CN108359625B - 一种福菜乳杆菌新亚种 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种福菜乳杆菌新亚种，它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏号：CGMCC NO：13425的福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1(Lactobacillus futsaii Subsp.chongqingii CQ16Z1)。本发明还提供了其用途及一种食品、保健品或药品。本发明福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1，带有魏斯氏菌特征，可用于制作泡菜制作、制备益生菌剂，而且为丰富福菜乳杆菌种类及科学研究提供理论基础。

Description

一种福菜乳杆菌新亚种
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种福菜乳杆菌新亚种。
背景技术
乳杆菌属(Lactobacillus)是一类革兰氏阳性细菌，能发酵多种碳水化合物产生大量的乳酸，是乳酸菌的重要成员。乳杆菌作为一种安全无害的微生物，广泛分布于植物表面、传统发酵食品、乳制品、人类和动物的肠道中。是可以用于维持肠道菌群平衡，减轻肠道疾病等的益生菌。因此，开发新的乳杆菌种类，对乳杆菌的科学研究及实际应用具有重要意义。
福菜乳杆菌(Lactobacillus futsaii)是2012年在我国台湾地区首次发现的乳杆菌新种，目前对其研究较少，并且尚未有亚种报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种福菜乳杆菌新亚种及其应用。
本发明提供了一种福菜乳杆菌亚种，它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏的保藏号：CGMCC NO：13425的福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1(Lactobacillus futsaii Subsp.chongqingii CQ16Z1)。
本发明的福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1，于2016年12月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，其地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC NO：13425。
本发明还提供了一种细菌培养物，它含有上述福菜乳杆菌亚种。
本发明还提供了保藏号：CGMCC NO：13425的福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1或上述细菌培养物，在制备益生菌中的用途。
本发明还提供了保藏号：CGMCC NO：13425的福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1或上述细菌培养物，在制备发酵食品中的用途。
本发明还提供了保藏号：CGMCC NO：13425的福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1或上述细菌培养物，在制备能够同时分解葡萄酸盐、半乳糖和核糖的食品、保健品或药物中的用途。
本发明还提供了一种食品、保健品或药品，其特征在于：它是以保藏号：CGMCC NO：13425的福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1为活性成分，加入食品、保健品或药学领域可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
魏斯氏菌(Weissella)是一类存在于酱油、泡菜、豆豉、香肠等多种发酵食品的乳酸菌，它是参与食品发酵的重要微生物，对食品中有机酸、酯类及短链脂肪酸等风味物质的合成具有重要作用，在发酵食品中具有良好应用价值。
本发明保藏号：CGMCC NO：13425的福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1(Lactobacillusfutsaii Subsp.chongqingii CQ16Z1)，从中国传统泡菜中分离。该分离株革兰阳性，无鞭毛，不形成芽胞，兼性厌氧，过氧化氢酶阴性，长棒状。最佳生长温度为37℃，G+C含量为39.1mol％。16S rRNA和rpoA基因测序，DNA-DNA杂交和细胞壁肽聚糖型分析表明，CQ16Z1菌株属于福菜乳杆菌(Lactobacillus futsaii)这个种。然而，pheS基因测序，DNA-DNA杂交和细胞壁的单糖的测定表明，CQ16Z1菌株具有魏斯氏菌(Weissella)的一些特征。扩增片段长度多态性(AFLP)结果，生化表型，细胞脂肪酸种类和细胞形态特征也表明CQ16Z1菌株明显不同于福菜乳杆菌模式菌株(L.futsaii JCM17355T)。因此，将CQ16Z1菌株定义为福菜乳杆菌的新亚种，命名为福菜乳杆菌重庆亚种(Lactobacillus futsaii subsp.chongqingii)，该亚种带有魏斯氏菌特征。
本发明福菜乳杆菌新亚种，带有魏斯氏菌特征，可用于制作泡菜、制备益生菌剂等，应用前景广泛；而且本发明提供的新亚种，为丰富福菜乳杆菌种类及科学研究提供理论基础。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1基于基因pheS的系统进化树，注:构建方法为邻接法，自举检验值设为1000，德氏乳杆菌德氏亚种(L.delbrueckii subsp.delbrueckii)设置为外群，标尺为5％的序列差异。
图2AFLP实验结果，M:marker；1:the isolate CQ16Z1；2:Weissella cibaria M2；3:L.futsaii JCM17355T。
图3细胞壁特征性糖组分分析，1:the CQ16Z1；2:Weissella cibaria M2；3:L.futsaii JCM17355。
图4菌株CQ16Z1、W.cibaria M2及L.futsaii JCM17355T的扫描电镜图。
具体实施方式
下面以实施例作进一步说明，但本发明不局限于这些实施例。
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
实施例1本发明福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1的分离鉴定
1实验菌株与方法:
1.1实验菌株
菌株CQ16Z1分离自重庆农家自制泡姜，分离点坐标为(29.8337°，106.4295°)。福菜乳杆菌模式菌株YM0097T＝(JCM17355T＝BCRC80278T)，购于台湾食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心(BCRC)。食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)M2菌株，本实验室保存。
1.2保守基因的基因测序及系统发育分析
用细菌基因组DNA提取试剂盒提取菌株CQ16Z1的染色体DNA(菌株培养使用MRS培养基，37℃静置培养24小时)，然后作为16S rRNA，RNA聚合酶α亚基(rpoA)和苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基(pheS)基因的扩增模板。PCR引物如下：
16S rRNA：16S-for(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)
16S-rev(5’-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3’)
rpoA：rpoA-F2(5’-GTGGATGGCGTYGTWGARGA-3’)
rpoA-R2(5’-TTGATTGAACCRTTWGTCCAAA-3’)
pheS：pheS-21-F(5’-CAYCCNGCHCGYGAYATGC-3’)
pheS-23-R(5’-GGRTGRACCATVCCNGCHCC-3)
利用NCBI网站上的序列比对工具BLAST，输入菌株CQ16Z1的16S rDNA、pheS和rpoA基因的扩增片段序列，获得与其相近的序列。使用MEGA软件对经过BLAST比对获得的相关序列计算进化距离，进化树构建方法为邻接法，自举检验值设为1000。
1.3G+C含量测定
采用热变性温度法测定G+C含量(mol％)。将制备好的DNA样品用1SSC适当稀释后装入石英比色杯内，将比色杯放置于分光光度计的带有加温装置的比色架内，固定波长在260nm，根据变性过程中各温度和对应的相对吸光度绘制DNA热变性曲线，热变性曲线中点对应的温度即是Tm值。以大肠杆菌模式菌株K12作为对照菌株。将所测Tm值带入特定公式即可计算出G+C含量(mol％)，特定公式：1SSC(G+C)％＝2.44×Tm-169.3。
1.4DNA-DNA分子杂交
细菌的基因组DNA在液相中复性(杂交)时，同源DNA比异源DNA的复性速率要快。同源程度越高，复性速率和杂交率叶越高。利用这个特点，可以通过分光光度计直接测定变性DNA在一定条件下的复性速率，进而用理论推导的数学公式来计算DNA-DNA的杂交百分率(结合度)。
1.5基因组DNA扩增片段长度多态性分析(amplified fragment lengthpolymorphism,AFLP)
基因组总DNA用EcoRI和MseI两种限制性内切酶进行双酶切，形成分子量大小不等的限制性酶切片段。利用人工接头：EcoRI接头和MseI接头在T4 DNA连接酶作用下把酶切片段与有共同粘性末端的人工接头连接，连接后的粘性末端序列和接头序列作为PCR反应引物的结合位点，使用引物通过PCR反应对酶切片段进行选择性扩增。只有那些能与选择性碱基配对的片段才能与引物结合，成为模版被扩增，从而达到对限制性片段进行选择性扩增的目的。
EcoRI接头序列：5’-CTCGTAGACTGCGTACC-3’；
3’-CATCTGACGCATGG TTAA-5’
MseI接头序列：5’-GACGATGAGTCCTGAG-3’；
3’-TACTCAGGACTCAT-5’
EcoRI引物：5’-GACTGCGTACCAATTCGC-3’
MseI引物：5’-GATGAGTCCTGAGTAACG-3’
1.6碳水化合物代谢分析
法国梅里埃(Biomerieux)API(Analytic Products INC)是一个标准化的鉴定系统,它采用50个生化试验来对微生物的碳水化合物的代谢进行研究.API 50CHL主要用以乳酸杆菌鉴定,近年来在国内外API 50CHL系统已经广泛地运用于乳杆菌种及亚种的鉴定。本实验中采用API 50CHL来测定CQ16Z1、L.futsaii JCM17355T及Weissella cibaria M2菌株对49种可发酵碳水化合物的利用情况。
1.7细胞壁化学组分检测
1)细胞准备：收集菌株CQ16Z1和Weissella cibaria M2菌株以及L.futsaiiJCM17355T菌体，再离心洗涤，将菌体置于乙醇中过夜，室温下干燥。
2)水解细胞：干燥后的菌体中加入6mol/L HCL，121℃水解菌体15min，取水解物的上清液于试管内，在沸水浴中蒸发浓缩，直至p H﹥3.5为止。
3)点样：用铅笔距底边2cm水平线上进行标注，然后使用微量进样器吸取0.2ul标准样进行点样及制备好的细胞水解样品，点样。用于氨基酸分析的标准样为：DAP(LL-DAP,DD-DAP和meso-DAP混合样品)；用于糖分析的标准样为：核糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖及半乳糖的混合样品。
4)展层剂(V/V)：
①用于细胞壁水解液氨基酸分析的展层剂(甲醇：吡啶：冰醋酸：水＝40：4：1：20，v/v)
②用于全细胞水解液糖组分分析的展层剂(乙酸乙酯：吡啶：冰醋酸：水＝16：10：2：3，v/v)
1.8全脂肪酸的分析
用气相色谱对细胞壁脂肪酸组分进行分析。
1.9形态学观察
扫描电镜观察菌株的形态。
2结果与讨论:
2.1遗传分析
CQ16Z1的16S rRNA基因扩增片段长1559bp。序列提交GenBank数据库，获得编号为：KY242444，详细碱基对为：
>KY242444.3Lactobacillus sp.CQ16Z1 16S ribosomal RNA gene,partialsequence
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCATGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAACCAAACTGTTGATTAAAGCTTGCTTTATGATTCAGACCTTGGTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAAAAGTGGGGGATAACATTTGGAAACAAGTGCTAATACCGCATAACAACTACTTTCACATGATTGTAGCTTGAAAGATGGCTCTGCTATCACTTTTGGATGGACCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATAGCTCACCAAGGCAATGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGAAAGCCTGATGGAGCAATGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTGAAGAAGAACATGCGTGAGAGTAACTGTTCACGTACTGACGGTATTCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGAGAATGTAGGCGGTCTATTAAGTTTGAAGTGAAAGCCCTCGGCTCAACCGAGGAAGTGCTTCGAAAACTGGTAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGATTCGAAAGCATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATACCATGAAAAGCTTAGAGATAAGTCTTTCCCTTCGGGGACATGGATACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTATCAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTGGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAACGTGTTGCGAACTCGCGAGGGCAAGCAAATCACTTAAAACCGATCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGTCGGTGGGGTAACCCTTCGGGGAACTAGCCGCCTAAGGTGGGACAAATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCGGTAGGAGAACCTGCGGCTGGATCACCTCCTT
BLAST序列比对结果表明：L.futsaii JCM17355T的16S rRNA序列(NR_117973.1)是与扩增片段最相似的序列，相似性为99.87％.1542bp中仅有2个碱基不同,没有缺口。
CQ16Z1的rpoA基因扩增片段长407bp。序列提交GenBank数据库，获得编号为：KY242490，详细碱基对为：
>KY242490.1Lactobacillus sp.CQ16Z1 RNA polymerase alpha subunit(rpoA)gene,partial cds
GATGGCGTTGTTGAAGACGTTACGCAAACTGTGCTTAACGTGAAGAAATTAAAGCTTAAGTCTTATGCTGAAGACAGCTTAAAAGCTGAAGTTGACATTGTTGGCCCAGCTACTGTTACGGCTAAAGATATCAAAGCTGATGATGACCTAGAAATCCTCGATCCAGAACAATTTATTTGTACTGTTGCTGAGGGTGGACATTTCCACATGCAAATGACAATTAAAAATGGTCGTGGATATACTCCTGCAGAACAAAATAAGACGGACGAAACACCTATTGGTGTTCTTCCAGTTGACTCTATTTTTACACCTGTAGAAAAAGTTAACTATCAAGTTGAAAACACTCGTGTGGGTAAGAGAAACGACTTCGACAAATTAACAATCGATATTTGGACAAACGGTTCAAT
BLAST序列比对结果表明：L.futsaii JCM17355T的rpoA基因序列(HQ540081.1)是与扩增片段最相似的序列，相似性为99.26％，仅有5个碱基不同，没有缺口。
CQ16Z1的pheS基因扩增片段长425bp。序列提交GenBank数据库，获得编号为：KY233121详细碱基对为：
>KY233121.1Lactobacillus sp.CQ16Z1 phenylalanyl-tRNA synthetase alphachain(pheS)gene,partial cds
CACCCGGCACGTGATATGCAAGACACGTTCTATATCAAGCCAGAAATCTTGATGCGTACGCAAACGTCACCTGTTCAAGCCCGCACGTTGGAGTCACACGACTTTAATGCTGGACCTTTGAAGATGGTATCACCTGGTCGTGTTTACCGTCGCGATACAGATGATGCAACGCACTCACACCAATTCCACCAAATGGAAGGACTTGTGATCGATAAGCACATCACGATGGGTGATTTGAAGGGAACACTTTTGGCAATTGCGCGCAACTTGTTTGGTGAAGACCATGATATTCGTTTGCGTCCATCGTACTTCCCATTCACGGAACCTTCTGTTGAAGTCGATGTGTCATGGAACGCGGTAACGCCTGACATGAACCCTGAAGATATCGAATGGATTGAAGTGCTTGGAGCCGGTATGGTCCACCC
BLAST比对结果显示鉴定菌株Weissella cibaria strain CH2的pheS基因序列(CP012873.1)是与扩增片段最相似的序列，相似性为98.35％，425bp中仅有7个碱基不同。菌株CQ16Z1与L.futsaii JCM17355T的pheS基因序列相似性仅为74.05％。从图1可以知道，与扩增片段序列相似的还有L.plantarum JP7.1.5,L.mudanjiangensis 11050T等。其中CQ16Z1和L.plantarum JP7.1.5的pheS基因序列相似性为97.42％，271bp中仅有7个碱基不同，没有缺口。
DNA-DNA的杂交率，通过该实验我们得到CQ16Z1与L.futsaii JCM17355T的杂交率为91.9％；CQ16Z1与W.cibaria M2的杂交率为40.2％；而W.cibaria M2和L.futsaiiJCM17355的杂交率为20.4％。从这个结果可以看出CQ16Z1与L.futsaii JCM17355T属于同一个种。CQ16Z1与W.cibaria M2的杂交率明显高于L.futsaii JCM17355T和W.cibaria M2。
AFLP实验结果(图2)：位于泳道2的Weissella cibaria M2明显不同于位于泳道1的CQ16Z1与位于泳道3的L.futsaii JCM17355T。同时可以看出位于泳道1的CQ16Z1与位于泳道3的L.futsaii JCM17355T非常相似，但是在600bp和400bp位置仍然是有区别的。故，可以得知CQ16Z1与L.futsaii JCM17355T的亲缘性很近，且二者与在进化关系上与W.cibariaM2的亲缘性远。
CQ16Z1的G+C含量(mol％)为：39.1％；Weissella cibaria M2的G+C含量(mol％)为：44％；参考Chao的文献L.futsaii JCM17355T的G+C含量(mol％)为：36.3％。通过这个实验结果可以得出，CQ16Z1的G+C含量(mol％)符合乳杆菌的G+C含量范围32-53％，同时CQ16Z1的G+C含量(mol％)与模式菌株的差别是2.8％，参照3％这个阈值。我们认为菌株CQ16Z1与L.futsaii JCM17355T的亲缘性较W.cibaria M2更近，归属于福菜乳杆菌群。
因此，将本发明CQ16Z1菌株鉴定为福菜乳杆菌种。
2.2生化表型
API 50CHL实验结果:CQ16Z1有3个表型特征不同于和它亲缘性更近的L.futsaiiJCM17355T，有7个表型特征不同于和它亲缘性较远的W.cibaria M2。具体表现在CQ16Z1能弱利用葡萄酸盐、半乳糖和核糖，而L.futsaii JCM17355却不能利用(表1)。
表1.CQ16Z1T,L.futsaii JCM17355T and W.cibaria M2菌株的生化表型区别
Figure GDA0002634102110000081
Figure GDA0002634102110000091
*特征符号:+,阳性；-,阴性；w,弱阳性.
2.3.化学分类性状
2.3.1全脂肪酸分析
表2菌株CQ16Z1与其相近菌株的脂肪酸成分对比图
Figure GDA0002634102110000092
注：菌株:1,CQ16Z1；2,L.futsaii JCM17355T；3,W.cibaria M2.数值为总脂肪酸的百分比。只有3株菌株某类脂肪酸含量大于1％时，数据列出。-：没有测到。摘要特征表示两个或三个不能通过气相色谱分离的脂肪酸组。摘要特征3:C16:1ω6c/C16:1ω7c,摘要特征7:C19:0cycloω10c/C19:1ω6c/C19:1ω7c,摘要特征8:C18:1ω6c/C18:1ω7c。
从表2中得知菌株CQ16Z1和模式菌株L.futsaii JCM17355T的主要脂肪酸为C16:0,C18:1ω9c和Summed feature 7(C19:0cycloω10c/C19:1ω6c/C19:1ω7c)；W.cibaria M2的主要脂肪酸为C16:0,C18:1ω9c和C19:0cycloω8c。
菌株CQ16Z1和模式菌株L.futsaii JCM17355T的主要脂肪酸Summed feature 7(C19:0cycloω10c/C19:1ω6c/C19:1ω7c)是W.cibaria M2中不含有的脂肪酸成分。W.cibariaM2的主要脂肪酸C19:0cycloω8c是菌株CQ16Z1和模式菌株L.futsaii JCM17355T中不含有的脂肪酸成分。
通过表2我们还可以看出菌株CQ16Z1和与它亲缘性最近的L.futsaii JCM 17355T总脂质的色谱图模式一致，但是在C17:02OH,C19:0iso,C19:1iso I,Summed feature 3andSummed feature 7的含量上呈现了差异性。CQ16Z1和L.futsaii JCM 17355T与W.cibariaM2不管是在总脂质的色谱图模式及百分比含量上C19:0cycloω8c and C19:0iso and Summedfeature 7(C19:1ω7c and C19:1ω6c)呈现明显差异性。
2.3.2细胞壁化学组分检测
细菌化学分类法认为细胞壁中氨基酸组分在同一个属内是相同的，种之间的差异主要是糖的不同。根据实验结果我们得知本实验中所涉及的实验对象均不具有LL-DAP,meso-DAP和DD-DAP。由图3可知CQ16Z1和Weissella cibaria M2细胞壁糖组分主要是核糖、葡萄糖、半乳糖。L.futsaii JCM17355T的细胞壁糖组分则没有半乳糖。这个结果不但支持CQ16Z1是L.futsaii的亚种，同时也支持CQ16Z1和Weissella cibaria M2之间的亲缘关系。
2.4形态鉴定
图4为菌株CQ16Z1及其亲缘性相近菌株的扫描电镜图，Fig.4(A)菌株CQ16Z1菌体呈长杆状,0.5-0.6μm×2.2-4.6μm，单个或成对排列；Fig.4(B)菌株W.cibaria M2呈椭球状,0.6-0.7μm×1.0-1.2μm，单个或成对排列；Fig.4(C)菌株L.futsaii JCM17355T菌体呈杆状,0.7-0.8μm×1.2-3.3μm，单个或成对排列。从扫描电镜图可以看出，我们的鉴定菌株CQ16Z1和福菜模式菌株L.futsaii JCM17355T在形态特征上的亲缘性比W.cibaria M2更近。
结合分子生物学特征、生化表型及形态鉴定结果，将本发明分离菌株鉴定为福菜乳杆菌新亚种，命名为福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1(Lactobacillus futsaiiSubsp.chongqingii CQ16Z1)，并于2016年12月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC NO：13425。
3总结
3.1福菜乳杆菌重庆亚种描述
细胞革兰氏阳性，无鞭毛，不形成芽孢，兼性厌氧，过氧化氢酶阴性，长棒状。37℃培养48小时后，MRS琼脂菌落呈白色、光滑、圆形。在肉汤培养基中，生长在30℃或37℃，而不是在10℃和45℃，在pH值为4.5和8，而不是在pH 3。生长在2％和4％氯化钠，弱生长在6％氯化钠，在8％和10％氯化钠不生长。G+C含量为39.1％。可利用下列碳源产酸：L-阿拉伯糖、核糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、N-乙酰氨基葡萄糖、苦杏仁苷、柠檬酸铁、水杨素、纤维二糖，麦芽糖，蔗糖和葡萄糖酸和龙胆二糖。不能利用：甘油，赤藓糖醇、半乳糖醇，D-阿拉伯糖、L-木糖，D-核糖醇，β-甲基木糖甙、山梨糖、鼠李糖、肌醇、甘露醇、山梨醇、α-甲基-D-甘露糖苷，α-甲基-d-葡萄糖苷、D-乳糖、D-密二糖，海藻糖，菊糖，松三糖、棉子糖、淀粉、糖原、木糖醇、D-松二糖，来苏糖，D-塔格糖，海藻糖，L-岩藻糖，阿拉伯糖醇、L-阿拉伯糖醇，2-酮葡糖酸，和5-酮葡糖酸。主要的细胞脂肪酸C18:1ω9c，C16:0和摘要特征7。细胞壁含有核糖、葡萄糖和半乳糖，但没有二氨基庚二酸。
乳杆菌和魏斯氏是发酵食品中的主要菌群，在中国泡菜中通常可以分离到乳杆菌和魏斯氏菌，也许在这两种菌之间发生了同源重组，导致菌株CQ16Z1具备魏斯菌基因的部分特征，它具有分类学意义。
综上所述，本发明菌株CQ16Z1可以被鉴定为福菜乳杆菌的新亚种，拉丁学名为Lactobacillus futsaii subsp.Chongqingii，中文名称为福菜乳杆菌重庆亚种。模式菌株：Lactobacillus futsaii subsp.chongqingii CGMCC 13425。
序列表
<110> 成都医学院
<120> 一种福莱乳杆菌新亚种
<130> GY044-18P1234
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1559
<212> DNA
<213> 福莱乳杆菌(Lactobacillus futsaii CQ16Z1的16S rRNA基因)
<400> 1
agagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcatgc ctaatacatg caagtcgaac 60
gaaccaaact gttgattaaa gcttgcttta tgattcagac cttggtgagt ggcggacggg 120
tgagtaacac gtgggtaacc tgcccaaaag tgggggataa catttggaaa caagtgctaa 180
taccgcataa caactacttt cacatgattg tagcttgaaa gatggctctg ctatcacttt 240
tggatggacc cgcggcgtat tagctagttg gtgaggtaat agctcaccaa ggcaatgata 300
cgtagccgac ctgagagggt aatcggccac attgggactg agacacggcc caaactccta 360
cgggaggcag cagtagggaa tcttccacaa tgggcgaaag cctgatggag caatgccgcg 420
tgagtgaaga aggttttcgg atcgtaaaac tctgttgttg aagaagaaca tgcgtgagag 480
taactgttca cgtactgacg gtattcaacc agaaagccac ggctaactac gtgccagcag 540
ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt ccggatttat tgggcgtaaa gagaatgtag 600
gcggtctatt aagtttgaag tgaaagccct cggctcaacc gaggaagtgc ttcgaaaact 660
ggtagacttg agtgcagaag aggaaagtgg aactccatgt gtagcggtgg aatgcgtaga 720
tatatggaag aacaccagtg gcgaaggcgg ctttctggtc tgtaactgac gctgagattc 780
gaaagcatgg gtagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccatgccgta aacgatgagt 840
gctaagtgtt ggagggtttc cgcccttcag tgctgcagct aacgcattaa gcactccgcc 900
tggggagtac gaccgcaagg ttgaaactca aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt 960
ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta ccaggtcttg acataccatg 1020
aaaagcttag agataagtct ttcccttcgg ggacatggat acaggtggtg catggttgtc 1080
gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttattatca 1140
gttgccagca ttcagttggg cactctggtg agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg 1200
gggacgacgt caaatcatca tgccccttat gacctgggct acacacgtgc tacaatggtc 1260
ggtacaacgt gttgcgaact cgcgagggca agcaaatcac ttaaaaccga tctcagttcg 1320
gattgcaggc tgcaactcgc ctgcatgaag ctggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcat 1380
gccgcggtga atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gagagtttgt 1440
aacacccaaa gtcggtgggg taacccttcg gggaactagc cgcctaaggt gggacaaatg 1500
attagggtga agtcgtaaca aggtagcggt aggagaacct gcggctggat cacctcctt 1559
<210> 2
<211> 407
<212> DNA
<213> 福莱乳杆菌(Lactobacillus futsaii CQ16Z1的rpoA基因)
<400> 2
gatggcgttg ttgaagacgt tacgcaaact gtgcttaacg tgaagaaatt aaagcttaag 60
tcttatgctg aagacagctt aaaagctgaa gttgacattg ttggcccagc tactgttacg 120
gctaaagata tcaaagctga tgatgaccta gaaatcctcg atccagaaca atttatttgt 180
actgttgctg agggtggaca tttccacatg caaatgacaa ttaaaaatgg tcgtggatat 240
actcctgcag aacaaaataa gacggacgaa acacctattg gtgttcttcc agttgactct 300
atttttacac ctgtagaaaa agttaactat caagttgaaa acactcgtgt gggtaagaga 360
aacgacttcg acaaattaac aatcgatatt tggacaaacg gttcaat 407
<210> 3
<211> 425
<212> DNA
<213> 福莱乳杆菌(Lactobacillus futsaii CQ16Z1的pheS基因)
<400> 3
cacccggcac gtgatatgca agacacgttc tatatcaagc cagaaatctt gatgcgtacg 60
caaacgtcac ctgttcaagc ccgcacgttg gagtcacacg actttaatgc tggacctttg 120
aagatggtat cacctggtcg tgtttaccgt cgcgatacag atgatgcaac gcactcacac 180
caattccacc aaatggaagg acttgtgatc gataagcaca tcacgatggg tgatttgaag 240
ggaacacttt tggcaattgc gcgcaacttg tttggtgaag accatgatat tcgtttgcgt 300
ccatcgtact tcccattcac ggaaccttct gttgaagtcg atgtgtcatg gaacgcggta 360
acgcctgaca tgaaccctga agatatcgaa tggattgaag tgcttggagc cggtatggtc 420
caccc 425

Claims (3)

1.一种福菜乳杆菌亚种，其特征在于：它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏号：CGMCC NO：13425的福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1(Lactobacillusfutsaii Subsp.chongqingii CQ16Z1)。
2.一种细菌培养物，其特征在于：它含有权利要求1所述的福菜乳杆菌亚种。
3.保藏号为CGMCC NO：13425的福菜乳杆菌重庆亚种CQ16Z1或权利要求2所述的细菌培养物在制备发酵食品中的用途。
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