CN107865884A - Orientin在制备治疗白血病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及Orientin在制备治疗白血病药物中的应用，属于医药领域。Orientin在制备治疗白血病药物中的应用；Orientin在制备抑制白血病细胞增殖药物中的应用，Orientin在制备诱导白血病细胞凋亡药物中的应用。Orientin通过抑制白血病细胞增殖和诱导白血病细胞凋亡，来对白血病进行治疗。对于本发明涉及的Houttuynoid B在制备治疗白血病药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于白血病细胞的抑制活性强得意想不到。
Description
技术领域
本发明涉及化合物Orientin的新用途，尤其涉及Orientin在制备治疗白血病药物中的应用。
背景技术
急性白血病是一类造血干细胞异常的克隆性恶性疾病。其克隆中的白血病细胞失去进一步分化成熟的能力而停滞在细胞发育的不同阶段。在骨髓和其他造血组织中白血病细胞大量增生积聚并浸润其他器官和组织，同时使正常造血受抑制，临床表现为贫血、出血、感染及各器官浸润症状。根据统计，白血病约占肿瘤总发病率的3％左右，是儿童和青年中最常见的一种恶性肿瘤。白血病的发病率在世界各国中，欧洲和北美发病率最高，其死亡率为3.2-7.4/10万人口。寻找能够防治急性白血病的药物显得非常迫切。
本发明涉及的化合物Orientin是一个2014年发表(Ebenezer de Mello Cruz，etal.,Leishmanicidal activity of Cecropia pachystachya flavonoids:Arginaseinhibition and altered mitochondrial DNA arrangement.Phytochemistry,89(2013)71–77.)的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前发现其能导致食物损坏(Ebenezer de Mello Cruz，et al.,Leishmanicidal activity of Cecropiapachystachya flavonoids:Arginase inhibition and altered mitochondrial DNAarrangement.Phytochemistry,89(2013)71–77.)，对于本发明涉及的Orientin在制备治疗白血病药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的结构类型，而且其对于治疗白血病活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于白血病的防治显然具有显著的进步。
发明内容
本发明的目的在于根据现有Orientin研究中未发现其具有治疗白血病活性的报道的现状，提供了Orientin在制备治疗白血病药物中的应用。
Orientin通过抑制白血病细胞(HL-60细胞)增殖和诱导白血病细胞(HL-60细胞)凋亡，来对白血病进行治疗。
所述化合物Orientin,结构如式(Ⅰ)所示：
本发明涉及的Orientin在制备治疗白血病药物中的用途属于首次公开，而且由于骨架类型属于全新的骨架类型,而且其对于白血病细胞的细胞毒性和凋亡诱导的生物活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于白血病的防治显然具有显著的进步。
具体实施方式
本发明所涉及化合物Orientin的制备方法参见文献(Ebenezer de Mello Cruz，et al.,Leishmanicidal activity of Cecropia pachystachya flavonoids:Arginaseinhibition and altered mitochondrial DNA arrangement.Phytochemistry,89(2013)71–77.)
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
实施例1：本发明所涉及化合物Orientin片剂的制备：
取20克化合物Orientin,加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。
实施例2：本发明所涉及化合物Orientin胶囊剂的制备：
取20克化合物Orientin，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000粒。
下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
试验例：Orientin抑制HL-60细胞增殖和诱导HL-60细胞凋亡
1材料和方法
1.1材料RPMI1640培养基购于Gibco公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)、罗丹明123为Sigma公司产品；Caspase-3,9分光光度法检测试剂盒购自南京凯基生物有限公司；其他化学试剂均为国产分析纯。
1.2细胞培养人早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60购于中科院上海细胞生物研究所，培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养液中，青霉素100kU/L，链霉素100mg/L，37℃，5％CO2，饱和湿度培养箱内培养，取对数生长期细胞进行实验。
1.3人外周血单个核细胞(PBMC)的分离
无菌采集健康供者静脉血，肝素抗凝(每毫升全血加0.1ml的200U/ml肝素钠溶液)，PBS等倍稀释血液，1:4加入人淋巴细胞分离液，2000rpm离心20min，收集乳白层后用无血清RPMI-1640培养基1500rpm10min离心洗涤2次，获得单个核细胞，台盼蓝拒染率大于95％，重悬于10％FCS的RPMI-1640培养基中备用。
1.4Orientin对HL-60细胞和人PBMC生长的影响
接种HL-60细胞和人PBMC与96孔板，每孔2×104个细胞(100ul)。37℃、5％CO2条件下培养24h后，实验组一次加0.625、1.25、2.5、5.0、10.0ug/mL的Orientin，继续分别培养24、48、72h后，终止培养，设只加培养液的对照组，每个剂量组设4个复孔。实验结束前4h，每孔加入20ul MTT溶液(5g/L)，继续孵育4h，终止培养，小心吸弃上清液，每孔加入150uLDMSO，震荡10min，选择570nm波长，在自动酶联检测仪上测定各孔吸光度(A)值，重复实验3次，并计算其生长抑制率(CI)。CI＝(阴性对照组A值-实验组A值)/阴性对照组A值×100％。
1.5流式细胞术测定细胞凋亡率
收集0、2.5、5.0、10.0ug/mL Orientin处理48h的各组细胞，PBS洗涤2次，加入预冷的70％乙醇于-20℃固定24h，离心洗涤后加入200uL PI染液，50ul RNA酶，4℃避光放置20min，1500rpm离心5min。调整细胞浓度为1×105个/ml～1×106个/ml，上流式细胞仪分析，激发光源为氩离子激光，激发波长为488nm。
1.6统计学分析本实验结果应用统计分析
软件SPSS13.0处理，所有实验结果采用x±s表示，组间比较采用单因素方差分析。
2结果
2.1Orientin对HL-60细胞及PBMC生长的影响对照组HL-60细胞生长活跃，经0.625、1.25、2.5、5.0、10.0ug/mL的HouttuynoidB处理24、48、72h后，HL-60细胞生长均不同程度的减慢，并呈时间、浓度依赖性。在相同浓度下，培养72h Orientin对人PBMC几乎无抑制作用，与HL-60细胞比较有显著性差异(P<0.05)(见表1)。
表1 Orientin对HL-60细胞增殖的影响(x±s，n＝4)
与24h比较*p<0.05**p<0.01；与48h比较△p<0.05△△p<0.01；与72h比较▲p<0.05▲▲p<0.01
2.2流式细胞术检测HL-60细胞凋亡
HL-60细胞与不同浓度的Orientin作用48h后，经流式细胞仪分析，结果显示G1期峰前均出现了代表细胞凋亡的亚二倍体峰，在一定浓度范围内随着Orientin浓度增升高，HL-60细胞凋亡率升高，其中10.0ug/mL Orientin作用48h凋亡率达到(22.16±4.87)％(表2)。
表2 Orientin作用48h后对HL-60细胞凋亡率的影响(x±s，n＝3)
与阴性对照组比较*p<0.05,**p<0.01
结论：Orientin能够抑制白血病细胞(HL-60细胞)增殖和诱导白血病细胞(HL-60细胞)凋亡，因此，可以用来对白血病进行治疗。
Claims (4)
1.Orientin在治疗白血病药物中的应用，所述化合物Orientin结构如式(Ⅰ)所示：
2.如权利要求1所述Orientin在治疗白血病药物中的应用，其特征在于Orientin抑制白血病细胞HL-60细胞增殖。
3.如权利要求1所述Orientin在治疗白血病药物中的应用，其特征在于Orientin诱导白血病细胞HL-60细胞凋亡。
4.一种治疗白血病的药物，其特征在于以权利要求1所述的Orientin为活性成分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物Orientin加入糊精195克，混匀，常规压片制成1000片。
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| CN201610849144.3A Pending CN107865884A (zh) | 2016-09-25 | 2016-09-25 | Orientin在制备治疗白血病药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107865884A (zh) |
-
2016
- 2016-09-25 CN CN201610849144.3A patent/CN107865884A/zh active Pending
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
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