CN107847473B - 新型神经保护性和神经修复性n-炔丙基咖啡酰胺(paca)及作为神经变性疾病的疗法的用途 - Google Patents

新型神经保护性和神经修复性n-炔丙基咖啡酰胺(paca)及作为神经变性疾病的疗法的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN107847473B
CN107847473B CN201680031130.9A CN201680031130A CN107847473B CN 107847473 B CN107847473 B CN 107847473B CN 201680031130 A CN201680031130 A CN 201680031130A CN 107847473 B CN107847473 B CN 107847473B
Authority
CN
China
Prior art keywords
paca
cells
ohda
disease
nrf2
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201680031130.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107847473A (zh
Inventor
荣建辉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Hong Kong HKU
Original Assignee
University of Hong Kong HKU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Hong Kong HKU filed Critical University of Hong Kong HKU
Publication of CN107847473A publication Critical patent/CN107847473A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107847473B publication Critical patent/CN107847473B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/32—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton containing six-membered aromatic rings
    • C07C235/34—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton containing six-membered aromatic rings having the nitrogen atoms of the carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/185—Nerve growth factor [NGF]; Brain derived neurotrophic factor [BDNF]; Ciliary neurotrophic factor [CNTF]; Glial derived neurotrophic factor [GDNF]; Neurotrophins, e.g. NT-3
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
    • C07C231/10—Preparation of carboxylic acid amides from compounds not provided for in groups C07C231/02 - C07C231/08
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
    • C07C231/22—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C231/24—Separation; Purification

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明涉及治疗和/或预防神经变性疾病如帕金森病的化合物、药物组合物以及相关方法。

Description

新型神经保护性和神经修复性N-炔丙基咖啡酰胺(PACA)及作 为神经变性疾病的疗法的用途
发明背景
帕金森病（PD）是第二大常见的神经变性疾病，影响1-2%的65岁以上的老年人，而世界上有1/10的患者在50岁左右年龄被诊断出1。PD病因学尚不清楚，但认为氧化损伤导致黑质中分泌多巴胺的神经元损失和随后的症状，包括震颤、强直以及运动障碍2。最近已评价了L-DOPA、多巴胺激动剂、MAO-B抑制剂以及NMDA受体拮抗剂以改善PD患者的运动症状3,4。当前疗法无一在临床上被证明阻止神经变性的发展5。另一方面，由于神经营养因子产生不足，在老化的脑、PD和其它神经变性疾病中神经发生经常受损6。令人感兴趣的是，在6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导的PD动物模型和过度生成人α-突触核蛋白的转基因小鼠中神经发生也减少7。事实上，已评价了神经营养因子疗法以提高神经发生，用于治疗PD和阿尔茨海默病8。然而，NGF和几种其它神经营养因子的临床应用因递送问题和副作用而受挫9。因此，已大力寻求小分子来模拟或提高神经营养因子对神经保护和神经再生的药理学作用。
核因子红细胞2相关因子2（Nrf2）是重要的细胞内氧化还原敏感性转录因子10, 11。Keap1-Nrf2-ARE途径调节针对氧化应激的细胞防御机制。Keap1-Nrf2-ARE途径已成为预防和治疗氧化应激相关疾病包括癌症、神经变性疾病、心血管疾病、代谢性疾病以及炎性疾病的有吸引力的靶标。重要的是，各种亲电子诱导剂通过共价修饰Keap1解离Nrf2-Keap1复合物12, 13。由此，Nrf2被移位至细胞核中，激活各种II阶段防御酶、抗氧化蛋白以及抗炎因子的表达10, 11。例如，血红素加氧酶-1（HO-1）受Nrf2介导的机制诱导。HO-1催化促氧化血红素降解为胆绿素/胆红素、一氧化碳以及亚铁离子。HO-1从而表现出宽范围的生物学活性，例如抗氧化、抗炎、神经保护和免疫调节活性14, 15。重要的是，Nrf2/HO-1途径还在神经发生和神经突增生中起关键作用16, 17。因此，在各种神经变性病症包括PD的治疗中，Nrf2/HO-1途径成为治疗靶标12, 15, 18。
天然产物构成了用于鉴定神经保护剂和神经再生剂的丰富来源19, 20。咖啡酸衍生物以结构依赖性和细胞类型特异性方式发挥抗氧化、抗炎、化学预防、抗癌以及抗菌特性21, 22。最近证实咖啡酸冰片酯通过刺激GSH耗竭、ROS形成以及线粒体机能障碍诱导数种癌细胞系中的细胞凋亡23, 24。尽管如此，最新研究还证实了咖啡酸衍生物诱导脑源性神经营养因子（BDNF）表达并清除神经毒性过亚硝酸盐25, 26。然而，咖啡酸衍生物尚未被研究用于针对6-OHDA诱导的神经毒性的神经保护和神经突发生。
发明简述
本发明涉及治疗和/或预防神经变性疾病的化合物、药物组合物以及相关方法。
本发明的方面提供了一种式（I）的化合物：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
。
本发明的方面还提供了包含式（I）的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明的方面进一步提供了治疗或预防受试者的神经变性疾病的方法，所述方法包括将有效量的式（I）的化合物施用于有需要的受试者。在一些实施方案中，神经变性疾病是帕金森病。
本发明的方面提供了刺激需要神经突增生的区域中神经突增生的方法，所述方法包括将有效量的式（I）的化合物施用于需要神经突增生的区域中的细胞，由此刺激神经突增生。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用有效量的神经生长因子。
本发明的方面还提供了减弱神经元损伤的方法，所述方法包括使有需要的神经元与有效量的式（I）的化合物接触，由此以血红素加氧酶-1依赖性方式减弱神经元损伤。
附图简述
图1描述了制备N-炔丙基咖啡酰胺（PACA）的合成方案。通过四个步骤，包括乙酰化、羧酸基团活化、胺化以及去乙酰化，由咖啡酸和炔丙胺合成PACA。总产率为65%。Ac2O，乙酸酐；MeONa，甲醇钠；MeOH，甲醇。
图2显示PACA提高PC12细胞中NGF诱导的神经突发生。PACA以浓度依赖性方式有效地提高大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞系中神经生长因子（NGF）诱导的神经突发生。通过诱导主要的神经元生物标志物（例如，β3-微管蛋白、MAP-2以及GAP43）证实了PACA的神经突发生潜力。（A）PACA增强PC12细胞中NGF诱导的神经突增生的典型图像。PC12细胞用NGF (2ng/ml)和PACA (单独或组合)处理。使用神经突增生染色试剂盒对细胞进行染色，在荧光显微镜下显像。（B）对小图A中的神经突增生进行定量。对神经突进行染色之后，在荧光显微镜下对带有长度超过20 μm的神经突的细胞进行计数。**，p<0.01（样品对比单独NGF）。（C）神经元生物标志物的蛋白质印迹分析。使用NGF和PACA (单独或组合)处理细胞，而对照细胞使用溶媒处理72小时。提取细胞蛋白，通过蛋白质印迹分析检测神经元标志物的表达。将GAPDH作为蛋白质上样的对照检测。
图3显示了PACA针对6-OHDA诱导的神经元死亡的神经保护作用。神经毒素6-羟基多巴胺(6-OHDA)被广泛用于诱导人帕金森病的细胞模型。使用6-OHDA与PACA或无PACA处理PC12细胞24小时，通过MTT比色测定评价细胞成活力。相对细胞成活力针对PACA浓度进行绘图。另一方面，从17天龄的Sprague Dawley（SD）大鼠胚胎分离原代中脑神经元。使用6-OHDA与PACA或无PACA处理中脑神经元12小时，通过MTT比色测定评价细胞成活力。或者，使用5 μM Hoechst 33342和1 μM PI在分化培养基中于37℃持续30分钟对神经元进行染色。在Zeiss荧光显微镜上捕获图像。（A）PC12细胞中细胞成活力的MTT测定。单独使用6-OHDA或与PACA组合处理PC12细胞24小时。通过标准MTT测定检测细胞成活力。数值表示平均值± SD(n = 3)。*，p < 0.05；**，p < 0.01（6-OHDA + PACA对比单独6-OHDA）。（B）大鼠中脑神经元中神经元成活力的MTT测定。单独使用6-OHDA或与PACA组合处理大鼠原代胚胎中脑神经元24小时。通过标准MTT测定检测细胞成活力。数值表示平均值± SD (n = 3)。*，p <0.05；**，p < 0.01，***，p < 0.001（6-OHDA + PACA对比单独6-OHDA)。（C）大鼠中脑神经元中6-OHDA诱导的细胞凋亡的Hoechst 33342/PI染色。单独使用6-OHDA或与PACA组合处理大鼠原代胚胎中脑神经元24小时。使用PI/Hoechst 33342温育神经元。在荧光显微镜下对PI阳性和Hoechst 33342染色的神经元进行计数。显示了来自两个独立的实验的典型图像。
图4显示在生物素点击化学标记和亲和分离之后对PACA修饰的蛋白质的鉴定。在氧化酶介导的氧化为化学反应性邻苯醌之后，PACA直接修饰携带游离半胱氨酸残基的蛋白质。在24小时温育结束时，将生物素标签引入被PACA共价修饰的蛋白质。在使用抗Keap1抗体珠进行亲和分离之后，链霉亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）检测出Keap1为主要的PACA修饰的蛋白，具有显而易见的约72 kDa分子大小。（A）通过点击化学对PACA修饰的蛋白进行生物素化。氧化酶表示将PACA氧化为邻苯醌的酶，蛋白质-SH表示带有游离半胱氨酸残基的蛋白质。（B）分离PACA修饰的蛋白质的程序。（C）PACA修饰的蛋白质的蛋白质印迹分析。使用PACA（20 µM）处理PC12细胞6小时。分离细胞蛋白，并使用叠氮生物素（Azido-Biotin）在点击化学条件下进行处理。将点击化学产物与Keap1抗体一起温育，接下来通过蛋白质A/G琼脂糖珠分离。通过SDS-PAGE解析所有蛋白质级分，通过链霉亲和素-HRP缀合物进行检测。CL，PACA处理的PC12细胞的细胞裂解物；CRP，点击化学产物；NB，非结合级分；W1，使用PBS的洗涤级分-1；W2，使用PBS的洗涤级分-2；W3，使用PBS的洗涤级分；E，通过在2× Laemmli样品缓冲液中于95℃加热珠5分钟进行洗脱。
图5显示PACA诱导Nrf2移位至细胞核中。Keap1的直接修饰导致Nrf2-Keap1复合物解离。基于核蛋白的蛋白质印迹分析和胞内Nrf2的免疫染色，PACA以浓度依赖性方式诱导Nrf2移位至细胞核中。（A）细胞溶质和细胞核Nrf2的蛋白质印迹分析。在PACA处理之后分离细胞溶质和细胞核蛋白并通过蛋白质印迹分析Nrf2表达。将GAPDH和核纤层蛋白b作为蛋白质上样的对照进行分析。（B）胞内Nrf2的免疫染色。在PACA处理之后，使用Nrf2抗体探测细胞，接下来使用Alexa Fluor 586缀合的第二抗体可视化。DAPI用于检测细胞核。在荧光显微镜下捕获图像。箭头指向细胞核Nrf2。
图6显示PACA诱导HO-1的表达，并通过HO-1介导的机制刺激神经突增生。在Keap1的直接修饰之后，PACA以浓度和时间依赖性方式顺序诱导Nrf2-Keap1复合物解离和血红素加氧酶-1（HO-1）表达。HO-1表达的诱导是作为PACA的神经突发生作用的基础的关键机制。（A和B）HO-1诱导的蛋白质印迹分析。在不同浓度（A）和不同时间点（B）的PACA处理之后，分离细胞蛋白质并通过蛋白质印迹分析HO-1表达。将GAPDH作为蛋白质上样的对照进行分析。（C）PACA通过HO-1介导的机制刺激神经突增生。使用NGF（2 ng/ml）连同PACA（5 µM，20 µM）在存在或不存在HO-1抑制剂SnPP的情况下处理PC12细胞72小时。通过神经突增生染色试剂盒对细胞进行染色，在荧光显微镜下进行成像。（D）HO-1诱导在PACA的神经突发生活性中的作用。分析小图C中捕获的图像带有神经突的细胞数量。对带有长度大于20 μm的神经突的细胞进行计数。数值表示平均值±SD (n = 3)。**，p < 0.01 (+SnPP对比–SnPP)。
图7显示PACA减弱6-OHDA诱导的线粒体膜电位破坏。通过使用荧光探针5,5’,6,6’-四氯-1,1’,3,3’-四乙基-苯并咪唑-羰花青碘化物（JC-1）监测线粒体膜电位，发现PACA以浓度依赖性方式抑制6-OHDA诱导的线粒体膜完整性破坏。单独使用6-OHDA或与PACA组合处理PC12细胞6小时，接下来使用JC-1染色。在荧光显微镜下捕获图像。
图8显示PACA减弱6-OHDA诱导的RNS和ROS产生。在单独使用6-OHDA或与不同浓度的PACA组合处理之后，分别使用荧光探针二氢乙锭（DHE）对PC12细胞的超氧负离子产生进行染色(A和B)，和使用另一种荧光探针DAF-FM二乙酸酯对PC12细胞的氧化氮产生进行染色(A和B)。（A）DHE染色细胞的典型图像。6-OHDA，200 µM；PACA，50 µM。（B）PACA抑制6-OHDA诱导的超氧负离子形成。单独使用6-OHDA或与PACA组合处理PC12细胞6小时，接下来使用探针DHE进行染色。在荧光显微镜下捕获图像。通过ImageJ软件测定荧光。（C）DAF-FM DA染色细胞的典型图像。6-OHDA，200 µM；PACA，50 µM。（D）PACA抑制6-OHDA诱导的NO生成。单独使用6-OHDA或与PACA组合处理PC12细胞6小时，接下来使用探针DAF-FM DA进行染色。在荧光显微镜下捕获图像。通过ImageJ软件测定荧光。
图9显示小鼠中PACA的药物代谢动力学分析。（A）PACA的HPLC-MS/MS检测。（B）小鼠血浆中的PACA检测。（C）小鼠脑组织中PACA的检测。将PACA（30 mg/kg）口服施用于小鼠。在不同时间（0、0.5、1、2、3、6、9、12或24 h）之后采集血液样品和脑组织。通过基于液相色谱-质谱多重反应监测的策略对PACA进行检测。
图10显示呈现PACA的独特神经突发生活性的荧光显微术分析。单独使用NGF（2ng/ml）或与PACA（20 µM）、咖啡酸（20 µM）以及CAPE（20 µM）组合处理PC12细胞72小时。通过神经突增生染色试剂盒对细胞进行染色，并在荧光显微镜下成像。显示PC12细胞的典型图像，白色箭头指向神经突。
图11：PACA对MPTP诱导的小鼠运动功能障碍的体内影响。（A）研究设计。（B）旋杆试验（Rotarod test）。将小鼠置于水平滚筒（直径30 mm）上，滚筒在5分钟时间内从4至32 rpm渐进加速下旋转。测量各动物掉落前待在杆上的时间。（C）爬杆试验。将小鼠头朝上置于50cm长的金属杆（1cm直径）顶端。记录各动物达到杆基部的总时间。各小鼠试验三次。数据表示为平均值± SEM，通过单因素ANOVA和事后Dunnett检验进行分析。*p<0.05；**，p<0.01。
本发明的详细描述
在各种神经变性病症中广泛认识到神经营养因子产生不足。本发明提供了一种用于制备新型化学品N-炔丙基咖啡酰胺（PACA）的合成方法和该化合物PACA作为新型神经保护和神经突发生剂用于治疗神经变性疾病包括帕金森病的用途。发现在多巴胺能PC12细胞和原代大鼠中脑神经元中PACA不仅加强NGF诱导的神经突增生而且减弱6-羟基多巴胺（6-OHDA）的神经毒性。为了鉴定PACA结合蛋白，通过“点击化学”炔烃-叠氮基环加成作用将生物素标签引入共价PACA-蛋白质加合物。结果，kelch样ECH缔合蛋白1（Keap1）分离为来自PACA处理的PC12细胞的主要蛋白。证实了PACA-Keap1缀合物的形成诱导转录因子Nrf2的核移位和抗氧化血红素加氧酶-1（HO-1）的表达。重要的是，特异性HO-1抑制剂SnPP减小PACA的神经保护和神经突发生活性。另外，PACA减弱6-OHDA诱导的神经毒性反应性氧物质和反应性氮物质的产生。PACA还保持线粒体膜完整性，提高细胞针对6-OHDA神经毒性的抵抗力。这些结果表明PACA通过激活Nrf2/HO-1抗氧化途径表现出神经保护和神经突发生活性。
本发明的方面提供了一种式（I）的化合物：
Figure DEST_PATH_IMAGE004
，
所述化合物具有化学名称N-炔丙基咖啡酰胺（PACA）。
本发明的方面还提供了包含式（I）的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本文所使用的有关药物组合物的术语“药学上可接受的”是指由联邦或州政府管理机构批准，或列于美国药典或其它普遍被认可的药典，用于动物和/或人。
术语“载体”是指与化合物一起施用的稀释剂、助剂、赋形剂和/或载体。这些药用载体可以是无菌液体，例如，水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。盐水溶液和葡萄糖水溶液以及甘油溶液也可用作液体载体，特别是用于注射液。合适的药用赋形剂包括淀粉、葡萄糖、蔗糖、明胶、乳糖、麦芽糖、米粉、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、甘油、丙二醇、水、乙醇等。药物组合物还可以含有增湿剂或乳化剂或助悬剂/稀释剂，或pH缓冲剂，或用于改变或维持化合物释放速率的试剂。这些组合物可以采用溶液、混悬液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉剂、缓释制剂等剂型。口服制剂可包含标准的载体，例如药用级甘露醇、乳糖、糖精钠、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、碳酸镁等。所述组合物含有治疗有效量的所述化合物连同合适量的载体，以基于待使用的施用模式提供合适的形式给患者。
如果用于静脉内施用，将所述组合物包装于无菌等渗水缓冲溶液中。必要时，所述组合物还可包含增溶剂。所述组合物的组分分开提供，或在单位剂型中混合在一起，例如，作为标明活性剂的量的气密密封容器(例如安瓿或小袋（sachette）)中的冻干粉或浓缩溶液。如果所述组合物待通过输注施用，可以使用含有无菌药用级水或盐水的输注瓶分配。当通过注射施用所述组合物时，可以提供无菌水或盐水的安瓿，使得成分可以在注射前被混合。
另外，如果包装材料用于包装药物组合物，其可以为生物学惰性的或缺乏生物活性，例如塑料聚合物、硅酮等，可以由受试者内部处理，而不影响所包装和/或所递送的化合物的有效性。
本发明的方面还提供了治疗或预防受试者中神经变性疾病的方法，所述方法包括将有效量的式（I）的化合物（即PACA）施用于有需要的受试者。在一些实施方案中，神经变性疾病是帕金森病。在一些实施方案中，通过Keap1的直接修饰，PACA诱导Nrf2的核移位，和接下来HO-1的诱导。在一些实施方案中，PACA以HO-1依赖性方式加强NGF诱导的神经突增生。在一些实施方案中，PACA以HO-1依赖性方式减弱6-OHDA诱导的神经元损伤。在口服施用后，PACA在血浆和脑组织中可快速生物利用。
本文所使用的“治疗(treatment或treating)”是指遏制或抑制、或试图遏制或抑制疾病的发生或发展，和/或导致或试图导致疾病和/或其症状的减轻、抑制、消退或缓解。本领域技术人员应理解的是，不同临床和科学方法和测定法可用于评价疾病的发生或发展，并且类似地，不同临床和科学方法和测定法可用于评价疾病或其症状的减轻、消退或缓解。“治疗”是指治疗性治疗和预防或防御性措施。需要治疗的受试者包括已经患有疾病的那些，以及倾向于患疾病的那些，或其中有疾病待预防的那些。在至少一种实施方案中，所治疗或预防的疾病是神经变性疾病。在一些实施方案中，所治疗或预防的疾病是帕金森病。
施用可以是受试者的局部（限于单细胞或组织）和/或全身。将本发明的化合物和药物组合物局部施用于需要治疗的区域例如脑中可能是合乎需要的。此施用方法可以通过例如但不限于手术过程中局部输注、局部涂覆（例如在手术后连同伤口敷料一起）、通过注射、通过导管、或借助于植入物（例如多孔膜）来实现。
在一些实施方案中，所述化合物或药物组合物可在控释系统中递送。这样的方法可包括使用用于施用的泵（例如，使用静脉滴注）。在另一种实施方案中，可将控释系统置于治疗靶附近，仅需要全身用药所需剂量的一部分。
另外，本领域技术人员应理解，所述治疗方法不仅适用于在受试者中治疗，还可在体内、离体或体外适用于细胞培养物、器官、组织或单个细胞。
基于本说明书全文提供的教导，本领域技术人员还应理解在不进行过度实验的情况下如何将本发明的化合物和/或药物组合物用于诊断或治疗目的。
本文使用的术语“受试者”是指动物。通常，本文中就受试者而言，术语“受试者”和“患者”可互换使用。因此，“受试者”包括作为患者被治疗神经变性疾病的人。
术语“动物”包括但不限于小鼠、大鼠、狗、猫、兔、猪、猴、猩猩以及人。
术语“有效量”和“治疗有效量”，当适用于本文所述的化合物和药物组合物时可互换使用，是指实现所需治疗结果所需的量。例如，有效量是有效治疗、治愈或缓解神经变性疾病的症状的所施用的组分和/或药物组合物的水平。所寻求的特定治疗目的的有效量取决于多种因素，包括所治疗的疾病及其严重性和/或发生/发展阶段，所使用的具体化合物或药物组合物的生物利用度和活性，施用途径或方法及受试者的引入部位，具体组分的清除率及其它药物代谢动力学特性，治疗持续时间，接种方案，与具体组合物联合或同时使用的药物，所治疗的受试者的年龄、体重、性别、饮食、生理和一般健康状况，以及相关科学领域技术人员公知的类似因素。根据所治疗的受试者的条件，有必要发生剂量的一些变化，不管怎样，医师或施用治疗的其它个体将确定单个患者的合适剂量。
本发明的方面还提供了刺激需要神经突增生的区域中神经突增生的方法，所述方法包括将有效量的式（I）的化合物施用于需要神经突增生的区域中的细胞，由此刺激神经突增生。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用有效量的神经生长因子。式（I）的化合物可以以血红素加氧酶-1依赖性方式刺激神经突增生。
本发明的方面还提供了减弱神经元损伤的方法，所述方法包括使有需要的神经元与有效量的式（I）的化合物接触，由此以血红素加氧酶-1依赖性方式减弱神经元损伤。
本发明的方面还提供了合成PACA的方法，所述方法包括实施例1中描述的和图1所示的步骤。
在不进一步阐述的情况下，认为本领域技术人员使用先前的描述最大程度地利用本发明。下列实施例通过例示而非限制性的方式提供。尽管提供了具体的实施例，但上述描述为例示而非限制性。先前描述的实施方案的任一或多个特征可以以任何方式与本发明的任何其它实施方案的一个或多个特征组合。另外，当阅读本说明书时，本发明的许多变化形式对于本领域技术人员来说将变得显而易见。
为所有目的，本申请中所引用的所有出版物和专利文献通过引用而并入相关部分，至如同各单个出版物或专利文献如此单独引用的相同程度。本文中通过引用多个文献，申请人并不认为任何特定的文献是其发明的“现有技术”。
实施例
本文描述的方法、化合物以及组合物在下列实施例中进一步说明，其通过例示的方式提供而非意于限制。应理解，所示的组分要素的比例和替选物的变化对于本领域技术人员来说显而易见，并且在本发明的实施方案的范围内。理论方面的呈现理解为本申请人并不寻求受所呈现的理论的限制。除非另有指明，所有部分或量均按重量计。
实施例1：PACA的合成和化学表征
通过四个步骤，包括乙酰化、羧酸基团活化、胺化以及去乙酰化由咖啡酸和炔丙胺合成PACA。具体地，通过于无水吡啶（2 mL）中的乙酸酐（1 mL）在室温下对咖啡酸（0.5 g）进行乙酰化过夜，产生二-O-Ac-咖啡酸（579mg，~90%）。通过与N, N-二甲基甲酰胺（2 mL）中的N, N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯（1.28 g）反应使二-O-Ac-咖啡酸转化为二-O-Ac-咖啡酸N-羟基琥珀酰亚胺酯。通过减压下旋转蒸发去除溶剂后，在室温下使用炔丙胺（320μL，275mg）处理含有二-O-Ac-咖啡酸N-羟基琥珀酰亚胺酯的残留物8小时。使用3个当量的NaOMe/MeOH处理反应混合物2小时。根据TLC检测完成反应之后，通过凝胶色谱在二氧化硅柱上纯化反应混合物，得到PACA，淡黄色粉末，325 mg，60%。通过质谱（MS）和核磁共振（NMR）波谱对PACA进一步表征。MS分析在Analyst v1.4.2数据系统（Applied Biosystems/MDS Sciex，Concord，ON，Canada）控制下以正电离模式操作在配备有TurboV源的ABI/Sciex三重四极3200 QTRAP质谱仪（Framingham，MA，USA）上进行。ESI-MS (m/z): 218 [M+H]+，435 [2M+H]+。在Varian Unity plus NMR 400 MHz波谱仪（Varian Inc.，Palo Alto，CA，USA）上于MeOD：CDCl3 (50 : 50, v/v)中记录NMR波谱。1H NMR (MeOD: CDCl3, 400 MHz), δ H :2.79 (1H, t, 2.4 Hz, H-3″), 4.50 (2H, d, 2.4 Hz, H2-1″), 6.74 (1H, d, 15 Hz,H-2), 7.21 (1H, d, 8.1 Hz, H-6′), 7.33 (1H, d, 8.1 Hz, H-5′), 7.48 (1H, s, H-2′), 7.86 (1H, d, 15 Hz, H-3), 8.33 (1H, s, H-N); 13C NMR (MeOD: CDCl3, 75MHz), δ C : 28.5 (C-3″), 70.9 (C-1″), 79.11 (C-2″), 113.7 (C-2′), 115.1 (C-5′),116. 4 (C-2), 121.3 (C-6′), 126.6 (C-1′), 141.5 (C-3), 144.5(C-3′), 146.7 (C-4′), 167.3 (C-1)。
实施例2：PACA的神经突发生作用
在大鼠多巴胺能PC12细胞中评价PACA的神经突发生活性。单独使用NGF（2 ng/mL）或与5、10、20 μM浓度的PACA组合处理PC12细胞72小时。通过神经突增生试剂盒对细胞进行染色，接下来在荧光显微镜下分析神经突（> 20 µm）。与单独NGF对比，PACA以浓度依赖性方式显著加强NGF诱导的神经突增生。单独PACA（20 µM）不诱导神经突增生。令人注意的是，相对于单独NGF，PACA（20 µM）和NGF（2 ng/mL）组合增加带有神经突的细胞的数量大约6倍。在使用PACA和NGF单独或组合处理之后，通过蛋白质印迹分析PC12细胞的神经元生物标志物（例如，β3-微管蛋白、MAP-2以及GAP43）的表达。基于神经元标志物包括β3-微管蛋白、MAP2和GAP-43的诱导，PACA以浓度依赖性方式提高NGF的神经突发生活性。
实施例3：PACA的神经保护作用
神经毒素6-羟基多巴胺(6-OHDA)被广泛用于诱导人帕金森综合征的细胞模型。使用6-OHDA与PACA或无PACA处理PC12细胞24小时，通过MTT比色测定评价细胞成活力。相对细胞成活力针对PACA浓度进行绘图。另一方面，从17天龄的Sprague Dawley（SD）大鼠胚胎分离原代中脑神经元。使用6-OHDA与PACA或无PACA处理中脑神经元12小时，通过MTT比色测定评价细胞成活力。或者，使用5 μM Hoechst 33342和1 μM PI在分化培养基中于37℃持续30分钟对神经元进行染色。在Zeiss荧光显微镜上捕获图像。
实施例4：对作为特定PACA修饰蛋白的Keap1的鉴定
在PACA进入细胞后，通过细胞内氧化酶使PACA转化为化学反应性邻苯醌中间物。邻苯醌中间物直接修饰带有游离半胱氨酸残基的蛋白质。具体地，使用20 µM PACA处理PC12细胞24小时。从PACA处理的细胞提取细胞蛋白。通过“点击”炔烃-叠氮基环加成作用将生物素标签引入PACA修饰的蛋白质用于通用亲和纯化27。开始通过来自Sigma-Aldrich（StLouis，MO，USA）的链霉亲和素-琼脂糖珠分离生物素化蛋白。在凝胶电泳和蛋白质印迹到PVDF（聚偏二氟乙烯）膜上之后，HRP-链霉亲和素缀合物检测主要的~70 kDa蛋白条带（数据未显示）。还通过相似的程序由keap1抗体检测这样的蛋白条带。为了自细胞培养物系统直接分离PACA修饰的Keap1，因此通过Keap1抗体和蛋白质A/G珠拉下生物素化蛋白。通过凝胶电泳和蛋白质印迹到PVDF膜上解析所有蛋白质级分。通过HRP缀合的链霉亲和素探测印迹，接下来通过化学发光检测。通过Keap1抗体主要捕获70 kDa蛋白条带。
实施例5：PACA诱导Nrf2移位至细胞核
Keap1的直接修饰导致Nrf2-Keap1复合物的解离。在使用不同浓度的PACA处理之后，通过蛋白质印迹和免疫染色方法检测Nrf2的细胞内定位。对于蛋白质印迹分析，将细胞蛋白分离成细胞溶质和细胞核级分，使用Nrf2抗体通过蛋白质印迹分析。GAPDH用作蛋白质上样对照，而核纤层蛋白B作为细胞核生物标志物检测。结果显示PACA以浓度依赖性方式显著增加核Nrf2水平。对于细胞内Nrf2免疫染色，另一方面，PC12细胞顺序使用兔抗Nrf2抗体探测，和通过Alexa Fluor 594缀合的山羊抗兔IgG抗体PACA检测。在Zeiss荧光显微镜下捕获图像。结果再次证实PACA促进细胞核中Nrf2积累。
实施例6：在PC12细胞中PACA诱导HO-1表达并接着促进神经突增生
Keap1的直接修饰导致Nrf2-Keap1复合物解离和接着血红素加氧酶-1（HO-1）的表达是公知的。在使用浓度范围5至100 μM的PACA处理24小时或浓度20 μM的PACA处理3、6、12、24小时之后，通过蛋白质印迹分析PC12细胞的HO-1诱导。基于蛋白质印迹结果，PACA确实以时间和浓度依赖性方式诱导HO-1表达。
为了明确HO-1诱导的神经突发生作用，单独或组合使用NGF、PACA以及HO-1抑制剂SnPP处理PC12细胞72小时。通过神经突增生染色试剂盒使神经突可视化，在荧光显微镜下进行显像。通过使用NIH ImageJ软件，在各处理中比较带有神经突的细胞的数量。结果，HO-1抑制剂SnPP显著减小PACA在加强NGF诱导的神经突增生中的潜力。
实施例7：PACA针对6-OHDA诱导的破坏保持线粒体膜完整性
为了研究PACA的神经保护机制，单独使用6-OHDA或与5、10、20以及50 μM浓度的PACA组合处理PC12细胞。在处理结束时，通过使用可渗透细胞的荧光探针5,5’,6,6’-四氯-1,1’,3,3’-四乙基-苯并咪唑-羰花青碘化物（JC-1）检测PACA对线粒体膜完整性的保护。如JC-1渗入胞质溶胶中所示，6-OHDA致死性破坏线粒体膜完整性。引人注意的是，针对6-OHDA诱导的膜破坏和接下来的探针JC-1渗入，PACA充分保持MMP。结果表明PACA以浓度依赖性方式保持线粒体膜完整性。
实施例8：PACA抑制6-OHDA诱导的RNS和ROS产生
单独使用6-OHDA或与5、10、20以及50 μM浓度的PACA组合处理PC12细胞。在处理结束时，然后分别使用荧光探针二氢乙锭（DHE）对PC12细胞的超氧负离子产生进行染色，和使用另一种荧光探针DAF-FM二乙酸酯对PC12细胞的氧化氮产生进行染色。发现PACA以浓度依赖性方式显著减弱6-OHDA诱导的不仅超氧负离子的形成，而且神经毒性NO的形成。
实施例9：小鼠中PACA的药物代谢动力学分析
9只体重240–280 g的雄性Sprague Dawley大鼠购自香港大学实验动物中心。将动物饲养在12小时光暗循环的合格设施中。允许动物无限制接近食物和水。动物研究方案受到香港大学李嘉诚医学院批准。以于50%丙二醇/盐水中的PACA（30 mg/kg）通过口服强饲施用于大鼠，而对照动物仅接受溶媒。通过异氟烷在0、0.5、1、2、3、6、9、12或24小时的时间点对大鼠进行麻醉。通过使用预先肝素化的注射器心脏穿刺采集血液样品，并将其立即转移至含有防止酯酶代谢的乙腈的管中。在5700 rpm下于4℃对血液样品离心10分钟以回收血浆。在去除血管后将脑组织切离，使用干净的纸巾点干，并称重。所有样品在使用前储存于−80℃。在Agilent HLPC 1100系统（Santa Clara，CA，USA）控制下于Phenomenex Synergihydro-RP C18反相柱（150 mm × 4.6 mm，4 m）（Torrance，CA，USA）上进行HPLC分离。使用移动相设定梯度：A，水与0.05%（v/v）甲酸，B，乙腈与0.05%（v/v）甲酸，如下：0–2.5 分钟，40–50% B；2.5–5.5 分钟，50-80% B；5.5–11.5 分钟，80% B；11.5–12 分钟，80-40 % B，12–15 分钟，40% B。流速恒定在0.7 mL/分钟。柱温度维持在30℃。用于注射的样品体积为20 µL。以负电离模式操作的配备有ESI-Turbo V源的ABI/Sciex三重四极质谱仪3200 QTRAP®LC/MS/MS系统（Applied Biosystems/MDS Sciex，Concord，ON，Canada）用于分析。通过Analyst v1.4.2数据系统（Applied Biosystems/MDS Sciex, Concord, ON, Canada）控制此系统。以电喷射正模式进行MS分析。使用-4.5 kV的离子喷射电压和325℃干燥气体、40psi喷雾气体和60 psi涡轮气体操作质谱仪。多重反应监测（MRM）检测用于对所有分析物进行定量。
实施例10：PACA对于神经突发生活性的独特结构元件
单独使用NGF（2 ng/mL）或与PACA（20 μM）、咖啡酸（20 μM）以及咖啡酸苯乙酯（CAPE）（20 μM）组合处理PC12细胞72小时。通过神经突增生染色试剂盒对细胞进行染色。在Zeiss荧光显微镜上捕获图像。显示PC12细胞的典型图像，白色箭头指向神经突。
实施例11：PACA针对MPTP诱导的小鼠运动功能障碍的体内神经保护作用
在帕金森病的模型小鼠中评价PACA的体内神经保护作用。将19只小鼠随机分成三组：对照（n=5），接受溶媒施用；MPTP（n = 7），每天下午接受MPTP（25 mg/kg）腹腔内注射，持续7天；MPTP + PACA（n = 7），每天早晨接受PACA（15 mg/kg）口服施用和每天下午接受MPTP（25 mg/kg）腹腔内注射，持续7天。在第8天，通过旋杆行为试验和爬杆试验评价小鼠的运动功能。结果表明PACA针对MPTP诱导的运动功能障碍有效保护动物。
讨论
本发明描述了化学衍生自咖啡酸和炔丙胺的N-炔丙基咖啡酰胺（PACA）。在大鼠多巴胺能PC12细胞和原代大鼠中脑神经元中，PACA不仅加强NGF诱导的神经突增生，而且减弱6-羟基多巴胺（6-OHDA）神经毒性。机制研究表明PACA通过直接修饰Keap1激活Nrf2/血红素加氧酶-1（HO-1）途径。因此，PACA可减弱6-OHDA诱导的神经毒性反应性氧物质和反应性氮物质的生成。PACA还可保持线粒体膜完整性，提高细胞针对6-OHDA神经毒性的抵抗力。在口服施用后，PACA在60分钟内于血液和脑组织中达到峰浓度。因此，PACA的使用被教导作为神经保护和神经修复剂，其可用于治疗神经变性疾病，包括帕金森病。
参考文献
1.Healy, D. G.; Falchi, M.; O'Sullivan, S. S.; Bonifati, V.; Durr,A.; Bressman, S.; Brice, A.; Aasly, J.; Zabetian, C. P.; Goldwurm, S.;Ferreira, J. J.; Tolosa, E.; Kay, D. M.; Klein, C.; Williams, D. R.; Marras,C.; Lang, A. E.; Wszolek, Z. K.; Berciano, J.; Schapira, A. H.; Lynch, T.;Bhatia, K. P.; Gasser, T.; Lees, A. J.; Wood, N. W.; International, L. C.,Phenotype, genotype, and worldwide genetic penetrance of LRRK2-associatedParkinson's disease: a case-control study. The Lancet. Neurology 2008, 7,583-90.
2.Perfeito, R.; Cunha-Oliveira, T.; Rego, A. C., Revisiting oxidativestress and mitochondrial dysfunction in the pathogenesis of Parkinsondisease--resemblance to the effect of amphetamine drugs of abuse. Free Radic Biol Med 2012, 53, 1791-806.
3.Bonuccelli, U.; Del Dotto, P., New pharmacologic horizons in thetreatment of Parkinson disease. Neurology 2006, 67, S30-8.
4.Muller, T., Non-dopaminergic drug treatment of Parkinson's disease.Expert Opinion on Pharmacotherapy 2001, 2, 557-72.
5.Meissner, W. G.; Frasier, M.; Gasser, T.; Goetz, C. G.; Lozano, A.;Piccini, P.; Obeso, J. A.; Rascol, O.; Schapira, A.; Voon, V.; Weiner, D. M.;Tison, F.; Bezard, E., Priorities in Parkinson's disease research. Nature Reviews. Drug Discovery 2011, 10, 377-93.
6.Marxreiter, F.; Regensburger, M.; Winkler, J., Adult neurogenesisin Parkinson's disease. Cell Mol Life Sci 2013, 70, 459-73.
7.Lamm, O.; Ganz, J.; Melamed, E.; Offen, D., Harnessing neurogenesisfor the possible treatment of Parkinson's disease. J Comp Neurol 2014, 522,2817-30.
8.Rangasamy, S. B.; Soderstrom, K.; Bakay, R. A.; Kordower, J. H.,Neurotrophic factor therapy for Parkinson's disease. Prog Brain Res 2010,184, 237-64.
9.Sullivan, A. M.; Toulouse, A., Neurotrophic factors for thetreatment of Parkinson's disease. Cytokine Growth Factor Rev 2011, 22, 157-65.
10. Ma, Q., Role of nrf2 in oxidative stress and toxicity. Annual Review of Pharmacology and Toxicology 2013, 53, 401-26.
11. Joshi, G.; Johnson, J. A., The Nrf2-ARE pathway: a valuabletherapeutic target for the treatment of neurodegenerative diseases. Recent Patents on CNS Drug Discovery 2012, 7, 218-29.
12. Satoh, T.; McKercher, S. R.; Lipton, S. A., Nrf2/ARE-mediatedantioxidant actions of pro-electrophilic drugs. Free Radic Biol Med 2013, 65,645-57.
13. Zhang, D. D.; Hannink, M., Distinct cysteine residues in Keap1are required for Keap1-dependent ubiquitination of Nrf2 and for stabilizationof Nrf2 by chemopreventive agents and oxidative stress. Molecular and Cellular Biology 2003, 23, 8137-51.
14. Paine, A.; Eiz-Vesper, B.; Blasczyk, R.; Immenschuh, S.,Signaling to heme oxygenase-1 and its anti-inflammatory therapeuticpotential. Biochemical Pharmacology 2010, 80, 1895-903.
15. Gozzelino, R.; Jeney, V.; Soares, M. P., Mechanisms of cellprotection by heme oxygenase-1. Annual Review of Pharmacology and Toxicology 2010, 50, 323-54.
16. Karkkainen, V.; Pomeshchik, Y.; Savchenko, E.; Dhungana, H.;Kurronen, A.; Lehtonen, S.; Naumenko, N.; Tavi, P.; Levonen, A. L.; Yamamoto,M.; Malm, T.; Magga, J.; Kanninen, K. M.; Koistinaho, J., Nrf2 regulatesneurogenesis and protects neural progenitor cells against Abeta toxicity.Stem Cells 2014, 32, 1904-16.
17. Zhao, F.; Wu, T.; Lau, A.; Jiang, T.; Huang, Z.; Wang, X. J.;Chen, W.; Wong, P. K.; Zhang, D. D., Nrf2 promotes neuronal celldifferentiation. Free Radic Biol Med 2009, 47, 867-79.
18. Kumar, H.; Koppula, S.; Kim, I. S.; More, S. V.; Kim, B. W.;Choi, D. K., Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 signaling inParkinson disease: a promising multi therapeutic target against oxidativestress, neuroinflammation and cell death. CNS & Neurological Disorders Drug Targets 2012, 11, 1015-29.
19. Chen, L. W.; Wang, Y. Q.; Wei, L. C.; Shi, M.; Chan, Y. S.,Chinese herbs and herbal extracts for neuroprotection of dopaminergic neuronsand potential therapeutic treatment of Parkinson's disease. CNS & Neurological Disorders Drug Targets 2007, 6, 273-81.
20. Campos, H. C.; da Rocha, M. D.; Viegas, F. P.; Nicastro, P. C.;Fossaluzza, P. C.; Fraga, C. A.; Barreiro, E. J.; Viegas, C., Jr., The roleof natural products in the discovery of new drug candidates for the treatmentof neurodegenerative disorders I: Parkinson's disease. CNS & Neurological Disorders Drug Targets 2011, 10, 239-50.
21. da Cunha, F. M.; Duma, D.; Assreuy, J.; Buzzi, F. C.; Niero, R.;Campos, M. M.; Calixto, J. B., Caffeic acid derivatives: in vitro and in vivoanti-inflammatory properties. Free Radical Research 2004, 38, 1241-53.
22. Fiuza, S. M.; Gomes, C.; Teixeira, L. J.; Girao da Cruz, M. T.;Cordeiro, M. N.; Milhazes, N.; Borges, F.; Marques, M. P., Phenolic acidderivatives with potential anticancer properties--a structure-activityrelationship study. Part 1: methyl, propyl and octyl esters of caffeic andgallic acids. Bioorganic & Medicinal Chemistry 2004, 12, 3581-9.
23. Yang, C.; Zhao, J.; Pei, W.; Zheng, X.; Rong, J., Biochemicalmechanisms of bornyl caffeate induced cytotoxicity in rat pheochromocytomaPC12 cells. Chem Biol Interact 2014, 219C, 133-142.
24. Yang, C. B.; Pei, W. J.; Zhao, J.; Cheng, Y. Y.; Zheng, X. H.;Rong, J. H., Bornyl caffeate induces apoptosis in human breast cancer MCF-7cells via the ROS- and JNK-mediated pathways. Acta Pharmacologica Sinica 2014, 35, 113-23.
25. Kurauchi, Y.; Hisatsune, A.; Isohama, Y.; Mishima, S.; Katsuki,H., Caffeic acid phenethyl ester protects nigral dopaminergic neurons viadual mechanisms involving haem oxygenase-1 and brain-derived neurotrophicfactor. Br J Pharmacol 2012, 166, 1151-68.
26. Wei, X.; Zhao, L.; Ma, Z.; Holtzman, D. M.; Yan, C.; Dodel, R.C.; Hampel, H.; Oertel, W.; Farlow, M. R.; Du, Y., Caffeic acid phenethylester prevents neonatal hypoxic-ischaemic brain injury. Brain 2004, 127,2629-35.
27. DeGuire, S. M.; Earl, D. C.; Du, Y.; Crews, B. A.; Jacobs, A. T.;Ustione, A.; Daniel, C.; Chong, K. M.; Marnett, L. J.; Piston, D. W.;Bachmann, B. O.; Sulikowski, G. A., Fluorescent probes of the apoptolidinsand their utility in cellular localization studies. Angew Chem Int Ed Engl. 2015, 54, 961-4.

Claims (6)

1.式（I）的化合物：
Figure 457607DEST_PATH_IMAGE001
在制备用于刺激需要神经突增生的区域中神经突增生的药物中的用途。
2.权利要求1所述的用途，其中所述药物进一步包含有效量的神经生长因子。
3.权利要求1所述的用途，其中所述化合物以血红素加氧酶-1依赖性方式刺激神经突增生。
4.式（I）的化合物：
Figure 282737DEST_PATH_IMAGE001
在制备用于减弱神经元损伤的药物中的用途。
5.式（I）的化合物：
Figure 328054DEST_PATH_IMAGE001
在制备用于刺激需要神经突增生的受试者中神经突增生的药物中的用途。
6.式（I）的化合物：
Figure 988842DEST_PATH_IMAGE001
在制备用于减弱神经元损伤的药物中的用途。
CN201680031130.9A 2015-05-29 2016-05-13 新型神经保护性和神经修复性n-炔丙基咖啡酰胺(paca)及作为神经变性疾病的疗法的用途 Active CN107847473B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562168023P 2015-05-29 2015-05-29
US62/168023 2015-05-29
PCT/CN2016/082007 WO2016192525A1 (en) 2015-05-29 2016-05-13 A novel neuroprotective and neurorestorative n-propargyl caffeamide (paca) and use as a treatment for neurodegenerative diseases

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107847473A CN107847473A (zh) 2018-03-27
CN107847473B true CN107847473B (zh) 2021-08-10

Family

ID=57440131

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680031130.9A Active CN107847473B (zh) 2015-05-29 2016-05-13 新型神经保护性和神经修复性n-炔丙基咖啡酰胺(paca)及作为神经变性疾病的疗法的用途

Country Status (3)

Country Link
US (1) US10259777B2 (zh)
CN (1) CN107847473B (zh)
WO (1) WO2016192525A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114835727B (zh) * 2022-06-07 2023-05-23 南京农业大学 一种咖啡酸-生物素小分子探针的设计及制备方法和应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2788598T3 (es) * 2012-11-21 2020-10-22 Golden Biotechnology Corp Métodos y composiciones para tratar enfermedades neurodegenerativas

Also Published As

Publication number Publication date
US20180155275A1 (en) 2018-06-07
CN107847473A (zh) 2018-03-27
WO2016192525A1 (en) 2016-12-08
US10259777B2 (en) 2019-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. The effect of resveratrol on beta amyloid-induced memory impairment involves inhibition of phosphodiesterase-4 related signaling
Ren et al. Ganoderma lucidum extract ameliorates MPTP-induced parkinsonism and protects dopaminergic neurons from oxidative stress via regulating mitochondrial function, autophagy, and apoptosis
Zhong et al. Inhibition of phosphodiesterase 4 by FCPR16 protects SH-SY5Y cells against MPP+-induced decline of mitochondrial membrane potential and oxidative stress
Zhao et al. Botanical drug puerarin coordinates with nerve growth factor in the regulation of neuronal survival and neuritogenesis via activating ERK 1/2 and PI 3K/Akt signaling pathways in the neurite extension process
Qi et al. Potential roles of PI3K/Akt and Nrf2–Keap1 pathways in regulating hormesis of Z-ligustilide in PC12 cells against oxygen and glucose deprivation
Doo et al. Neuroprotective effects of an herbal medicine, Yi-Gan San on MPP+/MPTP-induced cytotoxicity in vitro and in vivo
Zhong et al. A novel polysaccharide from Acorus tatarinowii protects against LPS-induced neuroinflammation and neurotoxicity by inhibiting TLR4-mediated MyD88/NF-κB and PI3K/Akt signaling pathways
Kim et al. Protective effect of Chrysanthemum indicum Linne against 1-methyl-4-phenylpridinium ion and lipopolysaccharide-induced cytotoxicity in cellular model of Parkinson’s disease
Luo et al. N-propargyl caffeamide (PACA) ameliorates dopaminergic neuronal loss and motor dysfunctions in MPTP mouse model of Parkinson’s disease and in MPP+-induced neurons via promoting the conversion of proNGF to NGF
Zhang et al. Atorvastatin prevents amyloid-β peptide oligomer-induced synaptotoxicity and memory dysfunction in rats through a p38 MAPK-dependent pathway
Cheng et al. Proteomic identification of calcium-binding chaperone calreticulin as a potential mediator for the neuroprotective and neuritogenic activities of fruit-derived glycoside amygdalin
Han et al. Dalesconols B inhibits lipopolysaccharide induced inflammation and suppresses NF-κB and p38/JNK activation in microglial cells
Cui et al. Neuroprotective mechanisms of dieckol against glutamate toxicity through reactive oxygen species scavenging and nuclear factor-like 2/heme oxygenase-1 pathway
Yang et al. Morroniside-induced PP2A activation antagonizes tau hyperphosphorylation in a cellular model of neurodegeneration
US20130237556A1 (en) Berberine alkaloid as a medicament for prevention and treatment of neural disease
Xu et al. Neuroprotection against glutamate-induced excitotoxicity and induction of neurite outgrowth by T-006, a novel multifunctional derivative of tetramethylpyrazine in neuronal cell models
Gao et al. Grape seed proanthocyanidin extract ameliorates streptozotocin-induced cognitive and synaptic plasticity deficits by inhibiting oxidative stress and preserving AKT and ERK activities
Cheng et al. Dopamine D1 receptor agonist A-68930 ameliorates Aβ1-42-induced cognitive impairment and neuroinflammation in mice
Shou-Bao et al. Pinocembrin protects rats against cerebral ischemic damage through soluble epoxide hydrolase and epoxyeicosatrienoic acids
Ju et al. The protective effects of Mogroside V and its metabolite 11-oxo-mogrol of intestinal microbiota against MK801-induced neuronal damages
Li et al. Anti-Alzheimer's disease activity of secondary metabolites from Xanthoceras sorbifolia Bunge
Wang et al. Identification of a novel BACE1 inhibitor, timosaponin A-III, for treatment of alzheimer's disease by a cell extraction and chemogenomics target knowledgebase-guided method
Höllerhage et al. Multiple molecular pathways stimulating macroautophagy protect from alpha-synuclein-induced toxicity in human neurons
Huang et al. Caloric restriction ameliorates acrolein-induced neurotoxicity in rats
Kim et al. Anti-inflammatory effect of Ailanthus altissima (Mill.) Swingle leaves in lipopolysaccharide-stimulated astrocytes

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant