CN107853241A - 一种提高水牛配种效率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及水牛繁殖技术领域，特别涉及一种提高水牛配种效率的方法，本申请的发明采用肌肉注射促性腺激素释放激素类似物制造一个人为的黄体期，抑制卵泡发育成熟，然后再注射氯前列醇溶解功能黄体，再重复对肌肉注射促性腺激素释放激素类似物使母水牛在此后发情，适时输精配种；在配种后的第28天对母水牛进行早期孕检，快速区分怀孕母水牛和空怀母水牛，对母水牛进行分群管理，本技术对同群母牛连续进行2次同期化处理和2次配种，可以提高群体受胎率，运用28天早期孕检技术代替35天B型超声波妊娠诊断技术可以减少母牛配种等待时间，节约母牛饲养成本。
Description
【技术领域】
本发明涉及水牛繁殖技术领域，特别涉及一种提高水牛配种效率的方法。
【背景技术】
水牛是季节性繁殖家畜，主要分布热带和亚热带地区，繁殖性能易受环境、气候等影响，而且母水牛发情持续期长，发情症状不明显，技术不熟练的人工授精配种员很难掌握适时输精的时机，致使配种受胎率较低，在水牛自然发情情况下，大多数利用人工授精配种受胎率大约在30％-35％。为了提高水牛的配种效率，目前，行内技术人员采用同期发情技术来进行配种，应用同期发情技术可以减少人力、物力的消耗，便于掌握适时输精，缩短发情配种时间，有利于提高人工授精配种受胎率和胚胎移植受胎率，但是，目前此技术的应用仍不能最大限度的提高水牛的配种效率，常规的水牛配种一般只能在配种后35天-60天通过B超孕检，也有在配种后第28天进行早期孕检，然后再对空怀牛进行观察配种，但均无在配种后28天孕检分群并在当天对空怀水牛进行二次同期发情处理和配种，不能有效缩短空怀水牛的配种等待时间。因此，为了提高水牛的繁殖效率，有必要找出一种能提高水牛的配种效率，有效缩短空怀水牛的配种等待时间的方法。
【发明内容】
鉴于上述内容，有必要提供一种能提高水牛的配种效率，有效缩短空怀水牛的配种等待时间的方法。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种提高水牛配种效率的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)人工授精：选取在繁育期但是尚未怀孕的母水牛1批，然后按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物，注射当天为第1天；从第1天起算到第7天按照0.4mg/头的注射量向母牛肌肉注射氯前列醇；从第1天起算到第9天按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物；第9天注射药品后18-30小时进行人工授精；
(2)孕检：步骤(1)进行人工授精后第28天对母水牛进行孕检，将孕检出现阳性的母水牛进行孕期管理；在孕检当天，向孕检为阴性的母水牛重复执行步骤(1)的人工授精步骤。
进一步的，所述步骤(2)孕检的方法为：
A、采集母水牛血样；吸取100μL不含母牛怀孕相关蛋白的标准溶液为阴性对照液；吸取100μL含母牛怀孕相关蛋白的标准溶液为阳性对照液；将阴性对照液和阳性对照液分别加入孕检试剂盒反应板上相对应的阴性对照反应孔和阳性对照反应孔中；再吸取母水牛血样100μL加入孕检试剂盒反应板上的血样反应孔内；最后将孕检试剂盒放入18℃-26℃的条件下孵育30min；
B、将步骤A孵育好的孕检试剂盒反应板取出，弃去反应板上阴性对照反应孔、阳性对照反应孔和血样反应孔内的液体，并用洗涤液洗涤，之后在各反应孔内滴入2滴检测溶液，并在18℃-26℃的条件下孵育30min，之后进行清洗；清洗后，向反应孔内滴加2滴辣根过氧化物酶标记物，并在18℃-26℃的条件下孵育30min，之后在反应孔内加入2滴TMB底物溶液(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)终止反应；
C、肉眼观察步骤B终止反应后的反应孔颜色；如观察到阳性对照反应孔是呈蓝色，阴性对照反应孔不呈蓝色，说明阴阳对照成立，此时，观察样本反应孔，如果呈蓝色则为阳性；未观察到蓝色则为阴性；如果未观察到阳性对照反应孔是呈蓝色，或者观察到阴性对照反应孔已经呈蓝色，说明阴阳对照不成立此时需要重复A、B步骤直到观察到阴阳对照成立为止。
进一步的，所述步骤B的洗涤液为蒸馏水。
本发明所述的母牛怀孕相关蛋白指的是妊娠期相关糖蛋白(PAGs)。
本发明具有如下有益效果：
1、本发明采用肌肉注射促性腺激素释放激素类似物制造一个人为的黄体期，抑制卵泡发育成熟，然后再注射氯前列烯醇钠溶解功能黄体，再重复对肌肉注射促性腺激素释放激素类似物使母水牛在此后发情，适时输精配种；在28d后及时对母水牛进行孕检，快速区分怀孕母水牛和空怀母水牛及时对怀孕母水牛和空怀母水牛进行区分管理，进一步提高母水牛配种的成功率，可以最大限度缩短空怀水牛配种等待时间，提高水牛的配种效率，对同群母牛连续进行2次同期化处理和2次配种，可以提高群体受胎率，运用28天早期孕检技术代替35天B型超声波妊娠诊断技术可以减少母牛配种等待时间，节约母牛饲养成本。
【具体实施方式】
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
实施例1：
本实施例为一种提高水牛配种效率的配种方法，该方法包括如下步骤：
(1)人工授精：选取在繁育期但是尚未怀孕的母水牛1批，然后按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物，注射当天为第1天；从第1天起算到第7天按照0.4mg/头的注射量向母牛肌肉注射氯前列醇；从第1天起算到第9天按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物；第9天注射药品后18-30小时进行人工授精；
(2)孕检：步骤(1)进行人工授精后第28天对母水牛进行孕检，将孕检出现阳性的母水牛进行孕期管理；向孕检为阴性的母水牛重复执行步骤(1)的人工授精步骤；
即向步骤(2)孕检为阴性的母水牛，然后按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物，注射当天为第1天；从第1天起算到第7天按照0.4mg/头的注射量向母牛肌肉注射氯前列醇；从第1天起算到第9天按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物；第9天注射药品后18-30小时进行人工授精；人工授精后的第28天再对本次配种母牛进行孕检。
上述步骤(2)孕检的方法为：
A、采集母水牛血样；吸取100μL不含母牛怀孕相关蛋白(指的是妊娠期相关糖蛋白(PAGs))的标准溶液为阴性对照液；吸取100μL含母牛怀孕相关蛋白(指的是妊娠期相关糖蛋白(PAGs))的标准溶液为阳性对照液；将阴性对照液和阳性对照液分别加入孕检试剂盒反应板上相对应的阴性对照反应孔和阳性对照反应孔中；再吸取母水牛血样100μL加入孕检试剂盒反应板上的血样反应孔内；最后将孕检试剂盒放入18℃-26℃的条件下孵育30min；
B、将步骤A孵育好的孕检试剂盒反应板取出，弃去反应板上阴性对照反应孔、阳性对照反应孔和血样反应孔内的液体，并用洗涤液洗涤(洗涤液为蒸馏水)，之后在各反应孔内滴入2滴检测溶液，并在18℃的条件下孵育30min，之后进行清洗；清洗后，向反应孔内滴加2滴辣根过氧化物酶标记物，并在18℃的条件下孵育30min，之后在反应孔内加入2滴TMB底物溶液(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)终止反应；
C、肉眼观察步骤B终止反应后的反应孔颜色；如观察到阳性对照反应孔是呈蓝色，阴性对照反应孔不呈蓝色，说明阴阳对照成立，此时，观察样本反应孔，如果呈蓝色则为阳性；未观察到蓝色则为阴性；如果未观察到阳性对照反应孔是呈蓝色，或者观察到阴性对照反应孔已呈蓝色，说明阴阳对照不成立此时需要重复A、B步骤直到观察到阴阳对照成立为止。
本申请实施例中排卵期的确定：
在步骤(1)人工授精步骤的第9天注射药品后第24h开始对母水牛进行60h的排卵时间评估，然后在排卵时间前后进行人工授精；
上述排卵时间评估的评估方法为：当新黄体已生成并明显突起时，母水牛判为0h排卵，当排卵凹填平但为突起时，母水牛判为12h排卵，其余为实测值。发明人监测384头母水牛的排卵情况，监测到在第9天注射促性腺激素释放激素类似物后母水牛的排卵时间如表1所示：
表1
| 排卵时间(h) | 0 | 12 | 24 | 36 | 48 | 60 | 合计 |
| 样本数(头) | 7 | 7 | 103 | 246 | 9 | 12 | 384 |
| 占比 | 1.82 | 1.82 | 26.82 | 64.06 | 2.34 | 3.13 | 100 |
由上表可知，第9天注射促性腺激素释放激素类似物后，90.89％的试验牛集中在24h、36h时段排卵，其中又以36h的排卵达到最多，占到排卵总数的64.06％，故本申请的母牛配种时间定为第9天注射药品后的18-30小时进行人工授精。
对照组1：
本对照组的配种方法与实施例1基本相同，但是在第28天进行孕检分群后试验结束，不再进行第二次发情配种，该方法为：
(1)人工授精：选取在繁育期但是尚未怀孕的母水牛1批，然后按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物，注射当天为第1天；从第1天起算到第7天按照0.4mg/头的注射量向母牛肌肉注射氯前列醇；从第1天起算到第9天按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物；第9天注射药品后18-30小时进行人工授精。
(2)孕检：配种后第28天按实施例1的孕检方法进行孕检。
对照组2：
本对照组的配种方法与实施例1基本相同，但是只进行第一次人工授精，孕检方法采用35天B超孕检法，该方法为：
选取在繁育期但是尚未怀孕的母水牛1批，然后按照100μg/头的注射量对母水牛进行肌肉注射促性腺激素释放激素类似物，注射当天为第1天；从第1天起算到第7天按照0.4mg/头的注射量对母牛进行肌肉注射氯前列醇；从第1天起算到第9天按照100μg/头的注射量对母水牛进行肌肉注射促性腺激素释放激素类似物；第9天注射药品后18-30小时进行人工授精，在配种后第35天对母水牛进行B超妊娠检查。
对照组3：
本对照组的配种方法与实施例1基本相同，但是在第35d才进行B超孕检分类，该方法为：
(1)人工授精：选取在繁育期但是尚未怀孕的母水牛1批，然后按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物，注射当天为第1天；从第1天起算到第7天按照0.4mg/头的注射量向母牛肌肉注射氯前列醇；从第1天起算到第9天按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物；第9天注射药品后18-30小时进行人工授精。
(2)孕检：步骤(1)进行人工授精后第35天对母水牛B超检查；在孕检当天，向孕检为阴性的母水牛重复执行步骤(1)的人工授精步骤；
即向步骤(2)孕检为阴性的母水牛按照100μg/头的注射量对母水牛进行肌肉注射促性腺激素释放激素类似物，注射当天为第1天；从第1天起算到第7天按照0.4mg/头的注射量对母牛进行肌肉注射氯前列醇；从第1天起算到第9天按照100μg/头的注射量对母水牛进行肌肉注射促性腺激素释放激素类似物；第9天注射药品后18-30小时进行人工授精。
对照组4：
本对照组的配种方法与实施例1基本相同，但是只进行第一次人工授精，孕检方法采用60天手工直肠检查法，该方法为：
选取在繁育期但是尚未怀孕的母水牛1批，然后按照100μg/头的注射量对母水牛进行肌肉注射促性腺激素释放激素类似物，注射当天为第1天；从第1天起算到第7天按照0.4mg/头的注射量对母牛进行肌肉注射氯前列醇；从第1天起算到第9天按照100μg/头的注射量对母水牛进行肌肉注射促性腺激素释放激素类似物；第9天注射药品后18-30小时进行人工授精，在配种后第60天对母水牛进行手工直肠妊娠检查。
测试试验：
相同的技术团队使用相同的试剂，按上述不同方案开展试验，试验结果见表2：
表2
| 组别 | 实施例 | 对照组1 | 对照组2 | 对照组3 | 对照组4 |
| 母牛头数 | 77 | 85 | 62 | 65 | 60 |
| 第一次发情数 | 62 | 69 | 50 | 51 | 47 |
| 第一次发情率(％) | 80.52 | 81.18 | 80.65 | 78.46 | 78.33 |
| 第一次怀孕数 | 25 | 26 | 20 | 21 | 19 |
| 第二次发情数 | 40 | / | / | 31 | / |
| 第二次怀孕数 | 14 | / | / | 10 | / |
| 总怀孕数 | 39 | 26 | 21 | 31 | 19 |
| 繁殖效率(％) | 50.65 | 30.59 | 32.26 | 47.69 | 31.67 |
注：繁殖效率＝怀孕总数/母牛头数*100％
由上表可知，试验各组第一次发情率在78.33％～81.18％之间，差异不显著，说明本次申请的同期发情方案效率较高且效果稳定；对照组1、对照组2和对照组4均不进行第二次发情和配种，繁殖效率只有30.59％、32.26％和31.67％，明显低于实施例且差异显著，说明本申请的两次授精可明显提高母水牛的繁殖效率。对照组3进行了第二次发情和配种，繁殖效率达到47.69％，与实施例比差异不显著，但对照组3试验全程耗时90天，而实施例试验全程耗时76天，实施例可以减少母牛配种等待时间14天，说明本申请的配种方法可以有效缩短母牛配种等待时间。
综上所述，使用本申请的方法能提高水牛的配种效率，有效缩短空怀水牛的配种等待时间。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (3)
1.一种提高水牛配种效率的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)人工授精：选取在繁育期但是尚未怀孕的母水牛1批，然后按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物，注射当天为第1天；从第1天起算到第7天按照0.4mg/头的注射量向母牛肌肉注射氯前列醇；从第1天起算到第9天按照100μg/头的注射量向母水牛肌肉注射促性腺激素释放激素类似物；第9天注射药品后18-30小时进行人工授精；
(2)孕检：步骤(1)进行人工授精后第28天对母水牛进行孕检，将孕检出现阳性的母水牛进行孕期管理；在孕检当天，向孕检为阴性的母水牛重复执行步骤(1)的人工授精步骤。
2.根据权利要求1所述一种提高水牛配种效率的配种方法，其特征在于，所述步骤(2)孕检的方法为：
A、采集母水牛血样；吸取100μL不含母牛怀孕相关蛋白的标准溶液为阴性对照液；吸取100μL含母牛怀孕相关蛋白的标准溶液为阳性对照液；将阴性对照液和阳性对照液分别加入孕检试剂盒反应板上相对应的阴性对照反应孔和阳性对照反应孔中；再吸取母水牛血样100μL加入孕检试剂盒反应板上的血样反应孔内；最后将孕检试剂盒放入18℃-26℃的条件下孵育30min；
B、将步骤A孵育好的孕检试剂盒反应板取出，弃去反应板上阴性对照反应孔、阳性对照反应孔和血样反应孔内的液体，并用洗涤液洗涤，之后在各反应孔内滴入2滴含特异性怀孕相关蛋白抗体的检测溶液，并在18℃-26℃的条件下孵育30min，之后进行清洗；清洗后，向反应孔内滴加2滴辣根过氧化物酶标记物，并在18℃-26℃的条件下孵育30min，之后在反应孔内加入2滴TMB底物溶液终止反应；
C、肉眼观察步骤B终止反应后的反应孔颜色；如观察到阳性对照反应孔是呈蓝色，阴性对照反应孔不呈蓝色，说明阴阳对照成立，此时，观察样本反应孔，如果反应孔呈蓝色则为阳性；观察到反应孔反应孔不呈蓝色则为阴性；如果未观察到阳性对照反应孔是呈蓝色，或者观察到阴性对照反应孔已经呈现蓝色，说明阴阳对照不成立，此时需要重复A、B步骤直到观察到阴阳对照成立为止。
3.根据权利要求2所述一种提高水牛配种效率的配种方法，其特征在于，所述步骤B的洗涤液为蒸馏水。
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