托胍腙(mitoguazone)、米托蒽醌、mopidanmol、二胺硝吖啶nitraerine、喷司他丁、蛋氨氮芥(phenamet)、吡柔比星、洛索蒽醌(losoxantrone)、足叶草酸(podophyllinic acid)、2-乙基酰肼、甲苄肼、雷佐生(razoxane)、根瘤菌素(rhizoxin)、西佐喃、锗螺胺(spirogermanium)、细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)、三乙撑亚胺苯醌(triaziquone)、杆孢菌素(roridine)A、蛇形菌素(anguidine)、聚氨酯、长春地辛、达卡巴嗪、甘露醇氮芥(mannomustine)、二溴甘露醇、二溴卫矛醇(mitolactol)、哌泊溴烷(pipobroman)、gacytosine、多西他赛、瘤可宁、吉西他滨(gemcitabine)、6-硫鸟嘌呤、巯嘌呤、顺铂、奥沙利铂、卡波铂、长春碱、足叶乙甙、异环磷酰胺、米托葸醌、长春新碱、长春瑞滨、诺消灵(novantrone)、替尼泊苷、依达曲沙(edatrexate)、道诺霉素、氨蝶呤、希罗达(xeloda)、伊班膦酸盐(ibandronate)、伊立替康、拓扑异构酶抑制剂、二氟甲基鸟氨酸(DMFO)、视黄酸、卡培他滨(capecitabine)，以及它们的药学上容许的盐或衍生物。

或者，本发明的抗体上也可以结合在文献等中公知的²¹¹At、¹³¹I、¹²⁵I、⁹⁰Y、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、¹⁵³Sm、²¹²Bi、³²P、¹⁷⁵Lu、¹⁷⁶Lu等放射性同位素。放射性同位素期望是对于肿瘤的治疗、诊断有效的放射性同位素。

本发明的抗体优选为与MCEMP1有免疫反应性的抗体、或者特异性地识别MCEMP1的抗体。该抗体应该是具有能够在施与该抗体的对象动物中几乎避免或完全避免排斥反应那样的结构的抗体。作为这样的抗体，例如在对象动物为人时，可以列举人抗体、人源化抗体、嵌合抗体(例如人-小鼠嵌合抗体)、单链抗体、双特异性抗体等。这些抗体是重链和轻链的可变区来源于人抗体的重组型抗体，或者重链和轻链的可变区由来源于非人动物抗体的互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)和来源于人抗体的框架区组成的重组型抗体，或者重链和轻链的可变区来源于非人动物抗体、且重链和轻链的恒定区来源于人抗体的重组型抗体。优选的抗体是前两种抗体。

这些重组型抗体可以如下制作。从杂交瘤等产生抗体的细胞克隆编码针对人MCEMP1的单克隆抗体(例如，人单克隆抗体、小鼠单克隆抗体、大鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体、鸡单克隆抗体等)的DNA，以其为模板通过RT-PCR法等制作编码该抗体的轻链可变区和重链可变区的DNA，基于Kabat EU numbering system(Kabat等，Sequences of Proteinsof Immunological Interest，5thEd.Public Health Service，National Institute ofHealth，Bethesda，Md.(1991))确定轻链和重链的各可变区的序列或各CDR1、CDR2、CDR3的序列。

进而，可以使用基因重组技术(Sambrook等，Molecular Cloning A LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989))或DNA合成仪来制作编码这些各可变区的DNA或编码各CDR的DNA。其中，产生上述人单克隆抗体的杂交瘤可以通过对产生人抗体的动物(例如，小鼠)免疫人MCEMP1，然后使从该免疫动物切除的脾细胞与骨髓瘤细胞融合来制作。与此独立地，根据需要使用基因重组技术或DNA合成仪制作编码来源于人抗体的轻链或重链的可变区和恒定区的DNA。

在人源化抗体情况下，可以制作将编码来源于人抗体的轻链或重链的可变区的DNA中的CDR编码序列置换成与它们对应的来源于人以外的动物(例如小鼠、大鼠、鸡等)的抗体的CDR编码序列的DNA，将由此得到的DNA分别与编码来源于人抗体的轻链或重链的恒定区的DNA连接，从而制作编码人源化抗体的DNA。

在嵌合抗体的情况下，可以将编码来源于除人以外的动物(例如小鼠、大鼠、鸡等)的抗体的轻链或重链的可变区的DNA分别与编码来源于人抗体的轻链或重链的恒定区的DNA连接，从而制作编码嵌合抗体的DNA。

在单链抗体的情况下，该抗体是将重链可变区和轻链可变区通过连接物以直线状连接而成的抗体，可以通过将编码重链可变区的DNA、编码连接物的DNA、和编码轻链可变区的DNA结合，从而制作编码单链抗体的DNA。其中，重链可变区和轻链可变区都来源于人抗体，或者来源于仅CDR被来源于除人以外的动物(例如小鼠、大鼠、鸡等)的抗体的CDR替换而得的人抗体。另外，连接物包含12～19个氨基酸，可以列举例如15个氨基酸的(G4S)3(G.-B.Kim等，Protein Engineering Design and Selection 2007，20(9)：425-432)。

在双特异性抗体(diabody)的情况下，该抗体是可与2个不同的表位特异性地结合的抗体，例如可以通过将编码重链可变区A的DNA、编码轻链可变区B的DNA、编码重链可变区B的DNA、和编码轻链可变区A的DNA以该顺序进行结合(其中编码轻链可变区B的DNA与编码重链可变区B的DNA可介由编码如上所述的连接物的DNA来结合)，从而制作编码双特异性抗体的DNA。这里，优选重链可变区和轻链可变区都来源于人抗体，或者来源于仅CDR被来源于除人以外的动物(例如小鼠、大鼠、鸡等)的抗体的CDR替换而得的人抗体。

可以将如上所述制作的重组DNA整合到1个或多个适当的载体中，将其导入宿主细胞(例如，哺乳动物细胞、酵母细胞、昆虫细胞等)，进行(共)表达，从而制作重组型抗体(P.J.Delves.，ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES.，1997 WILEY、P.Shepherdand C.Dean.，Monoclonal Antibodies.，2000 OXFORD UNIVERSITY PRESS；J.W.Goding.，Monoclonal Antibodies：principles and practice.，1993ACADEMIC PRESS)。

上述抗体优选具有细胞毒活性，由此可以发挥抗肿瘤效果。

另外，制作能够产生针对人MCEMP1的别的人抗体或非人动物抗体(例如小鼠抗体)的杂交瘤，回收由该杂交瘤产生的单克隆抗体，以与人MCEMP1的免疫结合性和细胞毒活性为指标判定是否是目的抗体。由此识别产生目的单克隆抗体的杂交瘤，然后，如上所述，从该杂交瘤制作编码目的抗体的重链和轻链的可变区的DNA并确定碱基序列，将该DNA用于别的抗体的制作。

进而本发明的上述抗体只要具有特异性地识别MCEMP1这样的特异性，则在抗体的特别是框架区的序列和/或恒定区的序列中也可以有1或数个(优选为1或2个)氨基酸的替换、缺失或添加。其中数个是指2～5个、优选为2个或3个。

本发明还提供编码本发明的上述抗体的DNA、或编码上述抗体的重链或轻链的DNA、或编码上述抗体的重链或轻链的可变区的DNA。

由这些序列的DNA所编码的互补决定区(CDR)是决定抗体的特异性的区域，因此编码抗体的除此以外的区域(即，恒定区和框架区)的序列也可以是来源于其他抗体的序列。其中，其他抗体也包含来源于除人以外的生物的抗体，但从降低副作用的观点考虑优选来源于人的抗体。即，在上述的DNA中，编码重链和轻链的各框架区和各恒定区的区域优选包含编码来源于人抗体的对应氨基酸序列的碱基序列。

本发明的DNA可以通过例如上述的方法或以下的方法得到。首先，从本发明的抗体所涉及的杂交瘤使用市售的RNA提取试剂盒制备总RNA，使用随机引物等通过逆转录酶合成cDNA。接着通过使用了已知的在小鼠抗体重链基因和轻链基因的各可变区中分别保守的序列的寡核苷酸作为引物的PCR法，来扩增编码抗体的cDNA。对于编码恒定区的序列，可以通过将已知的序列用PCR法扩增来得到。DNA的碱基序列可以插入到序列确定用质粒或噬菌体中等，通过常规方法来确定。

认为本发明中使用的抗MCEMP1抗体对表达MCEMP1的癌细胞的抗肿瘤效果是由表达MCEMP1的细胞的效应器细胞抗体依赖性细胞毒活性(ADCC活性)、或表达MCEMP1的细胞的补体依赖性细胞毒活性(CDC活性)引起的。

因此，本发明中使用的抗MCEMP1抗体的活性如以下实施例中具体显示的那样，可以通过在生物体外对表达MCEMP1的癌细胞测定上述ADCC活性或CDC活性来评价。

本发明中使用的抗MCEMP1抗体与癌细胞上的MCEMP1蛋白质结合，通过上述活性而显示抗肿瘤作用，因此认为在癌的治疗或预防中是有用的。即，本发明提供以抗MCEMP1抗体作为有效成分的用于癌的治疗和/或预防的药物组合物。在以将抗MCEMP1抗体施与人体为目的(抗体治疗)而使用的情况下，为了使免疫原性降低，优选制成人抗体和/或人源化抗体。

此外，抗MCEMP1抗体与癌细胞表面上的MCEMP1蛋白质的结合亲和性越高，则通过抗MCEMP1抗体能够得到越强的抗肿瘤活性。因此，如果能够获得与MCEMP1蛋白质具有高结合亲和性的抗MCEMP1抗体，则可以期待更强的抗肿瘤效果，可以适应作为以癌的治疗和/或预防为目的的药物组合物。作为高的结合亲和性，如前所述，期望结合常数(亲和常数)Ka(kon/koff)优选为至少10⁷M^-1、至少10⁸M^-1、至少5×10⁸M^-1、至少10⁹M^-1、至少5×10⁹M^-1、至少10¹⁰M^-1、至少5×10¹⁰M^-1、至少10¹¹M^-1、至少5×10¹¹M^-1、至少10¹²M^-1、或者至少10¹³M^-1。

＜对表达抗原的细胞的结合＞

抗体与MCEMP1结合的能力如实施例中所述那样的，可以利用使用了例如ELISA法、蛋白质印迹法、免疫荧光和流式细胞仪分析等的结合分析来特定。

＜免疫组织化学染色＞

识别MCEMP1的抗体可以通过利用本领域技术人员周知的方法的免疫组织化学，由外科手术期间从患者得到的组织、患者的骨髓组织、淋巴节或外周血细胞、从担载了接种有自然地或在转染后表达MCEMP1的细胞系的异种移植组织的动物得到的组织，使用进行了低聚甲醛或丙酮固定的冷冻切片，或用低聚甲醛固定并进行了石蜡包埋的组织切片，关于与MCEMP1的反应性进行试验。

为了进行免疫组织化学染色，可以用各种方法使对MCEMP1有免疫反应性的抗体染色。例如可以通过与辣根过氧化物酶复合山羊抗小鼠抗体或山羊抗兔抗体反应，从而进行可视化。

＜药物组合物＞

本发明提供包含本发明的抗体、即上述的针对MCEMP1的抗体或其片段(优选为抗原结合性片段)的药物组合物(或药物)。本发明的药物组合物(或药物)通常以有效量包含上述的针对MCEMP1的抗体或其片段(优选为抗原结合性片段)。

本发明的用于癌的治疗和/或预防的药物组合物的靶标只要是表达MCEMP1基因的癌(细胞)，就不特别限定。

本说明书中使用的“肿瘤”和“癌”这样的术语是指恶性新生物，可以互换使用。

作为在本发明中成为对象的癌，是表达编码包含序列号2、4、6或8的氨基酸序列或其由7个以上的连续氨基酸组成的部分序列的多肽的基因的癌，优选为在细胞表面表达这样的多肽的癌。在本发明中成为对象的癌优选为白血病、骨髓增生异常综合征、骨肉瘤、胸腺瘤、肥大细胞瘤或肛周腺癌，这些特定的癌包含例如，急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性前中幼粒细胞性白血病、成人T细胞白血病、非白血病性白血病、白细胞血症性白血病(leukocythemicleukemia)、嗜碱细胞性白血病、胚细胞性白血病、牛白血病、慢性中幼粒细胞性白血病、皮肤白血病、胎生细胞性白血病、嗜酸细胞性白血病、Gross白血病、前导细胞(leader)性白血病、Shilling白血病、干细胞性白血病、亚白血性白血病、未分化细胞性白血病、毛状细胞性白血病、成血细胞性白血病(hemoblastic leukemia)、成血细胞性白血病(hemocytoblastic leukemia)、组织细胞白血病、干细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、白细胞减少性白血病、淋巴性白血病、原淋巴细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、淋巴向性白血病、淋巴样白血病、淋巴肉瘤细胞性白血病、肥大细胞白血病、巨噬细胞性白血病、小原粒细胞性白血病、单核细胞性白血病、原粒细胞性白血病、中幼粒细胞性白血病、骨髓粒细胞性白血病、骨髓单核细胞性白血病、Naegli白血病、浆细胞白血病、浆细胞性白血病、前中幼粒细胞性白血病、难治性贫血(RA)、伴有铁粒幼细胞的难治性贫血(RARS)、伴有原始细胞增加的难治性贫血(RAEB)、转化型RAEB(RAEB-T)、前白血病和慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、骨内通常型骨肉瘤和亚系骨肉瘤(骨内高分化型骨肉瘤、圆形细胞骨肉瘤、表面骨肉瘤、骨旁骨肉瘤、骨膜骨肉瘤或表面高恶性骨肉瘤)、胸腺瘤、肥大细胞瘤、肛周腺瘤、肛周腺癌，但不限于这些。

另外，成为对象的动物是哺乳动物，例如是包含灵长类、宠物、家畜类、竞技用动物、实验动物等的哺乳动物，特别优选是人、犬和猫。

当将本发明中使用的抗体作为药物组合物使用时，可以利用本领域技术人员公知的方法进行制剂化。例如，可以以与水或除水以外的药学上容许的液体的无菌性溶液、或悬浮液剂的注射剂的形式非经口地使用。例如，认为可以与药理学上容许的担载体或介质或添加剂、具体来说为灭菌水和/或生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、香味剂、赋形剂、媒介物(vehicle)、防腐剂、结合剂等适当组合，通过以一般认为的制药实施所要求的单位用量方式混和来进行制剂化。这些制剂中的有效成分量，是可得到所指示的范围的适当的用量那样的量。

用于注射的无菌组合物可以使用注射用蒸馏水这样的媒介物，按照通常的制剂实施来制备。

作为注射用的水溶液，可以列举例如生理盐水、含有葡萄糖和/或其他辅助剂、例如D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露醇、氯化钠的等渗液，也可以与适当的溶解助剂、例如醇、具体为乙醇、多元醇例如丙二醇、聚乙二醇、非离子性表面活性剂例如聚山梨醇酯80(TM)、HCO-60联合使用。

作为油性液可列举芝麻油、大豆油，其也可以与作为溶解助剂的苯甲酸苄酯、苄醇联合使用。另外，还可以与缓冲剂例如磷酸盐缓冲液、乙酸钠缓冲液、镇痛剂例如盐酸普鲁卡因、稳定剂例如苄醇、苯酚、抗氧化剂配合。制备的注射液通常填充到适当的安瓿中。

施与为经口或非经口，优选非经口施与，具体来说，可以列举注射剂型、经鼻施与剂型、经肺施与剂型、经皮施与型等。作为注射剂型的例子，可以通过例如静脉内注射、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射等全身或局部性地施与。另外也可以通过利用注射、注入、缓释制剂的填埋等对肿瘤局部施与，从而对肿瘤直接施与本发明的抗体。

另外，可以根据患者的年龄、体重、性别、症状等选择适当的施与方法。作为含有抗体或编码抗体的多核苷酸的药物组合物的施与量，例如可以在一次每1kg体重为0.0001mg至1000mg的范围中选择。或者例如可以在每个患者0.001～100000mg/个体的范围中选择施与量，但未必限于这些数值。施与量、施与方法根据患者的体重、年龄、性别、症状等不同而变化，只要是本领域技术人员就可以适当选择。

通过将本发明的抗体或其片段、或包含它们的上述药物组合物施与受检者，能够治疗和/或预防上述的癌、尤其是在细胞表面表达MCEMP1的癌、优选为白血病、骨髓增生异常综合征、骨肉瘤、胸腺瘤、肥大细胞瘤或肛周腺癌。

进而，本发明还包含癌的治疗和/或预防方法，包括将本发明的药物组合物(或药物)与如上所例示的抗肿瘤剂或包含抗肿瘤剂的药物组合物(或药物)组合，对受检者联合施与的步骤。成为对象的癌与上述相同。本发明的抗体或其片段与抗肿瘤剂可以同时或分别施与受检者。分别施与时，任一药物组合物可以在先或在后，它们的施与间隔、施与量、施与途径和施与次数可以由专业医师来适当选择。同时施与时，例如，制成也包含将本发明的抗体或其片段与抗肿瘤剂在药理学上容许的担载体(或介质)中混合并制剂化而得的药物剂型的药物组合物。另外，针对含有抗肿瘤剂的上述药物组合物和剂型的任一者，都可以适用对于含有本发明的抗体的药物组合物和剂型的处方、制剂化、施与途径、用量、癌等的说明。

因此，本发明还提供包含本发明的药物组合物和含有如上所例示的抗肿瘤剂的药物组合物的用于癌的治疗和/或预防的组合药物，和包括施与该组合药物的步骤的癌的治疗和/或预防方法。另外，本发明还提供将本发明的抗体或其片段和抗肿瘤剂与药理学上容许的担载体和/或添加剂一起包含的用于癌的治疗和/或预防的药物组合物。

实施例

以下基于实施例更具体地说明本发明，但本发明的范围不受这些具体例限制。

实施例1通过SEREX法鉴定新的癌抗原蛋白质

通过酸胍-酚-氯仿法(Acid guanidium-Phenol-Chloroform法)从健常犬的精巢组织提取总RNA，使用Oligotex-dT30mRNA furification Kit(宝酒造)，根据试剂盒所附的方案纯化多聚腺苷酸RNA。

使用该获得的mRNA(5μg)合成犬精巢cDNA噬菌体文库。使用cDNASynthesis Kit，ZAP-cDNA Synthesis Kit，ZAP-cDNA GigapackIII Gold Clonig Kit(STRATAGENE)按照试剂盒所附的方案制作cDNA噬菌体文库。制作的cDNA噬菌体文库的大小是1×10⁶pfu/ml。

(2)通过血清筛选cDNA文库

使用上述制作的犬精巢cDNA噬菌体文库进行免疫筛选。具体地，使宿主大肠杆菌(XL1-Blue MRF’)感染噬菌体，使得在Φ90×15mm的NZY琼脂糖平板产生约2500个克隆，在42℃培养3～4小时以形成溶菌斑(噬菌斑)，将该平板以浸透了IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)的硝化纤维素膜(Hybond C Extra：GE Healthcare Bio-Scinece)在37℃覆盖4小时以诱导并表达蛋白质，将蛋白质转印到该膜上。此后，将该膜回收，浸泡在含有0.5％脱脂乳粉的TBS(10mM Tris-HCl,150mM NaCl,pH 7.5)中于4℃振摇过夜以抑制非特异性反应。使该滤膜与500倍稀释的患病犬血清在室温反应2～3小时。

作为上述患病犬血清，使用从白血病的患病犬采集的血清。将这些血清保存在-80℃，在就要使用之前进行前处理。血清的前处理方法根据以下方法进行。即，用未插入外来基因的λZAP表达噬菌体感染宿主大肠杆菌(XL1-Blure MRF’)后，在NZY平板培养基上于37℃过夜培养。随后，在该平板添加含有0.5M NaCl的0.2M NaHCO₃pH 8.3的缓冲液，4℃静置15小时后，回收上清作为大肠杆菌/噬菌体提取液。接着，使回收的大肠杆菌/噬菌体提取液流经NHS-柱(GE Healthcare Bio-Science)，从而将来源于大肠杆菌/噬菌体的蛋白质固定化。使患病犬血清流经该蛋白质固定化柱并进行反应，从血清中除去吸附于大肠杆菌和噬菌体的抗体。将直接流过柱的血清级分用含有0.5％脱脂乳粉的TBS稀释500倍，将其用作免疫筛选材料。

将已经印迹了所述处理血清和蛋白质的上述膜用TBS-T(0.05％Tween20/TBS)洗涤4次，然后作为二抗添加已经用含有0.5％脱脂乳粉的TBS稀释5000倍的山羊抗犬IgG(山羊抗犬IgG-h+I HRP缀合：BETHYL Laboratories)，在室温反应1小时，通过使用NBT/BCIP反应液(Roche)的酶显色反应进行检测，从Φ90×15mm的NZY琼脂糖平板上采集与显色反应阳性部位一致的集落，溶解于500μl SM缓冲液(100mM NaCl,10mM MgClSO₄,50mM Tris-HCl,0.01％明胶pH 7.5)。以与上述相同的方法重复二次、三次筛选直至显色反应阳性集落单一化，对与血清中IgG反应的约10000个噬菌体克隆进行了筛选，分离到1个阳性克隆。

(3)分离抗原基因的同源性检索

为了将通过以上方法分离的1个阳性克隆供碱基序列分析，进行从噬菌体载体转换成质粒载体的操作。具体地，将调节至吸光度OD₆₀₀为1.0的宿主大肠杆菌(XL1-BlueMRF’)溶液200μl与100μl纯化的噬菌体溶液和1μl ExAssist辅助噬菌体(STRATAGENE)混合，然后37℃反应15分钟后，添加3ml LB培养基，37℃进行2.5～3小时的培养，此后立即在70℃水浴中保温20分钟，然后4℃、1000×g离心15分钟，将上清作为噬菌粒溶液回收。随后，将调节至吸光度OD₆₀₀为1.0的噬菌粒宿主大肠杆菌(SOLR)溶液200μl与10μl纯化的噬菌体溶液混合后，37℃反应15分钟，将50μl所得物接种在含有氨苄青霉素(终浓度：50μg/ml)的LB琼脂培养基，37℃过夜培养。挑取转化的SOLR的单菌落并且在含有氨苄青霉素(终浓度：50μg/ml)的LB琼脂培养基中于37℃培养后，使用QIAGEN plasmid Miniprep Kit(キアゲン)纯化具有目的插入物的质粒DNA。

纯化而得的质粒使用序列号17所记载的T3引物和序列号18所记载的T7引物，通过引物步移法进行插入物全长序列的分析。通过所述序列分析获得序列号3所记载的基因序列。使用该基因的碱基序列和氨基酸序列进行序列同一性检索程序BLAST搜索(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)从而进行与已知基因的序列同一性检索，结果表明获得的基因是MCEMP1基因。在作为犬MCEMP1的人同源因子的人MCEMP1中，序列同一性为碱基序列70％、氨基酸序列51％，在猫MCEMP1中，序列同一性为碱基序列83％、氨基酸序列64％，在作为小鼠同源因子的小鼠MCEMP1中，序列同一性为碱基序列65％、氨基酸序列47％。人MCEMP1的碱基序列示于序列号1，氨基酸序列示于序列号2，猫MCEMP1的碱基序列示于序列号5，氨基酸序列示于序列号6，小鼠MCEMP1的碱基序列示于序列号7，氨基酸序列示于序列号8。

(4)各组织中的基因表达分析

通过RT-PCR(Reverse Transcription-PCR，逆转录PCR)法对由上述方法获得的基因调查在犬、人和小鼠的各种正常组织、各种肿瘤组织和各种癌细胞株中的表达。逆转录反应如下进行。即，使用TRIZOL试剂(ThermoFisher Scientific)，按照其所附的方案从各组织50～100mg和各细胞株5～10×10⁶个细胞中提取总RNA。利用该总RNA，通过SuperscriptFirst-Strand Synthesis System for RT-PCR(ThermoFisher Scientific)按照本试剂盒所附的方案合成cDNA。人正常组织(脑、精巢、结肠、胎盘)的cDNA使用GenePool cDNA(ThermoFisher Scientific)、QUICK-Clone cDNA(クロンテック)和Large-Insert cDNALibrary(クロンテク)。PCR反应使用对所获得的基因特异的引物(犬引物记载于序列号19和20，人引物记载于序列号21和22，小鼠引物记载于序列号23和24)如下进行。即，按照通过逆转录反应制备的cDNA样品0.25μl、上述引物各2μM、0.2mM各dNTP、0.65U ExTaq聚合酶(宝酒造)的方式添加各试剂和所附的缓冲液，使总量为25μl，使用Thermal Cycler(BIO RAD)，将94℃#30秒、55℃30秒、72℃1分钟的循环重复30次，从而进行PCR。其结果如图1所示，在犬肿瘤组织中，犬MCEMP1基因在肥大细胞瘤、肛周腺癌中观察到强表达(图1)。关于人MCEMP1基因表达，对于健常的人组织，在大部分组织观察不到表达，另一方面对于人癌细胞，在白血病、骨髓增生异常综合征、骨肉瘤的细胞株中观察到人MCEMP1基因强表达(图2)。进而，小鼠MCEMP1基因在白血病、胸腺瘤的细胞株中检测到表达(图3)。

实施例2人MCEMP1蛋白的制作

(1)编码人MCEMP1的全长cDNA和编码人MCEMP1的细胞外区域的cDNA的克隆

编码人MCEMP1的全长cDNA以实施例1中获得的序列号1的基因为基础通过以下方法克隆。PCR如下进行：以实施例1中制作的来源于各种组织/细胞的cDNA中能通过RT-PCR法确认表达的cDNA 1μl、包含EcoRI和NotI限制性酶切序列的2种引物(记载于序列号25和26)各0.4μM、0.2mM dNTP、1.25U的PrimeSTAR HS聚合酶(宝酒造)的方式添加各试剂和附带的缓冲液，使总量为50μl，使用Thermal Cycler(BIO RAD)，将98℃10秒、55℃15秒、72℃1分钟的循环重复30次，从而进行PCR。此外，上述2种引物是扩增编码序列号2的氨基酸序列全长的区域的引物。PCR后，将扩增而得的DNA用1％琼脂糖凝胶进行电泳，使用QIAquick GelExtraction Kit(QIAGEN)纯化约0.6kbp的DNA片段。将通过上述的PCR反应获得的扩增产物插入pcDNA3.1(ThermoFisher Scientific)(以下记为人MCEMP1/pcDNA3.1)。另外，通过使用DNA测序仪进行的测序，确认了该扩增产物是编码人MCEMP1的cDNA序列。序列号1所示的序列表示人MCEMP1基因的碱基序列，序列号2所示的序列表示人MCEMP1蛋白质的氨基酸序列。

另外，以序列号1为基础，以包含KpnI和EcoRI限制性酶切序列的2种引物(记载于序列号27和28)各0.4μM、0.2mM dNTP、1.25U的PrimeSTAR HS聚合酶(宝酒造)的方式加入各试剂和附带缓冲液使总量为50μL，使用Thermal Cycler(BIO RAD)将98℃10秒、55℃15秒、72℃30秒的循环重复30次，从而进行PCR。此外，上述2种引物是扩增编码包含序列号1中MCEMP1蛋白质的细胞外区域的氨基酸序列的序列号10的区域的引物。PCR后，将扩增而得的DNA用1％琼脂糖凝胶进行电泳，使用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN)纯化约0.3kbp的DNA片段。将通过上述的PCR反应获得的扩增产物与插入有编码小鼠IgG2a Fc蛋白质的cDNA的pSecTagB(ThermoFisher Scientific)连接，制成编码人MCEMP1细胞外区域/小鼠IgG2a Fc融合蛋白质(以下记为hMCEMP1ECD-mIgG2aFc)的表达载体(以下记为pSecB-hMCEMP1ECD-mIgG2aFc)。另外，通过使用DNA测序仪进行的测序，确认了是编码hMCEMP1ECD-mIgG2aFc的cDNA序列。序列号29所示的序列表示编码hMCEMP1ECD-mIgG2aFc的碱基序列，序列号30所示的序列表示hMCEMP1ECD-mIgG2aFc的氨基酸序列。

(2)hMCEMP1ECD-mIgG2aFc的制作

作为用于制作针对MCEMP1的抗体的免疫抗原，制作hMCEMP1ECD-mIgG2aFc。

通过脂质体转染法将表达载体pSecB-hMCEMP1ECD-mIgG2aFc导入人胎儿肾细胞株HEK293细胞，从导入7天后的培养上清纯化hMCEMP1ECD-mIgG2aFc。将培养上清上样到HiTrap ProteinA HP柱(GEヘルスケアバイオサイエンス社)，用结合缓冲液(20mM磷酸钠(pH7.0))洗涤后，用溶出缓冲液(0.1M甘氨酸-HCl(pH 2.7))溶出。溶出液通过溶出到添加了中和缓冲液(1M Tris-HCl(pH 9.0))的管中而立即中和。接下来，将上述方法获得的溶出液的缓冲液使用超滤NANOSEP 10K OMEGA(PALL)置换成生理用磷酸缓冲液(日水制药)，然后用HT Tuffryn Acrodisc 0.22μm(PALL)进行无菌过滤，将所得物用于以下实验。

实施例3与MCEMP1的细胞外区域结合的多克隆抗体的制作

(1)针对MCEMP1的多克隆抗体的制作

为了获得与MCEMP1的细胞外区域结合的抗体，以上述制作的hMCEMP1ECD-mIgG2aFc 0.1mg作为抗原，与等体积的弗氏完全佐剂(CFA)溶液混合，将其每2周在小鼠的皮下施与，施与4次。然后采取血液，得到包含多克隆抗体的抗血清。进一步将该抗血清使用蛋白G载体柱(GEヘルスケアバイオサイエンス)进行纯化，获得针对hMCEMP1ECD-mIgG2aFc的多克隆抗体。另外，将未施与抗原的小鼠的血清与上述同样地使用蛋白G载体纯化后作为对照抗体。

(2)恒常表达全长人MCEMP1的细胞的建立

将上述制作的人MCEMP1/pcDNA3.1通过脂质转染法导入CHO-K1细胞(ATCC社)中，通过利用500μg/ml的G418(ナカライ社)的筛选，建立恒常表达全长人MCEMP1的CHO细胞株(CHO-人MCEMP1)。另外，将未插入编码MCEMP1的cDNA的表达载体(以下记为emp/pcDNA3.1)与上述同样地导入并筛选而得的细胞作为对照细胞(以下记为CHO-emp)。

(3)细胞表面上的抗原蛋白的表达分析

接下来调查(1)中制作的多克隆抗体是否与在(2)中建立的细胞表面上表达的MCEMP1特异性地反应。将CHO-人MCEMP1细胞和CHO-emp细胞各10⁶个细胞用1.5mL的微量离心管离心分离。在其中添加上述(1)制备的针对MCEMP1的多克隆抗体2μg(5μL)，再用95μL的包含0.1％胎牛血清的PBS悬浮后，冰上静置1小时。用PBS洗涤后，用包含5μL的FITC标记山羊抗小鼠IgG抗体(サンタクルズ)和95μL的包含0.1％胎牛血清(FBS)的PBS悬浮，冰上静置1小时。用PBS洗涤后，用ベクトンディッキンソン株式会社的FACS Calibur测定荧光强度。另一方面，使用上述(1)中制备的对照抗体代替针对MCEMP1的多克隆抗体进行与上述同样的操作，作为对照。其结果是，添加了抗人MCEMP1抗体的CHO-人MCEMP1细胞与对照相比，荧光强度显示208％的荧光强度增强。另一方面，将同样的操作对CHO-emp细胞实施。其结果是，添加了抗人MCEMP1抗体的CHO-emp细胞与对照相比，荧光强度显示0％的荧光强度增强。由此表明，抗人MCEMP1抗体与在细胞膜表面上表达的MCEMP1蛋白质特异性地结合。此外，上述荧光强度的增强率用各细胞中的平均荧光强度(MFI值)的增加率表示，通过以下算式计算出。

平均荧光强度的增加率(荧光强度的增强率)(％)＝((与抗人MCEMP1抗体反应的细胞的MFI值)-(对照MFI值))÷(对照MFI值)×100。

接下来对于确认了MCEMP1基因的大量表达的白血病细胞株2种(U937、THP-1)和骨髓增生异常综合征细胞株1种(MDS92)，调查MCEMP1蛋白质是否在其细胞表面上表达。将上述确认了基因表达的各人细胞株各10⁶个细胞在1.5mL的微量离心管中离心分离。在其中添加上述(1)制备的针对MCEMP1的多克隆抗体2μg(5μl)，再用95μL的包含0.1％胎牛血清的PBS悬浮后，冰上静置1小时。用PBS洗涤后，用包含5μL的FITC标记山羊抗小鼠IgG抗体(サンタクルズ)和95μL的包含0.1％胎牛血清(FBS)的PBS悬浮，冰上静置1小时。用PBS洗涤后，用ベクトンディッキンソン株式会社的FACS Calibur测定荧光强度。另一方面，使用上述(1)中制备的对照抗体代替针对MCEMP1的多克隆抗体进行与上述同样的操作，作为对照。其结果是，添加了抗人MCEMP1抗体的细胞与对照相比，荧光强度均强30％以上。具体地，U937显示175％的荧光强度增强，THP-1显示123％的荧光强度增强，MDS92显示137％的荧光强度增强。由此确认，MCEMP1蛋白在上述人癌细胞株的细胞膜表面上表达。

此外，上述荧光强度的增强率用各细胞中的平均荧光强度(MFI值)的增加率表示，通过以下算式计算出。

平均荧光强度的增加率(荧光强度的增强率)(％)＝((与抗人MCEMP1抗体反应的细胞的MFI值)-(对照MFI值))÷(对照MFI值)×100。

实施例4针对MCEMP1的多克隆抗体对癌细胞的抗肿瘤效果(ADCC活性)

接下来研究针对MCEMP1的多克隆抗体能否毒害表达MCEMP1的肿瘤细胞。使用实施例3中制备的针对人MCEMP1的多克隆抗体进行评价。将确认了MCEMP1的表达的人白血病细胞株U937、骨髓增生异常综合征细胞株MDS92各10⁶个收集在50mL容量的离心管中，加入100μCi的铬51在37℃孵育2小时。然后用包含10％胎牛血清的RPMI1640培养基洗涤3次，在96孔V底板每1孔中各添加10³个。在其中分别添加上述针对人MCEMP1的多克隆抗体1μg，进而添加从小鼠的外周血分离的淋巴细胞各2×10⁵个，在37℃、5％CO₂的条件下培养4小时。培养后，测定从受到毒害的肿瘤细胞释放出的培养上清中的铬(Cr)51的量，计算出针对人MCEMP1的多克隆抗体对癌细胞的ADCC活性。其结果是，对U937细胞确认了18.1％的ADCC活性，对MDS92细胞确认了17.3％的ADCC活性(参照图4)。另一方面，对各个细胞株，使用从未免疫抗原的小鼠的外周血制备的对照抗体(实施例3)进行同样的操作的情况下，和不添加抗体的情况下，基本没有确认活性(参照图4)。因此表明，通过使用针对MCEMP1的抗体的ADCC活性，能够毒害表达MCEMP1的肿瘤细胞。

此外，图4中的细胞毒活性(ADCC活性)如上所述，是显示将本发明中使用的针对MCEMP1的抗体、小鼠淋巴细胞和摄入了铬51的10³个细胞株混合并培养4小时，测定培养后释放到培养基中的铬51的量，通过以下算式＊计算出的对白血病细胞株的细胞毒活性的结果。

＊式：细胞毒活性(％)＝从加入针对MCEMP1的抗体和小鼠淋巴细胞时的U937游离出的铬51游离量÷从加入了1N盐酸的靶标细胞游离出的铬51游离量×100。

产业可利用性

本发明的抗体对于癌的治疗和/或预防是有用的。

本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请直接通过引用而引入本说明书中。

Claims (10)

1.用于癌的治疗和/或预防的药物组合物，包含与MCEMP1蛋白质、或该蛋白质的包含连续7个以上氨基酸的片段具有免疫反应性的抗体或其片段作为有效成分，所述MCEMP1蛋白质具有序列号2、4、6或8所示的氨基酸序列、或与该氨基酸序列有80％以上的序列同一性的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，包含与下述多肽具有免疫反应性的抗体或其片段作为有效成分，所述多肽包含所述MCEMP1蛋白质的细胞外区域部分，并且是由序列号10、12、14或16所示的氨基酸序列的连续7个以上氨基酸组成的多肽、或由与该氨基酸序列有80％以上的序列同一性的氨基酸序列组成的多肽。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，所述癌是在细胞表面表达MCEMP1的癌。

4.根据权利要求1～3的任一项所述的药物组合物，所述癌选自由白血病、骨髓增生异常综合征、骨肉瘤、胸腺瘤、肥大细胞瘤和肛周腺癌组成的组。

5.根据权利要求1～4的任一项所述的药物组合物，所述抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。

6.根据权利要求1～5的任一项所述的药物组合物，所述抗体是人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体或多特异性抗体。

7.抗体或其片段，与包含MCEMP1蛋白质的细胞外区域部分的多肽具有免疫反应性，所述多肽是由序列号10、12、14或16所示的氨基酸序列、或与该氨基酸序列有80％以上的序列同一性的氨基酸序列组成的多肽。

8.根据权利要求7所述的抗体或其片段，所述抗体是人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体或多特异性抗体。

9.用于癌的治疗和/或预防的组合药物，包含：权利要求1～6的任一项所述的药物组合物、和含抗肿瘤剂的药物组合物。

10.癌的治疗和/或预防方法，包括对受检者施用与MCEMP1蛋白质、或该蛋白质的包含连续7个以上氨基酸的片段具有免疫反应性的抗体或其片段的工序，所述MCEMP1蛋白质具有序列号2、4、6或8所示的氨基酸序列、或与该氨基酸序列有80％以上的序列同一性的氨基酸序列。