CN108676875A - Cd20、fcgriia及fcgriiia基因在弥漫大b细胞淋巴瘤预后中的用途 - Google Patents

Cd20、fcgriia及fcgriiia基因在弥漫大b细胞淋巴瘤预后中的用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了CD20、FCGRIIA及FCGRIIIA基因在弥漫大B细胞淋巴瘤预后中的用途。所述的CD20,FCGRIIA及FCGRIIIA基因序列中分别含有与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点，所述的基因位点分别位于人类第11号染色体的第60458830位核苷酸处(CD20)、人类第1号染色体的第161514689位核苷酸处(FCGRIIA)以及人类第1号染色体的第161549644位核苷酸处(FCGRIIIA)；当第11号染色体的第60458830位核苷酸处为T，当人类第1号染色体的第161514689位核苷酸处为A或当人类第1号染色体的第161549644位核苷酸处为A时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较差。本发明的提出为肿瘤的个体化医学，包括预警、预测、早期筛查和诊断以及个体化治疗，提供了一种有效技术手段。

Description

CD20、FCGRIIA及FCGRIIIA基因在弥漫大B细胞淋巴瘤预后中 的用途
技术领域
本发明涉及与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点，具体的本发明涉及CD20、FCGRIIA及FCGRIIIA基因序列在预测利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤疗效中的用途。本发明属于肿瘤生物治疗技术领域。
背景技术
弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是成人淋巴瘤中最常见的一种类型，约占非霍奇金淋巴瘤(NHL)的31％，在亚洲国家占NHL大于40％，在临床表现、组织形态及预后情况等方面具有较大的异质性。研究报道60％的DLBCL能够治愈，然而仍有40％的DLBCL患者并不能从现今的治疗中最大获益，如何鉴别出这部分患者并给予更有效的治疗，一直是该领域核心的研究目标。
近年来，个体化治疗的观念被越来越多的医生所接受，在DLBCL的诊治领域，国际肿瘤学界仍然在寻找着针对每一位患者的最佳治疗方案。利妥昔单抗是一种人鼠嵌合型IgGl免疫球蛋白，包括人源Fc段和鼠源可变区Fab段。主要通过抗原抗体结合及补体作用后所介导的一系列免疫反应完成，是迄今为止临床上应用最广泛和最成功的单抗之一。然而，由于个体遗传差异的影响，一些DLBCL患者在治疗过程中出现对利妥昔单抗疗效降低的现象，严重影响了治疗的效果。目前无论是单药还是联合化疗利妥昔单抗治疗确切的效应和耐药机制仍不十分明确。其耐药性不仅与肿瘤的特异性改变有关，也与宿主的免疫效应相关。
利妥昔单抗确切的耐药机制目前尚不明确，但有研究报道抗体依赖细胞毒作用(antibody dependent cell mediated cytotoxieity,ADCC)是潜在的耐药机制。ADCC是一种抗原抗体结合后，通过与携带Fcγ受体的细胞(如NK细胞、粒细胞、单核细胞和巨噬细胞等)起作用的免疫效应。人类FCGRIIIA基因上的一个单核苷酸多态(Single nueleotidepolymorphism，SNP)能导致FCGRIIIA受体158位残基上的缬氨酸与苯丙氨酸的颠换。目前，我们正在开展一项考察FCGRIIIA 158V/F与应用利妥昔单抗的DLBCL患者疗效反应相关性的研究，涉及亚洲、欧洲等国家地区人群。研究结果提示，FCGRIIIA 158V/F能够预测应用利妥昔单抗治疗的DLBCL患者的疗效，对亚洲人尤为明显；还有3项研究考察了FCGRIIIA158V/F与骨髓抑制等不良反应的相关性。此外，相关学者报道了FCGRIIA基因多态性与利妥昔单抗预后的关系。
当利妥昔单抗与CD20结合后即易位到细胞膜内的脂阀，推测脂阀结构上的变异可能在利妥昔单抗耐药方面起重要作用：已有研究显示恶性B细胞可以出现脂阀变异，并且NHL细胞的脂阀鞘糖脂含量与利妥昔单抗治疗的敏感性有关。体外实验发现他汀类药物的应用可通过抑制胆固醇的合成、破坏脂阀的结构而导致ADCC抵抗。
本发明对DLBCL治疗应答组与非应答组的CD20,FCGRIIA,FCGRIIIA等基因序列进行比对分析。今后便可通过在治疗前对DLBCL患者在该段基因序列进行检测进而预测利妥昔单抗的疗效。不仅为适合应用利妥昔单抗进行治疗的DLBCL患者提供了个体化治疗的依据，同时也降低了不建议应用利妥昔单抗进行治疗的DLBCL患者的经济费用，具有重要意义和巨大的应用前景。
发明内容
针对目前DLBCL治疗现状，本发明的目的在于明确CD20,FCGRIIA,FCGRIIIA与应用利妥昔单抗进行治疗的DLBCL患者疗效的关系，进一步揭示利妥昔单抗的作用机制，为DLBCL的治疗提供新思路。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：
1、病历及流行病学数据收集和筛选，选择首次应用含利妥昔单抗方案进行化疗的DCBCL患者；
2、患者预后疗效评价：
3、对研究对象在CD20,FCGRIIA,FCGRIIIA进行全基因测序；
4、比对分析疗效较好和较差两组间的差异基因序列，最终确定可能导致利妥昔单抗疗效降低的基因序列靶点。
5、基因位点的定位
在进行与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点的定位时，本发明采用的方法是将含有上述基因位点的序列与人类染色体序列进行比对，已确定所述基因位点在染色体上的具体位置。
在上述研究的基础上，本发明提出了CD20,FCGRIIA及/或FCGRIIIA基因序列在制备预测利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤疗效的药物中的用途。
其中，所述的CD20,FCGRIIA及FCGRIIIA基因序列中分别含有与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点，在所述的CD20基因中，与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点位于人类第11号染色体的第60458830位核苷酸处，在所述的FCGRIIA基因中，与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点位于人类第1号染色体的第161514689位核苷酸处，在所述的FCGRIIIA基因中，与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点位于人类第1号染色体的第161549644位核苷酸处。
在CD20基因序列中，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为T时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较差，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为C时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较好；在FCGRIIA基因序列中，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为A时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较差，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为G时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较好；在FCGRIIIA基因序列中，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为A时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较差，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为C时,利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较好。
其中，优选的，含有与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点的CD20、FCGRIIA以及FCGRIIIA的基因序列分别如下所示：
CD20:AATCAGATATA T/C ATATGAAAGATAGTTTCCATAAGAAAT(位于chr11:60458819-60458857位，SEQ ID NO.1所示)
FCGR IIA：TTTTATTTCTCATTTGATTCAGC A/G GTTAATC(位于chr1:161514666-161514696位，SEQ ID NO.2所示)
FCGR IIIA：GCCTTGGGTTCA G/T CAGAGACCCCTTTTCAGGCTAC(其反向互补序列位于chr1:161549 622-161549656位，SEQ ID NO.3所示)
其中在对FCGR IIIA预后相关的基因位点进行定位时，比对的序列为人类第1号染色体(chr1)的反相互补序列，因此，基于chr1描述该基因位点时，将“G/T”转换为“C/A”。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
本发明从药物遗传学角度，对临床疗效显著且应用利妥昔单抗的DLBCL患者进行CD20,FCGRIIA,FCGRIIIA基因测序，研究其遗传变异对DLBCL患者临床化疗疗效个体差异的影响，鉴定出一些显著影响预后的重要基因序列，研究结果有望首次揭示CD20,FCGRIIA,FCGRIIIA的差异基因序列在DLBCL发展及其临床疗效中的作用，并为肿瘤的个体化医学，包括预警、预测、早期筛查和诊断以及个体化治疗，奠定重要的理论基础。
附图说明
图1为预后较好的DLBCL患者(R61、82、93、98)与预后较差的患者(R33、34、69)的CD20基因测序图谱(部分)；
图2为预后较好的DLBCL患者(R61、82、93、98)与预后较差的患者(R33、34、69)的FCGRIIA基因测序图谱(部分)；
图3为预后较好的DLBCL患者(R61、82、93、98)与预后较差的患者(R33、34、69)的FCGRIIIA基因测序图谱(部分)。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1
(一)病历筛选---流行病学资料统计：
本发明人自2014年1月起建立NHL(B)生物样本库，建立流行病学统计表，并跟踪并记录患者病情进展情况，并在整个治疗过程中，不断完善流行病学相关记录。患者排除标准：
(1)既往接受过含有利妥昔单抗方案进行治疗的DLBCL患者；
(2)年龄小于18岁，大于75岁；
(3)有严重的心、肺或脑等伴发病；严重的恶病质；严重肝肾功能损害；
(4)Karnofsky体力状态(karnofskyperformancemKPS)评分＜70；
(5)WBC＜4.0×109/L，Hbg＜100g/L，PLT＜100×109/L。
(二)患者化疗疗效评价：
根据WHO颁布的实体瘤的疗效评价标准(RECIST 1.1)，每两周期对患者的疗效进行一次评价。
临床上普遍接受的耐药的定义是：a.含利妥昔单抗方案治疗无效(PD)；b.含利妥昔单抗方案治疗6个月内无进展；c.单药利妥昔单抗治疗期间出现复发是最明确的判断耐药的表现；d.治疗期间出现了肿瘤的退缩但未能达到部分缓解(PR)或完全缓解(CR)的也应被认为耐药。
纳入弥漫大B淋巴瘤患者特征及预后情况如下表1所示。
表1纳入弥漫大B淋巴瘤患者特征及预后情况
(三)差异基因序列测定及分析
经过临床治疗和观察后可将应用利妥昔单抗治疗的DLBCL患者按RECIST 1.1疗效评价标准分为治疗应答组(CR+PR)和治疗无应答组(SD+PD)，利用基因测序技术测定并比对分析两组患者在CD20,FCGRIIA及FCGRIIIA基因中的差异序列，结果如图1-3所示，所述的差异序列分别如下所示：
CD20:AATCAGATATAT/CATATGAAAGATAGTTTCCATAAGAAAT(位于chr11:60458819-60458857位，SEQ ID NO.1所示)
FCGR IIA：TTTTATTTCTCATTTGATTCAGC A/G GTTAATC(位于chr1:161514666-161514696位，SEQ ID NO.2所示)
FCGR IIIA：GCCTTGGGTTCA G/T CAGAGACCCCTTTTCAGGCTAC(其反向互补序列位于chr1:161549 622-161549656位，SEQ ID NO.3所示)
将含有上述基因位点的序列与人类染色体序列进行比对，已确定所述基因位点在染色体上的具体位置。通过序列比对可知，在所述的CD20基因中，与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点位于人类第11号染色体的第60458830位核苷酸处，在所述的FCGRIIA基因中，与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点位于人类第1号染色体的第161514689位核苷酸处，在所述的FCGRIIIA基因中，与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点位于人类第1号染色体的第161549644位核苷酸处。
该结果提示，CD20基因中，第11号染色体的第60458830位核苷酸处为T等位基因的DLBCL患者预后较差，FCGRIIA基因中，第1号染色体的第161514689位核苷酸处为A等位基因的DLBCL患者预后较差，FCGRIIIA基因中，第1号染色体的第161549644位核苷酸处为A(对应SEQ ID NO.3所示序列相应位点为T)等位基因的DLBCL患者预后较差。
序列表
<110> 哈尔滨医科大学
<120> CD20、FCGRIIA及FCGRIIIA基因在弥漫大B细胞淋巴瘤预后中的用途
<130> KLPI170623
<160> 3
<170> PatentIn 3.5
<210> 1
<211> 39
<212> DNA
<213> human
<220> n=c/t
<221> mutation
<400> 1
aatcagatat anatatgaaa gatagtttcc ataagaaat 39
<210> 2
<211> 31
<212> DNA
<213> human
<220> n=a/g
<221> mutation
<400> 2
ttttatttct catttgattc agcngttaat c 31
<210> 3
<211> 35
<212> DNA
<213> human
<220> n=g/t
<221> mutation
<400> 3
gccttgggtt cancagagac cccttttcag gctac 35

Claims (3)

1.CD20,FCGRIIA及/或FCGRIIIA基因序列在制备预测利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤疗效的药物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的CD20,FCGRIIA及FCGRIIIA基因序列中分别含有与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点，在所述的CD20基因中，与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点位于人类第11号染色体的第60458830位核苷酸处，在所述的FCGRIIA基因中，与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点位于人类第1号染色体的第161514689位核苷酸处，在所述的FCGRIIIA基因中，与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点位于人类第1号染色体的第161549644位核苷酸处；
在CD20基因序列中，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为T时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较差，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为C时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较好；在FCGRIIA基因序列中，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为A时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较差，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为G时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较好；在FCGRIIIA基因序列中，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为A时，利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较差，当与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点为C时,利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后较好。
3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，含有与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关的基因位点的CD20、FCGRIIA以及FCGRIIIA的基因序列分别包含SEQ ID NO.1-3所示的序列。
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