CN107847614A - 借助于iRGD和磁共振成像（MRT）用于诊断癌症的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及成像诊断方法，其包括在磁共振成像(MRT)的诊断中具有造影增强剂的造影剂，所述癌症或癌特别是肝细胞癌(HCC)。所述造影剂优选涉及钆化合物，优选具有iRGD作为造影增强剂的Gd‑DTPA，用于改善在癌症特别是HCC的MRT中的成像。此外本发明描述了用于患者和受试者借助所述诊断的风险分级。

Description

借助于iRGD和磁共振成像（MRT）用于诊断癌症的方法
本发明涉及成像诊断方法，其包括在磁共振成像(MRT)的诊断中具有造影增强剂的造影剂，所述癌症或癌特别是肝细胞癌(HCC)。所述造影剂优选涉及钆化合物，优选具有iRGD作为造影增强剂的Gd-螯合物，用于改善在癌症特别是HCC的MRT中的成像。此外本发明描述了用于患者和受试者借助所述诊断的风险分级。
尽管近年来的进步，晚期实体恶性肿瘤包括肝细胞癌(HCC)的治疗始终不令人满意。HCC是世界范围内第五最常见的恶性肿瘤，且由于直到晚期的诊出和之后欠缺有成功希望的治疗选项，是癌症死亡率的第三原因。HCC通常在肝硬化的基础上发展，肝硬化通过慢性肝炎产生。肝硬化的重要原因是乙肝和丙肝病毒感染、黄曲霉毒素和酗酒。
有疗效的HCC治疗方案是肝移植或切除。移植可在BCLC的0、A 和视情况B期进行，而肿瘤切除仅在0期中具有意义。剩下的、较高级的肿瘤期仅可通过局部消融法(LITT、TACE)或全身性疗法保守地治疗(用索拉非尼的化学疗法)。早期诊断因此对于实体恶性肿瘤有成效的治疗是起决定作用的。
改善对具有发展HCC高风险的患者(即具有肝硬化的患者)的监护以及对可疑结节的诊断，对明显改善HCC患者的预后具有重要意义。可靠成像的HCC诊断术允许动态造影-磁共振(造影-MRT)以及造影- 计算机成像。在这种检查下，基于经肝动脉的供应，HCC显示特征性动脉和静脉的涌入涌出行为，其通过低分子造影剂 被利用。小的HCC却罕见具有典型的放射性标准并且由于已经减少的门静脉供应更是血管减少且尚未形成的富动脉血管化。由此，对于临床特别重要的在硬化的肝中小HCC以及再生结节和发育不良的结节之间的区分即使现在也很难。
磁共振成像(MRT)是主要在医学诊断学用于呈现机体中组织和器官的结构和功能的成像方法。磁共振成像基于非常强的磁场以及在射频范围内的交替电磁场，用其激发体内特定原子核(大多数情况下氢核/质子)的共振，所述共振则在接收回路中引发电子信号。造影剂在此用于改善组织/器官的结构和功能在MRT中的呈现。在磁共振成像术的情况下，作为造影剂首选使用钆-螯合物，其因为钆原子的顺磁性导致造影剂附近的弛豫时间(T1和T2)缩短并由此导致明亮(信号强) 的结构呈现。
从现有技术出发，本发明的任务因此是提供用于癌(特别是肝细胞癌HCC)的诊断、差异诊断、预后和特别是用于早期识别以及用于这种癌症的风险分级的新的可能性。
在此主要是改善在癌诊断中磁共振成像技术。此外，本发明提供一种新型MRT造影剂，其在特异性和敏感性方面超越当前在MRT中用于呈现癌的造影剂。由此允许即便是小的癌以及转移灶的早期识别，这是至今在现有技术中尚未已知的。
通过在用于癌症或癌诊断和/或风险分级的方法中的使用iRGD作为造影增强剂解决了所列任务，所述方法涉及镧系元素化合物作为造影剂，就此对患者或受试者进行MRT。iRGD有利地允许在癌中造影剂更好的被吸收和特异性富集，特别是以镧系元素化合物作为造影剂。
因此本发明涉及用于癌症的诊断和/或风险分级的造影方法，其中借助
a.)包含游离的镧系元素化合物的造影剂，和
b.)造影增强剂iRGD，
c.)对患者/受试者进行磁共振成像。
此外本发明涉及包含a.)游离的镧和b.)造影增强剂iRGD的造影剂在用于癌症的诊断和/或风险分级中的应用，其中对患者/受试者进行磁共振成像。
在本发明另一个优选的实施形式中多次进行磁共振成像，其中优选在第一次磁共振成像中
i.)给药/施用含有游离镧系元素化合物的造影剂而无造影增强剂iRGD或者
i.’)给药/施用造影增强剂iRGD而无含有游离镧系元素化合物的造影剂且延迟时间后，
ii.)第二次磁共振成像，给药/施用含有游离镧系元素化合物的造影剂和造影增强剂iRGD。
这允许对照通过造影增强剂改善成像实现的效果，还允许标准化或规格化。第二次MRT可优选在第一次MRT后10分钟至6小时内，特别是1至24小时内，特别是数天内，特别是4至24小时内进行。
特别是可以施用相应的注射溶液，其中第一注射溶液不包含 iRGD，但具有含有游离镧系元素化合物的造影剂，且第二注射溶液除了额外具有iRGD，其它相同。
特别是可以使用相应的注射溶液，其中第一注射溶液不包含含有游离镧系元素化合物的造影剂，但具有iRGD且第二注射溶液除了额外具有含有游离镧系元素化合物的造影剂，其它相同。
因此本发明同样涉及用于癌症诊断和/或风险分级的成像方法，其特征在于借助
a.)含有游离镧系元素化合物的造影剂或a’.)造影增强剂 iRGD，
b.)对患者/受试者进行第一次磁共振成像并延迟时间后
c.)含有游离镧系元素化合物的造影剂，和
d.)造影增强剂iRGD，
e.)对患者/受试者进行第二次磁共振成像。
在本发明的上下文中，可使用的是含有顺磁性物质的造影剂，如选自过渡金属的元素，镧系和锕系，其所希望的是，可共价或非共价结合络合剂(螯合剂)或含氨基酸的大分子。特别是优选选自包含以下的组的元素：Gd(III)、Mn(II)、Cu(II)、Cr(III)、Fe(II)、Fe(III)、 Co(II)、Er(II)、Ni(II)、Eu(III)和Dy(III)。特别优选的元素是 Gd(III)、Mn(II)、Cu(II)、Fe(II)、Fe(III)、Eu(III)和Dy(III)，特别是Mn(II)和Gd(III)。
在另一个特别优选的实施形式中，所述含有顺磁性物质的造影剂包括选自镧系元素的化合物。特别优选所述镧系元素化合物是钆化合物。优选所述造影剂包含顺磁性物质，特别是络合的/螯合的镧系化合物。优选本发明的螯合剂包括：乙酰丙酮(acac)、乙二胺(en)、 2-(2-氨基乙基氨基)乙醇(AEEA)、二亚乙基三胺(dien)、亚氨基二乙酸盐(ida)、三亚乙基四胺(trien)、三氨基三乙基胺、次氮基三乙酸盐(nta)、亚乙基-二氨基三乙酸盐(ted)、乙二胺四乙酸盐(edta)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)(亦称：钆特酸，Acidum gadotericum)、草酸盐(ox)、酒石酸盐(tart)、柠檬酸盐(cit)、丁二酮肟(dmg)、 8-羟基喹啉、2,2'-双吡啶(bpy)、1,10-邻二氮杂菲(phen)、2-[4-(2- 羟丙基)-7,10-双(2-氧-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酸盐(钆特醇、)、2,2',2”-(10-((2R,3S)-1,3,4- 三羟丁-2-基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸盐 (Gadovist、Gadobutrol)。
根据本发明的造影剂或镧系元素化合物，特别是钆化合物同样可具有助剂，特别是成盐剂，如甲基葡胺(亦称：Megluminum)(N-甲基-D-葡糖胺)或其它，例如钆特酸(DOTA)以钆特酸甲基葡胺的形式所述助剂甲基葡胺是优选的。
在下一个优选的实施形式中，本发明进一步涉及含有顺磁性物质特别是镧系元素化合物的造影剂，其中钆化合物是由钆与螯合剂构成的络合物，优选其中所述螯合剂选自下组：二亚乙基三胺五乙酸 (DTPA)、1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)(亦称：钆特酸，Acidum gadotericum)、2-[4-(2-羟丙基)-7,10-双(2- 氧-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酸盐(钆特醇、)或2,2',2”-(10-((2R,3S)-1,3,4-三羟丁-2- 基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸盐(Gadovist、Gadobutrol)。优选钆化合物是Gd-DTPA，或该化合物的衍生物，例如Gd-EOB-DTPA
在本发明的上下文中，作为“螯合剂”理解为具有多于一个自由电子对的配体，其可以占据中心原子(在此特别是钆原子)的至少两个配位点(键合点)。配体和中心原子通过配位键连接。这意味着，结合中的电子对由配体单独提供。中心原子和配体的整体复合物被称为“螯合物”。
在于此描述的发明的范围内重要的是，所述含有顺磁性物质的造影剂，其游离且非结合地存在镧系元素化合物，优选钆化合物，特别是不并入纳米颗粒。因此根据本发明特别优选游离的镧系元素化合物作为造影剂。
WO 2012/113733 A1描述了一种仅基于纳米颗粒的造影剂，其中所述造影剂和造影增强剂结合到纳米颗粒上。然而，这被证明不能靶向引导(Waralee Watcharin,2015)，因为含Gd-DTPA的人血清白蛋白(HSA)-纳米颗粒的注射对具有HCC的肝脏中的HCC造影事实上起到负面作用(图4，Waralee Watcharin(supra))。经发现，所述 HSA纳米颗粒很快被巨噬细胞摄取(图7，Waralee Watcharin (supra))，导致纳米颗粒在肝脏中留存，因为巨噬细胞的密度在肝脏中高于在恶性肿瘤中。
出于好的癌(特别是HCC)诊断的目的，以及特别是允许在MRT 中图像的高分辨率，优选本发明的造影剂与优选3-特斯拉-断层摄影仪结合在MRT中使用。
根据本发明优选的癌是与在病理改变的区域血管屏障功能紊乱且淋巴流出减少相关的。这符合大多数实体癌，特别是乳癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、胆囊癌、前列腺癌、宫颈癌、胶质母细胞瘤、支气管癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、膀胱癌、脑瘤、肉瘤、肝细胞癌或还有这些癌的肿瘤转移灶。
然而肝细胞癌(HCC)是特别优选的。
在特别优选的实施形式中，根据本发明的造影剂还包含肿瘤归巢肽，特别是iRGD优选具有序列CRGDKGPDC(序列号1)，CRGDRGPDC (序列号2)，CRGDKGPEC(序列号3)和CRDGRGPEC(序列号4)。
近来在不同的肿瘤模型中显示，静脉施用肿瘤归巢肽(iRGD)改善了低分子物质和高分子物质在不同肿瘤模型的肿瘤基质中选择性的透入(Sugahara等人,2009；2010)。iRGD由连接整联蛋白av(优选在肿瘤血管的内皮中表达的整联蛋白(Ruoslahti,2002))的RGD基序和连接神经纤毛蛋白1的CendR基序组成。CendR在神经纤毛蛋白1上的连接对提高的肿瘤选择性透过效果是必需的。
在博士论文(http://thesis.library.caltech.edu/7084/45/ NG_SHEUNGCHEETHOMAS_2012_CH5.pdf)中借助Gd-DPTA和iRGD同样证明肿瘤血管具有轻度提高的透入性。然而经确定，其发现的透入性不足以适用于依据MRT的诊断。
此外WO 2011/005540 A1描述了借助iRGD用于改善癌制剂透入到癌细胞中的治疗应用。
在另一个实施形式中，根据本发明的造影剂此外包含提高待诊断的患者/受试者的血压的制剂。就此可证明，血压的提高导致所谓的 EPR效果加强。这允许改善的造影和由此特异性和敏感的诊断。就此特别优选根据本发明的造影剂包含血管紧张素II。在本发明另一个实施形式中，所述造影剂可包含生理耐受的含水介质。
在另一个方面，本发明的任务通过用于癌(特别是肝细胞癌)的诊断和/或风险分级的方法解决，其包括施用根据本发明具有造影增强剂的造影剂给患者/受试者并随即进行患者/受试者的MRT检查。就此所述MRT检查优选借助3-特斯拉断层摄影仪。
本发明可一般性地用于借助MRT的患者/受试者摄像。所述摄像过程就此如下进行：首先施用足够量的根据本发明的具有造影增强剂的造影剂给患者，以便随即借助磁共振成像进行患者扫描。不需要侵入性手术。由此拍摄所关注的患者内部结构(特别是患病组织，包括癌) 的图像。所述根据本发明的具有造影增强剂的造影剂对于组织特别是肝组织的可视化特别有帮助。患者/受试者的任何它区域可用于拍摄图像。
根据本发明的具有造影增强剂的造影剂的施用可以任何专业人员最熟知的方式和方法进行。这包括特别是静脉内、肠胃外、心脏内(心脏注射)、口腔、直肠等的各种造影剂配制剂的施用。造影剂的必要剂量相应于患者的年龄、体量和体重，以及待检查的身体区域而变化。
然而在优选的实施形式中，所述根据本发明的造影剂，优选 Gd-DPTA以45-65μmol/kg，优选57μmol/kg体重施用。优选静脉内施用给患者/受试者。
然而在优选的实施形式中根据本发明的造影增强剂iRGD以 0.1-12μmol/kg，2-10μmol/kg，优选4μmol/kg体重施用。
优选静脉内施用给患者/受试者。
本发明的具有造影增强剂的造影剂在此既可以单独也可以与其它诊断物质、治疗物质或其它物质一起使用。“其它物质”在此理解为特别是药物助剂、遮味剂或染色剂。就此例如口服配制剂可混入蔗糖或天然柠檬香料。
在另一个实施形式中，本发明涉及试剂盒，其包含用于实施根据本发明的方法彼此独立地具有的一种或多种注射溶液，共同或分别的造影剂，优选Gd-DPTA和/或造影增强剂iRGD，其剂量为0.1-12μ mol/kg，2-10μmol/kg，优选4μmol/kg体重。
例如注射溶液包含300μmol的iRGD用于75kg的患者。Gd-DPTA 可以用于MRT的常规剂量施用。
术语“风险分级”根据本发明包括找到的具有不好预测的患者，特别是急诊患者和高危患者，意图癌症(特别是HCC)的紧急诊断和治疗/处理，以使之尽可能有利的病态过程为目的。根据本发明的风险分级因此允许有效的治疗方法，其例如在用新的药物，如细胞抑制剂、单克隆抗体和化疗的癌症情况下进行，或用于治疗或处理癌症。
因此本发明同样涉及患者的鉴别，所述患者具有癌症的高危或/ 和不良预测，并且甚至在有症状和/或无症状患者情况下，特别是急诊患者，例如由于癌转移。
特别有利的是，特别是在急诊和/或重症医学的情况下可借助根据本发明的方法进行可靠的分级。所述根据本发明的方法因此允许临床决定，其导致快速的成功治疗和避免死亡情况。这种临床决定同样包括借助用于治疗或处理癌的药物的进一步治疗。
因此，本发明同样涉及用于癌症患者的诊断和/或风险分级以进行临床决定的方法，如借助药物的进一步治疗和处理，优选在时间关键的重症医学或急诊医学中，包括患者住院决定。
在另一个优选的实施形式中，本发明因此涉及监控癌症或癌的治疗的方法。
在根据本发明的方法的另一个优选的实施形式中，其用于诊断和/ 或风险分级、用于预测、用于差异诊断的早期识别和识别，用于评估难度和用于伴随治疗的进程评估。
本发明在下面借助实施例和附图进一步阐明，而非经此限制本发明。
实施例和附图：
1.肽
合成肽iRGD(CRGDKGPDC)和RGD对照肽(Kontroll-Peptid) (CRGDDGPKC)，其通过在氨基酸1和9之间的半胱氨酸-半胱氨酸- 二硫键以环形存在(Sugahara等，2010)，以大于98％的纯度从 GenScript USA Inc.获取。
2.TGFα/c-myc-转基因小鼠的产生和HCC的可视化
如所描述(Murakami等人，1993；Haupenthal等人，2012)通过杂交纯合子金属硫蛋白/TGFa和白蛋白/c-myc单转基因小鼠在 CD13B6CBA背景中产生人TGFα/c-myc双转基因小鼠。在断奶后，所述动物经饮用水获得ZnCl2用于通过TGFα的表达引发肿瘤。如所述(Siemens 113Magnetom Trio,Siemens Medical Solutions)从20 周龄起将TGFα/c-myc动物在3T MRI扫描仪中经受Primovist-增强的MRT-检查(Haupenthal等人，2012；Watcharin等人，2015；Korkusuz 等人，2013)。
根据Primovist-增强的MRT，具有HCC的小鼠被用于以下实验。
3.HCC-裸鼠的产生
HepG2-和Huh-7-细胞(ATCC and RIKEN BioResource Center) 在DMEM中用10％的FBS和青霉属/链霉素(Life Technologies)培育。在100μl PBS中的5百万细胞被注射到NMRI Foxnl裸鼠(Harlan Laboratories B.V.)的肋腹。四周后给小鼠列入实验组。
4.4T1-乳癌小鼠模型
4T1-细胞(ATCC)在RPMI 1640-介质中用10％的FBS和青霉属/ 链霉素(LifeTechnologies)培育。
Balb/c-小鼠用2.5x104 4T1-细胞注射到小鼠的乳腺4级(das die Mamma-DrüseNr.4der Maus)中并使肿瘤生长两周。
5.有和无iRGD的Gd-DTPA-增强的MRT
为了确定iRGD对HCC中Gd-DTPA-增强的MRT的作用，在实验中包括根据一周前前述Gd-EOB-DTPA(Primovist)-增强的MRT具有HCC 的TGFα/c-小鼠，或者具有HepG2-或Huh-7-肿瘤的裸鼠。所述小鼠借助腹膜内注射氯胺酮(Ketamin)(70mg/kg体重)和赛拉嗪(Xylazin) (10mg/kg体重)麻醉，之后进行基底T1-加权的MRT(von einer basalen T1-gewichteten MRT)。随即直接进行Gd-DTPA-增强的MRT (Haupenthal等人，2012)。12至24小时后注射iRGD或RGD对照肽 (经尾静脉各100ml)，之后进行基底MRT和Gd-DTPA-增强的MRT(Watcharin等人，2015)。用于定量分析MRT-数据使用应用者定义的“关注区域”(ROI)的信号强度(Korkusuz等人，2013)。在肝脏和在肿瘤组织中的ROI。信号强度的变化通过减除造影强化前的值依据Gd-DTPA-数据确定。肿瘤和肝脏的信号强度通过iRGD或RGD-对照肽的变化是之前注射PBS的Gd-DTPA-MRT的值的数倍。
结果描述：
共同施用iRGD，而非含有RGD-基序(不是CendR-基序)的肽，提高了染料伊文思蓝(Evans blau)和阿霉素(Doxorubicin)选择性进入肿瘤，特别是HCC。
为了研究静脉内施用iRGD是否提高HCC的透过性，借助共同注射的伊文思蓝(一种结合白蛋白的染料)根据Gd-EOB-DTPA-增强的MRT 研究静脉内施用的iRGD在具有内源性HCC的TGFα/c-myc小鼠中的作用。为此将具有HCC的小鼠静脉内注射iRGD、不含有CendR基序的RGD- 对照肽，或注射PBS，15分钟后注射伊文思蓝。再过30分钟后将上述动物末端灌注(terminal perfundiert)。光度测定地量化所述染料，相比用PBS-(p＝0.012)或对照肽(p＝0.012)注射的小鼠的HCC，在 iRGD注射的动物中伊文思蓝的量提高了三倍，而RGD-对照肽或PBS 没有作用(附图1A)。iRGD或RGD-对照肽对伊文思蓝在正常组织中的浓度没有影响(肝、肾、胰和肺)，这说明，iRGD特异性提高在TGF α/c-myc-小鼠中HCC的恶性肿瘤组织对共同施用的物质的透过性。
为了研究，是否在HCC-裸鼠肿瘤模型中也出现iRGD的肿瘤透过性效果，借助共同施用的伊文思蓝研究静脉内施用的iRGD在携带 HepG2-或Huh-7-异种移植的裸鼠中的作用。iRGD起到将在HepG2-以及Huh-7-异种移植的肿瘤中共同施用的伊文思蓝的浓度提高3.4倍(p ≤0.002)的作用(在HepG2-肿瘤中)或在Huh-7-肿瘤中提高2.6倍 (p<0.001)，相比注射PBS或对照肽的裸鼠的相应肿瘤(图1B和 C)。
此外在TGFα/c-myc-和在HepG2-异种移植-HCC-小鼠模型中，研究iRGD对静脉内施用阿霉素(肿瘤治疗剂，可依据其在组织切片和组织提取物中的荧光被检测)的组织浓度的影响。如图2中所显示，在这两个肿瘤模型的HCC中，iRGD起到提高阿霉素水平的作用(p≤0.0011)。iRGD在器官中对阿霉素的水平没有影响(图2A)。所述对照肽对阿霉素在任何器官中不具有影响。
研究在具有内源性HCC的TGFα/c-myc小鼠中是否已经能通过 Gd-DTPA-增强的MRT(一种普遍的临床方法)检测出所述iRGD的肿瘤透过性效果。对此使用一周前根据Gd-EOB-DTPA-增强的MRT确认HCC 的TGFα/c-myc小鼠。所述动物接受Gd-DTPA-增强的MRT，显示出在肝脏中强烈阴性造影的HCC(图3B，左)。12至24小时后给小鼠施用iRGD或RGD对照肽，随后进行另一个Gd-DTPA-增强的MRT。如图 3A(左)所示，注射PBS或RGD对照肽的小鼠肿瘤保持阴性造影。在 Gd-DTPA-增强的MRT之前注射iRGD导致肿瘤信号强度的实质性升高，其现在在肝脏中阳性造影(图3A，右)。iRGD和RGD对照肽在正常器官中对信号强度没有影响。相比施用RGD-对照肽(p＝0.004)或PBS (p<0.001；图3B)的动物，在注射iRGD后的肿瘤中信号强度的定量密度测量分析显示2倍的升高。
作为下一项，研究iRGD是否也影响在HCC-异种移植-裸鼠模型中的HCC中的MRT-信号。如图3C中所示，iRGD使得在HepG2-肿瘤中的肿瘤信号强度升高(p＝0.0311)。相似地，Huh-7-异种移植的也是这样(p＝0.0081)，但相比其它HCC小鼠模型(≤2倍)，升高并不明显(1.5倍；图3D)。这些数据表明，iRGD诱导的肿瘤透过性的升高能在所有三个不同的HCC小鼠模型中借助非侵入性方法(有或无 iRGD的Gd-DTPA-增强的MRT)被观察到。
此外研究，在同系(syngenen)4T1-乳腺癌小鼠模型中，在 Gd-DTPA-增强的MRT中iRGD影响肿瘤MRT信号到何种程度。据显示， iRGD导致在Gd-DTPA-增强的MRT中4T1-肿瘤的MRT-信号显著升高 (p<0.05)。
因此造影增强剂iRGD允许区别于硬化改变的肝脏的良性变化的差异诊断。
当前，HCC的放射性诊断依据肝脏与肿瘤组织不同的血液供应，以及HCC与正常肝组织之间不同的阴离子运输分布。所述血液供应主要通过门静脉(肝)或肝动脉(HCC)，其导致在肝中相比HCC组织，静脉内施用的造影剂时间延迟的涌入。所述阴离子运输分布通过在MRT中肝特异性造影剂Primovist的分布。
图1：
iRGD，而不是用无CendR基序的对照肽，提高了全身性共同施用的伊文思蓝(EB)在TGFα/c-myc-小鼠和在2HCC-异种移植-裸鼠模型的HCC中的浓度。
具有MRT确定的HCC的TGFα/c-myc-小鼠(A)或具有皮下HepG2 的小鼠(B)或Huh-7-异种移植的(C)，静脉内用4mmol/kg iRGD或对照肽(各自在PBS中)，或单独PBS注射，5分钟后进行EB注射。在另外30分钟后摘取组织。在所述组织中EB的集聚经光度计测定。数据是平均值±SD；n＝4-5。星号指示显著差异性(*P<0.05；*P <0.01；***P<0.001)。n.s.表示不显著。
图2：
用iRGD一起处理提高阿霉素选择性在TGFα/c-myc-小鼠和具有 HepG2-异种移植的小鼠的HCC中的浓度。
放射证实HCC的TGFα/c-myc-小鼠(A)或皮下HepG2-异种移植的裸鼠(B)，静脉内用4mmol/kg iRGD或对照肽(各自在PBS中)，或用PBS单独处理，10分钟后进行阿霉素(20mg/kgi.v.)注射。在另外30分钟后摘取组织并测定阿霉素浓度。测试值是平均值±SD； n＝5-6。星号指示显著差异性(**P<0.01；***P<0.001)。
图3：
iRGD导致在Gd-DTPA-增强的MRT中信号强度的肿瘤特异性升高。将其中HCC一周前借助Gd-EOB-DTPA-增强的MRT证实的TGFα/c-myc- 小鼠麻醉，之后进行基底T1-加权的MRT并直接随即进行Gd-DTPA-增强的MRT。12-24小时后iRGD或RGD-对照肽(Kon.-肽)(各100μl经尾静脉，4mmol/kg)注射到同一动物中，之后进行基底和Gd-DTPA- 增强的MRT。A，具有HCC的TGFα/c-myc-小鼠的Gd-DTPA-增强的MRT (左)，之后注射iRGD且12小时后进行另一次Gd-DTPA-增强的MRT。箭头标识肿瘤。B，MRT数据的定量分析。数值是平均值±SD；n＝12。
C，12只具有HepG2-异种移植的裸鼠在第一天注射对照肽，之后进行Gd-DTPA-增强的MRT。在第二天用iRGD处理动物，之后进行 Gd-DTPA-增强的MRT。数值是平均值±SEM。D，13只具有Huh-7-异种移植的裸鼠经受与(C)相同的程序。数值是平均值±SEM。星号指示显著差异性(*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001)。
图4：
iRGD和RGD-对照肽对Balb/c小鼠中肝脏和4T1-肿瘤的Gd-DTPA- 增强的MRT的信号强度升高的影响。Balb/c小鼠用2.5*104 4T1-细胞注射到小鼠的乳腺4级(in dieMamma-Drüse Nr.4)。两周后，将小鼠麻醉，之后进行基底T1-加权的MRT并直接随即进行Gd-DTPA-增强的MRT。12-24小时后iRGD或RGD-对照肽(Kon.-肽)(各100μl 经尾静脉，4mmol/kg)注射到同一动物中，之后进行基底和Gd-DTPA- 增强的MRT。数据被定量分析。数值是平均值±SD；n＝6。
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<213> 人工
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<223> 肿瘤归巢肽
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Cys Arg Asp Gly Arg Gly Pro Glu Cys
1 5

Claims (15)

1.用于癌症诊断和/或风险分级的成像方法，其特征在于借助
a.)含有游离镧系元素化合物的造影剂，和
b.)造影增强剂iRGD，
c.)进行磁共振成像。
2.根据权利要求1的用于癌症诊断和/或风险分级的成像方法，其特征在于借助
a.)含有游离镧系元素化合物的造影剂或a’.)造影增强剂iRGD，
b.)进行第一次磁共振成像并延迟时间后
c.)含有游离镧系元素化合物的造影剂，和
d.)造影增强剂iRGD，
e.)进行第二次磁共振成像。
3.根据权利要求2的用于癌症诊断和/或风险分级的成像方法，其中所述第二次磁共振成像在第一次MRT之后10分钟至6小时，特别是1至24小时内，特别是在数天内，特别是在4至24小时内进行。
4.根据前述权利要求之一的用于癌症诊断和/或风险分级的成像方法，其特征在于，所述癌选自下组实体癌：乳癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、胆囊癌、前列腺癌、宫颈癌、胶质母细胞瘤、支气管癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、膀胱癌、肉瘤、肝细胞癌HCC、脑瘤或还有这些癌的肿瘤转移灶。
5.根据前述权利要求之一的用于癌症诊断和/或风险分级的成像方法，其特征在于，所述iRGD选自具有序列CRGDKGPDC(序列号1)，CRGDRGPDC(序列号2)，CRGDKGPEC(序列号3)和CRDGRGPEC(序列号4)的组。
6.根据前述权利要求之一的用于癌症诊断和/或风险分级的成像方法，其特征在于，所述游离的镧系元素化合物是钆化合物，特别是钆与螯合剂构成的络合物，特别是其中所述螯合剂选自下组：二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)、2-[4-(2-羟丙基)-7,10-双(2-氧-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酸盐或2,2',2”-(10-((2R,3S)-1,3,4-三羟丁-2-基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸盐，任选地具有助剂，如成盐剂，特别是甲基葡胺。
7.根据前述权利要求之一的用于诊断和/或风险分级的方法，其用于鉴别具有癌症高风险或/和不利预后的患者。
8.根据前述权利要求之一的用于诊断和/或风险分级的方法，其中所述患者是有症状和/或无症状的患者，特别是急诊患者。
9.根据前述权利要求之一的用于诊断和/或风险分级的方法，其用于癌症的治疗监控，特别是在重症医学或急诊医学中。
10.根据前述权利要求之一的用于诊断和/或风险分级的方法，其用于进行临床决定，特别是借助药物的进一步处理和治疗，特别是在重症医学或急诊医学中，包括用于患者住院的决定。
11.根据前述权利要求之一的用于诊断和/或风险分级的方法，其用于预后、用于差异诊断的早期识别和识别、用于评估难度和用于伴随治疗的进程评估。
12.造影剂，其包含a.)游离的镧系元素和b.)造影增强剂iRGD用于癌症诊断和/或风险分级的成像方法，其中进行磁共振成像。
13.造影剂，其包含a.)游离的镧系元素和b.)造影增强剂iRGD用于根据权利要求12的癌症诊断和/或风险分级的成像方法，其中借助
a.)含有游离镧系元素化合物的造影剂或a’.)造影增强剂iRGD，
b.)进行第一次磁共振成像并延迟时间后
c.)含有游离镧系元素化合物的造影剂，和
d.)造影增强剂iRGD，
e.)进行第二次磁共振成像。
14.造影剂，其包含a.)游离的镧系元素和b.)造影增强剂iRGD用于根据权利要求12的癌症诊断和/或风险分级的成像方法，其中iRGD静脉内施用。
15.试剂盒，其包括彼此独立地具有一种或多种用于实施根据权利要求1至13之一的方法的注射溶液，共同或分别的造影剂，特别是Gd-DPTA和/或造影增强剂iRGD，剂量为0.1-12μmol/kg体重，2-10μmol/kg体重，特别是4μmol/kg体重。
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