CN108562566B - 除草剂2,4-d药害评价方法及应用 - Google Patents

除草剂2,4-d药害评价方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种除草剂2,4‑D药害评价方法及应用，涉及作物栽培学技术领域。该除草剂2,4‑D药害评价方法，主要是将植株分为处理组和对照组，将其暗适应后，分别对其快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测定得到Fv/Fm与PI值，并进行JIP‑test分析，在相对可变荧光诱导动力学曲线上观察K点是否出现，将Fv/Fm、PI值以及K点共同作为判断除草剂2,4‑D对植株的光合机构的伤害情况的依据，确保了判断结果的准确性；同时，该药害评价方法可快速、无损、高效地指示出植株受除草剂2,4‑D喷施或飘移所受伤害的程度，为研究植物对除草剂抗性的评价提供了可借鉴的方法。本发明还提供除草剂2,4‑D药害评价方法的应用。

Description

除草剂2,4-D药害评价方法及应用
技术领域
本发明涉及作物栽培学技术领域，具体而言，涉及一种除草剂2,4-D药害评价方法及应用。
背景技术
近年来，各种各样的除草剂在农业上被大量使用，在有效、快速的防除农田杂草的同时，也提高了生产效率，解放了大量劳动力，对农业生产而言，是一项巨大进步。但是除草剂在使用过程中，对周围邻近作物产生的药害也是不容忽视的问题。例如，除草剂中的苯氧羧酸类物质在施药过程中可对周围50m内的阔叶作物造成药害，除草剂2,4-D可对下风口500m的阔叶作物产生药害。
具体以药用经济植物五味子为例，除草剂2,4-D会对五味子产生危害，轻的植株生长发育不良，导致减产，受害后短期内能恢复生长；受害重的植株生长发育停滞，严重减产或绝产，短期内难以恢复生长。所有受害植株均表现为生长缓慢，生育期推迟，重新发出的枝条也表现不正常，叶片油黄色，极个别重症植株死亡，有的植株畸形，生长点受抑制而变形、扭曲，叶片皱缩。
而在现有技术的研究中，只表明除草剂2,4-D对阔叶作物尤其是五味子的生长有一定的危害，但是对于植物对除草剂2,4-D抗性的评价方法研究较少。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种除草剂2,4-D药害评价方法，该药害评价方法可无损、快速、高效、准确地指示出植物受除草剂2,4-D喷施或飘移所受伤害的程度，为研究植物对除草剂抗性的评价提供了借鉴方法。
本发明的第二个目的在于提供一种除草剂2,4-D药害评价方法的应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明提供一种除草剂2,4-D药害评价方法，包括如下步骤；
(a)将植株分为已喷施除草剂2,4-D的处理组和未喷施除草剂2,4-D的对照组，将处理组和对照组经过暗适应后，测量处理组和对照组的植株叶片的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线，得到Fv/Fm和PI值；
(b)将步骤(a)得到的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线用JIP-test进行分析，在相对可变荧光诱导动力学曲线上观察K点是否出现；
(c)根据处理组和对照组的Fv/Fm、PI值的变化情况以及相对可变荧光诱导动力学曲线上K点是否出现，即可判断除草剂2,4-D对植株的光合机构的伤害情况。
进一步的，所述植株为阔叶作物，优选为五味子，进一步优选为五味子中的“嫣红”品种。
进一步的，步骤(a)中，将处理组和对照组置于黑暗条件下20min以上，以进行暗适应。
进一步的，步骤(a)中，在饱和脉冲光不小于3000μmol m-2s-1PFD条件下对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量。
进一步的，步骤(a)中，对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量所采用的仪器选自Pocket-PEA仪器、Handy-PEA仪器或PEA-Senior仪器中的一种，优选为Pocket-PEA仪器。
进一步的，步骤(a)中，测量快速叶绿素荧光诱导动力学曲线的时间小于2min。
进一步的，步骤(b)中，根据步骤(a)测量得到的荧光参数计算出可变荧光值和相对可变荧光值，绘制出相对可变荧光诱导动力学曲线，在300μs特征位点处出现明显的正向升高即为出现K点。
进一步的，步骤(c)中，根据下述条件判断除草剂2,4-D对植株的光合机构的伤害情况：
与对照组相比，当处理组相对可变荧光诱导动力学曲线出现K点，并且Fv/Fm与PI值均发生降低，即表示除草剂2,4-D对植株的光合机构产生了药害。
进一步的，所述除草剂2,4-D药害评价方法，包括如下步骤：
(a)选取长势一致的植株，将植株分为已喷施除草剂的处理组和未喷施除草剂的对照组；
将处理组和对照组暗适应20min以上，采用Pocket-PEA仪器在饱和脉冲光3000μmol m-2s-1PFD条件下对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量，得到Fv/Fm和PI值；
(b)将步骤(a)得到的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线用JIP-test进行分析，在相对可变荧光诱导动力学曲线上观察K点是否出现；
(c)根据Fv/Fm和PI值的变化情况以及相对可变荧光诱导动力学曲线上K点是否出现，即可判断除草剂2,4-D对植株光合机构的伤害情况：
与对照组相比，当处理组相对可变荧光诱导动力学曲线出现K点，并且Fv/Fm与PI值均发生降低，即表示除草剂2,4-D对植株的光合机构产生了药害。
本发明还提供了一种除草剂2,4-D药害评价方法在评价植物对除草剂抗性中的应用。
与现有技术相比，本发明提供的除草剂2,4-D药害评价方法及应用具有以下有益效果：
(1)本发明提供了一种除草剂2,4-D药害评价方法，是将植株分为处理组和对照组，并将处理组和对照组经暗适应后，分别对其快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测定得到Fv/Fm与PI值，并进行JIP-test分析，在相对可变荧光诱导动力学曲线上观察K点是否出现，将Fv/Fm、PI值以及K点共同作为判断除草剂2,4-D对植株的光合机构的伤害情况的依据，确保了判断结果的准确性；同时，该药害评价方法可快速、无损、高效地指示出植株受除草剂2,4-D喷施或飘移所受伤害的程度，为植物对除草剂抗性的研究评价提供了可借鉴的方法。
(2)本发明提供的除草剂2,4-D药害评价方法，可简单快速的在除草剂2,4-D受害早期对植株的光合机构进行评价，对于植株的栽培区域、喷施浓度等做出初步判断，减少因除草剂2,4-D药害产生的损失。
(3)本发明还提供了除草剂2,4-D药害评价方法的应用，鉴于上述除草剂2,4-D药害评价方法所具有的优势，使得其在评价植物对除草剂抗性中具有良好的应用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1-4中的对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组第1d、2d和3d后的Fv/Fm值变化情况；
图2为实施例1-4中的对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组第1d、2d和3d后的PI值变化情况；
图3为实施例1-4中的对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组第1d后的相对可变荧光诱导动力学曲线；
图4为实施例1-4中的对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组第2d后的相对可变荧光诱导动力学曲线；
图5为实施例1-4中的对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组第3d后的相对可变荧光诱导动力学曲线；
图6为实施例4中的对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组熏蒸或喷施处理后的外在表观情况，其中(a)为对照组，(b)为熏蒸处理3天，(c)为喷施处理3天。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
当植物遭受温度胁迫、光抑制、水分胁迫、盐胁迫等常规环境胁迫时，叶绿素荧光的变化可以在一定程度上反映环境因子对植物的影响，目前对于上述环境变化对于植物的叶绿素荧光诱导与光合作用研究较多。但是当植物遭受到除草剂的喷施或者飘移危害时，对于植物对除草剂抗性的研究较少。
且除草剂胁迫对于植物的影响与常规的环境胁迫(温度胁迫、光抑制、水分胁迫、盐胁迫等)对于植物的影响有很大不同。胁迫理论认为任何逆境胁迫都会使植物的光合效率下降，但是除草剂对植物的光合作用却表现出不同影响，除了对光合电子传递链产生抑制的除草剂外，还有一类是会促进光合作用的除草剂，例如2,4-D属于生长素类除草剂，低浓度下会促进植物生长，高浓度下能杀死双子叶植物，因其可促进植物体内核酸和蛋白质的合成，使细胞过度分裂和伸长，组织因过度生长呈畸形，阻碍物质运输，导致植物死亡。具体表现为，经过低浓度除草剂2,4-D处理后，植物的叶绿素荧光参数升高，光合速率加快，而当除草剂2,4-D浓度越过一定阈值，则会对植物的光合机构产生伤害。可见，该类除草剂对植物的胁迫与其他常规的环境胁迫存在很大差异。但是目前关于除草剂2,4-D对于植株药害评价方法的研究较少，对于产生药害的阈值研究更是缺少有效的检测方法。
为此，根据本发明的第一个方面，提供了一种除草剂2,4-D药害评价方法，包括如下步骤；
(a)将植株分为已喷施除草剂2,4-D的处理组和未喷施除草剂2,4-D的对照组，将处理组和对照组经过暗适应后，测量处理组和对照组的植株叶片的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线，得到Fv/Fm和PI值；
(b)将步骤(a)得到的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线用JIP-test进行分析，在相对可变荧光诱导动力学曲线上观察K点是否出现；
(c)根据处理组和对照组的Fv/Fm、PI值的变化情况以及相对可变荧光诱导动力学曲线上K点是否出现，即可判断除草剂2,4-D对植株的光合机构的伤害情况。
具体的，除草剂2,4-D也称2,4-二氯苯氧乙酸，纯品为白色结晶，水中溶解度很小，易溶于乙醇、苯等有机溶剂，其钠盐、胺盐则极易溶于水。在500ppm以上高浓度时用于茎叶处理，可在麦、稻、玉米、甘蔗等作物田中防除藜、苋等阔叶杂草及萌芽期禾本科杂草。但由于2,4-D在气温高时挥发量大，易扩散飘移，危害邻近双子叶作物和阔叶作物。故研究除草剂2,4-D对于植物抗性的影响十分必要。
快速叶绿素荧光诱导动力学曲线，又称OJIP荧光诱导曲线，该曲线蕴藏着丰富的信息，主要反映了光系统Ⅱ(PSⅡ)的原初光化学反应及光合机构的结构和状态等的变化。通过对除草剂2,4-D在不同浓度下快速叶绿素荧光诱导动力学曲线的分析，可深入了解除草剂2,4-D对植物光合机构主要是PSⅡ的影响以及光合机构对除草剂2,4-D的适应机制。
通过对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线的测定，即可得到Fv/Fm和PI值。
其中，Fv/Fm是PSⅡ的最大光化学量子产量，或者称为开放的PSⅡ反应中心捕获激发能的效率，是个稳定的研究植物胁迫反应常用的参数。Fv/Fm降低表示胁迫使PSⅡ受到伤害，降低了PSⅡ原初光能转化效率，使PSⅡ潜在活性中心受损，光合作用原初反应过程受到抑制，故叶绿素荧光参数Fv/Fm的变化可作为光合机构损坏程度的诊断指标之一。
PI值为光化学性能指数，是快速叶绿素荧光诱导动力学曲线中对环境变化最敏感的参数之一，可较准确反映植物光合机构的状态，常用来估计整个光化学反应对环境的响应。
JIP-test是在生物膜能量流动基础上建立的针对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线的数据分析和处理方法。根据该方法，可在相对可变荧光诱导动力学曲线上观察K点是否出现。
当PSⅡ的供体侧受到伤害时，经过极短的时间(在J点之前)，叶绿素荧光强度就会上升，出现K相，多相荧光O-J-I-P变为O-K-J-I-P。通过上述JIP-test数据处理方法，可在相对可变荧光诱导动力学曲线观察到K点。K点的出现说明除草剂2,4-D对于植株的光合机构产生伤害。
在本发明中，将Fv/Fm、PI值以及K点共同作为判断除草剂2,4-D对植株的光合机构的伤害情况的依据，确保了判断结果的准确性。同时，该药害评价方法可快速、无损、高效地指示出植株受除草剂2,4-D喷施或飘移所受伤害的程度，为植物对除草剂抗性的研究评价提供了可借鉴的方法。
作为本发明的一种优选实施方式，所述植株为阔叶作物，优选为五味子，进一步优选为五味子中的“嫣红”品种。
阔叶作物尤其是五味子对于除草剂2,4-D较为敏感，故可以五味子对于除草剂2,4-D的抗性为例，研究植物对除草剂2,4-D抗性的评价方法。
作为本发明的一种优选实施方式，步骤(a)中，将处理组和对照组置于黑暗条件下20min以上，以进行暗适应。
在进行药害评价时，处理组和对照组的植株要经过充分暗适应。
作为本发明的一种优选实施方式，步骤(a)中，在饱和脉冲光不小于3000μmol m- 2s-1PFD条件下对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量。
优选地，在饱和脉冲光3000μmol m-2s-1PFD条件下对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量。
作为本发明的一种优选实施方式，进一步的，步骤(a)中，对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量所采用的仪器选自Pocket-PEA仪器、Handy-PEA仪器或PEA-Senior仪器中的一种，优选为Pocket-PEA仪器。
上述仪器均可实现对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线的测定。相比之下，Pocket-PEA仪器(植物效率分析仪)可在较短时间内完成上述曲线的测定。
作为本发明的一种优选实施方式，步骤(a)中，测量快速叶绿素荧光诱导动力学曲线的时间小于2min。
作为本发明的一种优选实施方式，步骤(b)中，根据步骤(a)测量得到的荧光参数计算出可变荧光值和相对可变荧光值，绘制出相对可变荧光诱导动力学曲线，在300μs特征位点处出现明显的正向升高即为出现K点。
具体的，PEA测量后会得到一系列荧光参数，每一个时间点的荧光值都可以运用公式计算出可变荧光值，将处理组减去对照组就可以得到相对可变荧光值，绘制出相对可变荧光诱导动力学曲线。需要说明的是，相对可变荧光诱导动力学曲线上K点出现的特征位点为300μs。
作为本发明的一种优选实施方式，步骤(c)中，可根据下述条件判断除草剂2,4-D对植株的光合机构的伤害情况：
与对照组相比，当处理组相对可变荧光诱导动力学曲线出现K点，并且Fv/Fm与PI值均发生降低，即表示除草剂2,4-D对植株的光合机构产生了药害。
将Fv/Fm、PI值以及K点共同作为判断除草剂2,4-D对植株的光合机构的伤害情况的依据，确保了判断结果的准确性。
作为本发明的一种优选实施方式，所述除草剂2,4-D药害评价方法，包括如下步骤：
(a)选取长势一致的植株，将植株分为已喷施除草剂的处理组和未喷施除草剂的对照组；
将处理组和对照组暗适应20min以上，采用Pocket-PEA仪器在饱和脉冲光3000μmol m-2s-1PFD条件下对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量，得到Fv/Fm和PI值；
(b)将步骤(a)得到的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线用JIP-test进行分析，在相对可变荧光诱导动力学曲线上观察K点是否出现；
(c)根据Fv/Fm和PI值的变化情况以及相对可变荧光诱导动力学曲线上K点是否出现，即可判断除草剂2,4-D对植株光合机构的伤害情况：
与对照组相比，当处理组相对可变荧光诱导动力学曲线出现K点，并且Fv/Fm与PI值均发生降低，即表示除草剂2,4-D对植株的光合机构产生了药害。
通过对除草剂2,4-D药害评价方法的具体限定，可对植株受除草剂2,4-D喷施或飘移所受伤害的程度做出快速、无损、高效地判断，为植物对除草剂抗性的研究评价提供了可借鉴的方法。
根据本发明的另一个方面，还提供了一种除草剂2,4-D药害评价方法在评价植物对除草剂抗性中的应用。
鉴于上述除草剂2,4-D药害评价方法所具有快速和非破坏性的优势，该方法为评价植物对除草剂抗性研究提供了可借鉴的方法，有望在植物生理研究中被广泛应用。
下面结合具体实施例，对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例提供的一种除草剂药害评价方法，包括如下步骤：
(a)选取长势一致的五味子品种‘嫣红’一年生嫁接苗，将五味子分为已喷施除草剂2,4-D的处理组和未喷施除草剂2,4-D的对照组(CK)；其中，已喷施除草剂2,4-D的处理组是将2,4-D稀释成4000*(4000倍)稀释液，采用喷壶将稀释液均匀的喷施在叶片下表面，选取自植物学上端第6片叶片为测试对象；
在喷施处理后第24h、48h和72h(即1d、2d和3d)，将处理组和对照组暗适应20min后，采用Pocket-PEA仪器在饱和脉冲光3000μmol m-2s-1PFD条件下对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量，得到Fv/Fm和PI值；
(b)将步骤(a)得到的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线用JIP-test进行分析，在相对可变荧光诱导动力学曲线上观察K点是否出现；
(c)根据Fv/Fm和PI值的变化情况以及相对可变荧光诱导动力学曲线上K点的出现，即可判断除草剂对植株光合机构的伤害情况。
实施例2
本实施例提供的一种除草剂药害评价方法，除了步骤(a)中已喷施除草剂2,4-D的处理组是将除草剂2,4-D稀释成2000*(2000倍)稀释液，其余步骤与实施例1相同。
实施例3
本实施例提供的一种除草剂药害评价方法，除了步骤(a)中已喷施除草剂2,4-D的处理组是将除草剂2,4-D稀释成1000*(1000倍)稀释液，其余步骤与实施例1相同。
实施例4
本实施例提供的一种除草剂药害评价方法，除了步骤(a)中已喷施除草剂2,4-D的处理组是将除草剂2,4-D稀释成500*(500倍)稀释液，其余步骤与实施例1相同。
对上述实施例1-4对应的Fv/Fm、PI值和相对可变荧光诱导动力学曲线进行测定，具体结果可参见图1-5。
其中，图1为对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组(实施例1-4)第1d、2d和3d后的Fv/Fm值变化情况；图2为对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组(实施例1-4)第1d、2d和3d后的PI值变化情况；图3为对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组(实施例1-4)第1d后的相对可变荧光诱导动力学曲线；图4为对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组(实施例1-4)第2d后的相对可变荧光诱导动力学曲线；图5为对照组和已喷施除草剂2,4-D的处理组(实施例1-4)第3d后的相对可变荧光诱导动力学曲线。
由图1可以看出，实施例1与2中的植株叶片分别经过除草剂2,4-D4000*和2000*稀释液喷施后，其Fv/Fm值高于对照组，说明低浓度条件下的PSII原初光能转化效率上升，实施例3与4中在高浓度条件下其Fv/Fm值低于对照组，说明植株的潜在光合能力降低，初步说明其光合机构受到影响。
由图2可以看出，与对照组相比，实施例1与2中的植株叶片经过除草剂2,4-D4000*和2000*稀释液喷施后，其PI值始终高于对照，说明低浓度的除草剂2,4-D会增高植株的PI值，进一步说明喷施低浓度的除草剂2,4-D可以从光能吸收、捕获和电子传递三个方面综合提高光系统的活性；实施例3与4中的植株叶片经过除草剂2,4-D 1000*和500*稀释液喷施后，其PI值低于对照组，说明光系统活性受到了除草剂2,4-D的胁迫。随着处理时间的延长，4000*和500*浓度处理下的差值在逐渐缩小，说明植物在除草剂2,4-D胁迫后有恢复功能，即随着除草剂2,4-D的挥发和体内代谢，低浓度的正向促进作用和高浓度的反向抑制作用都在减弱。
由图3-5可以看出，实施例1与2中所对应的相对可变荧光诱导动力学曲线上，处理3天后的300μs特征位点处(图中箭头所指示的位置)相对可变荧光差值始终小于对照组，未观察到K点，且图1和图2中实施例1与2对应的Fv/Fm和PI值均呈现升高的结果。
而实施例3与4中的处理300μs特征位点处(图中箭头所指示的位置)的叶绿素荧光产量均有明显增加，即出现K点的正向升高(ΔK>0)。相对可变荧光诱导动力学曲线中K点的出现主要是因为电子传递中水的裂解过程被抑制和电子初级醌受体(QA)部分被抑制，标志着放氧复合体受到伤害。实施例3的K点的相对变化量(ΔK)始终低于实施例4处理，由于ΔK能够反映放氧复合体被破坏的程度，说明高浓度的实施例4中放氧复合体破坏程度更大，并结合Fv/Fm和PI值均降低的结果，说明高浓度除草剂会使光合机构受损，即除草剂2,4-D对植株的光合机构产生了药害。
为进一步验证除草剂药害评价方法的准确性，对实施例4已喷施除草剂2,4-D的处理组进行熏蒸或喷施处理，并与对照组进行对比，具体如图6所示。
实施例4已喷施除草剂2,4-D的处理组是将除草剂2,4-D稀释成500*稀释液。五味子植株经过除草剂2,4-D 500*稀释液熏蒸处理后，受除草剂2,4-D飘移药害的植株呈现出叶片下垂、茎尖弯曲的现象。喷施除草剂2,4-D的五味子叶片会出现枯斑，组织坏死。同时，药害产生的程度暂时不会导致植株的死亡，但是会影响植株的正常生长，这说明除草剂对植株的光合机构产生了药害。图6中植株的外在表观情况与本发明提供的除草剂药害评价方法所得到的结果相一致。
综上所述，本发明提供的除草剂药害评价方法，将Fv/Fm、PI值以及K点共同作为判断除草剂2,4-D对植株的光合机构的伤害情况的依据，确保了判断结果的准确性。同时，该药害评价方法可快速、无损、高效地指示出植株受除草剂2,4-D喷施或飘移所受伤害的程度，为植物对除草剂抗性的研究评价提供了可借鉴的方法。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种除草剂2,4-D药害评价方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)将植株分为已喷施除草剂2,4-D的处理组和未喷施除草剂2,4-D的对照组，将处理组和对照组经过暗适应后，测定处理组和对照组的植株叶片的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线，得到Fv/Fm和PI值；其中，所述植株为五味子；
(b)将步骤(a)得到的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线用JIP-test进行分析，在相对可变荧光诱导动力学曲线上观察K点是否出现；
(c)根据处理组和对照组的Fv/Fm、PI值的变化情况以及相对可变荧光诱导动力学曲线上K点是否出现，即可判断除草剂2,4-D对植株的光合机构的伤害情况；
与对照组相比，当处理组相对可变荧光诱导动力学曲线出现K点，并且Fv/Fm与PI值均发生降低，即表示除草剂2,4-D对植株的光合机构产生了药害。
2.根据权利要求1所述的除草剂2,4-D药害评价方法，其特征在于，所述植株为五味子中的“嫣红”品种。
3.根据权利要求1所述的除草剂2,4-D药害评价方法，其特征在于，步骤(a)中，将处理组和对照组置于黑暗条件下20min以上，以进行暗适应。
4.根据权利要求1所述的除草剂2,4-D药害评价方法，其特征在于，步骤(a)中，在饱和脉冲光不小于3000μmol m-2s-1 PFD条件下对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量。
5.根据权利要求1所述的除草剂2,4-D药害评价方法，其特征在于，步骤(a)中，对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量所采用的仪器选自Pocket-PEA仪器、Handy-PEA仪器或PEA-Senior仪器中的一种。
6.根据权利要求5所述的除草剂2,4-D药害评价方法，其特征在于，步骤(a)中，对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量所采用的仪器为Pocket-PEA仪器。
7.根据权利要求1所述的除草剂2,4-D药害评价方法，其特征在于，步骤(a)中，测量快速叶绿素荧光诱导动力学曲线的时间小于2min。
8.根据权利要求1所述的除草剂2,4-D药害评价方法，其特征在于，步骤(b)中，根据步骤(a)测量得到的荧光参数计算出可变荧光值和相对可变荧光值，绘制出相对可变荧光诱导动力学曲线，在300μs特征位点处出现明显的正向升高即为出现K点。
9.根据权利要求1-8任意一项所述的除草剂2,4-D药害评价方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)选取长势一致的植株，将植株分为已喷施除草剂2,4-D的处理组和未喷施除草剂2,4-D的对照组；
将处理组和对照组暗适应20min以上，采用Pocket-PEA仪器在饱和脉冲光3000μmol m- 2s-1 PFD条件下对快速叶绿素荧光诱导动力学曲线进行测量，得到Fv/Fm和PI值；
(b)将步骤(a)得到的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线用JIP-test进行分析，在相对可变荧光诱导动力学曲线上观察K点是否出现；
(c)根据Fv/Fm和PI值的变化情况以及相对可变荧光诱导动力学曲线上K点是否出现，即可判断除草剂2,4-D对植株光合机构的伤害情况：
与对照组相比，当处理组相对可变荧光诱导动力学曲线出现K点，并且Fv/Fm与PI值均发生降低，即表示除草剂2,4-D对植株的光合机构产生了药害。
10.权利要求1-9任意一项所述的除草剂2,4-D药害评价方法在评价植物对除草剂抗性中的应用。
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